秀丽隐杆线虫作为抗感染药物筛选模型的研究进展

秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)作为一种经典的模式生物,具有虫体小、生命周期短、虫体透明等特点,易于培养和观察,近年来在生命科学领域得到了广泛的运用.该文综述了利用秀丽隐杆线虫作为微生物感染模型进行抗感染药物体内研究的进展,并展望了秀丽隐杆线虫作为模式生物的应用前景.     

秀丽隐杆线虫在药物筛选中的应用

秀丽隐杆线虫在药物和靶蛋白筛选方面越来越受到药物学家的重视,已形成了较为完善的药物筛选技术平台。本文以新药的发现为目标,介绍线虫作为新药筛选模型的特点、研究现状及该模型在新药发现中的应用。     

秀丽隐杆线虫衰老与衰老相关神经退行性疾病模型及药物筛选研究进展

秀丽隐杆线虫(C.elegans)是生命科学领域非常重要的模式生物,具有寿命短、世代周期短、易于培养与观察等特点,因而被广泛用于生命科学研究,特别是在药物筛选和药物作用机制研究等方面。衰老是一个复杂的过程,是多因素共同作用的结果。在C.elegans中的抗衰老信号通路主要有3种,包括胰岛素-胰岛素样生长因子1信号通路、饮食限制信号通路和线粒体呼吸链/ATP合成信号通路。本文主要综述了基于以上3种信号通路的衰老模型以及基于以上衰老模型的抗衰老药物研究进展。此外,通过转基因或化学诱变可获得一些与衰老相关神经退行性疾病的C.elegans模型,包括帕金森病的α-突触核蛋白转基因模型、阿尔茨海默病的β-淀粉样蛋白沉积模型和亨廷顿舞蹈病的多聚谷氨酰胺聚集的转基因模型,总结了基于以上C.elegans疾病模型筛选的有效药物。<正>随着当今社会人口老龄化的日益加重,人口老龄化已对我国社会经济的稳定和发展产生了深远影响,与此同时与衰老相关的疾病也引起了人们的广泛关注,如何安全有效地延缓衰老已成为医学界和社会关注的焦点,因而衰老机制的探索以及抗衰老药物的研究已成为当今社会研究的一大热点。在衰老与抗衰老研究中人们遴选出了各种动物衰老模型,如D-半乳糖(D-galactose,D-Gal)所致的亚急性大鼠衰老模型[1]、β淀粉样蛋白(β-amyloid     

秀丽隐杆线虫在抗肿瘤药物开发中的应用

秀丽隐杆线虫是一种适合肿瘤学研究的模型动物.本文从秀丽隐杆线虫的程序性细胞死亡、多药耐药相关蛋白的研究以及作为肿瘤研究中的体内整体模型,综述秀丽隐杆线虫在抗肿瘤药物开发中的应用.     

秀丽隐杆线虫用于帕金森病及其治疗药物的分子生物学研究

帕金森病是一种常见的神经退行性疾病,利用脊椎动物模型和组织培养系统可对神经退行性疾病病理进行有价值的研究,但帕金森病及其治疗药物的病理、药理分子机制研究尚待深入.本文阐述如何利用线虫的遗传学和神经生物学特点对帕金森病及治疗药物进行研究和评价.     

线虫模型与干预帕金森病靶点及药物发现的研究进展

目的对秀丽隐杆线虫在帕金森病药物发现中的作用进行总结,以期对帕金森病的药物发现提供参考。方法通过系统文献调研,以近年来的30余篇外文文献为依据进行归纳总结。结果线虫分子途径的保守性及应用线虫模型进行药物筛选实验的可行性使线虫成为非常有潜力用于发现治疗帕金森病药物的模式生物。结论线虫这一模式生物的引入对于帕金森病药物靶点的发现与确证及新的治疗药物的研究具有重要作用。     

秀丽隐杆线虫-耐药铜绿假单胞菌感染模型的建立

目的 建立耐药铜绿假单胞菌感染的秀丽隐杆线虫感染模型。方法 利用临床分离的P.aeruginosa A258制各BHI、PGS、NG和Aga线虫感染平板。采用不同浓度的四环素、利福平和多粘菌素B对感染线虫进行治疗,考察感染线虫的存活率。结果 不同感染平板对线虫致死情况不同。采用NG感染平板对glp-4;sek-1线虫进行感染,其LT50 为3.5d。32μg/mL利福平和16μg/mL多粘菌素B对该感染线虫进行治疗,与不加入药物的对照组相比,其存活率分别提高了5和14倍。但一定浓度的四环素没有提高感染线虫的存活率,在线虫体内不能抑制P.aeruginosa A258的感染,与体外抑菌实验结果相一致。结论 建立了秀丽隐杆线虫-耐药铜绿假单胞菌A258感染模型,为此模型用于抗感染化合物的筛选奠定基础。     

基于微流控芯片技术的秀丽隐杆线虫药物筛选体系研究进展

活性化合物筛选和早期药物毒性筛选是创新药物研究的起点,整合新技术的高通量筛选成为研究热点.秀丽隐杆线虫作为一种常用的体内模式生物,既可以模拟化合物在体内的代谢变化,又可以实现药物的高通量筛选.微流控芯片通道与线虫大小尺度相匹配,能实现线虫在芯片内分选、固定、长期培养、自动化给药、高分辨率成像和图像自动分析等,为基于线虫...     

