益气活血方药对老年大鼠肝脏衰老相关基因表达的影响

目的:观察益气、活血方药对老年大鼠肝脏衰老相关基因表达的影响.方法:以自然衰老大鼠为衰老模型,采用RT-PCR、Western blotting法研究益气、活血方药对老年大鼠肝脏p16、p21、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、cyclin D1和cyclin E mRNA转录和蛋白表达的影响.结果:老年大鼠肝脏p16、p21、cyclin D1 mRNA转录和蛋白的表达增加;PCNA、cyclin E mRNA转录和蛋白的表达降低.与老年大鼠比较,益气、活血方药可下调老年大鼠肝脏cyclin D1 mRNA转录和蛋白表达,上调促进增殖基因cyclin E mRNA转录和蛋白表达,但对p16、p21和PCNA的调节作用不明显.结论:益气、活血方药主要通过调控cyclin D1和cyclin E mRNA转录和蛋白表达而促进细胞增殖.     

加味四君子汤诱导小鼠肿瘤细胞凋亡的实验研究

目的:从诱导肿瘤细胞凋亡的角度探讨中药复方加味四君子汤抗肿瘤作用的机理。方法:1.运用透射电镜观察肿瘤组织中凋亡细胞的超微结构。2.运用原位末端标记法观察凋亡细胞形态并计数,计算凋亡指数。3.运用流式细胞仪分析加味四君子汤对肿瘤细胞增殖周期的影响。结果:1.透射电镜观察到凋亡细胞超微结构发生了一系列典型变化。2.原位末端标记法镜下可见不同时期的凋亡细胞,加味四君子汤组凋亡指数为12.29%,与生理盐水组比较差异非常显著(P<0.01)。3.流式细胞仪分析发现加味四君子汤组G0-G1期细胞增加,S期和G2-M期细胞减少,中药组处于G0-G1期的细胞占57.88%,与生理盐水组比较差异非常显著(P<0.01)。结论:加味四君子汤抗肿瘤作用机理之一可能是将细胞周期阻滞在G0-G1期,继而导致受阻滞的细胞发生凋亡。     

索拉菲尼对人肝癌细胞株HepG2抑制作用的研究

目的:探讨分子靶向药物索拉菲尼(Sorafenib)在体外对人肝癌细胞株HepG2的抑制作用.方法:采用MTT法检测Sorafenib对HepG2细胞的增殖抑制率,流式细胞仪分析细胞周期和凋亡率.结果:Sorafenib能明显抑制HepG2细胞增殖,呈时间-剂量依赖效应;6μmol/L的Sorafenib理HepG2细胞72d,时,HepG2 细胞周期中的S期比例明显升高,G0-G1期、G2-M期比例明显下降,凋亡率明显上升(P<0.05,P<0.01).结论:Sorafenib对体外人肝癌HepG2细胞具有明显的抑制作用,主要表现为抑制其增殖和促进其凋亡.     

脐血NK细胞改善亚急性衰老大鼠肝脏损伤

目的 探讨脐血NK细胞改善亚急性衰老大鼠模型肝脏损伤的可行性及其分子机制。 方法 采用基因工程改造的K562细胞,从新鲜脐带血获得大量NK细胞。8~10周龄雄性Wistar大鼠随机分为4组:Normal组、Model组、Mod-Con组和Mod-NK组。实验完成1周后观察大鼠体质量及肝脏指数,检测血清和肝脏中超氧化物岐酶(SOD)、丙二醛(MDA)及肝脏中凋亡相关基因的表达,观察肝脏切片组织细胞形态变化。 结果 皮下注射D-半乳糖可成功构建亚急性衰老大鼠模型。输注大量高纯度的脐血NK细胞,可显著改善其肝脏损伤,促进体质量回升(P<0.01)并降低肝脏指数(P<0.05),血清及肝脏中SOD活性增强(P<0.01),MDA水平降低(P<0.01);肝脏切片示肝细胞水肿减轻,Masson染色显示肝组织纤维化减轻;促凋亡基因表达减少(P<0.01),而抗凋亡基因成纤维细胞生长因子表达上升(P<0.01)。 结论 脐血NK细胞输注可有效改善亚急性衰老大鼠的肝脏损伤。     

