6-羟多巴胺单侧损伤大鼠黑质纹状通路后多巴胺受体的长时程变化

目的:应用免疫组织化学和蛋白印迹方法来观察帕金森病模型大鼠D1和D2多巴胺受体(64周)的长时程变化。方法:实验于2003-10/2005-03在首都医科大学北京神经科学研究所、北京市神经再生修复研究重点实验室完成。①选择SD雌性大鼠78只,随机分为模型组72只和正常组6只。造模后2,4,8,16,32,64周进行实验,每个时间点取6只模型大鼠用于免疫组织化学染色,另外6只模型大鼠和1只正常大鼠用于进行Westernblotting分析。②观察模型大鼠黑质和纹状体多巴胺D1受体和多巴胺D2受体免疫组织化学染色强度。③Westernblotting用来测定模型大鼠相对于正常大鼠纹状体多巴胺D1受体和多巴胺D2受体蛋白含量。结果:78只大鼠均进入结果分析。①损伤2周后模型大鼠损伤侧纹状体的多巴胺1型受体免疫反应在2周和4周要弱于损伤对侧,8周及以后损伤侧纹状体内多巴胺1型受体免疫反应与损伤对侧没有显著性差异。损伤侧黑质的多巴胺1型受体阳性强度一直要弱于损伤对侧约20%,多巴胺1型受体阳性面积也小于损伤对侧。而纹状体内多巴胺2型受体的免疫反应则刚好相反,即损伤侧则强于健侧,从2周就开始上升约15%,到16周上升到顶峰(约30%),之后下降,于64周时下降到约5%。损伤侧黑质的多巴胺2型受体与酪氨酸羟化酶染色相似,几乎为阴性。②多巴胺D2受体在损伤侧纹状体从2周时开始上调,到16周达到高峰后回落,直到64周仍高于正常水平。与多巴胺D2受体相反,多巴胺D1受体在损伤侧纹状体于2周和4周下调,到8周以后恢复到正常水平。同时,多巴胺D1受体免疫反应强度在损伤侧黑质表达持续减弱且阳性面积也减小。结论:帕金森病在纹状体失去多巴胺能神经支配后多巴胺D2受体上调,多巴胺D1受体先下调后恢复正常水平。     

电针对6-羟多巴胺毁损大鼠黑质铁含量变化的影响

目的探讨电针疗法治疗帕金森病(PD)神经保护作用的机制。方法采用6-羟多巴胺(6-OHDA)偏侧黑质毁损大鼠模型,实验大鼠分为正常组、正常电针组、PD模型组、电针组、假电针组,每组9只大鼠。大鼠进行电针处理2周后,利用原子吸收分光光度法测定各组大鼠黑质铁含量,观察针刺某些特定穴位对偏侧毁损大鼠脑黑质铁含量的影响。结果 PD模型组大鼠黑质铁含量较正常组明显升高(P<0.05),旋转行为学明显异常;而电针组大鼠黑质铁含量较PD模型组显著减少(P<0.05),旋转行为学明显改善。结论电针疗法可以降低6-OHDA偏侧毁损大鼠脑黑质内铁的含量,改善大鼠的旋转行为学,研究结果提示电针疗法对6-OHDA偏侧毁损大鼠脑黑质内铁代谢有调节作用,这也可能是针刺治疗PD神经保护作用的机制之一。     

