#br# rhTGF-β1对SD大鼠MSCs骨向分化的影响及机制研究

 目的：通过观察重组人转化生长因子 β1(rhTGF-β1)对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)增殖和骨向分化能力的影响,以及对骨形态发生蛋白2(BMP-2)、Smad4及核心结合因子α1(Cbfa1)的作用,阐释其对MSCs骨向分化影响以及可能的作用机制。方法：用全骨髓贴壁法分离、纯化SD大鼠MSCs;用MTT法检测0、5、10、20、40、80和100 μg/L rhTGF-β1对MSCs增殖活性的影响;以碱性磷酸酶(ALP)活性及ALP染色阳性率确定rhTGF-β1的最佳促MSCs骨向分化浓度,并以该浓度对MSCs骨向分化进行干预。按是否添加经典成骨诱导液将实验分为：正常组、经典组、rhTGF-β1组和rhTGF-β1+经典组。通过检测ALP、I型胶原、骨钙素表达和钙化结节的数目,评价各组骨向分化能力;通过检测BMP-2、Smad4和Cbfa1 mRNA的表达,评价各组促MSCs骨向分化的可能作用机制。结果：rhTGF-β1最佳促MSCs增殖浓度为10 μg/L,最佳促MSCs骨向分化浓度为5 μg/L。经典组、rhTGF-β1组和rhTGF-β1+经典组均能促进MSCs骨向分化,刺激BMP-2分泌,并上调Smad4和Cbfa1 mRNA的表达,且rhTGF-β1对MSCs成骨分化的早期、中期效果好,而rhTGF-β1+经典组对MSCs成骨分化的晚期效果更为明显。结论:经典组、rhTGF-β1组和rhTGF-β1+经典组均有促MSCs骨向分化的作用,其机制可能是促进BMP-2的分泌,通过TGF-β超家族/Smads信号通路调控骨向分化。     

新型壳聚糖基仿生网络复合膜诱导骨髓间充质干细胞定向成骨分化

目的 探讨新型壳聚糖基网络复合膜诱导骨髓间充质干细胞（MSCs）定向成骨分化的可行性.方法 采用仿生学方法,壳聚糖、明胶、果胶按照一定比例制作成新型壳聚糖基仿生网络复合膜.设计4个组：实验组1（复合膜＋常规培养基）,对照组1（常规培养基）,实验组2（复合膜＋成骨诱导（OS）培养基）,对照组2（OS培养基）.通过倒置相差显微镜、四甲基偶氮唑盐（MTT）法、扫描电镜（SEM）检测细胞在复合膜上的生长和增殖情况;通过测定碱性磷酸酶（ALP）活性来评价MSCs在复合膜上的成骨分化能力;通过特殊染色和能谱分析（EDX）来评定钙盐的沉积.结果 MSCs在网络复合膜上贴附、生长良好且增殖旺盛.MTr法检测细胞活力显示实验组吸光度（OD）值与对照组比较无统计学意义（P＞0.05）.SEM观察到细胞在支架材料表面呈聚集生长,分泌大量的细胞外基质,可见散在的结节形成.实验组1的ALP活性明显增高,与实验组2、对照组比较有统计学意义（P＜0.01）.茜素红和Von Kossa染色可见实验组细胞分化后形成的钙化结节;ALP染色可见胞浆内蓝染颗粒;EDX检测到Ca、P沉积.结论 新型壳聚糖基网络复合材料具有良好的生物相容性,在不添加诱导剂的条件下,可以诱导MSCs定向成骨分化.     

miR-181b抑制骨髓间充质干细胞成骨分化可能参与青少年特发性脊柱侧弯骨密度降低

目的探讨miR-181b在正常对照和青少年特发性侧弯患者(AIS)骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)之间的表达差异,以及其对BM-MSCs成骨分化能力的影响。方法 RT-qPCR检测对照和AIS患者MSCs中miR-181b的表达;将miR-181b模拟物、抑制剂以及相应对照瞬时转染BM-MSCs,随后更换为成骨诱导培养基,比较不同处理组BM-MSCs成骨能力的差异; RT-qPCR和Western blot检测成骨标志基因以及特异性转录因子的表达;碱性磷酸酶(ALP)染色法以及ALP活性分析法来鉴定成骨早期分化;茜素红染色检测细胞外基质的形成情况;慢病毒在BM-MSCs中过表达miR-181b的模拟物和抑制剂后,建立裸鼠异位骨生成模型,通过组织染色检测类骨质的形成。Western blot检测miR-181b水平的改变对ERK1/2磷酸化的影响。结果与正常对照比,AIS患者BM-MSCs中miR-181b表达显著升高(P0.01)。过表达miR-181b明显抑制间充质干细胞体外向成骨分化,降低体内异位骨生成(P0.05);阻断内源性miR-181b可以促进BM-MSCs体外向成骨分化,增强体内类骨质的形成(P0.05)。其作用机制是,过表达miR-181b抑制ERK1/2的磷酸化,而抑制miR-181b促进ERK1/2的磷酸化(P0.05)。结论 miR-181b抑制间充质干细胞成骨分化,可能与AIS患者骨密度降低有关。     

