雌／孕激素对原代培养的子宫内膜内皮细胞HOXA11和PR基因表达的影响

目的：探讨雌、孕激素（尤其孕激素）对从子宫内膜腺上皮细胞HOXA11基因和孕酮受体(progesterone receptor,PR)基因表达的影响，以及二者表达量变化的相互关系。方法：将6例增生期子宫内膜腺上皮细胞进行原代培养，当细胞生长融合时，加入17β-雌二醇或／和孕酮培养4h、4d、6d、8d，提取细胞总RNA,半定量RT－PCR法检测HOXA11mRNA和PRmRNA表达量变化。结果：17β－雌二醇使上皮细胞HOXA11和PR基因表达量增加；而孕酮的作用效应则有所不同，当孕酮作用于与间质细胞分离培养的上皮细胞时，其HOXA11的表达增加，当上皮与间质细胞混合培养时，孕酮则降低上皮细胞HOXA11表达；孕酮对PR的影响则显示无论分离培养还是与间质细胞混合培养的上皮细胞，孕酮均可使上皮细胞PRmRNA表达量降低。结论：子宫内膜HOXA11基因表达受雌、孕激素调节、孕激素对内膜腺上皮HOXA11和PR基因均起负调控作用，但二者的发生机制有所不同。     

孕激素及间质细胞培养液对原代培养内膜腺上皮HOXA11基因表达的影响

目的:探讨间质细胞是否参与了孕激素对子宫内膜腺上皮的调控,及其初步的作用机制。方法:将增生期子宫内膜间质细胞经激素处理后进行培养,提取培养液。用浓度为30%的提取培养液对腺上皮细胞进行原代培养,当细胞生长融合时,加入孕酮或孕雌激素培养4h、24h。提取细胞总RNA,用半定量RT-PCR方法检测腺上皮细胞HOXA11基因表达量。结果:当内膜腺上皮细胞中含有30%经孕激素处理的间质细胞培养液时,加入孕激素或孕、雌激素后其HOXA11基因,在培养4h时表达量有下降趋势;24h时,表达量下降明显;而用RU486预处理后再加入孕激素或雌孕激素,腺上皮细胞HOXA11基因表达量与对照组无差异;当上皮细胞中含有30%经RU486预处理后,再加入孕激素处理的间质细胞培养液时,孕激素或孕、雌激素对内膜腺上皮HOXA11表达的负调控作用在4h时消失;24h时,转为正调控(HOXA11基因表达量增加)。结论:孕激素对内膜腺上皮HOXA11基因的负调控作用需要问质细胞分泌的孕激素依赖因子的参与,而且由间质细胞和内膜腺上皮中的孕激素受体共同介导完成这一负调控作用。     

左旋18-甲基炔诺酮和米非司酮对分泌中期人子宫内膜HOXA11基因表达的影响

目的:通过口服孕激素类(左旋18-甲基炔诺酮,Levenorgestrel,LNG)和抗孕激素类(米非司酮,RU486)避孕药,研究孕激素对分泌中期人子宫内膜HOXA11基因表达的影响。方法:30名自愿者,于正常月经周期排卵后d7,刮取内膜组织做自身对照;实验周期在排卵前或排卵后2d,口服小剂量LNG(18例)或RU486(12例),同样在排卵后d7刮取内膜组织。用原位杂交方法检测服药子宫内膜HOXA11基因表达的变化。结果:对照组(分泌中期)内膜,间质细胞普遍表达HOXA11mRNA,而腺上皮HOXA11的表达则呈弱阳性或阴性。口服LNG后,子宫内膜形态变化不明显;内膜腺上皮HOXA11表达量进一步下降或无明显变化(即用药前后均表达阴性);间质细胞HOXA11表达增强。服用RU486后,内膜发育明显延迟,腺上皮HOXA11表达强度普遍大于对照组,而间质细胞的表达变化无明显规律。结论:孕激素对内膜腺上皮HOXA11基因的表达起负调控作用;正常分泌中期,内膜腺上皮HOXA11表达减弱或消失是内膜分化成熟的标志。     