制备人Ⅱ型多巴胺受体cRNA探针检测帕金森病大鼠模型纹状体内Ⅱ型多巴胺受体基因表达的变化

目的：获得单链、杂交结果稳定的人Ⅱ型多巴胺受体基因正义和反义RNA探针，检测人Ⅱ型多巴胺受体在帕金森病大鼠模型中表达的变化。方法：实验于2002-10／2003-06在首都医科大学神经科学研究所内完成。选出2，6，12周帕金森病大鼠模型60只，每组各20只，用来做原位杂交的组织处理；将已制备的pGEM-T-Easy-D2R质粒载体分别经ClaI、Xba I限制性酶切反应得到线形质粒，再分别以17和SP6聚合酶制备了人Ⅱ型多巴胺受体基因的反义和正义探针，通过斑点杂交检测探针的浓度；将反义和正义探针分别作等梯度稀释，分别与组织切片杂交，强度洗脱后，观察使对照正义链探针没有杂交信号，而反义探针杂交后也无本底的最适宜浓度，从而降低内缘性其他多巴胺受体亚型的干扰作用；用制备的最适宜浓度探针分别杂交帕金森病大鼠模型2，6，12周的组织切片，杂交后冲洗，免疫检测及呈色，观察帕金森病大鼠模型纹状体中Ⅱ型多巴胺受体表达。结果：①实验标记的人Ⅱ型多巴胺受体探针属cRNA探针，其特点为单链探针，杂交过程不需变性，可合成最可靠的反义链探针，杂交结果稳定，体外转录合成的cRNA探针长度也比较一致，其浓度分别为150．120mg／L。②将反义和正义探针分别等梯度稀释，分别与组织切片杂交，强度洗脱后，结果证明25mg／L浓度最适宜，对照正义链探针没有杂交信号，而反义探针杂交后也无本底。③原位杂交证实，反义探针能够与帕金森病大鼠模型纹状体中Ⅱ型多巴胺受体mRNA杂交。用反义探针标记的细胞中可见蓝色颗粒沉积，左右半球纹状体中标记细胞数在2周时没有变化，帕金森病大鼠损伤侧和健侧Ⅱ型多巴胺受体mRNA表达没有明显变化；6周时，损伤侧较健侧表达明显上调，12周时，损伤侧与健侧表达都下降且没有明显差别。结论：实验获得了人Ⅱ型多巴胺受体基因反义和正义cRNA探针，并得出无本底的最适宜浓度；制备的人Ⅱ型多巴胺受体cRNA探针可以检测帕金森病大鼠模型纹状体内Ⅱ型多巴胺受体基因变化情况，并说明了帕金森病大鼠纹状体Ⅱ型多巴胺受体mRNA表达水平随模型日期增长而发生相应变化。     

制备人Ⅱ型多巴胺受体cRNA探针检测帕金森病大鼠模型纹状体内Ⅱ型多巴胺受体基因表达的变化

目的:获得单链、杂交结果稳定的人Ⅱ型多巴胺受体基因正义和反义RNA探针,检测人Ⅱ型多巴胺受体在帕金森病大鼠模型中表达的变化。方法:实验于2002-10/2003-06在首都医科大学神经科学研究所内完成。选出2,6,12周帕金森病大鼠模型60只,每组各20只,用来做原位杂交的组织处理;将已制备的pGEM-T-Easy-D2R质粒载体分别经ClaI、XbaⅠ限制性酶切反应得到线形质粒,再分别以T7和SP6聚合酶制备了人Ⅱ型多巴胺受体基因的反义和正义探针,通过斑点杂交检测探针的浓度;将反义和正义探针分别作等梯度稀释,分别与组织切片杂交,强度洗脱后,观察使对照正义链探针没有杂交信号,而反义探针杂交后也无本底的最适宜浓度,从而降低内缘性其他多巴胺受体亚型的干扰作用;用制备的最适宜浓度探针分别杂交帕金森病大鼠模型2,6,12周的组织切片,杂交后冲洗,免疫检测及呈色,观察帕金森病大鼠模型纹状体中Ⅱ型多巴胺受体表达。结果:①实验标记的人Ⅱ型多巴胺受体探针属cRNA探针,其特点为单链探针,杂交过程不需变性,可合成最可靠的反义链探针,杂交结果稳定,体外转录合成的cRNA探针长度也比较一致,其浓度分别为150,120mg/L。②将反义和正义探针分别等梯度稀释,分别与组织切片杂交,强度洗脱后,结果证明25mg/L浓度最适宜,对照正义链探针没有杂交信号,而反义探针杂交后也无本底。③原位杂交证实,反义探针能够与帕金森病大鼠模型纹状体中Ⅱ型多巴胺受体mRNA杂交。用反义探针标记的细胞中可见蓝色颗粒沉积,左右半球纹状体中标记细胞数在2周时没有变化,帕金森病大鼠损伤侧和健侧Ⅱ型多巴胺受体mRNA表达没有明显变化;6周时,损伤侧较健侧表达明显上调,12周时,损伤侧与健侧表达都下降且没有明显差别。结论:实验获得了人Ⅱ型多巴胺受体基因反义和正义cRNA探针,并得出无本底的最适宜浓度;制备的人Ⅱ型多巴胺受体cRNA探针可以检测帕金森病大鼠模型纹状体内Ⅱ型多巴胺受体基因变化情况,并说明了帕金森病大鼠纹状体Ⅱ型多巴胺受体mRNA表达水平随模型日期增长而发生相应变化。     