缺氧条件下间充质干细胞以旁分泌方式影响脑微血管内皮细胞的功能

目的：探讨缺氧条件下间充质干细胞（MSCs）以旁分泌方式对脑微血管内皮细胞（BMECs）的增殖、迁移和细胞单层通透性的影响。 方法:分离、培养并鉴定人MSCs和大鼠BMECs，ELISA检测细胞条件培养基中VEGF和MMP-9的含量，跨内皮电阻（TEER）检测反映脑BMECs单层通透性的变化，观察不同条件培养基对缺氧BMECs增殖、迁移和通透性的影响。结果:VEGF和MMP-9在MSCs条件培养基中的含量显著高于BMECs条件培养基，缺氧处理的MSCs条件培养基中VEGF和MMP-9含量比正常MSCs条件培养基显著增高；MSCs条件培养基能明显促进BMECs在缺氧条件下的增殖和迁移，但也使BMECs的TEER显著降低（50.5％±2.6％，P<0.05），这些作用在不同程度上能被VEGF抗体和MMP-9抑制剂所抑制。结论:缺氧条件下MSCs可通过旁分泌方式促进BMECs增殖和迁移，但同时也增加了BMECs单层的通透性。     

纤维蛋白凝胶促进大鼠间充质干细胞的成骨分化

背景：纤维蛋白是一种天然的可生物降解、组织相容性好的高分子材料,是一种能促进细胞和外源性生长因子释放的载体,其中血纤维蛋白稳定因子ⅩⅢ已证明有利于未分化的间充质干细胞在高度交联的凝胶支架内迁移,并且促进这些细胞的增殖与分化能力。 目的：观察大鼠间充质干细胞在纤维蛋白凝胶内的行为。 方法：无菌条件下分离大鼠胎肢细胞获得间充质干细胞,取第3代细胞分别接种于0,5,10,20 g/L纤维蛋白凝胶内,用倒置相差显微镜和激光扫描共聚焦显微镜分析细胞在凝胶内的形态学变化; 酶标仪和Von Kossa染色分析碱性磷酸酶活性和钙盐沉积。 结果与结论：5 g/L低浓度纤维蛋白凝胶有利于细胞形态的发生,20 g/L高浓度凝胶有利于细胞的成骨分化。20 g/L纤维蛋白凝胶碱性磷酸酶活性高于对照组,10和20 g/L浓度纤维蛋白凝胶矿化结节出现在21至28 d,而对照组无矿化结节出现。提示大鼠间充质干细胞的形态与成骨分化依赖于纤维蛋白凝胶浓度,提示纤维蛋白凝胶有助于间充质干细胞的成骨分化。中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料;骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性;组织工程全文链接：     

不同浓度细胞松弛素D对人脂肪源干细胞分化能力的影响

目的　观察不同浓度细胞松弛素D（Cyto D）对人脂肪源干细胞（hASC）成骨分化和成脂分化能力的影响。 方法　在生长培养基、成脂诱导培养基及成骨诱导培养基中分别加入0.05、0.1、0.2 μg/ml的Cyto D处理hASC,干扰肌动蛋白的延长,并在处理的第1、4、7 d时分别进行油红O染色、ALP染色及CCK8等实验检测细胞性能的改变。 结果　7 d时实验组0.2 μg/ml的存活率相比于对照组下降了1/3。Cyto D能抑制hASCs的存活和增殖,且浓度越大细胞的存活率越低。单纯的Cyto D既能促使hASC胞内脂滴形成,又能改变细胞内成骨的基础状态。Cyto D与成脂诱导液联合使用后能极大的促进成脂,且不同的浓度具有不同的成脂效果,低浓度使脂滴数量增加,高浓度促进脂滴成熟;与成骨诱导液联合使用后Cyto D用药浓度和成骨效果成反比。 结论　细胞松弛素D能增强成骨或成脂诱导液效果,且低浓度细胞松弛素D能够促进成骨,低浓度和高浓度细胞松弛素D都能促进成脂。本实验探究了细胞松弛素D引起的肌动蛋白解聚对脂肪源干细胞的分化能力影响,为研究脂肪源干细胞的分化机制提供了重要生物学信息。     

