神经特异性转录因子DAT1绿荧光蛋白表达载体的构建及其在C8细胞中的表达定位

目的：构建神经特异性转录因子DAT1与绿荧光蛋白融合表达的表达载体，并检测其在C8星形胶质细胞中的表达。方法：采用基因重组技术将DAT1基因和绿色荧光蛋白基因融合，构建绿荧光蛋白表达载体pEGFP—C1-DAT1，测序验证序列无误后。用脂质体法将重组质粒转入C8细胞，荧光显微镜观察DAT1的表达及定位。结果：测序验证结果表明，重组质粒含有DAT1全长编码序列，转染实验表明EGFP—DAT1能在C8细胞中正确表达，且：DAT1蛋白主要定位于细胞核中。结论：DAT1全长cDNA基因绿色荧光蛋白表达载体构建成功，在C8细胞中可以正确表达，为进一步研究DAT1的功能奠定了基础。     

牙釉质表层区抗龋坏作用离体牙实验及扫描电镜观察

将实验牙去除牙釉质表层区，壳冠修复开窗，浸泡在含有蔗糖的致龋溶液中５７周，实验组与保留釉质表层对照组抗龋坏能力有显著差别。ＥＳＭ观察，正常釉质表层１０３０μｍ，有的部位轻薄或缺乏，尤以牙面沟凹，点隙区明显。龋坏的釉质表层边缘，呈风化石层样改变，裂缝方向与釉柱垂直，支持釉质龋表层带形成与釉质结构有关及存在着脱矿     

利用荧光探针JC-1检测心肌细胞线粒体膜电位的改变

利用荧光探针JC－1观察大鼠心肌细胞凋亡早期线粒体膜电位的变化。用过氧化氢（H2O2）诱导心肌细胞凋亡，在凋亡早期，利用新型荧光探针JC－1标记细胞线粒体，在FACS Calibur流式细胞仪上检测JC－1荧光强度的变化，用Annexin-V/PI双染色法鉴别凋亡和坏死的心肌细胞。结果显示，在正常大鼠心肌细胞中，线粒体维持较高的膜电位，JC－1在线粒体内形成聚合物，发出红色荧光。H2O2导致线粒体膜电位下降，JC－1聚合物分解成单体，红色荧光强度减弱。提示JC－1结合流式细胞仪是一种理想的检测线粒体膜电位的手段。     

抗坏血酸－Fe（Ⅲ）对铜锌超氧化物歧化酶理化性质的影响

用抗坏血酸－Ｆｅ（Ⅲ）作用于牛红细胞铜锌超氧化物歧化酶，观察到酶的紫外吸收增强，内源性荧光减弱，６８０ｎｍ表征二价铜光吸收降低，ＰＡＧＥ电泳图谱改变，在含有３．０ｍｏｌ／ＬＫＣｌ磷酸缓冲液中溶解度降低，酶对蛋白酶水解的敏感性提高．     

新装备卫生检验箱的使用体会

1992年4月，我所试装了军事医学科学院研制的88型水质理化检验箱、88型水质细菌检验箱、91型食品理化检验箱、91型食品细菌检验箱（统称新装备），新装备的使用，避免了过去食品理化性质和细菌学、水质细菌学检验需在实验室才能完成的缺点，适合在野战条件下的食品、水质卫生学检验的需要。经过3年的试用，并参加了两次野外军事演习，共检测水质60份，食品72份，结果满意。1体会新装备的总重量为24．25kg，为手提式和肩背式，具有体积小、重量轻、携带方便的特点，但手提箱的把手由于R时间负重、摇晃，容易出现断裂。为此，在实践中我们用…     

血球吸附免疫荧光技术在食品沙门氏菌快速检出中的应用

荧光抗体技术于1957年开始用于沙门氏菌纯培养的观察,1962年开始对乳制品中沙门氏菌进行检验试验,以后逐步扩大到其他多种食品的检出试验。早期的工作多采用间接荧光抗体染色法,自1970年以后,则多使用直接法。1975年以前,一般是处于实验研究阶段,方法程序往往各人不同。1975年美国分析化学协会(AOAC)提出了一个用免疫荧光检出食品沙门氏菌的标准化筛选程序,推荐作为初步法定的分析方     