亲代谢型谷氨酸受体配基对帕金森病大鼠的神经保护作用

目的探讨PD模型大鼠黑质致密部亲代谢型谷氨酸受体(mGluRs)的蛋白表达及其配基的药物治疗作用。方法6-羟基多巴单侧黑质损毁法建立大鼠PD模型。免疫组织化学法观察黑质致密部mGluR1a,2/3,4,5,8和酪氨酸羟化酶(TH)的表达,并用Nissl和Fluoro-JadeB荧光双染法在激光共集焦显微镜下观察退行性变的神经元。结果6-羟基多巴导致损毁侧mGluRs和TH免疫活性下降。Ⅰ组mGluRs拮抗剂和Ⅱ,Ⅲ组mGluRs激动剂能使治疗组相应的受体表达升高,尤其是mGluR5,mGluR2/3和mGluR4的蛋白表达。其中,以APDC组(Ⅱ组mGluRs激动剂)的保护效应最为显著。5个非假手术组退行性变细胞与正常细胞的比值(D/V)均有不同程度地增高。结论mGluRs可能参与PD的发生、发展过程。Ⅰ组mGluRs拮抗剂和Ⅱ组mGluRs激动剂具有一定的神经保护功能。     

脐血间充质干细胞移植后帕金森病大鼠纹状体内多巴胺含量的变化

背景:目前干细胞移植对帕金森病动物模型的研究多集中在骨髓间充质干细胞和胚胎干细胞方面,关于脐血间充质干细胞移植对帕金森病动物模型的研究相对较少,且未见测量脐血间充质干细胞移植前后多巴胺含量变化的报道.目的:观察脐血干细胞移植对帕金森病大鼠纹状体内多巴胺含量的影响.方法:帕金森病模型大鼠随机分成实验组和对照组.将第3代脐血间充质干细胞用Hoechst33258标记后植入实验组大鼠纹状体内,对照组注射磷酸盐缓冲溶液.移植后2,4,8周用免疫荧光双标法检测间充质干细胞的存活、迁移以及胶质纤维酸性蛋白、神经元特异性烯醇化酶、酪氨酸羟化酶和突触素的表达.移植后8周利用高效液相色谱-电化学检测仪检测纹状体多巴胺含量.结果与结论:脐血间充质干细胞移植后可在大鼠脑内存活,随时间延长迁移范围扩大,分布于纹状体、胼胝体和皮质;胶质纤维酸性蛋白、神经元特异性烯醇化酶、酪氨酸羟化酶都有表达,突触素无表达.多巴胺水平与对照组相比有明显提高 (P < 0.05).     

