毫米波辐射对白血病细胞的细胞结构、自由基和bcl-2基因表达的影响

目的 研究毫米波辐射对白血病细胞株的细胞结构、培养体系中的氧化自由基和抗氧化酶系,以及bcl-2基因表达的影响。方法 电镜显微技术研究细胞结构的变化,AnnexinV/PI双染法结合流式细胞术分析细胞株凋亡和坏死,硫代巴比妥酸（TBA）法和邻苯三酚法测定细胞株培养体系中的脂质过氧化物（LPO）和超氧化物歧化酶（SOD）的含量变化;流式细胞仪结合荧光标记抗体检测bcl-2基因表达。结果 毫米波辐射使白血病细胞株细胞结构产生显著的退行性变化,显著诱导细胞凋亡和坏死,抑制细胞活力,脂质过氧化物含量上升,SOD含量下降,bcl-2基因的表达显著下降。结论 毫米波辐射有明显的诱导白血病细胞凋亡的效应,其机制与辐射后氧化自由基水平上升、抗氧化酶系活性下降及bcl-2基因的表达下降有关。     

PUVA诱导K562细胞凋亡时对Fas表达的影响

目的探讨补骨脂素（PSO）加长波紫外线（UVA）光化学疗法（PUVA）诱导人白血病细胞K562凋亡时对Fas表达的影响。方法以K562细胞为研究对象,以细胞凋亡率、电镜下细胞超微结构改变以及细胞Fas基因表达水平、蛋白表达水平为检测指标,观察中药补骨脂中提取的PSO加波长为360 nm的UVA对人白血病细胞诱导凋亡的作用以及部分作用途径,并采用多因素方差分析法进行统计学处理。结果（1）单纯PSO、单纯UVA照射及PUVA均可诱导K562细胞发生凋亡,PUVA的作用显著强于前两者。（2）电镜下观察经PUVA处理后的K562细胞超微结构,可见明显的凋亡形态学改变。（3）单纯PSO、单纯UVA照射及PUVA均可上调K562细胞Fas基因表达水平,PUVA的作用显著强于前两者。（4）单纯PSO、单纯UVA照射及PUVA均可上调K562细胞Fas蛋白表达水平,PUVA的作用显著强于前两者。结论（1）PUVA可诱导白血病细胞K562发生凋亡,作用强于单纯PSO及单纯UVA照射。（2）PUVA诱导K562凋亡的途径之一为上调K562细胞Fas基因表达水平。     

益气养阴方对白血病细胞凋亡的影响

用流式细胞术（ＦＣＭ）观察细胞凋亡,用免疫组化方法检测ｂｃｌ－２基因表达的改变。结果表明,中药益气养阴方可以诱导白血病细胞凋亡,抑制癌基因ｂｃｌ－２的表达。     

榄香烯体外诱导急性白血病细胞凋亡的研究

目的 探讨榄香烯诱导白血病细胞凋亡的作用及其机制。方法 采用MTT法、荧光显微镜、透射电镜、流式细胞术（FCM）、DNA电泳方法观察榄香烯对HL．60白血病细胞株的促凋亡作用，并进行细胞周期分析和采用RT-PCR、FCM检测bcl-2基因表达的变化。结果 榄香烯在体外诱导HL-60细胞凋亡，呈细胞凋亡典型的形态和生化特征，可见凋亡小体和梯形条带，并具有时间剂量依赖性，凋亡率最高达51．8％，在凋亡过程中细胞阻滞于S期，并检测到bcl-2基因表达下调。结论 榄香烯具有诱导细胞凋亡的作用，其机制可能与bcl-2基因表达下调有关。     

中药逆转白血病细胞多药耐药的研究进展

白血病多药耐药是导致化疗失败的主要原因,其机制主要与膜转运蛋白、酶转移系统及抗凋亡通路激活和抗凋亡基因表达等有关。由于西药逆转剂有很强的毒副作用,因此,从中药复方中寻找高效、低毒、多靶点的多药耐药逆转剂已成为当今的一个热点。本文对近年来有关中药逆转白血病细胞多药耐药方面的研究做一综述。     

细胞毒药物对急性白血病原位凋亡的诱导作用

目的 观察细胞毒化疗对急性白血病原位细胞凋亡的影响。方法 用碱性磷酸酶－抗碱性磷酸酶（APAAP）免疫酶标和DNA末端原位标记（ISEL）双重染色方法检测38例急性白血病诱导化疗前后骨髓涂片中细胞凋亡程度及细胞类型,初治组17例与21例治病例对照。结果 化疗后凋亡明显增加,与化疗前比较有极显著差异（P＜0．01）,凋亡指数（AI）＞5％者平均原始细胞下降指数（MBDI）为28．6％,AI＜5％者平均MBDI仅为4．9％。凋亡细胞大多数白血病细胞。非白血病细胞凋亡亦有增加。结论 细胞毒化疗的主要机理这一为促进细胞凋亡。化疗后全血细胞下降与正常造血细胞凋亡增加有关。     

