大鼠外侧丘系核GABA能免疫阳性神经元向下丘的投射

用ＨＲＰ逆行追踪结合抗ＧＡＢＡ的免疫细胞化学双标记法对外侧丘系核（ＮＬＬ）向下丘中央核（ＩＣＣ）的ＧＡＢＡ能投射进行了研究。结果：在双侧外侧丘系背侧核（ＤＮＬＬ）及同侧外侧丘系中间核（ＩＮＬＬ）和外侧丘系腹侧核（ＶＮＬＬ）均可见到大量ＨＲＰ单标,ＧＡＢＡ单标及ＨＲＰ／ＧＡＢＡ 双标细胞。其中ＨＲＰ／ＧＡＢＡ双标细胞在同侧ＶＮＬＬ最多（４１％ ）,同侧ＩＮＬＬ为２１％ ,同侧ＤＮＬＬ为８％ ,对侧ＤＮＬＬ为２９％ ,各亚核双标细胞占投射神经元的比例：同侧ＶＮ－ＬＬ为７０％ ,同侧ＩＮＬＬ为６３％ ,同侧ＤＮＬＬ为５１％ ,而对侧ＤＮＬＬ为７５％ 。对侧ＩＮＬＬ及ＶＮＬＬ未见ＨＲＰ单标及ＨＲＰ／ＧＡＢＡ双标细胞。以上结果表明,双侧ＤＮＬＬ、同侧ＩＮＬＬ和ＶＮＬＬ存在着大量向ＩＣＣ投射ＧＡＢＡ能神经元。本研究提示ＮＬＬ通过ＧＡＢＡ能投射向ＩＣ施加抑制性影响。     

大鼠外侧丘系核GABA能免疫阳性神经元向下丘的投射①

用HRP逆行追踪结合抗GABA的免疫细胞化学双标记法对外侧丘系核 (NLL)向下丘中央核(ICC)的GABA能投射进行了研究。结果在双侧外侧丘系背侧核(DNLL)及同侧外侧丘系中间核(INLL)和外侧丘系腹侧核(VNLL)均可见到大量HRP单标,GABA单标及HRP/GABA双标细胞。其中HRP/GABA双标细胞在同侧VNLL最多(41%),同侧INLL为21%,同侧DNLL为8%,对侧DNLL为29%,各亚核双标细胞占投射神经元的比例同侧VNLL为70%,同侧INLL为63%,同侧DNLL为51%,而对侧DNLL为75%。对侧INLL及VNLL未见HRP单标及HRP/GABA双标细胞。以上结果表明,双侧DNLL、同侧INLL和VNLL存在着大量向ICC投射GABA能神经元。本研究提示NLL通过GABA能投射向IC施加抑制性影响。     

猕猴黑质GABA能神经元的分布

采用进化程度较高的灵长类动物猕猴作为实验材料,在光镜下观察黑质的GABA能神经元。在黑质网状部GABA能神经元数量多,以多角形和梭形为主,致密部的GABA能神经元较网状部略稀少,胞体形态以多角形、圆形和梭形为主;在下丘平面还可见到许多GABA样阳性神经纤维。     

猕猴黑质GABA能神经元的分布

采用进化程度较高的灵长类动物猕猴作为实验材料，在光镜下观察黑质的ＧＡＢＡ能神经元。在黑质网状部ＧＡＢＡ能神经元数量多，以多角形和梭形为主，致密部的ＧＡＢＡ能神经元较网状部略稀少，胞体形态以多角形、圆形和梭形为主；在下丘平面还可以许多ＧＡＢＡ样阳性神经纤维。     

豚鼠脑干听觉中枢生长抑素免疫反应产物的分布

目的 研究生长抑素（ＳＳ）在豚素脑干听觉中枢的分布及意义。方法 采用免疫组化ＡＢＣ法观察了豚鼠脑干听觉中枢的耳蜗核（ＣＮ）、上橄榄核簇（ＳＯＣ）及下丘（ＩＣ）内ＳＳ免疫反应阳性产物的分布。结果 在脑干听觉中枢广泛分布着ＳＳ阳性神经元、纤维及终末。ＳＳ阳性神经元主要分布在蜗神经腹核（ＶＣＮ）、斜方体核（ＮＴＢ）、内侧上橄榄核（ＭＳＯ）及橄榄周核（ＰＯＮ）,而ＳＳ阳性纤维及终末主要分布在下丘、外侧上橄     