外源性犬尿烯酸对黑质多巴胺能神经元损伤的保护性作用

背景：帕金森病治疗方法有多种，多巴胺替代疗法、外科靶点永久毁损、脑深部核团高频电刺激术、脑移植和基因治疗。这些外科及药物治疗都有一些不足及难以弥补的缺陷，国内外学者将多巴胺能神经元保护剂的研究和应用提到了重要位置。目的：观察评价预先应用谷氨酸受体拮抗剂犬尿烯酸对黑质多巴胺能神经元及神经传导纤维损伤的保护性作用。设计：采用随机对照单盲实验研究。地点和材料：研究地点为解放军总医院神经外科实验室；实验动物选取雌性SD大鼠(取自解放军总医院动物饲养室，40只，体质量210～240g，平均228g)。干预：雌性SD大鼠40只，随机分为4组，每组10只，应用江湾Ⅰ型C立体定向仪，在单侧黑质致密部及中脑被盖腹侧部，分别注射生理盐水，犬尿烯酸，犬尿烯酸加6-羟多巴胺，6-羟多巴胺。注射药物3d后，进行症状观察，2周后处死大鼠。切片HE染色观察黑质细胞的形态特点，冷冻切片免疫组化特殊染色观察TH阳性细胞及TH阳性纤维着色情况，实验数据分别采用方差分析以及秩和检验进行统计分析。主要观察指标：切片HE染色观察黑质细胞的形态特点，冷冻切片免疫组化特殊染色观察TH阳性细胞数及TH阳性纤维着色等级。结果：正常黑质细胞体形较大，富含黑色素颗粒，可见尼氏体。数据统计分析结果提示犬尿烯酸组与生理盐水组之间差异无显著性意义(P＞0．05)。实验组犬尿烯酸加6-羟多巴胺组与其他3组比较均差异有显著性意义(P＜0．01)。结论：外源性谷氨酸受体拮抗剂犬尿烯酸(kynurenic acid，KYNA)通过阻滞Glu受体能减轻6-羟多巴胺诱导的黑质多巴胺能神经元毒性损害。     

纹状体内注射胶质细胞源神经营养因子对帕金森病模型大鼠多巴胺能神经元剂量依赖性的保护

目的：探讨不同剂量胶质细胞源神经营养因子对6-羟多巴制造的偏侧帕金森病大鼠模型黑质多巴胺能神经元的保护作用。方法：实验于2005-04／10在四川大学华西医学中心组织胚胎学与神经生物学教研室及信号转导与分子靶向治疗研究室完成。选取雄性SD大鼠（鼠龄1．5个月）20只。大鼠前脑内侧束注射6-羟多巴。4周后应用免疫组织化学法检测中脑黑质酪氨酸羟化酶阳性神经元，小胶质细胞及星形胶质细胞数量的变化，建立帕金森病大鼠模型；取SD大鼠15只分为3组，分别为对照组．10，100μg胶质细胞源性神经营养因子处理组，每组5只。右侧前脑内侧束注射5g/L 6-羟多巴4mL，制备帕金森病模型，将不同剂量的胶质细胞源性神经营养因子（5g／L或25g／L，用生理盐水溶解）注入同侧的纹状体内，对照组纹状体内用等量生理盐水替代。手术后4周，取实验动物，麻醉，灌注，切片，再行中脑抗酪氨酸羟化酶免疫组织化学反应。镜下细胞计数；应用配对T检验，ANOVA，及SNK法进行统计。结果：所有实验动物生存状况良好，未发生死亡现象，全部进入结果分析。①损伤侧酪氨酸羟化酶阳性神经元形态未见明显的改变，但数量明显减少，明显低于对侧细胞数，差异有显著性[（11．36&;#177;3．85），（115．12&;#177;17．06），t=3．078，P〈0．01]。②损伤侧大多数小胶质细胞胞体变圆增大，突起变短增粗，染色变深。损伤侧明显高于对侧，差异有显著性[（292．20&;#177;19．73），（80．40&;#177;10．00），t=2．832，P〈0．01]。③中脑黑质损伤侧星形胶质细胞数量显著增加，增生的GFAP阳性星形胶质细胞胞体肥大，突起变短、增粗，染色变深。损伤侧显著高于对侧，差异有显著性[（507．64&;#177;19．99），（226．88&;#177;20．30），t=2．971，P〈0．01]。④损伤侧黑质酪氨酸羟化酶阳性神经元细胞数明显低于对侧，差异有显著性[（10．16&;#177;2．90）．（116．84&;#177;15．92），t=3．975，P〈0．01]。10μg胶质细胞源性神经营养因子处理组损伤侧明显高于对侧，差异有显著性[（114．60&;#177;18．71），（66．24&;#177;17．19）．t=3．811．P〈0．01]；100μg胶质细胞源性神经营养因子处理组损伤侧明显高于对侧，差异有显著性[（114．88&;#177;19．211），（92．72&;#177;16．29），t=3．725，P〈0．01]。③胶质细胞源性神经营养因子处理组存活的酪氨酸羟化酶阳性神经元数量均明显高于对照组（P〈0．01）。100μg胶质细胞源性神经营养因子处理组神经元存活率显著高于10μg胶质细胞源性神经营养因子处理组，差异亦具有显著性（P〈0．01）。结论：纹状体内运用胶质细胞源性神经营养因子，对多巴胺能神经元具有明显的保护作用．该作用在10～100μg范围内呈剂量依赖性。     

