一种简易的兔视网膜脱离模型

目的　建立一种较为简易的孔源性视网膜脱离动物模型。方法　 18只成年白兔 ,除 2只 4眼作为对照外 ,余 16只 32眼均分为 8组作为实验组 ,在间接检眼镜直视下 ,用 5 0nm玻璃微管在下方 6 :0 0赤道部位视网膜造孔后 ,注射 0 .5mL生理盐水于视网膜下间隙 ,术后观察眼底、B型超声检查和术后 0 .5、1、3、6、2 4h和 3、7、14d摘除眼球作组织学观察。结果　实验组兔眼术后均发生孔源性视网膜脱离 ,可见视网膜呈灰白色隆起。 2眼玻璃体出血 ,1眼晶状体后囊损伤 ;视网膜脱离范围 3:0 0～ 9:0 0达 5 0 %以上。视网膜脱离维持 2～ 14d。组织学切片显示 ,7d视网膜色素上皮细胞增生肥大和炎症细胞浸润 ,14d组可见视网膜自行复位的视网膜色素上皮多层化改变。结论　此方法简便易行 ,模型稳定、可靠。     

内皮素-1在实验性视网膜脱离兔中的表达特征

目的 观察内皮素-1(endothelin-1,ET-1)在实验性视网膜脱离兔中的表达.方法 选取18只(36眼)中国大白兔,对照组2只(4眼);实验组16只(32眼).实验组大白兔在间接检眼镜直视下,用50 nm玻璃微管在兔眼下方6:00钟位赤道部视网膜造孔并注射0.5 mL生理盐水于视网膜下间隙.实验组各取2只4眼兔于术后0.5 h、1 h、3 h、6 h、24 h和3 d、7 d、14 d摘除眼球作组织学观察并以免疫组织化学和原位杂交的方法检测ET-1在视网膜的表达,并于抽取玻璃体降眼压以及取眼球时分别抽出玻璃体用放射免疫测定法检测ET-1浓度.结果 实验组兔眼术后均发生视网膜脱离,视网膜脱离范围3:00-9:00钟位.从模型建立后3 h,经放射免疫测定开始可检测出玻璃体中存在ET-1,浓度逐渐上升,并随后下降,而免疫组织化学的结果提示,ET-1在模型建立后24 h开始表达.原位杂交检测结果也证实,建模后玻璃体液中检测出ET-1,ET-1的mRNA主要表达在视网膜神经层各层细胞和RPE的细胞核,胞浆只有较弱的着色,造模24 h后,胞浆的着色才明显加深,并且在建模后3 d时着色明显,7 d、14 d减弱.结论 ET-1在视网膜脱离中是一种早期表达的细胞因子,有峰值,也有低谷,除与视网膜脱离的损伤有关外,其在视网膜下液含量的波动与外屏障的破坏和细胞因子间的相互作用有关.     

姜黄素防治兔眼增生性玻璃体视网膜病变的实验研究

背景先前的系列研究表明,姜黄素可以诱导体外培养的兔视网膜色素上皮（RPE）细胞凋亡,抑制其RPE细胞的增生,且在玻璃体内应用后不良反应较小,具有防治增生性玻璃体视网膜病变（PVR）的潜在价值。目的探讨姜黄素玻璃体内注射对RPE细胞诱导的兔眼PVR模型的防治效果。方法新西兰白兔20只40只眼,所有兔眼玻璃体注射前先抽取0．2ml玻璃体液,然后在兔眼玻璃体内注射0．1ml（2×10^6）同种RPE细胞,每只兔随机选取1只眼立即注入1mg／L的姜黄素0．1ml作为姜黄素组（20只眼）,对侧眼注入等量的含质量分数0．5‰DMSO的生理盐水作为对照组（20只眼）。注药后1、3、7、14、21、28d裂隙灯显微镜下观察角膜、房水、晶状体的透明度及眼前节炎症反应情况;使用间接检眼镜、眼底彩色照相和B型超声检查玻璃体视网膜情况。以视网膜脱离发生眼数作为检测指标,评价姜黄素对PVR的防治效果。结果玻璃体注药后1d、3d所有兔眼发生眼前节炎症反应,玻璃体轻中度混浊,但未见增生条带及视网膜脱离。玻璃体注药后7d,所有兔眼前节炎症反应基本消退,对照组14只眼（75％）玻璃体出现增生条带,姜黄素组2只眼（10％）玻璃体内出现增生条带,差异有统计学意义（P〈0．01）,但2组均未见视网膜脱离。注药后14d,对照组11只眼（55％）出现视网膜脱离,姜黄素组2只眼（10％）出现视网膜脱离,差异有统计学意义（P〈0．01）;注药后21d,对照组16只眼（80％）出现视网膜脱离,姜黄素组3只眼（15％）出现视网膜脱离;注药后28d,对照组19只眼（95％）出现视网膜脱离,姜黄素组3只眼（15％）出现视网膜脱离,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论姜黄素玻璃体腔内注射可以有效预防RPE细胞诱导的兔眼实验性PVR的发生发展。     

