温度和二甲亚砜对放射诱导哺乳动物DNA双链断裂的影响

目的 :研究放射引起人乳腺癌细胞株 (MCF- 7)和完整细胞的染色体 DNA双链断裂 (DSB)时 ,亚生理辐射温度 (2℃～ 2 8℃ )的效应和自由基清除剂二甲亚砜 (DMSO)的影响 ,以及细胞在 2℃或 37℃照射后 DSB的重接。方法 :1MCF- 7细胞用含 10 %胎牛血清的 EME培养液于 37℃、5 % CO2 培养 ,传 12～ 2 0代后用 1 4 C胸腺嘧啶核苷(1k Bq/ m L )标记 DNA 7d;2染色体 DNA制备 :制细胞数为0 .5× 10 6 / m L～ 1.0× 10 6 / m L的琼脂糖凝胶块 ,EDTA- NL S-蛋白酶 K缓冲液于 37℃裂解凝胶块中的细胞 48h,冷藏10 d;3染色体 DNA照射 :…     

蜂窝移动电话频率射频辐射(835.62MHz,FDMA)对人血淋巴细胞离体照射的细胞遗传学研究

目的 :研究蜂窝移动电话的射频 (RF)辐射对人血淋巴细胞的细胞遗传学影响。方法 :4名健康不吸烟自愿者 (男 2名 ,女 2名 ,39～ 5 6岁 ) ,各采集外周血 2 0 0 m L,每份血样分别在三个无菌培养瓶中加 4m L 全血 ,以 36 m L RPMI16 40培养液稀释 ,在保温条件下 (37± 0 .3℃ ) ,一瓶培养液用 835 .6 2 MHz(分频多路系统 ,FDMA ) RF辐射连续照射 2 4h,照射的平均比吸收率(SAR)为 4.4或 5 .0 W/ kg;另一瓶假照射 2 4h;第三瓶在同样条件下保温达 2 4h之前的 5 m in用 1 3 7　 Csγ射线照射 1.5 0Gy(剂量率 81.4c Gy/ min)。每瓶照射过的…     

电离辐射和过氧化氢诱导中国仓鼠卵巢(CHO)细胞DNA损伤效应的比较

目的 :阐明在过氧化氢 (H2 O2 )和电离辐射的作用下 ,DNA损伤的诱导、修复和细胞失活之间的关系。方法 :1CHO- 10 A细胞在α基本培养基加胎牛血清培养 ,指数生长 ,用 3H -胸苷标记 (2 .2× 10 3Bq/ml)。 X线照射细胞 ,剂量率 4Gy/m in。用一定浓度 H2 O2 的培养基经 4℃、30min培养细胞后 ,多次冲洗。2细胞种植于培养皿中 ,8d后经乙醇固定并染色 ,大于 5 0个细胞的群落作为存活者。 3单链断裂 (ssb) :DNA培养液换 5 m l碱性溶液 ,避光 30 min,用2 ml HCl溶液阻止 DNA变性 ;2 ml DNA悬液进行超声波处理 ,再加 1.2 m l的 1%十二烷…     

辐射诱导DNA双链断裂的保护作用:对DNA复制和核蛋白的影响

目的 :研究人肿瘤细胞组蛋白和非组蛋白对辐射诱导正在复制的 S期 DNA和坪台期大部分 DNA双链断裂 (dsb)的保护作用。方法 :1选用 Colo32 0 HSR和 MCF- 7两种人腺癌细胞株。 2细胞标记 :用 1.85 k Bq [2 - 1 4 C]-胸苷 / m L标记 72 h后收获坪台期细胞 ;为了研究 S期细胞 ,将指数生长期细胞用7.4k Bq[甲基 - 3H]-胸苷 / m L 标记 30 m in后 ,洗去上清液中游离的放射性物质 ,再将细胞孵育于含 0 .2 3× 10 - 6 mol/ L 胸苷的新鲜培养基中 15 m in。 3照射 :将细胞冷却到 4℃ ,用线性加速器以 7Me V电子照射 ,剂量率为 2 1Gy/ m in,…     

辐射诱导大鼠大脑皮质中转录因子的激活

目的 :检测电离辐射对大鼠脑损伤中相关转录因子 AP-1、Sp- 1、p5 3和 NF- κB的 DNA结合活性的作用。方法 :选择约 2 5 0 g雄性 Sprague- Dawley大鼠和对照大鼠 ,肌注 6 .36 mg/ m L氯胺酮、3.6 mg/ m L xylazine和 0 .6 7mg/ m L阿托品 (0 .15 m L / 10 0 g体重 )溶液进行麻醉 ,然后 ,实验大鼠接受 1 37　 Cs射线 5～ 30 Gy全身照射 (3.8Gy/ min)。另选择一组实验大鼠 ,照射但不麻醉。大鼠在照后 2～ 2 4h断头 ,分离大脑皮质提取核蛋白。用电泳迁移率分析 AP- 1、Sp- 1、p5 3和 NF- кB的 DNA结合活性 ;提取大脑皮质的总 RNA,…     