热休克蛋白70在大鼠黑质多巴胺神经元损伤中的表达

目的 :探讨热休克蛋白 70 (HSP70 )在大鼠黑质多巴胺 (DA)神经元损伤中的表达以及在帕金森病 (PD)诊断中的意义。方法 :将 48只大鼠随机分为黑质DA神经元损毁组 (PD组 )和对照组各 2 4只。PD组注射 6 羟多巴胺 (6 OHDA)损毁大鼠黑质DA神经元 ,对照组仅注射 6 OHDA溶媒。于注射后 1、7、14及 2 1d采用免疫组织化学、尼氏染色、电镜手段动态观察HSP70在损毁的DA神经元中的表达以及DA神经元形态学变化。结果 :在 6 O HDA损毁黑质 1～ 2 1d ,对照组黑质HSP70表达和尼氏细胞计数差异无显著性 (P >0 .0 5 )。PD组HSP70表达在 1d最高 ,7d锐减 ,14和 2 1d则逐渐减少 ,分别为 2 5 %、74%、87%及 88% ;尼氏细胞计数在 4个时间点分别减少1%、13%、35 %及 48% ;超微结构损伤程度呈进行性加重。结论 :PD渐进性发病具有其形态学基础 ,HSP70可作为DA神经元存活的指标和早期诊断PD的指标。     

纹状体内注射胶质细胞源神经营养因子对帕金森病模型大鼠多巴胺能神经元剂量依赖性的保护

目的:探讨不同剂量胶质细胞源神经营养因子对6-羟多巴制造的偏侧帕金森病大鼠模型黑质多巴胺能神经元的保护作用。方法:实验于2005-04/10在四川大学华西医学中心组织胚胎学与神经生物学教研室及信号转导与分子靶向治疗研究室完成。选取雄性SD大鼠(鼠龄1.5个月)20只。大鼠前脑内侧束注射6-羟多巴,4周后应用免疫组织化学法检测中脑黑质酪氨酸羟化酶阳性神经元、小胶质细胞及星形胶质细胞数量的变化,建立帕金森病大鼠模型;取SD大鼠15只分为3组,分别为对照组、10,100μg胶质细胞源性神经营养因子处理组,每组5只。右侧前脑内侧束注射5g/L6-羟多巴4mL,制备帕金森病模型,将不同剂量的胶质细胞源性神经营养因子(5g/L或25g/L,用生理盐水溶解)注入同侧的纹状体内,对照组纹状体内用等量生理盐水替代。手术后4周,取实验动物,麻醉,灌注,切片,再行中脑抗酪氨酸羟化酶免疫组织化学反应。镜下细胞计数;应用配对T检验、ANOVA,及SNK法进行统计。结果:所有实验动物生存状况良好,未发生死亡现象,全部进入结果分析。①损伤侧酪氨酸羟化酶阳性神经元形态未见明显的改变,但数量明显减少,明显低于对侧细胞数,差异有显著性[(11.36±3.85),(115.12±17.06),t=3.078,P<0.01]。②损伤侧大多数小胶质细胞胞体变圆增大,突起变短增粗,染色变深。损伤侧明显高于对侧,差异有显著性[(292.20±19.73),(80.40±10.00),t=2.832,P<0.01]。③中脑黑质损伤侧星形胶质细胞数量显著增加,增生的GFAP阳性星形胶质细胞胞体肥大,突起变短、增粗,染色变深。损伤侧显著高于对侧,差异有显著性[(507.64±19.99),(226.88±20.30),t=2.971,P<0.01]。④损伤侧黑质酪氨酸羟化酶阳性神经元细胞数明显低于对侧,差异有显著性[(10.16±2.90),(116.84±15.92),t=3.975,P<0.01]。10μg胶质细胞源性神经营养因子处理组损伤侧明显高于对侧,差异有显著性[(114.60±18.71),(66.24±17.19),t=3.811,P<0.01];100μg胶质细胞源性神经营养因子处理组损伤侧明显高于对侧,差异有显著性[(114.88±19.211),(92.72±16.29),t=3.725,P<0.01]。⑤胶质细胞源性神经营养因子处理组存活的酪氨酸羟化酶阳性神经元数量均明显高于对照组(P<0.01)。100μg胶质细胞源性神经营养因子处理组神经元存活率显著高于10μg胶质细胞源性神经营养因子处理组,差异亦具有显著性(P<0.01)。结论:纹状体内运用胶质细胞源性神经营养因子,对多巴胺能神经元具有明显的保护作用,该作用在10～100μg范围内呈剂量依赖性。     