辛伐他汀对急性早幼粒细胞白血病NB4细胞NF-kB信号通路的影响

目的探讨辛伐他汀对人急性早幼粒细胞白血病细胞株（NB4细胞）增殖与凋亡的影响以及对凋亡信号转导通路NF．KB通路相关基因mRNA表达的影响,以探讨辛伐他汀抗白血病效应及可能机制。方法以不同浓度辛伐他汀处理NB4细胞,取对数生长期细胞进行实验。实验分为阴性对照组和辛伐他汀处理组（终浓度分别为5、10、15μmol／L）,培养24、48、72h。采用MTT法观察NB4细胞增殖能力;流式细胞术测定NB4细胞凋亡指标Annex—inV／propidiumiodide变化;PCR芯片研究NB4细胞NF—KB通路相关基因mRNA的差异表达。结果辛伐他汀对NB4细胞的生长有明显抑制作用和促凋亡作用（均P〈0．01）,且呈时间与剂量依赖性。15μmol／L辛伐他汀处理NB4细胞24、48、72h细胞抑制率分别达到45．75％、92．91％、96．46％,而细胞早期凋亡率分别为30．25％、64．34％、87．38％。与对照组相比,15μmol／L辛伐他汀处理NB4细胞48h组中NF—KB通路有56个基因表达发生改变,其中47个基因表达下调、9个基因表达上调。结论辛伐他汀能抑制NB4细胞增殖并诱导其凋亡,其诱导凋亡机制可能与辛伐他汀调节NF—KB通路相关基因的表达有关。     

p16、bcl-2、bax和fas/apo-1基因在急性白血病中的表达及其意义

采用免疫组织化学染色法,检测了61例急性白血病（AL）的p16、bcl-2、bax和fas/apo-1基因表达。结果表明:急性髓系白血病（AML）和急性淋巴细胞白血病（ALL）组的p16、bax和fas/apo-1表达均显著低于对照组（P<0.001）. ALL组的 p16、fas/apo-1表达又显著低于AML组（P<0.05）。 AML和 ALL组 bcl-2基因表达均显著高于对照组（P<0.001）。 AML缓解组的 bcl-2基因表达显著低于未缓解组（P<0.01）。提示:AL可同时存在多个凋亡基因缺陷,bcl-2高表达可作为AML患者化疗不敏感的预后指标之一。     

自拟益气活血方剂诱导白血病HL-60细胞和小鼠S180肉瘤细胞凋亡的研究

由该院血液科徐功立教授和内分泌科赵家军博士等完成的课题《自拟益气活血方剂诱导白血病HL-60细胞和小鼠S180肉瘤细胞凋亡的研究》,不久前通过了科研鉴定。     

死亡相关蛋白激酶对人白血病HL-60细胞凋亡及生存素基因表达的影响

目的：探讨死亡相关蛋白激酶（DAPK）对人白血病HL-60细胞凋亡及生存素（Survivin）基因表达的影响。方法：利用真核表达载体pReceiver-M29-DAPK,用脂质体LipofectamineTM2000介导转染HL-60细胞,荧光染色法观察细胞凋亡;RT-PCR方法检测SurvivinmRNA表达水平的变化。结果：pReceiver-M29-DAPK转染组的凋亡细胞比例高于pReceiver-M29组和空白组。pReceiver-M29-DAPK转染组Survivin mRNA表达水平低于pReceiver-M29组和空白组。结论：pReceiver-M29-DAPK转染诱导HL-60细胞发生凋亡,生存素基因表达显著下调。     

人参总皂苷对人慢性粒细胞性白血病K562细胞Fas、sFas和FasL的影响

人参Panax ginseng C.A.Meyer是祖国医学“补气”要药，人参总皂苷（total saponins of Panax ginseng ,TSPG）是其主要有效部位。既往研究已经证明TSPG既能促进造血干／祖细胞增殖分化及其信号转导，诱导造血生长因子基因表达，又能诱导白血病细胞凋亡和向较成熟细胞分化。诱导细胞凋亡的信号和转导途径多种多样，其中Fas—FasL途径属于死亡因子及其受体介导的信号转导途径。本实验就TSPG诱导人慢性粒细胞性白血病K562细胞凋亡的信号转导机制进行探讨，旨在为研究TSPG治疗白血病等肿瘤的机制提供实验依据。     