羊膜匀浆治疗实验性孔源性视网膜脱离的超微结构观察

目的对羊膜匀浆治疗实验性孔源性视网膜脱离的超微结构进行初步观察,并对其组织病理学结果进行评价。方法20只兔（每只兔1眼）随机分为A组（治疗组）10眼、B组（对照组）10眼。人造视网膜裂孔,治疗组裂孔表面滴加0．1mL羊膜匀浆上清液,对照组滴加0．1mL PBS,术毕20％SF6眼内填充。术后14d处死动物,透射电镜观察。结果术后14d。治疗组视网膜复位6眼（60．00％）,对照组视网膜复位2眼（20．00％）。透射电镜观察,治疗组在视网膜裂孔边缘及底部有多层Maller细胞及RPE细胞增生,与其下脉络膜发生粘连。而对照组,视网膜裂孔边缘细胞增生明显较少。结论羊膜匀浆治疗兔实验性视网膜脱离,有助于封闭视网膜裂孔,裂孔边缘增生细胞经电镜证实主要是视网膜Miiller细胞和RPE细胞     

地塞米松1 mg玻璃体注射对ET-1在实验性视网膜脱离表达的影响

目的观察1mg地塞米松(dexamethasone,DEX)玻璃体注射对ET1在实验性视网膜脱离中表达的影响。方法32只白色兔32眼,分为单纯模型组和模型加药组,每组分为4个时段,单纯模型组用50μm玻璃微管在下方6:00赤道部部位视网膜造孔并注射0.5mL生理盐水于视网膜下间隙。模型加药组在模型建立后,再注射1mgDEX于玻璃体中。术后0.5h、1h、3h、6h摘除眼球作组织学观察,以鼠抗MAPK抗体检测视网膜色素上皮(retinalpigmentepithelium,RPE)细胞表达变化,并以免疫组织化学和原位杂交的方法检测ET1的表达并抽出玻璃体,用放射免疫测定法检测ET1浓度。结果实验各组兔眼术后均发生视网膜脱离,视网膜脱离范围3:00～9:00。单纯模型组的视网膜在造模后0.5h,即有ERK表达,并进入RPE细胞核,而模型加药组则4个时间段未见ERK磷酸化进入RPE细胞核。经放射免疫测定,在单纯模型组,ET1从模型建立后3h开始检测出ET1浓度,并有逐渐上升趋势,而模型加药组,4个时间段均未测得ET1浓度;而免疫组化染色,2组4个时间段在视网膜均未检测出ET1表达;原位杂交也证实,在造模后3h,单纯模型组ET1mRNA主要表达在细胞核,6h在胞浆只有较弱的着色,而模型加药组4个时间段,在RPE层均未检测出ET1mRNA。结论1mgDEX玻璃体注射不但影响外源性ET1进入视网膜下,而且抑制RPE内源性ET1的表达。     