Interactions of D1 and D2 dopamine receptors on the ipsilateral vs. contralateral side in rats with unilateral lesions of the dopaminergic nigrostriatal pathway

In rats with a unilateral lesion of the nigrostriatal dopaminergic pathway, the ipsilateral rotation produced by the enhanced actions of endogenous dopamine (DA) on the nonlesioned side, induced by either the DA-releasing drug amphetamine or the DA uptake inhibitor GBR 13069, was blocked effectively by pretreatment with either the selective D1 DA receptor antagonist, SCH 23390, or the D2 selective antagonist, haloperidol. In contrast, contralateral rotation produced by apomorphine or I-dihydroxyphenylalanine, which lead to the preferential activation of D1 and D2 receptors on the lesioned side, was effectively prevented only when both receptor subtypes were inhibited. The results of these experiments demonstrate that the interaction between D1 and D2 receptors in the lesioned side differs from that in the nonlesioned side. Whereas the simultaneous stimulation of both DA receptor subtypes in the normally innervated basal ganglia is required for the production of turning behavior, the stimulation of either subtype alone in the dopaminergic denervated side can produce rotation. However, the concurrent administration of the D1 agonist, SKF 38393, with the D2 agonist, LY 171555, produced a synergistic effect on contralateral rotation. These results suggest that there is preservation of at least some functional interaction between D1 and D2 receptors in the lesioned basal ganglia but that there may be in addition a mechanism by which the two receptor subtypes can function independently of each other. The unilaterally lesioned rat appears to be a very good model in which to study the interaction between D1 and D2 receptors under conditions of both normal innervation and of DA denervation.(ABSTRACT TRUNCATED AT 250 WORDS)     

6- 羟基多巴不同部位毁损大鼠帕金森氏病模型的建立及比较

目的比较 6- OHDA毁损黑质 , 黑质 + 内侧前脑束 , 纹状体而制作 PD模型的异同及可靠性 . 方法在脑立体定位技术下 , 将 20 μ g 6- OHDA分两点注入大鼠上述脑区 , 术后不同时间用阿扑吗啡诱发大鼠异常旋转行为 , 并进行检测比较 . 结果 6- OHDA毁损黑质及黑质 + 内侧前脑束 , PD鼠于术后一周即出现稳定旋转行为 , 两部位模型成功率均为 50% ; 纹状体毁损后一周 PD鼠可出现轻微旋转 , 逐渐增强 , 模型成功率可达 80% . 结论 6- OHDA毁损大鼠黑质 , 黑质 + 内侧前脑束 , 纹状体均可制作成功的 PD模型 .     