急性三氧化二砷中毒59例肝脏损害分析

1997年3月我院收治急性三氧化二砷中毒59例，对全部患者进行了肝功能的监测及B型超声检查，对2例进行了肝活俭电镜观察，现将结果分析如下。1临床资料1．1病因及中毒量误服含有三氧化二砷（砒霜）的面粥。采样后由山东省卫生防疫站采用银盐法721分光光度此色仪检测，发现面粉中含砷量达40g／kg，面粥中含砷量达5g／L，估算服毒量在75～5000mg，平均32例521．86mg。设服达致死量（＞200mg）32例；余27例均超过中毒量。驱砷治疗一周后尿砷含量最高4mg／L，最低0.2mg／L。1．2一般情况男30例，支29例；年龄1～62岁，平均22．2岁，多为青壮年…     

基于MS2衣壳蛋白系统的活细胞内JunmRNA定位初探

目的检测细胞中JunmRNA在活细胞内的定位。方法设计引物，构建融合MS2茎环结构串联重复的Jun表达载体（pcDNA3．1-Jun-MS2-48X）。转染细胞后，绿色荧光蛋白（GFP）-MS2融合蛋白可与MS2茎环串联重复结构结合，通过荧光显微镜观察GFP的细胞定位，能够间接确定JunmRNA在细胞内的定位。结果成功构建了pcDNA3．1-Jun-MS2-48X表达载体，经荧光显微镜观察，能够看到明显的绿色荧光，并且在细胞内聚集。结论实现了在细胞内实时观察JunmRNA，为在单细胞水平上JunmRNA的定位提供了新的技术方法。     

抗坏血酸—Fe（Ⅲ）对铜锌超氧化物歧化酶理化性质的影响

用抗坏血酸－Ｆｅ（Ⅲ）作用于牛红细胞铜锌超氧化物歧化酶，观察到酶的紫外吸收增强，内源性荧光减弱，６８０ｎｍ表征二价铜光吸收降低，ＰＡＧＥ电泳图谱改变，在含有３．０ｍｏｌ／Ｌ Ｋｃｌ磷酸缓冲液中溶解度降低，酶对蛋白酶水解的敏感性提高。     

肠毒素大肠杆菌定居因子CS6抗原基因在大肠杆菌中的高效表达

目的：构建表达肠毒素大肠杆菌(ETEC)定居因子CS6的重组质粒，并在大肠杆菌DH5d中高效表达。方法：利用基因工程的方法，将含有cS6基因的质粒pMG233用限制性内切酶Cla Ⅰ酶切，得到长约3．1kb的CS6片段(含有cS6结构基因及调控基因的DNA片段)；并与用限制性内切酶Cla Ⅰ酶切的表达载体质粒pBV321连接．得到含有CS6片段的重组质粒pMG235，转化至大肠杆菌DH5a。结果：SDS-PAGE、Western印迹及免疫荧光观察的结果表明，重组菌DH5a／pMG235可高效表达相对分子质量为14600的CS6抗原蛋白，并在重组菌表面表达，表达产物可被抗CS6多克隆抗体识别。结论：重组菌可稳定表达肠毒素大肠杆菌定居因子抗原CS6。     

CB-GFP融合基因在COS-7细胞中的表达与定位

目的：构建以绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP）为报告基因的重组表达质粒pEGFP-N1-CB，转染体外培养的COS-7细胞，以观察CB重组蛋白在真核细胞中的表达及定位。方法：PCR方法扩增得到去除终止密码的cB融合基因序列，克隆入真核表达载体pEGFP-N1中，构建重组表达载体pEGFP-N1-CB。脂质体法转染体外培养的COST细胞后，以RT-PCR和Western印迹方法验证其mRNA及蛋白的表达，并在活细胞状态下用荧光显微镜、激光共聚焦显微成像技术直接观察CB-GFP融合蛋白在细胞中的分布和定位。结果：RT．PCR及Western印迹结果均证明CB—GFP融合基因表达载体pEGFP-N1-CB在COS．7细胞中获得了表达。荧光显微镜观察显示，在空载体pEGFP-N1转染组中，COST细胞内荧光呈弥散分布；重组质粒pEGFP-N1-CB转染组中，绿色荧光主要聚集在细胞浆中。结论：CB融合基因能在真核细胞COST中得到高效表达，且蛋白表达主要定位于细胞浆中，本试验为CB重组蛋白的提取及进一步功能研究奠定了基础。     