豚鼠脑干听觉中枢及内侧膝状体P物质受体阳性产物的分布

研究了Ｐ物质受体在豚鼠听觉脑干中枢及内侧膝状体的分布。采用兔抗ＳＰＲ血清和免疫组织化学ＡＢＣ法及葡萄糖氧化酶－ＤＮＡ－镍染色技术。结果；耳蜗核，上橄榄复合体，下丘及内侧膝状体广泛分布ＳＰＲ理性神经元，纤维及终末。     

光化学诱导树鼠句脑缺血中心区及半暗区神经元 PAF受体结合特性的研究(摘要)

观察血栓性局部脑缺血过程中缺血中心区及半暗区血小板活化因子(platelet activating factor, PAF)受体的消长变化,探讨PAF在脑缺血中心区及半暗区神经元继发性脑损伤中的分子机制.建立光化学诱导树鼠句血栓性局部脑缺血模型并提取树鼠句脑细胞膜蛋白,并用3H-PAF放射配体结合试验检测中枢神经细胞膜不同特性的PAF结合位点(受体),结果:树鼠句脑细胞膜上存在两种亲和性不同的PAF受体,即高亲和性和低亲和性受体,其亲和力(Kd)分别为(3.61±0.72)nM和(17.04±2.41)*#nM,相应的最大结合容量(max)分别为(1457.94±168.01)fmol/mg蛋白和(5017.40±742.16)fmol/mg蛋白.脑缺血4,24及72h中心区、半暗区及对侧区高、低亲和性受体的Kd值、Bmax值均较假手术组明显下降(P＜0.01),中心区及半暗区下降尤为明显,其中以缺血后24h的变化最为显著.结果表明:PAF受体在介导缺血性脑损伤的病理生理过程中起着重要作用,缺血中心区及半暗区机能代谢的不同与PAF受体亲和特性及最大结合容量改变不同有关,亦是PAF介导继发性脑损伤的重要分子基础.     

大鼠延髓背角浅层内CGRP阳性终末与GABA及甘氨酸能神经元的突触联系

目的 观察大鼠延髓背角（MDH，三叉神经脊束核尾侧亚核）浅层（Ⅰ，Ⅱ层）内降钙素基因相关肽（CGRP）阳性终末与γ－氨基丁酸（GABA）能和甘氨酸（Gly)能神经元的突触联系。方法 包埋前GABA或Gly免疫组织化学染色方法结合包埋前CGRP免疫金标记电镜技术。结果 GABA或Gly阳性产物广泛分布于神经元胞体、胞突和树突内，CGRP阳性标记主要见于无髓和薄髓轴突内。约53％和51％的CGRP阳性轴突终末分别与GABA和Gly阳性神经元的胞体或树突形成非对称性突触，其中的多数为轴－树突触，轴－体突触较少。结论 含CGRP的初级传入纤维直接与MDH浅层内的GABA能及Gly能抑制性中间神经元形成突触联系。     

抗乙肝表面抗原中草药的筛选(体外及树鼠句动物试验)

目的:筛选具有抑制乙型肝炎表面抗原(HBsAg)活性的中草药.方法:体外试验采用反向间接血凝法,动物实验采用本室自己建立的乙型肝炎树鼠句感染模型.结果:通过体外试验,从200种常用中草药中筛选出具有较明显抑制HBsA活性的5种药物,它们分别是珍珠草(叶下珠)、桑椹子、五倍子、丹参和仙茅,这5种药物可使HBsAg滴度从1∶327 68降至1∶16.进一步在树鼠句体内进行抗乙肝病毒抑制试验,仅有珍珠草和五倍子有清除HBsAg的作用.结论:体外实验及动物实验均表明珍珠草及五倍子有较强抗HBsAg作用,值得进一步作临床疗效的评价.     