玻璃体腔注射人PRP联合巩膜外冷冻建立PVR动物模型的研究

目的探讨玻璃体腔内注射人富含血小板血浆(platelet-richplasma,PRP)联合巩膜外冷冻建立增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy,PVR)动物模型的效果。方法选取青紫蓝兔52只,随机分成实验组及对照组,每组各26只,每只兔随机选取一眼作为实验眼。取健康体检者静脉血制备PRP。暴露实验眼颞上方巩膜,于角膜缘后3.5mm行巩膜切开,剪除玻璃体约0.5mL,实验组玻璃体腔注射PRP0.4mL,同时联合巩膜外冷冻;对照组单纯行玻璃体腔注射PRP0.4mL。分别于造模后1d、3d、7d、14d、28d行裂隙灯、间接眼底镜及B超观察玻璃体增殖及视网膜脱离情况,并进行PVR分级。分别于造模后7d、14d及28d每组随机选取2只兔摘除眼球行组织病理学检查。结果实验组和对照组造模后28d视网膜脱离的发生率分别为95%和65%,2组成模率比较,差异有统计学意义(χ2=3.906,P=0.048)。临床和B超观察:实验组造模后1d出现明显玻璃体混浊、3d出现玻璃体增殖条索、7d出现局限性视网膜脱离、14d广泛视网膜脱离、28d全视网膜脱离;对照组造模后1d玻璃体轻度混浊、3d出现明显玻璃体混浊、7d可见少量玻璃体增殖条索、14d出现局限性视网膜脱离、28d有广泛视网膜脱离发生。病理组织学观察:实验组造模后7d视网膜表面炎性细胞聚集、成纤维细胞增生,14d视网膜前增殖条索、视网膜皱褶,28d视网膜固定皱褶形成、呈花节样外观;对照组造模后7d视网膜表面见炎性细胞及渗出,14d视网膜表面增殖膜,28d视网膜表面增殖条索出现。结论玻璃体内注射人PRP联合巩膜外冷冻建立PVR动物模型简便有效、成模率高,可作为PVR相关基础研究的建模方法。     

结缔组织生长因子在兔视网膜增生膜中的表达

目的观察结缔组织生长因子（CTGF）在实验性增生性玻璃体视网膜病变（PVR）增生膜中的表达,探讨CTGF在PVR视网膜增生膜形成过程中的作用。方法采用Nobuyo的方法从兔视网膜中分离视网膜色素上皮（RPE）细胞并进行体外培养和传代。第3代RPE细胞制备密度为1.1×10^5/mL的细胞悬液。32只日本大耳白兔,取8只作为正常对照组,其余24只采用玻璃体腔内注入RPE细胞悬液的方法建立PVR动物模型。动物分别于造模后7、30、60d处死并摘除眼球,每次处死8只动物。光学显微镜下观察视网膜增生膜的组织学改变,免疫组织化学法检测PVR视网膜增生膜中CTGF的表达。结果造模后5d检眼镜下可见视网膜增生组织开始形成,增生膜随时间的推移逐渐增厚。组织学检查显示,造模后7d兔视网膜表面可见红染的条索状和网状胶原纤维,并可见大量的增生细胞分布其中。光学显微镜下可见视网膜内界膜变厚、粗糙、断裂或结构不清,视网膜各层结构欠清。免疫组织化学法检测表明,正常对照组在玻璃体及视网膜内未见CTGF的特异性染色。造模后7d,CTGF主要表达于视网膜表面增生细胞;造模后30d,CTGF主要表达于增生的细胞及增生的胶原纤维组织中;造模后60d,CTGF主要表达于增生的胶原纤维组织中。结论 CTGF在实验性PVR动物模型中呈高表达,提示CTGF参与了PVR增生膜的形成。     

维生素E防治增生性玻璃体视网膜病变的实验研究

目的:评价VitE对兔眼实验性增生性玻璃体视网膜病变的抗增殖作用。方法:15只健康家兔行气体压迫玻璃体术,3d后分3组,每组10眼行气液交换。对照组给予0.5mL平衡盐溶液;50μgVitE组给予0.5mL含50μgVitE的平衡盐溶液;100μgVitE实验组给予0.5mL含100μgVitE的平衡液溶液。同时,3组玻璃体内还注入0.1mL含2.5×105的成纤维细胞悬液。以检验镜观察眼底4wk,记录牵引性视网膜脱离的发生情况。28d后摘除眼球,作病理切片,光镜检查。结果:14d时,对照组、50μgVitE和100μgVitE组平均PVR发生程度为3.52.42。即在观察的前2wk,给药组延迟了PVR的发生,且给药组和对照组相比有显著性差别(P<0.05。结论:玻璃体内注入VitE的盐溶液可以延迟PVR牵引性视网膜脱离的发生。     