内皮素-1对大鼠骨髓内皮前体细胞凋亡和细胞周期的影响

目的:探讨内皮素-1(ET-1)对大鼠骨髓内皮前体细胞(EPCs)凋亡及细胞周期的影响.方法:采用密度梯度离心法获取大鼠骨髓单核细胞,在M199培养液中培养扩增EPC并进行鉴定.EPCs被分为对照组和ET-1组(100 μmol/L),各组再分为不同干预时间组(24,48,72,96 h),流式细胞仪检测EPC凋亡率和细胞周期比例.结果:24,48,72,96 h ET-1组凋亡率均比相应时段对照组低(P<0.01);72 h ET-1组和96 h ET-1组分别较48 h ET-1组有所降低(P<0.05和P<0.01).24,48,72,96 h ET-1组G0/G1期细胞比例均较相应时段对照组减少(P<0.01);24,48,72,96 h ET-1组S期细胞比例均较相应时段对照组增加(P<0.01);24,48,72,96 h ET-1组G2/M期细胞比例均较相应时段对照组增加(P<0.01).结论:ET-1可以同时促进EPC凋亡和增殖,随着干预时间延长,增殖效应逐渐显著.     

辛伐他汀对血管内皮祖细胞复制性衰老的抑制作用及其机制

目的：探讨辛伐他汀对血管内皮祖细胞(EPCs)复制性衰老的影响,阐明辛伐他汀抗衰老的作用机制。方法：取第2代EPCs作为正常对照组,取第8代细胞作为实验组,分为高剂量辛伐他汀组（培养基中的辛伐他汀浓度为1×10－7 mol?L-1）、低剂量辛伐他汀组(培养基中的辛伐他汀浓度为1×10－8 mol?L-1)和复制性衰老细胞组。继续培养7 d,流式细胞术检测各组细胞凋亡率、细胞周期以及Bcl-2蛋白的表达水平。结果：正常对照组细胞的早期凋亡率和晚期凋亡率低于其他3组 (P<0.05或P<0.01);高剂量辛伐他汀组、低剂量辛伐他汀组和复制性衰老细胞组3组间早期凋亡率比较差异无统计学意义(P>0.05);与复制性衰老细胞组比较,高剂量辛伐他汀组和低剂量辛伐他汀组细胞的晚期凋亡率降低(P<0.01或P<0.05),高剂量辛伐他汀组与低剂量辛伐他汀组之间的细胞晚期凋亡率比较差异无统计学意义(P>0.05)。与正常对照组比较,高剂量辛伐他汀组、低剂量辛伐他汀组和复制性衰老细胞组细胞大部分停滞于G0/G1期,S期及G2/M期减少(P<0.01);实验组3组之间各细胞周期细胞比例比较差异无统计学意义(P>0.05)。正常对照组细胞Bcl-2蛋白表达的荧光强度和阳性表达率均明显高于其他3组(P<0.01）;高剂量辛伐他汀组的荧光强度和阳性表达率高于复制性衰老
组(P<0.05或P<0.01）,低剂量辛伐他汀组的阳性表达率高于复制性衰老组(P<0.01）,但荧光强度与复制性衰老组比较差异无统计学意义（P>0.05)。结论：辛伐他汀可能通过降低Bcl-2蛋白的表达来延缓EPCs的复制性衰老。     

小分子干扰RNA下调星形细胞上调基因1的表达对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨小分子干扰RNA(siRNA)下调星形细胞上调基因1(AEG-1)表达对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响。方法卵巢癌细胞株SKOV3分为3组:空白对照组(不做任何处理)、阴性对照组(对照siRNA转染)和观察组(AEG-1 siRNA转染)。用反转录聚合酶链反应观察AEG-1 siRNA对AEG-1基因表达的影响;甲基噻唑基四唑法观察AEG-1 siRNA对卵巢癌SKOV3细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测AEG-1 siRNA对卵巢癌SKOV3细胞凋亡和细胞周期的影响。结果空白对照组和阴性对照组AEG-1 mRNA表达、SKOV3细胞增殖、细胞凋亡率及在DNA合成前期(G0/G1期)、合成期(S期)、合成后期(G2/M期)的细胞比例差异均无统计学意义(P>0.05)。观察组SKOV3细胞AEG-1 mRNA表达显著低于空白对照组和阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。观察组SKOV3细胞增殖在24、48、72 h较空白对照组和阴性对照组均显著减慢,差异有统计学意义(P<0.01)。观察组SKOV3细胞凋亡率显著高于空白对照组和阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.01);观察组SKOV3细胞在DNA合成前期(G0/G1期)细胞比例显著高于空白对照组和阴性对照组(P<0.01),而合成期(S期)、合成后期(G2/M期)的细胞比例均显著低于空白对照组和阴性对照组(P<0.01),差异均有统计学意义。结论 siRNA可通过下调卵巢癌SKOV3细胞AEG-1基因的表达,抑制其增殖,促进其凋亡。     