活性氧介导铁过载对正常及辐射损伤小鼠骨髓间充质干细胞的影响

目的 探讨铁过载对正常及病态骨髓间充质干细胞(MSCs)的损伤作用及其机制.方法 将40只雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组、铁剂组、照射组、及照射加铁剂组,给予铁剂4周.分离培养MSCs,普鲁士蓝铁染色检测MSCs内铁颗粒、流式细胞仪检测可变铁池(LIP)及活性氧(ROS)水平,CCK8检测MSCs增殖能力,油红-O染色检测MSCs成脂定向分化能力、茜素红染色检测成骨定向分化能力,实时定量-PCR(real-time PCR)检测成骨相关基因表达.结果 与对照组及照射组相比,铁剂组及照射加铁剂组MSCs内明显存在铁颗粒,LIP水平明显增高(P ＜0.05);ROS水平明显增加(P＜0.05);细胞增殖能力明显下降(P＜0.05);成骨分化能力下降(P＜0.05),向成脂细胞分化能力增强.结论 铁过载可介导ROS升高影响正常及病态骨髓MSCs的增殖、定向分化能力,降低其造血支持作用,并间接引起骨损害.     

上调骨形态发生蛋白2促进成骨细胞增殖分化的硅酸钙类材料Biodentine北大核心

背景:Biodentine是一种具有生物相容性的新型硅酸钙口腔修复材料,它不仅可以增加牙髓细胞中生长因子的分泌,也可以诱导牙本质的矿化,但是其在骨修复方面的研究较少。目的:通过构建干扰骨形态发生蛋白2的小鼠成骨前体细胞株,研究Biodentine对于干扰骨形态发生蛋白2小鼠成骨前体细胞株的增殖及分化能力的影响。方法:将0.1,1,10,100 g/L的Biodentine浸提液作用于小鼠成骨前体细胞24 h,通过CCK-8与碱性磷酸酶活性实验筛选最佳的作用质量浓度10 g/L,用于以下实验。将Biodentine浸提液作用于小鼠成骨前体细胞1,3,5,7 d,以未干预组为对照,通过CCK-8与碱性磷酸酶活性实验观察作用前后细胞的增殖及成骨分化。构建干扰骨形态发生蛋白2的小鼠成骨前体细胞株,通过CCK-8与碱性磷酸酶活性实验观察干扰前后细胞的增殖及成骨分化。构建干扰骨形态发生蛋白2的小鼠成骨前体细胞株,Biodentine组加入10 g/L的Biodentine浸提液,设置单纯干扰组为对照,作用24,48 h后,通过CCK-8与碱性磷酸酶活性实验观察细胞的增殖及成骨分化;作用24 h后,Real-time PCR、Western blot检测碱性磷酸酶mRNA与蛋白的表达。结果与结论:(1)10 g/L的Biodentine浸提液在1,3,5,7 d可促进小鼠成骨前体细胞的增殖与成骨分化;(2)干扰骨形态发生蛋白2可抑制小鼠成骨前体细胞的增殖与成骨分化;(3)Biodentine组作用24,48 h后的细胞增殖与成骨分化能力高于干扰组(P <0.05),作用24 h后的碱性磷酸酶mRNA与蛋白表达高于干扰组(P <0.05);(4)结果表明,10 g/L的Biodentine可以通过骨形态发生蛋白2增强成骨细胞的增殖及成骨分化。     