透明质酸酶对外伤性玻璃体积血转归的影响

目的探讨透明质酸酶对兔眼外伤性玻璃体积血转归的影响。方法28只新西兰白兔,右眼为外伤性玻璃体积血模型,左眼为空白对照眼。1d后随机分为实验组和阳性对照组,每组14只兔（14只眼）。实验组玻璃体腔注射透明质酸酶0．002umol／（min·L）,阳性对照组玻璃体腔注射0．1mL BSS。分别于给药后1、3、7、14、21、28d测量眼压,行裂隙灯及眼底检查。每组抽取2只实验兔行眼球摘除,抽取玻璃体液测定碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的质量浓度,取眼球壁行组织病理学检查。结果给药14d后,实验组的玻璃体混浊程度明显低于阳性对照组,各组间比较差异有统计学意义（P〈0．05）。给药后1d、3d,实验组眼压和空白对照组眼压比较差异均有统计学意义（P〈0．05）,与阳性对照组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。随着时间推移,玻璃体中bFGF的质量浓度均增高,阳性对照组增高更明显。组织病理学检查见实验组和阳性对照组视网膜均出现了水肿和神经节细胞空泡样变、内界膜增厚等改变,但实验组较阳性对照组形成增生膜少。结论透明质酸酶20IU于兔眼玻璃体腔内注射对视网膜无毒性作用,可加速外伤性玻璃体积血的消散,造成眼压一过性降低。     

三种药物在兔外伤性增生性玻璃体视网膜病变中的作用

目的：探讨曲安奈德(TA)、青蒿琥酯(ART)、木犀草素(LU)对外伤性增生性玻璃体视网膜病变(TPVR)的防治作用。

方法：选取青紫蓝兔48只经制作眼球穿通伤及玻璃体腔内注射0.3mL富含血小板血浆的方法制备TPVR动物模型,随机分为4组(n=12),其中对照组玻璃体腔注入0.1mL生理盐水; TA组玻璃体腔注入0.1mL(1mg/mL)曲安奈德; ART组玻璃体腔注入0.1mL(20μg/mL)青蒿琥酯; LU组玻璃体腔注入0.1mL(10μg/mL)木犀草素。术后1、2、3、4wk通过眼底照相和眼部B超观察玻璃体及视网膜增生情况,术后28d采用Western Blot法检测各组兔眼玻璃体液中α-SMA和VIM蛋白表达水平,并经视网膜HE染色观察各组视网膜组织结构情况。

结果：术后28d,TA组、ART组和LU组兔眼TPVR分级均显著低于对照组(P<0.05),且TA组兔眼TPVR分级均显著低于ART组和LU组(P<0.05)。术后28d,TA组、ART组和LU组兔眼玻璃体液中α-SMA和VIM蛋白的表达水平均显著低于对照组(P<0.01)。HE染色结果显示,对照组兔眼视网膜各层排列紊乱,严重扭曲或局部断裂,各层结构不清晰,前膜明显增厚,视网膜明显脱离; LU组兔眼视网膜各层排列轻微扭曲,视网膜前可见炎性渗出,视网膜浅层脱离; ART组兔眼视网膜结构清晰,轻度水肿,可见浅层脱离; TA组兔眼视网膜各层结构清晰,排列尚整齐,局部可见视网膜褶皱,无视网膜脱离。