奥沙利铂对结肠癌细胞XIAP表达及凋亡的影响

目的 研究奥沙利铂对人结肠癌细胞株SW1116中XIAP表达及凋亡的影响,探讨其诱导凋亡的作用机制。方法 应用流式细胞仪检测XIAP表达及凋亡的情况。结果 奥沙利铂对XIAP表达有明显的抑制作用（P〈0.05）,凋亡率明显高于对照组（P〈0.01）。结论 奥沙利铂具有抑制结肠癌细胞株SW1116中XIAP表达,诱导结肠癌细胞凋亡作用,其机制与抗凋亡相关基因表达减弱有关。     

反义bcl-2基因抗白血病作用的研究

目的 研究反义bcl-2基因抗白血病作用及其特点,探讨反义基因或联合药物体外净化和治疗白血病可行性。方法 （1）RT－PCR和蛋白印迹方法检测HL－60、U937、K562、CEM白血病细胞株以及常见白血病类型的bcl-2 mRNA和P26蛋白表达情况。（2）选择高表达bcl-2基因的HL－60细胞株作为靶细胞,用人工合成bcl-2正反义硫代寡聚脱氧核苷酸（PS－ODN）体外培养处理。检测bcl-2 mRNA和P26蛋白的变化;DNA梯形分析细胞凋亡,锥虫蓝拒染法和克隆培养观察细胞生长;同时将HL－60细胞与PS－ODN培养孵育7天后的活细胞腹腔接种Scid鼠,半巢式RT－PCR和病理分析该HL－60细胞在体内生物学行为改变。（3）建立三种白血病细胞株CEM、K562、HL－60 Scid鼠白血病模型和有效监测与追踪白血病细胞株的方法,掌握体内白血病细胞株生物学行为;用bcl-2正反义PS－ODN腹腔给药治疗HL－60 Scid鼠白血病模型,观察治疗后体内白血病进展变化。（4）用RT－PCR方法克隆bcl-2基因和构建其两种不同的反义RNA逆转录病毒表达载体。（5）转染高表达bcl-2的HL－60细胞,比较两种反义RNA在对抗bcl-2的作用与降低内源性bcl-2蛋白水平上的异同性。观察两种反义RNA介导的靶基因抑制对烷化溶血磷脂（ALP）和四种化疗药物诱导的HL－60细胞凋亡的影响。（6）RT－PCR检测基因转染HL－60在化疗药物作用下FGFβ1表达。结果 （1）白血病细胞株表达bcl-2有差异,bcl-2 mRNA和它的P26蛋白不平行。（2）三种白血病细胞株HL－60,K562,CEM可在Scid鼠增殖,产生典型白血病浸润模型特征,白血病增殖和浸润程度与白血病细胞生物特性有关,其顺序为CEM＞K562＞HL－60。（3）人工合成的bcl-2反义硫化寡脱氧核苷酸（ASPO）能够下调HL－60细胞bcl-2表达,诱导凋亡,抑制增殖和克隆形成;同时使其失去在体内的致白血病能力。（4）bcl-2反义硫代寡脱氧核苷酸,腹腔给药能够抑制肿块增长,白血病扩张,延长Scid鼠生存期,呈剂量依赖性。（5）部分编码区的反义RNA能够降低HL－60细胞内源性Bcl-2蛋白水平,提高ALP和四种化疗药物对HL－60杀伤率,促进它们诱导的HL－60细胞凋亡。（6）反义基因转染的HL－60细胞在化疗药物作用下负调控因子TGFβ1基因表达增加。结论 bcl-2反义基因可有效对抗bcl-2原癌基因表达,发挥明显的抗白血病作用,为体外净化白血病细胞和体内治疗白血病提供依据。     

抗凋亡蛋白XIAP在急性白血病患者中的表达及临床意义

目的探讨抗凋亡蛋白XIAP在急性白血病中的表达及临床意义。方法采用流式细胞术检测55例AL患者及10例正常对照组抗凋亡蛋白XIAP的表达。结果55例初治AL患者表达抗凋亡蛋白XIAP的阳性细胞率（79．85±2．23）％、平均荧光强度（302．70±5．61）,分别较10例正常对照组的阳性细胞率（3．35±2．80）％、平均荧光强度（58．22±16．82）明显升高（P〈0．01）。40例AL患者诱导化疗缓解后表达的抗凋亡蛋白XIAP阳性细胞率（74．35±2．10）％与初治组比较无明显差异（P〉0．05）,但平均荧光强度（124．13±9．47）较初治组明显下降（P〈0．01）。结论XIAP过度高表达与急性白血病的发病相关,XIAP可作为预后不良的指标。     