活血化瘀法对慢性萎缩性胃炎癌前病变大鼠早期细胞凋亡的影响

目的研究活血化瘀法、理气活血法和益气活血法对慢性萎缩性胃炎(Chronic Atrophic Gastritis,CAG)癌前病变大鼠早期细胞凋亡的影响。方法采用幽门弹簧插入配合高盐热糊灌胃法复制CAG癌前病变模型,用双标记流式细胞术检测癌前病变大鼠早期细胞凋亡。结果益气活血法、活血化瘀法和理气活血法干预12周后,自然恢复组大鼠早期凋亡率明显高于空白对照组(P<0.01),各干预组早期细胞凋亡率均有降低,其中活血化瘀组、理气活血组与自然恢复组比较有显著性差异(P<0.01或P<0.05),益气活血组显示出降低早期细胞凋亡的趋势,但与自然恢复组比较未见明显差异(P=0.057)。结论益气活血法、活血化瘀法和理气活血法对CAG癌前病变大鼠早期细胞凋亡均有抑制作用,这可能是益气活血法、活血化瘀法和理气活血法改善或逆转大鼠CAG癌前病变的作用机理之一。     

抗抑郁药奥氮平对大鼠海马神经细胞凋亡和细胞周期的影响

目的：探讨抗抑郁药物奥氮平对谷氨酸（Glu）损伤的大鼠海马神经元凋亡、坏死和细胞周期的影响,阐明奥氮平神经保护作用的机制。方法：采用体外原代培养的大鼠海马神经元,复制Glu损伤模型,细胞分为正常对照组、Glu损伤组和奥氮平+Glu损伤组,在体外通过流式细胞术测定各组神经元细胞凋亡率、坏死率和细胞周期的改变。结果：与正常对照组比较,其他组细胞凋亡率增加 (P<0.01);与Glu损伤组比较,10.0 μmol/L奥氮平+Glu损伤组细胞凋亡率降低（P<0.01 )。与正常对照组比较,Glu损伤组神经元坏死率升高2.9倍 (P<0.05);与Glu损伤组比较,100.0和200.0 μmol/L奥氮平+Glu损伤组神经元坏死率降低(P<0.05或P<0.01)。与正常对照组比较,Glu损伤组G0/G1期细胞百分数增加 (P<0.01）,S期细胞百分数下降（P<0.01）,G2 + M期变化不明显;而与Glu损伤组比较,
50.0和100.0 μmol?L-1奥氮平+Glu损伤组G0/G1期细胞比例下降为Glu损伤组的79.9%和62.6% (P<0.05或P<0.01);S期细胞比例上升为Glu损伤组的2.5和3.8倍 (P<0.05或P<0.01)。结论：奥氮平能够抵抗Glu诱导的神经元凋亡和坏死,改变细胞周期进程。     

广西产何首乌GXHSWAQ-1对卵巢癌耐药细胞SKOV-3/CBP的耐药逆转作用研究

目的:拟探讨广西产何首乌蒽醌类化合物GXHSWAQ-1对人卵巢癌耐卡铂细胞株SKOV-3/CBP的体外耐药逆转活性.方法:以人卵巢癌亲本细胞SKOV3和多药耐药细胞株SKOV-3/CBP为研究对象,通过噻唑蓝(MTT)法观察GXHSWAQ-1对卵巢癌细胞耐受CBP的逆转作用,采用流式细胞仪分析GXHSWAQ-1对细胞周期调控和凋亡的影响.结果:①无细胞毒剂量7.8 mg/L和3.9 mg/L的GXHSWAQ-1能逆转SKOV-3/CBP细胞对卡铂的耐药性,逆转倍数分别为1.75(P<0.01)和1.32(P<0.01)倍;②7.8 mg/L和3.9 mg/L GXHSWAQ-1联合卡铂后的细胞凋亡率高于SKOV-3/CBP单独卡铂作用组(P<0.01),G0-G1期细胞数减少(P<0.01),S期和G2-M期细胞增多(P<0.01).结论:无细胞毒剂量的GXHSWAQ-1可逆转卵巢癌耐药细胞对CBP的耐药性,逆转作用可能与其促进细胞更容易进入S期从而导致细胞对CBP敏感有关.     