结论：玻璃体腔内注射曲安奈德、青蒿琥酯及木犀草素均对TPVR具有防治作用,其中曲安奈德效果最明显。     

实验性视网膜脱离及复位后视网膜色素上皮细胞抗增殖性细胞核抗原的表达

目的 观察视网膜脱离和复位过程中抗增殖性细胞核抗原(proiferating cell nuclear antigen, PCNA)表达的状况，以评价其在接触抑制机制中的意义。 方法 对72只猫眼行晶状体 囊外摘除和玻璃体切除手术。3周后，利用微穿刺技术制作视网膜脱离和复位动物模型，在不同时间取眼球并制成组织切片。采用免疫组织化学方法，观察视网膜脱离后视网膜色素上皮(retinal pigment-epithelium, RPE)细胞PCNA的表达。光镜下确定PCNA阳性的RPE细胞并量化增殖反应。采用方差分析(ANOVA)方法 ，对脱离组的脱离区和非脱离区及复位组复位区RPE细胞层PCNA的表达水平进行比较。 结果 在视网膜脱离后24 h，脱离组脱离区视网膜RPE细胞层出现PCNA阳性细胞 ，5～6 d达到高峰，20 d后逐渐回落。在复位组复位区，PCNA标记的RPE细胞明显少于脱离组脱离区。脱离组非脱离区视网膜很少有PCNA标记的RPE细胞。3组PCNA标记的RPE细胞数比较，差异有显著性的意义。 结论 视网膜脱离诱导RPE细胞增殖，而视网膜复位后这种增殖受到抑制。表明视网膜复位过程中，接触抑制的机制在发挥作用。（中华眼底病杂志，2003，19：20-23）     

猫视网膜脱离后视网膜色素上皮细胞的行为观察

目的 观察猫视网膜脱离后，视网膜色素上皮细胞(RPE)的形态学改变及行为变化。方法 28只猫利用微穿刺技术将0．25％Healon注入到视网膜下腔造成视网膜脱离。脱离0．5～90d的视网膜用3％戊二醛固定，加工成组织切片，光镜和电镜下观察RPE细胞形态学变化。结果 视网膜脱离24h，视网膜色素上皮细胞顶端突起被短而均匀的指样突起所取代，RPE细胞顶端表面开始出现耸起。随着脱离时间的延长，细胞表面的这种耸起变得更加明显。脱离14d，RPE细胞开始向视网膜下腔迁移，1～2个月后，在视网膜下腔可以观察到一些小的RPE细胞团簇。结论 视网膜脱离后，RPE细胞的形态发生迅速改变，并且依赖视网膜脱离的时间呈进行性进展。视网膜脱离能诱导RPE细胞形状发生变化，这种形状改变可能与细胞的增殖行为有关。     

Retinal detachment in the cat: the pigment epithelial-photoreceptor interface

Twenty-six cat retinae were surgically detached by injecting fluid into the subretinal space (SRS). The retinae were then studied by light and electron microscopy at detachment intervals ranging from 1/2 hr to 14 months. Degenerative and proliferative changes occur at the retinal pigment epithelial (RPE)-photoreceptor interface very soon after detachment, and the severity of these changes depends upon both the duration and height of the detachment. The specialized apical RPE processes that ensheath the outer segments are replaced by a uniform fringe of short, undifferentiated processes. The apical RPE surface becomes mounded, and this mounding becomes more pronounced at longer detachment durations. Labeling experiments with 3H-thymidine showed that some cat RPE cells enter a phase of stimulated DNA synthesis 12-24 hrs after detachment; RPE mitotic figures are first apparent 48 hrs after detachment. In the cat, discrete regions of proliferated RPE cells usually appear in one of several configurations. A number of different cell types, including polymorphonuclear neutrophils, monocytes at various maturational stages, photoreceptor cells, Müller cells, and RPE cells, appear in the expanded SRS of detached retinae. Rod and cone outer segments degenerate rapidly and become membrane bound sacs by 3 days postdetachment; the assembly of new outer segment membrane apparently does not stop completely even at moderately long detachment intervals (ie, 2 months). Degenerative changes in the inner segments do not take place with the same rapidity as those in the outer segments. The changes that occur at the RPE-photoreceptor interface are rapid, progressive, and sometimes irreversible events that have significant implications for photoreceptor recovery following retinal reattachment surgery.     

Prevention of rod disk shedding by detachment from the retinal pigment epithelium

The authors tested whether or not rod outer segment (ROS) disks are shed when the neural retina is detached from the retinal pigment epithelium (RPE). Adult Xenopus were injected with 3H-L-leucine. Later, when the distal disks of their ROSs were labeled with a band of 3H-leucine, their eyes were enucleated. Intact eyecups, eyecups with partially detached retinae, and retinae that were peeled completely away from the RPE were incubated in culture medium. Disk shedding was stimulated by changes in lighting, or the addition of 0.5 mM ouabain. Where the retina was attached, phagosomes in the RPE, and not the ROSs, contained most of the radiolabel. Where there was retinal detachment, ROSs were still heavily radiolabeled near their distal ends. It was concluded that mechanical retinal detachment prevents ROS disk shedding.     