军用野战食品的研究与进展

野战食品是战场后勤保障的重要组成部分，各国对此极为重视。现将外军野战食品研究概述如下。外军野战食品特点外军野战口粮特点是品种系列化，花样多，更接近日常膳食。1．从实战出发，不断改进和完善野战食品系列在众多的外军野战口粮中，各类人员各种情况下使用的口粮品种比较完全，而且还不断改进。如美军一人一餐份包装的单兵快餐口粮[MORE]是在单兵快餐口粮[MRE]第8版餐港的基础上改进的。2．花样多，味美可口美军单兵快餐口粮含有12餐不同食谱，连续食用则不重复，糕点、蔬菜、水果和饮料俱全。加拿大的单兵口粮包共有7种餐谱，主…     

膀胱灌注5-氨基酮戊酸诱导内生PpⅨ荧光的组织分布

目的通过膀胱灌注5-氨基酮戊酸(5-ALA)探讨其所诱导产生内源性PpⅨ在膀胱组织中分布及不同病变表达上的差异。方法20例无痛性肉眼血尿患者行荧光膀胱镜检查。以50ml5-ALA缓冲液膀胱灌注,2~3h后置入荧光膀胱镜,用光动力学诊断系统进行荧光膀胱镜检,采用407nm激发光照射膀胱壁,对产生荧光的红色区域及非荧光的蓝色区域分别进行标记活检,取活检组织做快速冰冻切片,每块组织均做2份,1份用HE染色进行组织病理学检查,另1份用甘油封闭后在激光共聚焦显微镜下荧光成像,分析各标本荧光分布并定量检测不同组织PpⅨ荧光含量。结果共取活检组织32处,病理检查结果,膀胱移行细胞癌共18处、良性病变12处、正常膀胱上皮2处。激光共聚焦显微镜下所见,5-ALA诱导PpⅨ荧光主要分布在组织表层,深部组织PpⅨ荧光很弱。荧光量化分析显示,表层组织荧光强度高出深部组织5~10倍,对比各样本表层组织荧光,其强度与肿瘤分级相关(G3>G1-2),而肿瘤组织平均荧光强度明显高于良性病变的平均荧光强度。结论(1)由于PpⅨ荧光主要分布在组织表层,荧光膀胱镜检只能发现表层的病变,因此对于位于正常膀胱黏膜下的病变进行荧光诊断可能无价值,在荧光膀胱镜指示下行经尿道切除术(TUR)时,对于切除深度无指导意义。(2)5-ALA诱导荧光膀胱镜检对膀胱癌诊断特异性尚不高,但量化荧光强度可区分良、恶性病变,从而提高荧光膀胱镜检对肿瘤诊断的特异性。(3)PpⅨ可作为肿瘤标志物来判断肿瘤生物学行为。(4)激光共聚焦显微镜及其图像分析系统对于膀胱肿瘤光动力学诊断(PDD)临床应用价值的分析是一个很有用的工具。     

登革3型病毒NS1基因重组质粒DNA的构建及其免疫原性观察

目的：构建登革3型病毒NS1基因的真核重组表达质粒，观察其免疫原性，为登革新型疫苗的研究提供依据。方法：从感染鼠脑中提取登革3型病毒RNA，经RT－PCR获得NS1基因片段，然后将其克隆到真核表达载体中。用电穿孔法将重组质粒NDA转入COS7细胞，通过免疫荧光法检测外源基因在真核细胞中的表达，将重组质粒DNA免疫BALB／c小鼠，观察其免疫原性。结果：通过酶切鉴定和序列测定证实了NS1基因片段已经插入真核表达载体，用免疫荧光法证明转染了重组质粒的COS7细胞的胞浆中有特异荧光。重组质粒DNA免疫小鼠后可观察到诱发产生的细胞免疫应答。结论：含有登革3型病毒NS1基因的真核重组表达质粒可以在COS7细胞中进行表达，而且能够诱导小鼠产生细胞免疫应答。     