益康唑诱导HL-60白血病细胞内质网应激反应性细胞凋亡

目的研究唑类抗真菌药物益康唑（Ec）的抗白血病作用及其机制。方法将12μmol／L Ec、0．1μmol／L倍半萜烯酯（Tg）和0．2μg／ml依霉素（Tu）作用于体外培养的人急性髓细胞性白血病细胞HL-60，利用细胞核荧光染色进行形态学观察．Western blot法检测分子伴侣蛋白（GRP78）和胱天蛋白酶（Caspase）的表达。结果HL-60细胞经Ec，Tg和Tu处理后．细胞呈典型的凋亡形态，凋亡率分别为94％、63％和85％。分子伴侣蛋白GRP78的表达明显增加．位于内质网的Caspase12被活化。结论Ec可诱导人白血病HL-60细胞内质网应激反应性细胞凋亡，凋亡的发生与蛋白质合成抑制．Caspase12的活化有关。     

TRAIL基因在白血病原代细胞中的表达

目的：检测白血病原代细胞和正常人外周血淋巴细胞中TRAIL基因的表达情况，探讨TRAIL凋亡途径在肿瘤免疫中的作用。方法：通过RT-PCR检测TRAIL基因的表达。结果：83％（10/12)淋巴系白血病和80％(16／20)髓系白血病患者TRAIL基因表达阳性，正常人外周血淋巴细胞TRAIL基因表达阴性，IL-2能诱导PBL的TRAIL基因表达。结论：大多数白血病原代细胞TRAIL基因表达阳性，可能在肿瘤的自发坏死和凋亡以及免疫逃逸中发挥作用。另外，活化的T细胞表达TRAIL基因，TRAIL可能参与CD95非依赖性激活诱导的细胞凋亡。     

从诱导细胞凋亡的角度筛选抗白血病新药的可能性的探讨

近年来细胞凋亡被广泛地应用于肿瘤研究中。白血病的发病是因造血细胞凋亡机制紊乱所致。联合化疗可诱导凋亡引起白血病完全缓解。现代药理学研究表明，许多中草药具有细胞毒作用，改善体内激素水平，免疫调节及促进诱导白血病细胞分化等作用，这些都是其诱导白血病凋亡的药理学基础，抗白血病中药复方癌灵１号及其有效成分ＡＳ２Ｏ３确能诱导细胞凋亡。因而从诱导白血病发生细胞凋亡的角度筛选具有疗效好，毒副作用小的抗白血病的中     

维生素K2诱导白血病细胞凋亡的体外研究

目的：研究维生素K2（VK2）对白血病细胞生长及凋亡的诱导作用。方法：通过四唑盐比色法、镜下观察凋亡细胞形态及流式细胞仪检测细胞早期凋亡率研究维生素K2对急性早幼粒细胞白血病细胞株（NB4）及白血病患者骨髓单个核细胞（BMNC）的影响。结果：NB4细胞经VK2作用后增殖受到抑制。VK2作用NB4细胞72h后，部分细胞呈现凋亡细胞的特征。5、10、50μmol／LVK：作用NB4细胞72h后细胞早期凋亡率分别为8．06％、20．02％、29．60％，与对照组比较及两两比较差异均有极显著性（P〈0．01）。10μmol／LVK。作用白血病细胞及正常对照BMNC48h后，正常人及淋系白血病患者BMNC细胞早期凋亡率较空白对照组无明显增高（P〉0．05），慢性髓系白血病患者BMNC早期凋亡率较空白对照组增高（P〈0．05），急性髓系白血病患者BMNC早期凋亡率较空白对照组明显增高（P〈0．01）。结论：VK2对白血病有生长抑制作用，可选择性诱导髓系白血病细胞凋亡，且呈剂量依赖性。     

抗bcl-2核酶在HL-60细胞中的表达及促进其凋亡的研究

抗ｂｃｌ－２核酶在ＨＬ－６０细胞中的表达及促进其凋亡的研究［赵永同，王剑波，朱峰ｅｔａｌ．中华血液学杂志，１９９６；１７（１２）：６１９～６２２］为消除白血病细胞中ｂｃｌ－２基因对细胞凋亡的抑制作用，开辟白血病基因治疗的途径．将合成的针对ｂｃｌ－２ｍ...     

三种方法检测急性白血病患者多药耐药基因表达

三种方法检测急性白血病患者多药耐药基因表达艾辉胜杜耀斌王桂林楼方定赖春宁胡美茹胡良平我们联合采用链亲和素胶体金原位杂交（ＩＳＨ－ＳＡＧ）、抗碱性磷酸酶（ＡＰＡＡＰ）免疫细胞化学技术和逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法，检测了５４例急性白血病（Ａ...