益气化瘀中药对糖尿病皮肤溃疡大鼠缺氧诱导因子-1α和血管内皮细胞生长因子的影响

目的:探讨益气化瘀中药对糖尿病皮肤溃疡气虚血瘀证大鼠缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)和血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的影响。方法:72只清洁级雄性SD大鼠,除8只作正常对照组外,其他大鼠在背部全层皮肤缺损开放性创面的基础上加造气虚血瘀证糖尿病模型后,随机分为模型组、贝复济组、益气化瘀组、益气组和化瘀组。应用免疫组织化学、图像分析等技术,观察各组大鼠创面肉芽组织中HIF-1α和VEGF水平的变化。结果:模型组HIF-1α水平高于正常对照组(P<0.01),VEGF浓度明显低于正常对照组(P<0.01)。各用药组HIF-1α表达水平明显低于模型组(P<0.01),VEGF表达水平明显高于模型组(P<0.01)。益气化瘀组HIF-1α表达水平明显低于贝复济组、益气组和化瘀组(P<0.05或P<0.01),VEGF表达水平明显高于贝复济组(P<0.01)。益气组与化瘀组HIF-1α和VEGF的表达水平相似,它们与贝复济组之间无明显差异。结论:益气化瘀中药能明显促进糖尿病皮肤溃疡气虚血瘀证大鼠的创面愈合,其机制与下调HIF-1α水平、上调VEGF的表达水平和改善局部缺血缺氧状态有关。     

益气活血药对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞能量与脂质过氧化反应变化的影响

目的观察心肌细胞在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)作用后反映能量的酶与脂质过氧化反应的变化及不同类中药对其的影响.方法用AngⅡ作用于培养的SD大鼠乳鼠心肌细胞,观察作用24、48、72、96 h细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的变化及益气、活血、益气活血中药的作用.结果在AngⅡ作用48 h后,细胞上清液中LDH、SDH明显增加(P＜0.01),MDA含量明显升高,SOD活性明显降低(P＜0.01),各中药组LDH、SDH明显降低,且可明显减少MDA含量、升高SOD活性(P＜0.05或P＜0.01).结论AngⅡ作用一定时间后,伴随着能量的变化和引发的脂质过氧化反应,使心肌细胞的功能受到影响,益气、活血、益气活血中药均有保护作用,尤以益气活血药作用明显.     

补益气血方剂对大鼠慢性难愈性创面血管内皮生长因子及血管生成的影响

目的：探讨补益气血方剂四君子汤、四物汤和八珍汤对慢性难愈性创面大鼠创面血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）及微血管数（microvessel count,MVC）的影响。方法：在90只雄性SD大鼠背部制造全层皮肤缺损开放性创面。除正常对照组外,大鼠肌肉注射醋酸氢化可的松建立难愈性创面模型,随机分为模型组、四君子汤组、四物汤组和八珍汤组。观察创面愈合时间;通过免疫组化结合图像分析等技术,观察各组大鼠创面肉芽组织中VEGF表达情况和MVC。结果：模型组创面愈合时间较正常组明显延长（P〈0.01）,各治疗组创面愈合时间比模型组缩短（P〈0.01,P〈0.05）,四物汤组和八珍汤组创面愈合时间较四君子汤组延长（P〈0.05）。模型组VEGF表达和MVC明显低于正常对照组（P〈0.01）,各治疗组VEGF表达和MVC高于模型对照组（P〈0.01,P〈0.05）,低于正常对照组（P〈0.01）。四物汤组和八珍汤组VEGF表达和MVC低于四君子汤组（P〈0.05,P〈0.01）,四物汤组和八珍汤组比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：补益气血方剂能明显促进慢性难愈性创面大鼠的创面愈合,其机制可能与上调VEGF表达水平,诱导血管新生有关。     

益气活血利水法治疗肺心病急性发作期36例临床观察

目的观察益气活血利水法治疗慢性肺源性心脏病(简称肺心病)急性发作期的疗效.方法将70例肺心病患者随机分为治疗组(36例)和对照组(34例).治疗组在西医治疗(抗感染、平喘、化痰、吸氧)的基础上加用益气活血利水中药加减治疗,对照组单纯运用西药治疗.结果治疗组总有效率为91.7%,对照组总有效率为67.6%,两组比较,差异有非常显著性意义(P＜0.01).治疗后治疗组肺活量、1秒钟用力呼气量、氧分压、二氧化碳分压的改善优于对照组(P＜0.05).结论西药加用益气活血利水法治疗肺心病急性发作期比单纯用西药治疗疗效显著提高,两者有协同作用.     