月经周期人子宫内膜腺上皮和基质细胞HOXA11表达的差异

目的:探讨HOXA11在月经周期人子宫内膜腺上皮和基质细胞中的表达规律及其生理意义。方法:免疫组织化学方法观察38例子宫内膜腺上皮和基质细胞HOXA11蛋白质的表达;用细胞分离筛选法,分离出子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞,采用半定量RT-PCR和Dot-blot方法分别观察HOXA11在腺上皮和基质细胞中的表达。结果:腺上皮细胞HOXA11在分泌中晚期表达量较增生期和分泌早期显著降低;基质细胞HOXA11的表达从增生期到分泌期逐渐增加,以分泌中晚期表达量最高。结论:内膜腺上皮和基质细胞HOXA11表达在分泌中晚期变化最显著,而且其表达量呈反相变化,即腺上皮表达量下降,基质细胞表达量增加。提示HOXA11基因与着床期子宫内膜的分化、成熟密切相关;其对内膜腺上皮和基质细胞的调控机制可能不尽相同。     

HOXA-11基因与不孕及妊娠失败关系的研究

目的 :研究HOXA 11基因与不孕及妊娠失败的关系。方法 :选择 4 1例不明原因不孕症患者及 30例难免流产患者 ,同时选择 2 8例正常未孕者及 18例正常早期妊娠者分别作为对照组 ,留取子宫内膜或蜕膜组织。子宫内膜标本通过组织学检查分为增生期或分泌期。难免流产及正常妊娠组均妊娠 6～ 9周。采用原位杂交方法检测所有子宫内膜或蜕膜组织中的HOXA 11基因mRNA的表达。结果 :整个月经周期子宫内膜腺上皮细胞及间质细胞中均有HOXA 11基因mRNA表达 ,并因月经周期不同而有所波动。HOXA 11基因mRNA在分泌中晚期子宫内膜间质细胞中阳性表达率为 10 0 % ,在增生期子宫内膜间质细胞中的阳性表达率为 6 3.6 % ,差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;在不明原因不孕症患者中HOXA 11基因失去了它在正常子宫内膜表达的周期性变化 ,而且基因表达缺失明显。HOX A 11基因在正常增生期及分泌期子宫内膜腺上皮细胞或间质细胞中的阳性表达率分别为90 .9%、82 .4 %和 6 3.6 %、10 0 % ,在不孕症增生期及分泌期子宫内膜两种细胞的阳性表达率分别为 38.9%、4 7.8%和 2 2 .2 %、39.1% ,两组分别比较 ,差异均有显著性 (P <0 .0 5 ) ;HOXA 11基因在正常早期妊娠蜕膜细胞中持续表达 ,其阳性表达率均为 10 0 % ,在难免流产蜕膜细胞中的阳性表达     

原位杂交检测同源框基因HoxAll在人月经周期子宫内膜的表达

了解HoxAll基因在人月经周期子宫内膜的表达及变化,探索该基因对正常内膜周期的调节功能。应用地高辛标记的RNA探针进行原位杂交。HoxAll基因主要在内膜间质细胞中表达,增殖期与分泌期比较未见明显差异。腺上皮细胞中HoxAll基因的表达量虽较间质细胞少,但有明显的周期性变化,以增生殖期腺上皮细胞表达量较高,分泌早期开始下降,到分泌中晚期表达量极低或不表达。HoxAll基因在月经周期人子宫内膜中的这种表达时空的变化与孕酮受体(PR)非常相似,提示HoxAll基因的表达与卵巢激素及其受体的调控有着密切的关系,HoxAll在分泌中期内膜腺上皮中表达下降是内膜分化的重要指标志。     