非致死热疗对低剂量率照射的增敏作用

中国仓鼠V_(79)原代细胞在F_(12)培养基中培养(37℃、潮湿、5%CO_2、95%空气、pH=7.3),取指数生长细胞经处理置于T75瓶(2.5×10~5细胞/瓶),37℃培养12h,细胞于Lauda WGW/B水浴中作加热处理,温度变化小于0.05℃;经胰蛋白酶处理、冲洗、计数、形成集落,培养7～9天后固定、染色、测存活率,部分细胞用流式细胞光度计测细胞周期位置.高剂量率照射用15MeV线性加速器,5Gy/min,热处理后立即照射,低剂量率照射用~(60)Co,0.8Gy/min,与加热同时进行,源距细胞180cm.     

低剂量放疗所致离体外周血单核细胞凋亡呈现不连续剂量依赖性

目的 :观察在抗炎放疗剂量范围内低剂量辐射对外周血单核细胞 ( PBMC)凋亡的诱导及其可能的免疫调节机制。方法 :1标本 :PBMC取自 10名健康志愿者 ( 8男、2女 ,2 6～ 39岁 )。 2照射 :PBMC/ RPMI(标准培养基 )为 1× 10 6 /m l于 37℃照射 ,2 5 0 k V、15 m A,球靶距 40 cm,其中 9份样品以 0 .1～ 3.0 Gy单次照射 ,另 1份在 0 .1～ 1.0 Gy间以 0 .1Gy梯度增加的单次照射 ,剂量率均为 1.15 Gy/ m in,照射后培养12～ 78小时进行流式细胞分析。 3流式细胞仪检测 :用碘化丙锭 ( PI) / Triton染胞核 ,测定凋亡胞核 ;用膜联蛋白 V( Ax …     

不同剂量率γ射线诱发小鼠M5s细胞在坪生长期和对数生长期的突变效应

方法:将小鼠近二倍体细胞M5s置入a-MEM培养液中,加入10%受热灭活的胎牛血清。在5% CO2湿润空气中37℃培养,急性照射(30Gy/h)在室温下进行,低剂量照射(180mGy/h或13mGy/h)在孵化箱恒温37℃下进行。换取培养基,照射中止10分钟,细胞冲洗大约40分钟,用圆柱型电离室测量吸收剂量率。     

人淋巴细胞的凋亡与适应性反应

目的:检测小剂量辐射或膜氧化剂处理的淋巴细胞对其后的辐射或膜氧化剂引起的细胞凋亡效应,以确定适应性反应是否改变辐射或膜氧化剂引起人淋巴细胞凋亡的敏感性。方法:自供血者静脉取血,分离出单核细胞,在RPMI1640培养液中培养。在37℃用60Coγ射线适应性剂量0.1Gy(剂量率为0.01Gy·min-1)照射,攻击剂量2Gy(剂量率为1.0Gymin-1)照射离开37℃培养的细胞。膜氧化剂诱导适应性实验,以叔丁基过氧化氢加入细胞悬液内,分别在0℃或37℃培养30min,用冰预冷的培养液洗去药物,再培养一定时间。用DNA解螺旋荧光分析(FADU)和末端转移酶反应测定…     

中子和γ射线对停滞期小鼠m5S细胞诱发突变和肿瘤转化的剂量率效应

由ICR/Jcl小鼠胚胎组织衍生来的m5S成纤维母细胞系,在37℃ 5%CO2湿空气培养箱中培养,经6或7次传代后用胰酶消化,并取3×108细胞在25cm2培养瓶中培养,每2天换培养基,6天后获得融合单层细胞,用173Cs γ射线或252Cf中子源照射0~6 Gy,γ射线和中子照射的剂量率均为0.12cGy/min和1.8cGy/min。中子源平均能量为2.13 MeV,裂变中子占67%,γ射线占33%,照后分为肿瘤转化组和HPRT-突变组,受照细胞再培养18h,使其潜在致死性损伤修复。     