益气活血清热法对儿童哮喘发作期嗜酸性粒细胞的影响

目的观察益气活血清热法对儿童哮喘发作期嗜酸性粒细胞(EOS)绝对计数的影响.方法采用随机方法将160例患儿分为治疗组、西药组和中成药组.治疗组内服泻白定喘颗粒,外用中药穴位贴敷;西药组采用西医常规治疗;中成药组口服小儿咳喘灵颗粒.结果治疗组治疗后EOS绝对计数较治疗前显著降低(P＜0.01),与中成药组、西药组治疗后比较差异显著(P＜0.05,P＜0.01).在改善肺功能方面治疗组优于中成药组(P＜0.05).在消除哮鸣音、缓解咳嗽、出汗等症状方面,治疗组明显优于西药组、中成药组(P＜0.05,P＜0.01).治疗组显效率优于西药组、中成药组.结论内外并用、益气活血清热法治疗发作期儿童哮喘,可以显著降低EOS,临床疗效良好.     

UBE2D2基因在肝癌细胞中的作用及不同中医治法对其调控作用的影响

目的:观察不同中医治法对大鼠肝癌UBE2D2表达的调控差异,以及UBE2D2在人肝癌细胞增殖中的作用。方法:采用DEN诱发大鼠肝癌,分别经中药健脾益气、清热解毒、活血化瘀等治疗后,Affy-metrix rat 230A GeneChip arrays检测肝癌组织UBE2D2表达的差异;设计2个人UBE2D2基因siRNA靶点,将重组质粒经脂质体转入SMMC-7721人肝癌细胞株,MTT法检测细胞生长增殖情况、Realtime-PCR检测该基因的表达差异。结果:芯片结果显示,UBE2D2基因在大鼠肝癌形成后表达显著增加,不同中医治法对其具有不同程度的下调作用,其中健脾理气法下调作用较明显;采用MTT法筛选到1个UBE2D2基因RNA干扰有效靶序列,转染6 d后细胞的生长增殖得到了明显的抑制(与阴性对照组相比,P<0.01);实时荧光定量PCR检测表明,转染6 d后该基因的表达明显降低。结论:UBE2D2基因的高表达与肝癌细胞恶性增殖有关,而中药健脾理气治法对其具有下调作用。     

通脉宁调控AngⅡ、LPC诱导血管平滑肌细胞c-fos、c-myc基因表达的研究

目的观察通脉宁胶囊对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、溶血磷脂酰胆碱(LPC)诱导的兔血管平滑肌细胞(VSMC)c-fos、c-myc癌基因表达的影响。方法组织贴块法培养兔主动脉平滑肌细胞,用AngⅡ、LPC诱导VSMC增殖,采用RT-PCR方法,观察通脉宁全方及益气拆方和活血拆方药物血清对AngⅡ、LPC诱导的VSMC c-fos、c-myc蛋白表达。结果AngⅡ、LPC组c-fos和c-myc蛋白表达增加,与空白组比较有显著性差异(P<0.01);通脉宁全方组、益气拆方组、活血拆方组均可使c-fos和c-myc的蛋白表达下调,与AngⅡ、LPC组比较有显著性差异(P<0.01);通脉宁全方组与益气拆方组、活血拆方组比较也有显著性差异(P<0.01)。结论通脉宁胶囊可下调AngⅡ、LPC诱导的VSMC c-fos、c-myc基因表达,而对VSMC增殖起到抑制作用。     

补肾解毒活血法对环磷酰胺所致小鼠骨髓抑制的预防作用研究

目的研究补肾解毒活血法对环磷酰胺所致骨髓抑制的预防作用及机制。方法昆明小鼠60只,随机分成空白组、模型组和中药预防组,中药预防组连续灌胃给药10 d,空白组和模型组给予等体积的生理盐水。造模后,各组随机抽取10只,于造模前1 d及造模后第1、3、5、7、10天检测外周血象,其余10只小鼠在造模后第1天检测骨髓有核细胞计数、骨髓细胞凋亡情况、造血生长因子及培养造血祖细胞集落。结果造模后外周血WBC、PLT,骨髓有核细胞计数,粒—巨噬系集落形成单位（colony forming unit-granulocyte macrophage,CFU-GM）,造血祖细胞集落形成单位及造血生长因子中药预防组均显著高于模型组（P〈0.01或P〈0.05）。中药预防组总凋亡率远低于模型组（P〈0.01）。结论补肾解毒活血法可以减轻环磷酰胺对小鼠的骨髓抑制毒副作用,明显促进骨髓抑制小鼠WBC、PLT、CFU-GM及骨髓有核细胞的增加,抑制环磷酰胺所致的细胞凋亡。