应用环孢素A探讨树鼠句对乙型肝炎病毒的易感性

目前尚无理想的乙型肝炎动物模型。80年代以来苏建家等相继报告ＨＢＶ可实验性暂时性地感染树鼠句[1～3]。Ｇｏｔｅ等用环孢素Ａ成功地建立了慢性土拨鼠肝炎动物模型[4,5]。为了验证树鼠句对ＨＢＶ感染的敏感性,并试图在其潜伏期内采用免疫抑制的方法建立慢性ＨＢＶ感染动物模型,特进行以下实验。1　材料与方法11　实验动物　健康成年树鼠句24只,由中科院昆明动物所提供,雌雄不拘,体重86～112ｇ,单只笼养,室温24℃左右,相对温度65%～70%,实验前驯养3周。12　主要试剂　美国ＺＹＭＥＤ生物技术公司施作榕教授赠送;鼠抗人ＨＢｓＡｇ单克隆抗体,生物素标记羊抗鼠ＩｇＧ抗体,兔抗人ＨＢｃＡｇ抗体,生物素     

补阳还五汤对脊髓神经元NGF和GABA表达的调节作用

应用免疫细胞化学方法观察了补阳还五汤提取液对体外培养脊髓神经元ＧＡＢＡ和ＮＧＦ表达的调节作用。结果表明：用药后ＮＳＥ和ＮＧＦ免疫反应阳性神经元数目、胞体及突起面积（ＡＦ值）明显大于空白对照组（Ｐ＜０．０１），而ＧＡＢＡ免疫反应阳性神经元的数目及ＡＦ值则小于对照组（Ｐ＜０．０５）。     

大鼠上橄榄复合体中枢听觉信息处理相关蛋白的研究

目的:同位素相对标记和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantitation,iTRAQ)技术分析大鼠上橄榄复合体(superior olivary complex,SOC)胞膜差异蛋白?方法:从 P60健康的雄性Sprague Dawley(SD)大鼠的脑组织中,分离出耳蜗核(cochlear nuclear complex,CN)?SOC和下丘(inferior colliculus,IC),用iTRAQ技术检测SOC区域胞膜蛋白并分析其差异表达的蛋白质?以剩余脑组织(Rest)作为对照?结果:质谱分析共鉴定到1 937种膜蛋白质,核团间两两比较,确定SOC有14种区域特异蛋白?Gene ontology(GO)功能分析提示丙氨酸-tRNA连接酶(alanyl-tRNA synthetase,Aars)?双官能谷氨酰-脯氨酸-tRNA合成酶(glutamyl-prolyl-tRNA synthetase,Eprs)?α-内连蛋白(α-internexin,Ina)和溶质载体44A1(solute carrier 44A1,Slc44A1)等蛋白主要参与神经系统发育?神经传递和突触可塑性,其余蛋白与能量代谢有关?结论:iTRAQ技术分析SOC胞膜差异蛋白,鉴定到Aars?Eprs?Ina?Slc44A1等蛋白参与中枢听觉信息处理,为进一步研究中枢听觉处理障碍提供了理论依据?     