牙釉质表层区抗龋坏作用离体牙实验及扫描电镜观察

将实验牙去除牙釉质表层区,壳冠修复开窗,浸泡在含有蔗糖的致龋溶液中57周,实验组与保留釉质表层对照组抗龋坏能力有显著差别(P<0.05)。ESM观察,正常釉质表层10μm～30μm,有的部位轻薄或缺乏,尤以牙面沟凹、点隙区明显。龋坏的釉质表层边缘,呈风化石层样改变,裂缝方向与釉柱垂直,支持釉质龋表层带形成与釉质结构有关及存在着脱矿。     

QY-1A型青霉素过敏快速皮试仪的临床应用效果观察

目的了解无创、无痛的QY-1A型青霉素过敏快速皮试仪在临床应用的可行性。方法采用上海伊部电器有限公司生产的QY-1A青霉素过敏快速皮试仪，对182例头孢菌素类皮试患者、9例青霉素皮试患者进行传统皮试过敏试验和应用皮试仪做过敏试验进行对照。结果181例头孢菌素类皮试患者和9例青霉素皮试患者对照试验结果相符（2例皮试仪应用不当报警，重做后对照结果相符），其中1例青霉素传统皮试和皮试仪皮试结果均呈阳性。1例头孢菌素类皮试仪过敏试验结果为阳性，传统过敏试验法为阴性。结论皮试仪与传统皮试结果相符率99．5％（190／191），皮试过程无创、无痛、节省时间，患者易接受。     

CZK—Ⅱ型肿瘤样品快速处理仪在HE染色中的应用

目前又有一种具备超声恒温性能的肿瘤样品快速处理仪面世。一年多来，我们扩展其功能，作全程常现病理石蜡切片HE染色，收到广省时、质佳的理想染片效果。1材料和方法1．1标本为本院1995年6月～1996年8月，先后送检的病理标本共30余种，1400多份。标本经10％甲醛固定约24h或为术中送检的新鲜组织。标本小如针尖的胃肠粘膜或鼻咽部粘膜，大到10minX10mmX2mm的各种组织块。1．2仪器为深圳越华电子有限公司牛产的CZK－I型肿瘤样品快速处理仪（专利号：921076371），工作频率为1．7MHZ，最大输入功率800W，自动温控37、100“C。1．3方法标…     

鲜艳的"杀手"苏丹红

苏丹红的用途苏丹红是一种人工合成的红色染料,主要包括1、2、3和4号4种类型,常被作为一种工业染料广泛用于溶剂、油、蜡、汽油的增色以及鞋、地板的增光等。含苏丹红的食品遭禁1995年欧盟等国家已禁止将苏丹红作为色素在食品中进行添加。我国在《食品添加剂使用卫生标准》中也明令禁止将苏丹红作为食品添加剂使用。但由于其染色鲜艳,印度等一些国家还允许在加工辣椒粉的过程中添加苏丹红1号。1995年2月18日,英国食品标准局就含有添加苏丹红色素的食品向消费者发出警告,公布了可能含有苏丹红1号的产品清单。截至当年2月24日,清单上的产品增…     

玻片固相抗体吸附免疫荧光技术的实验研究——Ⅰ.方法的基本性能

为解决细菌学快速诊断技术中标本除杂菌杂质的问题,我们建立了致敏红细胞吸附免疫荧光技术(EAIF),已在食品沙门氏菌的快速检验中得到成功的应用。为了简化试剂制备手续,进一步提高本技术的使用性能,我们又建立了玻片固相抗菌抗体吸附免疫荧光技术(SPAIF),也在食品沙门氏菌,以及金黄色葡萄球菌和溶血性链球菌的快速诊断中应用成功。这些工作为免疫荧光技术在基层实验室用于细菌的快速检验创造了有利条件。本文报告SPAIF建立的主要试验数据及其基本性能。     

血红细胞的计算机自动识别与快速计数方法

本文介绍了一种用计算机数字图象技术对显微视场中血红细胞进行自动识别与快速计算方法。该方法是依次对图象作辐条滤波处理及快速标号,达到识别与计数的目的。检验计算证明,对一帧64×64象素的图象作处理,能正确识别各个血球细胞,在IBM/AT机上完成整个处理过程不到1分钟。