LEC大鼠辐射敏感性与其遗传性肝炎的诱发Atp7b基因突变之间的无关性

目的 :L EC大鼠是一种突变系大鼠 ,因 Atp7b基因突变而自发产生遗传性肝炎 ,Hayashi等曾提出该鼠的辐射敏感性由单一基因控制且可能与 Atp7b基因突变有关。现拟通过实验以确定其辐射敏感性是否与 Atp7b基因突变有关。方法 :1取 4周龄的 L EC大鼠、F34 4大鼠和杂交大鼠F1 (F34 4× L EC)各 2 0只或 2 1只 ,雌雄各半 ,用 2 0 0 k Vp的 X射线进行一次性照射 ,剂量率为 36～ 37Gy/ min,L EC组剂量为 2 .0～ 4.0 Gy,F34 4组和 F1 组的剂量为 5 .0～ 7.5 Gy,观察30 d,计算出各组 L D5 0 /30 (30天后实验动物半数致死剂量 ) ,并在 7.0 …     

人胎盘和脐带血巨核系集落形成细胞的辐射敏感性

目的 :用重组人细胞因子刺激血浆凝块培养法评价人胎盘和脐带血巨核细胞系集落形成单位 (CFU- Meg)的体外辐射敏感性。方法 :1征得产妇同意的脐带血在密度为 1.0 77g/m L细胞分离液中离心分离 ,收集低密度的单个核细胞 ,再用磁性细胞分选富集 CD34 + 细胞 ,其纯度从 88%至 93%之间。 2用 X射线照射 CD34 +细胞从 0至 5 Gy或 7Gy(73c Gy/m in) ;或照射 2 Gy,剂量率从 8.9c Gy/m in至 5 .3Gy/min。 3用去除血小板的人血浆以血浆凝块培养技术测定 CFU- Meg,其中含 CD34 +细胞浓度为 1× 10 3/m L,THPO(血小板生成素 )单用或与 FL T…     

通过诱导胞核金属硫蛋白保护辐射所致的DNA单链断裂

目的 :研究在有氧和乏氧状态下胞核金属硫蛋白 (MT)对辐射诱导的 DNA损伤的保护程度。方法 ;1选用 ME180和 Si Ha鳞状宫颈癌细胞株 ,均培养于含 10 %新生牛血清和 0 .1mg/ m L 卡那霉素的最低必需培养基中。 2在照前 2 4h向培养瓶中加乙酸锌 (终浓度10 0 μL/ L) ,照前再将 10 0 μL 细胞悬液加至预气化 (5 % CO2的空气 )的培养基中 (10 5细胞 / m L) ,6 0 Co照射 ,剂量率为 1.1Gy/ min。 3应用半定量荧光图像分析法检测两种细胞株在正常生长条件及乙酸锌诱导后胞核 MT含量。4应用流式细胞术检测细胞总 MT含量。5以高效液相色谱为…     

WR-2721和半胱胺对辐射引发妊娠大鼠乳腺肿瘤的抑制作用

方法 :1妊娠 2 0 d的 Wistar- MS大鼠用 6 0 Coγ射线照射1.5 Gy或 2 .6 Gy(0 .15 Gy/ m in)前 30 min,每只大鼠腹腔注射(ip) WR- 2 72 15 0 mg/ 1.5 m l,称为 W1 .5 和 W2 .6 组 ;若 ip半胱胺2 5 m g/ 1.5 ml,称为 C1 .5 和 C2 .6 组 ;若 ip生理盐水 1.5 ml,称为S1 .5 和 S2 .6 组 ;若不照射只 ip生理盐水 1.5 ml,称为 S0 组。 2所有大鼠在哺乳期结束后 1个月于肩胛间皮下植入己烯雌酚 (DES,肿瘤助长剂 )小丸 ,每 8周更新小丸。 3防护指数的计算是用照射组与不照射组肿瘤发生率之差除以给药照射组与不照射组发生率之差求得。4DES…     

低剂量X射线增强丝裂原诱导大鼠脾细胞增殖效应

实验选用8周龄F344/NSIC大鼠固定在2mm厚的丙烯笼内,置于距照射源40cm的照射台上进行全身照射,剂量率分别为0.01、0.025,0.05,0.1和0.2Gy/分,照射时间为1、5和10分钟,同时设空白对照组.照射剂量以大鼠背部皮肤量计算.在照射不同时间将大鼠乙醚麻醉取出胸腺、脾脏,分别置于盛有MEM液的陪替氏培养皿中制成细胞悬液,台盼蓝染色计数后离心,从MEM中移入含有10%小牛血清的RPMI 1640培养液中,最终浓度为5×10~6个/ml.在96孔平皿内加100μl含2倍浓度促细胞分裂剂的1640培养液,37.5℃、5%CO_2条件平衡后,向每孔内加100μl细胞悬液.上述条件下培养第44h加入~3H-TdR、48h收集细胞,液闪计数仪测~3H-TdR掺入量,时间为1分钟.结果如下:     