树鼠句脑缺血与IL-8的关系及银杏内酯B的保护作用

观察细胞因子之一，即白细胞介素8(interleukin-8,IL-8)在树鼠　句血栓性脑缺血形成过程中的变化规律,探讨其在缺血性脑损伤中的作用以及血小板活化因子受体拮抗剂-银杏内酯B(ginkgolide,GB)的脑保护作用机制是否与其对IL-8水平的调节有关．采用光化学反应法诱导树鼠　句[ HT5”SS〗局部脑血栓形成；采用经典双抗夹心酶联免疫法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测缺血4，24及72?h中心区、半暗区、对侧区和血清的IL-8水平，并观察在血栓形成后6?h静脉注射GB(5?mg.kg-1)对IL-8水平的影响．结果：脑血栓形成后缺血中心区、半暗区、对侧区和血清的IL-8水平随缺血时间的延长而呈逐渐升高趋势，并在 72?h时达到高峰，其中以缺血中心区IL-8水平(29.25±9.36）ng/dl最高，与假手术组缺血中心区(1.32±0.22)ng/dl相比较有显著性差异(P<0.01)；血清的 IL-8水平(8.21±0.83)?ng/dl与假手术组(1.44±0.21)?ng/dl相比较有显著性差异( P<0.05)；另外，GB药物组缺血中心区IL-8水平下降到(10.01±1.12) ng/dl，血清的IL-8水平也降至达(6.23±1.04)?ng/dl，显著性差异(P<0.01)存在于GB药物组与未给药组或溶剂组之间．结果表明：(1)脑缺血后IL-8水平升高与缺血状态下血脑屏障通透性增高导致脑组织外IL-8的渗入有关；同时，免疫反应性细胞( 如单核细胞、中性粒细胞及淋巴细胞等)和血小板在脑缺血后IL-8 mRNA的表达升高也是机理所在；(2)GB能逆转缺血后IL-8水平的升高，是其改善血脑屏障(blood brain barrier,BBB) 通透性及拮抗血小板活化因子介导的炎症反应的结果；(3)IL-8在脑血管疾病的发生中主要起损伤作用，直接作用可能是通过趋化、激活PMAL；间接增加BBB的通透性；(4)GB对IL-8可能有间接影响，其脑保护作用的机制主要是通过拮抗PAF受体、调节MAO活性与抑制IL-8水平升高等途径来实现的．     

钾离子通道相互作用蛋白1在大鼠脑中的分布及其与GABA能神经元

目的与方法用免疫组织化学法结合激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)观察钾离子通道相互作用蛋白1(KChIP1)免疫阳性神经元在大鼠脑中的分布及其与GABA能阳性神经元的定位关系,研究钾离子通道相互作用蛋白1(KChIP1)的功能。结果KChIP1免疫阳性神经元在大鼠皮层、海马均可见,海马部位KChIP1阳性神经元主要分布于锥体细胞层、齿状回颗粒细胞层;KChIP1阳性和GABA能阳性神经元在正常大鼠大脑顶叶皮层和海马部位的共存比例分别为63.94%、63.11%。结论在大鼠脑内,KChIP1主要与抑制性GABA能神经元共存发挥其调节神经元兴奋性的功能。     

豚鼠脑干听觉中枢和内侧膝状体GABAA受体β亚单位的分布

目的：研究豚鼠脑干听觉中枢内侧膝状体ＧＡＢＡＡ受体β亚单位的分布。方法：采用免抗ＧＡＢＡＡ受体β亚单位血清和免疫组织化学ＡＢＣ法及葡萄糖氧化酶－ＤＡＢ－镍成色技术。     

大鼠胼胝体神经元化学性质研究:Ⅱ.γ—氨基丁酸的免疫细胞化学研究

用辣根过氧化物酶(HRP)逆行示踪与γ-氨基丁酸(GABA)免疫细胞化学结合法研究了大鼠额叶和枕叶皮质内胼胝体神经元的化学性质.结果发现,有少量胼胝体神经元为 GABA 免疫反应阳性.含 GABA 的胼胝体神经元为中等大小的非锥体细胞,胞体为圆形、椭圆形或梭形,绝大部分位于皮质Ⅴ、Ⅵ层,并有成群分布的倾向。本文首次从形态学上证实,少量胼胝体神经元含抑制性神经递质 GABA,因而具有抑制性质。含GABA 的胼胝体神经元的存在还提示:至少在大鼠大脑皮质内一些含 GABA 神经元有比局部回路神经元较长的轴突投射。     

母语为汉语者听觉性语言中枢的定位

目的采用脑磁图(magnetoencephalography,MEG)的等价偶极子定位法(equivalent current dipole,ECD)和合成孔径磁场定位法(synthetic aperture magnetometry,SAM)定位母语为汉语健康自愿者的听觉性语言中枢,探讨汉字的语言加工过程。方法对15例母语为汉语的健康受试者采用北京大学附属第一医院制定的利手评定标准进行利手评定,采用给予听动物名称、植物名称的语言任务刺激,用MEG记录刺激后产生的诱发磁场,将采集的数据与MRI叠加,定位听觉性语言中枢。结果所有受试者听到动物名称、植物名称后均在双侧大脑半球诱发出明显的晚发磁反应波,其中左侧大脑半球磁反应波分化较右侧大脑半球好。结论母语为汉语的正常人听觉性语言中枢与经典的语言中枢基本相符,即听觉性语言中枢定位于左侧颞中回、颞上回、缘上回。     