不放液巩膜外加压术治疗陈旧性视网膜脱离

目的:探讨不放液巩膜外加压术治疗陈旧性视网膜脱离的临床疗效。方法:回顾性分析不放液单纯巩膜外加压术治疗32例32眼陈旧性视网膜脱离的临床病例资料,观察术后最佳矫正视力、手术并发症和视网膜复位情况。结果:术后随访6～12(平均9.2)mo,最佳矫正视力>0.1者17例17眼,2例2眼术后短期内眼压升高,首次手术解剖复位30例30眼,成功率94%。2例2眼术后视网膜下增殖继续发展,行玻璃体切除术后视网膜复位。结论:不放液巩膜外加压术对视网膜下增殖不严重的陈旧性视网膜脱离简单有效。     

玻璃体手术制备视网膜脱离模型的实验研究

目的 探讨应用玻璃体手术制备兔孔源性视网膜脱离模型的病理特征。方法 ２５只兔（２５只眼）均采用玻璃体切割、视网膜裂孔和视网膜下腔注射的方法。制备视网膜脱离模型,排除失败的５只眼后,２０只眼术后进行视网膜电图（ＥＲＧ）和荧光眼底血管造影（ＦＦＡ）检查,并分别于术后第１、４、７天和２８天进行常规的光镜和透射电镜检查。结果 ２０只视网膜全脱离眼、随着时间的延长,视网膜外层变性萎缩,膜状物形成,视网膜皱襞     

Intravitreal injection of fibroblasts: the pathological effects on the ocular tissues of the rabbit following an intravitreal injection of autologous skin fibroblasts.

The intravitreal injection of autologous cultured fibroblasts has been used by many groups to study proliferative vitreoretinopathy. Ninety-five New Zealand white rabbits were used to study the pathological effects on the ocular tissues following such an injection over various time periods up to six months. The ocular tissues were studied by light microscopy, electron microscopy, immunohistochemistry, and autoradiography. The cells which contributed to the inflammatory response (initially neutrophils, then later macrophages and lymphocytes) were found to gain entry into the vitreous via the pars plana, pars plicata, and the vessels associated with the optic nerve head. In the experimental eyes the detached retinae had a reduced ability to incorporate 3H proline. Both epiretinal and subretinal membranes were found on the retinal surfaces. The majority of the glial cells within the membranes were identified as Müller cells. The retinal pigment epithelium beneath the detached retinae incorporated 3H thymidine and detached into the subretinal space. Clear evidence was obtained of both epithelial cell migration through the retina and involvement within epiretinal membranes.     

兔出血性视网膜脱离模型B超与光学相干断层成像观察

目的　观察兔出血性视网膜脱离 (hemorrhagicretinaldetachment,HRD)模型的视网膜脱离状态及视网膜下血液吸收过程。方法　 10只健康青紫蓝兔设立HRD组及肝素盐水组、盐水组、假注射组和正常组 4组对照 ,通过玻璃体腔向视网膜神经感觉层下注射 0 .2mL自体抗凝血制成HRD后 1h ,1、3、7、14和 2 8d行B型超声和光学相干断层成像(opticalcoherencetomography ,OCT)检查。结果　B超显示 :HRD组 :早期呈明显的中高密度回声光带 ,光带与球后壁间为致密回声光点 ,隆起高度逐渐降低 ,14d后光带及光点基本消失 ;对照组视网膜脱离的中高密度回声光带 1d后基本消失。OCT显示 :HRD组 :早期视网膜神经感觉层隆起、增厚 ,随后逐渐变薄 ,2 8d时下方视网膜仍可见隆起的神经感觉层及少量血液 ;视网膜脱离组 :隆起的神经感觉层于 3d后大部分复位 ,脉络膜反光增强。结论　B超及OCT对HRD均能作出较为明确的诊断 ,2者结合可更全面有效的观察到HRD视网膜下血液吸收缓慢 ,视网膜明显变薄。