一种筛选抗心律失常药物新模型的建立

目的　建立一种细胞水平的心律失常模型 ,以用于抗心律失常药物的筛选和评价。方法　酶解法分离单个大鼠心室肌细胞 ,在细胞水平给予传统诱发心律失常药物乌头碱 ,应用膜片钳技术观察记录应用乌头碱后心肌动作电位时程 (APD)、钠电流 (INa)、L 型钙电流 (ICa L)、内向整流钾电流(IK1)及瞬时外向钾电流 (Ito)的变化。结果　应用乌头碱 1μmol·L-1使大鼠单个心室肌细胞 90 %复极化动作电位时程(APD90 )从给药前的 ( 15 0 2 3± 7 0 2 )ms延长至 ( 2 3 6 0 3±2 3 2 2 )ms(n =8,P <0 0 1)。应用奎尼丁 10 μmol·L-1后动作电位时程延长与乌头碱组比较 ,APD90 进一步延长 (n =6,P <0 0 5 ) ,但应用维拉帕米 10 μmol·L-1后被乌头碱延长的APD恢复近于正常 ,在乌头碱的作用下 ,除极电压为 0mV时ICa L从 ( 72 7 9± 178 0 ) pA增加至 ( 10 82 1± 2 2 2 2 ) pA(n =6,P <0 0 1) ;钠电流 (INa)在 - 5 0mV刺激电压下从( 2 5 4± 5 5 3 ) pA增加至 ( 45 3 0 2± 475 1) pA(n =4,P <0 0 5 ) ;IK1在 - 12 0mV的刺激电压下 ,Ik1的内向成分从( 2 0 0 7 1± 3 5 9 3 ) pA增加至 ( 2 3 17 7± 40 1 8)pA(n =10 ,P <0 0 1) ;奎尼丁、维拉帕米对乌头碱诱发的钠电流和钙电流增加有抑制的作用。结论　乌头碱使?     

一种阻断乙肝病毒衣壳组装的抗病毒药物的体外荧光筛选方法

病毒组装过程通常不作为开发抗病毒药物的靶标，部分由于缺乏易于操作的体外筛选方法。本研究基于染料标记的衣壳蛋白荧光猝灭原理，建立了体外检测乙型肝炎病毒（HBV）衣壳组装的方法，用于筛选可能的抑制剂。此方法适用于高通量筛选，能快速筛选出抑制病毒组装过程的小分子化合物，它们能阻止、不适当地加快和／或误导衣壳形成从而产生异常颗粒的小分子。     

一种快速可靠筛选作用于细胞缝隙连接药物的方法建立

目的建立一种可以快速有效地筛选能影响细胞缝隙连接(gap junction,GJ)功能药物的方法;为研制以GJ为靶点的新型药物提供技术手段。方法构建能同时双向表达两种不同连接蛋白(connexins,Cxs)的质粒;用能表达Cx26/Cx32的质粒转染HeLa细胞,建立可以稳定表达Cx26/Cx32并形成异质性GJ的HeLa细胞模型。用荧光传递示踪法测定荧光示踪剂在细胞之间的传递,以此反映GJ的功能。观察公认的GJ激活剂——维甲酸(retinoid acid,RA)和GJ抑制剂——油酸酰胺(oleamide)对GJ功能的影响,检验该方法是否能够准确地检测出GJ功能。结果 Western blot和荧光传递示踪法的结果表明,转染含有Cx26/Cx32 cDNA质粒的HeLa细胞,可以稳定表达Cx26/Cx32;并能够形成可以传递荧光示踪剂在相邻细胞间的GJ。RA和油酸酰胺能分别增强和抑制荧光示踪剂的传递。结论在转染Cx26/Cx32质粒并稳定表达Cxs的HeLa细胞上,用荧光传递示踪法测定GJ功能,可以快速准确地检测出药物对GJ的作用。该方法的建立为筛选作用于GJ的药物提供了一种有用的技术手段。     

研究一种用杀蚊幼虫和杀蜱螨的生物模型来筛选抗神经系统疾病的抗生素

以杀蚊虫的幼虫和杀蜱螨为生物模型,来寻找能产生对神经作用有效的抗生素产生菌.初筛有效的菌株经复筛培养,使用乙醇抽提活性成份,就UV吸收、抗菌性能、 TLC分离鉴别以及形态观察等方面进行综合评价。其中8株活性成份和Antimycin,另对4株活性也类似于polynactin而是一株有希望的新菌株。     

一种靶向于生长抑素受体2的药物筛选模型的建立与应用

目的以生长抑素受体2(SSTR2)为靶点,建立生长抑素类似物(SSTA)活性检测的细胞模型,为SSTR2激动剂以及SSTA的药物筛选提供一种简单稳定的评价方法。方法将SSTR2目的基因整合入pEGFP-N3载体中,构建重组质粒SSTR2-pEGFP-N3,并转染进HEK293细胞,使用G418筛选后挑取阳性克隆,扩大培养获得稳转细胞株。通过荧光细胞成像、免疫蛋白印迹、qPCR等方法对获得的稳转细胞株进行鉴定。建立钙流检测体系,对该体系细胞数量、荧光指示剂浓度、孵育时间等条件进行优化。最后利用建立的筛选模型对不同批次的上市药物生长抑素制剂思他宁进行检测。结果成功构建SSTR2稳转细胞株,受体主要分布在细胞膜上。确定钙流检测最优条件为:30 000个细胞每孔,Fluo-4/AM指示剂浓度为3μmol·L~(-1)～5μmol·L~(-1),孵育时间为45 min。在该条件下,不同批次的思他宁EC_(50)值稳定。结论成功构建SSTR2稳转细胞株,并优化钙流检测方法,为生长抑素受体激动剂的筛选提供了一种简单稳定的模型。