树鼠句血栓性脑缺血时单胺氧化酶(MAO)活性的变化及银杏内酯B作用机理的探讨(摘要)

揭示血栓性脑缺血时缺血区和血清单胺氧化酶(monoamine oxidase,MAO)活性变化及对血小板活化因子(platelet activating factor, PAF)受体拮抗剂银杏内酯(Bginkgolide B, GB)作用机理的探讨建立光化学诱导树鼠句血栓性脑缺血模型.用酶比色法测量缺血后4,24及72 h中心区、半暗区、对侧区及血清的MAO活性,并用双缩脲法测定上述各区的蛋白含量,观察缺血后树鼠句以上不同时间点肾上腺超微结构的改变结果:脑缺血后不同时间缺血中心区MAO活性均明显下降,半暗区及对侧区和血清的MAO活性进行性升高,以72h最为明显,与假手术组相比均有显著性差异(P＜0.01);光化学反应后6h舌下静脉一次注射PAF受体拮抗剂(GB 5mg/kg)后,24h时,半暗区MAO活性明显下降,而中心区则相反(P＜0.01)MAO活性变化与相应区域蛋白含量改变一致(r=0.81).超微结构观察显示缺血后反映肾上腺髓质嗜铬细胞合成及分泌功能的APUD颗粒逐渐衰竭,并可见线粒体肿胀和炎性细胞的浸润等改变.结果表明:脑缺血后中心区和半暗区MAO活性改变是相应区域单胺类递质消长变化的主要原因;MAO活性变化与神经元蛋白质合成能力的改变有关;GB的脑保护作用与其拮抗PAF受体和调节MAO活性而促进递质平衡有关.     

听觉剥夺延缓大鼠上外橄榄核神经元抑制性突触的发育

目的 在出生后2周,大鼠上外橄榄核(LSO) 神经元所接受的抑制性神经递质投射从以γ-氨基丁酸(GABA)为主逐渐转变为以甘氨酸为主,探讨听觉剥夺对该转变的影响.方法 利用电压固定膜片钳技术,观察生后13～15 d听觉剥夺大鼠和正常发育大鼠LSO神经元中GABA和甘氨酸受体电流的构成比率.结果 在出生后4～6 d LSO神经元,GABA和甘氨酸受体电流成分分别为(65.7±5.3)%和(34.3±5.3)%,出生后13～15 d正常发育大鼠为(14.9±5.1)%和(84.1±5.1)%;出生后13～15 d听觉剥夺大鼠为(38.7±5.9)%和(61.3±5.9)%.与正常发育组相比,听觉剥夺大鼠LSO神经元接受较多的GABA能投射(P＜0.001)和较少的甘氨酸受体电流(P＜0.001).结论 听觉剥夺大鼠LSO神经元的抑制性神经递质转换现象出现部分受阻,听觉信号刺激与听觉中枢通路的发育相关.     

听觉剥夺延缓大鼠上外橄榄核神经元抑制性突触的发育

目的在出生后2周,大鼠上外橄榄核(LSO)神经元所接受的抑制性神经递质投射从以γ-氨基丁酸(GABA)为主逐渐转变为以甘氨酸为主,探讨听觉剥夺对该转变的影响。方法利用电压固定膜片钳技术,观察生后13~15d听觉剥夺大鼠和正常发育大鼠LSO神经元中GABA和甘氨酸受体电流的构成比率。结果在出生后4~6dLSO神经元,GABA和甘氨酸受体电流成分分别为(65.7±5.3)%和(34.3±5.3)%,出生后13~15d正常发育大鼠为(14.9±5.1)%和(84.1±5.1)%;出生后13~15d听觉剥夺大鼠为(38.7±5.9)%和(61.3±5.9)%。与正常发育组相比,听觉剥夺大鼠LSO神经元接受较多的GABA能投射(P<0.001)和较少的甘氨酸受体电流(P<0.001)。结论听觉剥夺大鼠LSO神经元的抑制性神经递质转换现象出现部分受阻,听觉信号刺激与听觉中枢通路的发育相关。