原位杂交检测同源框基因HoxA11在人月经周期子宫内膜的表达

了解 Hox A1 1基因在人月经周期子宫内膜的表达及变化 ,探索该基因对正常内膜周期的调节功能。应用地高辛标记的 RNA探针进行原位杂交。 Hox A1 1基因主要在内膜间质细胞中表达 ,增殖期与分泌期比较未见明显差异。腺上皮细胞中 Hox A1 1基因的表达量虽较间质细胞少 ,但有明显的周期性变化 ,以增生殖期腺上皮细胞表达量较高 ,分泌早期开始下降 ,到分泌中晚期表达量极低或不表达。Hox A1 1基因在月经周期人子宫内膜中的这种表达时空的变化与孕酮受体 (PR)非常相似 ,提示 Hox A1 1基因的表达与卵巢激素及其受体的调控有着密切的关系 ,Hox A1 1在分泌中期内膜腺上皮中表达下降是内膜分化的重要指标志。     

孕激素受体与子宫内膜异位症的研究进展

子宫内膜异位症是妇女盆腔痛常见原因.孕激素可抑制异位内膜生长和炎症反应,但部分患者对孕激素治疗不敏感,这种孕酮抵抗的分子学基础可能与孕激素同源受体B(PRB)有关.孕激素作用于正常子宫内膜间质细胞诱导产生旁分泌因子,后者作用于相邻的上皮细胞,诱导产生17β羟类固醇脱氢酶(17βHSD2),该酶则将雌二醇(E2)灭活为雌酮.异位内膜间质细胞缺陷,缺乏PRB孕激素不能诱导产生旁分泌因子进而产生17βHSD2,最终使异位内膜E2增加.介绍子宫内膜异位症孕酮抵抗和异位内膜E2代谢异常分子生物学机制.     

孕三烯酮对大鼠血清雌孕激素及在位和异位子宫内膜雌孕激素受体的影响

目的:探讨孕三烯酮(gestrinone)治疗子宫内膜异位症的作用机理。方法:用自体移植术建立大鼠子宫内膜异位症动物模型,随机分组给药,3周后剖腹,取血测定雌二醇(E2)、孕酮(P)浓度,取出子宫及移植物,固定、切片,免疫组化SP法测定各组动物子宫及移植物的雌激素受体(ER)和孕激素受体(PR)的表达。结果:孕三烯酮高剂量使大鼠血清E2、P水平降低,而中低剂量对E2、P水平影响不大。免疫组化结果则显示移植物的ER、PR含量较子宫内膜低,孕三烯酮高、中剂量可下调在位和异位子宫内膜ER、PR表达,而低剂量孕三烯酮则不能明显改变ER、PR的表达量。结论:孕三烯酮可通过降低体内雌孕激素水平以及下调在位及异位子宫内膜ER、PR的表达,发挥对子宫内膜异位症的治疗作用。     

hMG对分泌晚期子宫内膜雌、孕激素受体基因表达的影响

目的:研究人绝经期促性腺激素(hMG)促排卵治疗对分泌晚期子宫内膜雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)基因表达的影响。方法:采用原位杂交技术,对9例hMG促排卵周期(实验组)分泌晚期子宫内膜ER、PRmRNA进行测定,并与11例自然周期(对照组)进行对照研究。结果:实验组分泌晚期子宫内膜腺体细胞内ER、PRmRNA水平明显低于对照组(P<0.05和P<0.005)。结论:hMG在转录水平降低分泌晚期子宫内膜腺体细胞ER、PRmRNA的表达。     

同源框基因HOXA11顺式作用元件具有启动子活性及孕激素应答元件功能

目的:探讨HOXA11基因顺式作用元件是否存在启动子及孕激素应答元件序列。方法:采用PCR技术以人基因组DNA为模板,扩增含HOXA11顺式作用元件序列的DNA片段;将扩增片段与无启动子的强化绿色荧光蛋白报告基因载体pEGFP-1多克隆位点连接,构建HOXA11基因顺式作用元件的表达载体pEGFP-HOXA11;用脂质体法将表达载体转染到Ishikawa细胞中,在荧光显微镜下观察重组HOXA11基因顺式作用元件的启动活性,以及转染细胞经孕酮处理后细胞内绿色荧光蛋白表达水平的变化。结果:成功地将HOXA11基因顺式作用元件克隆到报告基因载体pEGFP-1中,酶切和PCR鉴定以及DNA序列分析无误;转染pEGFP-HOXA11表达载体的Ishikawa细胞能表达发出绿色荧光的报告基因蛋白,而且经孕酮处理后绿色荧光强度明显增强。结论:HOXA11基因顺式作用元件具有启动子活性和孕激素应答元件功能。     