多胺防护DNA碱基免受辐射诱发降解

目的 :在充氧的水溶液中 ,研究精胺、精脒及腐胺对γ射线诱发 DNA碱基降解的防护作用。方法 :15 0 Gyγ射线照射小牛胸腺 DNA的充氧水溶液(含 0 .0 1～ 1m mol/ L 多胺或 0～ 30 mm ol/ L 二甲亚砜 ,DMSO) ,用高效液相色谱 -电化学法检测溶液中 8- Oxod Guo(8-氧 - 7,8二氢 - 2′-脱氧鸟苷 )和 5 - OHd Cyd(5 -羟基脱氧胞苷 )的产额 ,其分别是羟自由基 (· OH)介导 d Guo(2′-脱氧鸟苷 )和 d Cyd(2′-脱氧胞苷 )氧化的对应标志物。DMSO能高效率地抑制 · OH。 2 5 0 0 Gy和 5 0 Gyγ射线分别照射 d Ado(2′-脱氧腺苷 ,1m mol/ …     

T98G人恶性胶质瘤细胞株对低剂量辐射的超敏感性

目的 :为探讨人恶性胶质瘤细胞株 ( T98G)的低剂量辐射反应 ,利用动态显微镜图像处理扫描仪 ( DMIPS)或细胞分选仪 ( CS)两种方法测定细胞存活分数及确定细胞周期时相对这种反应的影响。方法 :1使用非同步化生长细胞实验。第 1组 :处于指数生长的细胞置于 3× 10 3细胞 / 5 ml培养液 [10 %胎牛血清的伊格尔氏最低限度必需介质 ( EMEM)培养基 ]培养瓶内 ,用0 .0 5～ 5 Gy X射线单次照射 ,剂量率为 0 .2～ 0 .4Gy·min- 1 。然后用 DMIPS扫描记录 2 0 0～ 30 0个细胞方位 ,在37℃培育 7天后再用 DMIPS扫描 ,在记录的细胞方位上检测…     

X线照射大鼠离体胸腺、脾细胞后核质体粘度的变化

辐射诱发的DNA损伤和修复,不仅影响到多聚核苷酸链,对DNA的超螺旋也有作用.本文通过对大鼠胸腺(T)细胞和脾(S)细胞核质体粘度和沉降率的检测,比较了经X线照射后,T、S细胞DNA超螺旋的损伤和修复.实验用的T、S细胞取自雌性Sprague-Dawley大鼠,悬浮于无Ca~(++)、Mg~(++)的Hank's液中(25×10~6细胞/ml).制备好的细胞悬液应尽快用于照射,辐照采用西门子710H X线机,剂量率为1.75Gy/min,一次照射剂量范围为0.6～19.2Gy,对照用模拟照射,研究修复现象的细胞照射后应在37℃下温浴适     

p~(53)依赖途径的辐射诱导潜在致死损伤的研究

目的 :研究潜在致死损伤 (PL D)是否与 p5 3有关。方法 :采用 12种肿瘤细胞株和 3种人二倍体纤维原细胞株分析辐射敏感性、DNA双链断裂重连接、PL D表达及修复 (PL DR)。其中 7种细胞株 p5 3正常表达 ,8种 p5 3功能缺陷 (6种基因突变 ,2种 HPV 16 E6转染 p5 3表达正常的细胞株 )。取指数生长期 (辐射前低密度培养 18h)和高峰生长期细胞 (待细胞长满后继续培养 3 d以上 ) ,1 3 7　 Csγ射线或 X射线 (剂量率为 1Gy/ min,剂量为 7Gy)照射后立即或于 2 4h以后消化成单细胞悬液 ,培养 2～ 3周 ,固定 ,0 .2 5 %结晶紫染色 ,观察细胞克隆…     

照射γ-亚麻酸盐溶液形成不同过氧化氢产物的证据:微胶粒形成效应

目的 :脂质的过氧化作用是机体细胞或组织损伤的原因。本文拟证实脂肪酸浓度及微胶粒亚麻酸过量浓度时的聚合物体积对过氧化反应产物的影响。方法 :1贮藏在氩气中的 γ-亚麻酸 ,使用前用双蒸馏水新鲜配制 ,浓度为 1～ 2 5 m mol/ L,用 Na OH调节 p H至 10 .5 ,并形成亚麻酸钠。 2辐照室为 1 37　 Csγ射线源 (2 2 2 TBq活性 ) ,在空气 2 5℃中照射亚麻酸钠溶液 ,剂量率为 9.8Gy/ min。 3用分光光度计记录过氧脂肪酸与相应的非过氧脂类的光谱吸收率 (在 2 34 nm附近 )之间的差异 ,作为测量共轭二烯的浓度 ,克分子消光系数取 2 80 0 0 / (…