Actions of GABAergic agents on dopamine metabolism in the nigrostriatal pathway of the rat

The gamma-aminobutyric acid (GABA) transaminase inhibitor aminoxyacetic acid, diazepam and the GABA agonists muscimol, 4,5,6,7-tetrahydroisoxazolo-[5,4-C]-pyridin-3-ol, kojic amine and SL-76002 all depressed nigrostriatal dopamine release as measured by decreased 3-methoxytyramine after parenteral administration. Experiments with intrastriatal and intranigral injections as well as parenteral injections in acutely hemisected and kainate lesioned animals demonstrated that parenteral muscimol inhibits the nigrostriatal pathway at the level of the substantia nigra. In contrast, parenteral 4,5,6,7-tetrahydroisoxazolo-[5,4-C]-pyridin-3-ol, kojic amine and aminoxyacetic acid inhibit the nigrostriatal pathway acting both within the substantia nigra and on presynaptic nigrostriatal GABA receptors in the striatum. A unique interneuronal GABA receptor also appears to be present in the striatum which is activated by intrastriatal muscimol but not 4,5,6,7-tetrahydroisoxazolo-[5,4-C]-pyridin-3-ol or kojic amine. Activation of these receptors leads to increased dopamine release in the striatum; however, this receptor population does not appear to be stimulated after parenteral administration of GABAergic agents. In summary, multiple GABA receptors appear to be present within the central nervous system which possess differential sensitivities to the GABA agonists examined; however, after parenteral administration, all GABAergics appear to depress nigrostriatal dopaminergic transmission.     

Evidence that D-1 dopamine receptors contribute to the supersensitive behavioral responses induced by L-dihydroxyphenylalanine in rats treated neonatally with 6-hydroxydopamine

The present investigation supports the hypothesis that functionally supersensitive D-1 dopamine receptors are involved in the self-mutilation behavior (SMB) induced by L-dihydroxyphenylalanine (L-dopa) in rats treated neonatally with 6-hydroxydopamine (6-OHDA). This conclusion is based upon 1) the antagonism of this behavior by SCH-23390, a D-1 antagonist; 2) induction of SMB in neonatal-6-OHDA-treated rats by the D-1 agonist, SKF-38393; 3) the high correlation of the supersensitive locomotor responses to the D-1 agonist with the occurrence of L-dopa-induced SMB; and 4) the inability of the D-2 agonist, LY-171555, to induce SMB in rats treated neonatally with 6-OHDA. The specificity of SCH-23390 and SKF-38393 for the D-1 dopamine receptor was supported by the absence of action of SCH-23390 against locomotor activities induced by LY-171555 and its blockade of SKF-38393-induced locomotion in 6-OHDA-treated rats. Behavioral responses to D-1 and D-2 agonists did not show the same profile in adult and neonatally 6-OHDA-treated rats, providing further support for the view that the age at which dopaminergic neurons are destroyed has differing effects on motor output. Many of the behaviors observed when the D-2 dopamine receptor was activated by LY-171555 were apparent after SKF-38393 in neonatally 6-OHDA-treated rats. Similar behavioral responses to the D-1 and D-2 agonists were also observed in adult 6-OHDA-treated rats.(ABSTRACT TRUNCATED AT 250 WORDS)     

Changes in brain functional activation during resting and locomotor states after unilateral nigrostriatal damage in rats

To evaluate functional neuronal compensation after partial damage to the nigrostriatal system, we lesioned rats unilaterally in the striatum with 6-hydroxydopamine. Five weeks later, cerebral perfusion was mapped at rest or during treadmill walking using [(14)C]-iodoantipyrine. Regional CBF-related tissue radioactivity (CBF-TR) was quantified by autoradiography and analyzed by statistical parametric mapping and region-of- interest analysis. Lesions were confirmed by tyrosine hydroxylase immunohistochemistry and changes in rotational locomotor activity. Functional compensations were bilateral and differed at rest and during treadmill walking. Consistent with the classic view of striatopallidal connections, CBF-TR of lesioned compared to sham-lesioned rats increased in the ipsilateral subthalamic nucleus (STN) and internal globus pallidus, and decreased in the striatum and external globus pallidus. Contrary to the classic view, CBF-TR increased in the ipsilateral ventral lateral, ventral anterior thalamus and motor cortex, as well as in the central medial thalamus, midline cerebellum, and contralateral STN. During walking, perfusion decreased in lesioned compared to sham-lesioned rats across the ipsilateral striato-pallidal-thalamic-cortical motor circuit. Compensatory increases were seen bilaterally in the ventromedial thalamus and red nucleus, in the contralateral STN, anterior substantia nigra, subiculum, motor cortex, and in midline cerebellum. Enhanced recruitment of associative sensory areas was noted cortically and subcortically. Future models of compensatory changes after nigrostriatal damage need to address the effects of increased neural activity by residual dopaminergic neurons, interhemispheric interactions and differences between resting and locomotor states. Identification of sites at which functional compensation occurs may define useful future targets for neurorehabilitative or neurorestorative interventions in Parkinson's disease.     