Abnormal expression of estrogen receptor is associated with thin endometrium

Abstract

This study was conducted to investigate the association of estrogen receptor (ER) and progesterone receptor (PR) expressions with thin endometrium. Patients with endometrial thickness of less than 7?mm were classified as the study group, while the control group was comprised of patients with endometrial thickness of 7 to 14?mm. The expressions of ER and PR were detected with semi-quantitative immunohistochemical analysis, and the differences were compared between the two groups. The expression of ER was significantly decreased (p?<?.05) in the stromal cells of thin endometrium during both proliferative and secretory phases as compared to those of normal endometrium. Likewise, ER expression was found to be lower in the glandular cells of thin endometrium than those of normal endometrium during proliferative phase. However, no significant differences were observed for the expression of PR in both glandular and stromal cells between the two groups. Thin endometrium was associated with reduced expression of ER in stromal cells both during proliferative and secretory phase, but in glandular epithelial cells only during proliferative phase.     

雌、孕激素对人子宫内膜Pbx2蛋白表达的影响

目的:探讨人子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞中雌、孕激素对Pbx2蛋白表达的影响。方法:采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)连接法检测人增生期、分泌中期和蜕膜期子宫内膜中Pbx2的表达和分布;体外培养人子宫内膜基质细胞和高分化子宫内膜癌细胞Ishikawa,分别加入雌激素、孕激素、雌、孕激素联合刺激48 h,并以不加雌、孕激素的基质细胞核和Ishikawa细胞为对照组,采用免疫组织化学、免疫印迹法测定各种条件下Ishikawa细胞中Pbx2蛋白的表达。结果:①在人各期子宫内膜组织中,Pbx2表达于腺上皮细胞和基质细胞的细胞核中;Pbx2在分泌中期和蜕膜期基质细胞中的表达显著高于增生期,但在腺上皮细胞中增生期组织的表达高于分泌中期和蜕膜期,差异均具有统计学意义(P<0.05)。②Western blotting结果显示,在孕激素和雌、孕激素联合处理Ishikawa细胞组中,Pbx2的表达显著低于对照组(P<0.05),雌激素处理后Pbx2的表达与其他各组间的表达无显著性差异(P>0.05),在人子宫内膜基质细胞(ESC)中,Pbx2的表达在雌、孕激素处理各组间比较均无统计学差异(P>0.05)。结论:在人子宫内膜腺上皮Ishikawa细胞中孕激素对Pbx2的表达具有下调作用,在人子宫内膜基质细胞中,Pbx2的调控可能是非雌、孕激素依赖性的。     

种植窗期预测体外受精-胚胎移植结局指标的研究

目的 探讨种植窗期子宫内膜雌、孕激素受体（ER、PR）及血管内皮生长因子（VEGF）的表达与体外受精-胚胎移植（IVF—ET）结局的关系，选择能预测IVF—ET结局的良好而可靠的指标。方法 2004-05—2005-01对郑州大学第二附属医院生殖中心40例拟行IVF—ET妇女，在IVF—ET前1周期采用免疫组化SP法和组织学积分H—score方法对ER、PR和VEGF在种植窗期子宫内膜中的表达进行定位和半定量分析。按IVF—ET后是否妊娠将40例不孕患者分为两组：妊娠组和未妊娠组。结果 未妊娠组腔上皮、腺体PR表达较妊娠组强，差异有统计学意义（P〈0．05），间质PR表达较妊娠组弱，差异有统计学意义（P〈0．05）；妊娠组和未妊娠组子宫内膜ER表达差异无统计学意义（P〉0、05）；VEGF在子宫内膜中的表达妊娠组较未妊娠组高，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论 种植窗期子宫内膜腔上皮、腺体PR下调失败，间质PR表达减弱及子宫内膜VEGF的表达减弱可导致IVF—ET妊娠失败。种植窗期子宫内膜PR和VEGF的表达可作为预测妊娠是否成功的指标。