p38信号通路对单侧输尿管结扎大鼠RANTES的影响

目的探讨p38有丝分裂素激活蛋白激酶(MAPK)在单侧输尿管结扎(UUO)大鼠肾组织的表达及活化状态。方法采用免疫组织化学法和Western印迹分析法检测UUO大鼠肾组织p38MAPK的磷酸化水平和RANTES蛋白水平,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测RANTES mRNA的表达。结果RANTES蛋白和RANTES mRNA随着梗阻时间的延长,表达明显上调,同时p38MAPK蛋白活性增高,两者呈显著正相关(P＜0．05)。结论UUO大鼠肾组织中p38MAPK的活化可上调RANTES的表达。     

丰富环境对脑梗死大鼠梗死灶周围血管内皮生长因子受体的影响

目的:研究丰富环境对大鼠局灶性脑梗死后梗死灶周围血管内皮生长因子受体的影响。方法:采用开颅电凝法制作SD大鼠右侧大脑中动脉缺血(MCAO)模型,术后第24小时随机分为丰富环境(EE)组和标准环境(SE)组。以免疫组织化学法检测血管内皮生长因子受体Flt-1及Flk-1的表达。结果:大鼠大脑中动脉闭塞后,缺血区神经元变性、坏死,Flt-1和Flk-1在缺血周边区表达明显增加,经丰富环境干预后,血管内皮生长因子受体表达大量增加。结论:丰富环境可促使血管内皮生长因子受体表达上调,进而促进微血管新生,有利于脑损伤修复。     

饲养的不同环境对局灶性脑梗死大鼠梗死灶周围IGF-1表达的影响

目的观察饲养的不同环境对局灶性脑梗死大鼠行为学恢复及梗死灶周围胰岛素样生长因子-1（IGF-1）表达的影响,为临床应用不同环境进行脑卒中康复治疗提供基础理论支持和实验依据。方法将实验动物随机分为假手术对照组（15只）和大脑中动脉阻塞（MCAO）（90只）。手术组用电凝法造成右侧大脑中动脉阻塞（MCAO）模型。术后标准笼中群居社交组,5只为一组,共30只;迷宫笼中居学习组,10只一组,共30只;30只居于丰富环境笼。术后剖颅取脑,采用石蜡包埋、切片,免疫组化染色,测梗死灶周围皮质胰岛素样生长因子-1（IGF-1）的表达情况,分别在术后28天、14天、7天、3天、1天随机在各组中选取5只进行,假手术组于术后1天、3天、7天随机选取大鼠5只处死。结果免疫组化结果：IGF-1阳性细胞表达：社交组MCAO术后3d可见梗死灶周围IGF-1表达增高（P〈0．05）,7d时表达略有下降,各手术组与假手术组没有明显差异（P〉0．05）。各手术组梗死灶周围皮质IGF-1阳性表达随时间延长逐渐增高,于MCAO术后第14天和28天时各手术组表达均高于假手术组（P〈0．05）,探索学习组、丰富环境组于MCAO术后IGF-1表达均明显优于社交组在14天和28天（P〈0．05）。结论在丰富环境及学习笼中的局灶性脑梗死大鼠,梗死灶周围皮层IGF-1的表达明显上调,可能为功能恢复的原因。