骨化三醇通过PI3K/AKT促进BMP9诱导的间充质干细胞成骨分化作用

目的研究骨化三醇(calcitriol)对骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein 9,BMP9)诱导的间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)成骨分化作用的影响。方法实验分为4组:对照组、calcitriol组、BMP9组、calcitriol联合BMP9组。通过PNPP法检测各组碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性;通过RT-PCR和Western blotting方法检测成骨分化标记物骨钙蛋白(osteocalcin,OCN)和骨桥蛋白(osteopontin,OPN)表达变化,同时检测AKT和β-catenin磷酸化水平以及和ALP活性水平;茜素红染色检测矿化结节形成。此外,用原子力显微镜测试MSCs成骨分化过程中细胞形态及细胞弹性模量改变。结果 calcitriol单独作用对MSCs成骨分化过程无明显作用,但是calcitriol可以增强BMP9诱导MSCs的ALP、OCN、OPN表达和矿化结节形成。同时,calcitriol和BMP9作用均不影响细胞弹性模量数值。BMP9和calcitriol联合作用可以增强AKT和β-catenin磷酸化水平,而PI3K抑制剂应用以后可以抑制这种磷酸化变化,并抑制联合作用后的ALP活性。calcitriol作用以后不影响BMP9诱导的BMP/Smad信号通路。结论 calcitriol通过激活PI3K/AKT信号通路从而协同BMP9促进MSCs成骨分化。研究不同调控因子对MSCs成骨分化的作用及机制对于骨质疏松等疾病的治疗和骨组织工程的发展有一定意义。     

G-CSF、AMD3100对大鼠间充质干细胞增殖、迁移和黏附能力影响的研究

目的 探讨粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、AMD3100对大鼠间充质干细胞(MSCs)增殖、迁移和黏附的影响.方法 采用MTT比色法、Transwell迁移法和黏附试验分别检测体外G-CSF、AMD3100对间充质干细胞的增殖、迁移和黏附能力的影响.结果 在G-CSF质量浓度为200 μg/L、AMD3100质量浓度为0.5 mg/L时MSCs增殖能力最强;在G-CSF质量浓度为200 μg/L、AMD3100质量浓度为0 mg/L时MSCs迁移能力最强;在G-CSF质量浓度为200 μg/L、AMD3100质量浓度为0.5 mg/L时MSCs黏附能力最强.结论 体外G-CSF对间充质干细胞的增殖、迁移和黏附能力呈促进作用,而AMD3100呈抑制作用.     

Level of functioning of siblings and parents of probands of varying degrees of retardation

A further analysis of already published data supports the position that retardates of low ability level less frequently have retarded siblings, retarded parents, and parents low in occupational level than do retardates higher in ability level. The analysis supports the position that there are two types of retarded individuals, persons retarded as a result of gene or chromosomal anomalies, brain injury, etc., who more frequently occur in the lower-level retardate group, and persons whose retardation represents polygenic segregation, who more frequently occur in the higher-level group.     

局部注射辛伐他汀对骨质疏松大鼠股骨髁骨小梁的改建效应

背景：局部注射具有成骨作用的辛伐他汀,可显著增加骨质疏松大鼠股骨颈及股骨髁部的骨密度及力学强度,分析局部注射辛伐他汀对股骨髁骨小梁的影响。 目的：进一步研究骨质疏松大鼠股骨内局部注射辛伐他汀对股骨髁骨小梁的影响。为将辛伐他汀应用于临床骨质疏松局部治疗提供实验基础。 方法：18只雌性SD大鼠双侧卵巢切除后3个月,制备大鼠骨质疏松模型。实验大鼠随机数字表法均分为3组,分别在实验大鼠的右侧股骨髓腔内单次注射辛伐他汀溶液5 mg、10 mg,对照组单纯注射空白载体。分别在注射后1个月处死大鼠并取材。Micro-CT扫描并定量分析骨组织形态变化。 结果与结论：给药后1个月,Micro-CT扫描结果显示,辛伐他汀治疗组的骨微结构参数如骨皮质厚度、骨小梁密度及连接率明显优于对照组。说明疏松骨骼单次注射小剂量辛伐他汀可显著促进股骨髁部骨小梁改建,改善骨骼微结构,可为强化局部、防治骨质疏松骨折的新选择进一步提供实验基础。     

石斛属民族药用植物的分类及生药学研究

中药石斛早在《神农本草经》中就被列为上品,其应用历史悠久,具有养阴生津、补肾益气、润喉护嗓、活血明目、抗癌防老等功效。本文对国内外石斛属民族药用植物的分类及生药学研究进行了综述。     

膝关节骨性关节炎的关节镜治疗体会

目的我科自2001～2005年4月对59例67膝的骨性关节炎（0A），进行关节镜检查及镜下清理术。方法镜检：膝关节骨性关节炎伴不同程度滑膜炎，滑膜皱壁粘连纤维片，关节软骨不同程度破坏。镜下清除增生滑膜，松解粘连，去除剥脱软骨、修复关节面。结果随访2月～4年，平均1.5年，术后综合评估2月～1年，优良率94％；1～2年，优良率79.2％；2年以上优良率54.8％。结论关节镜对膝关节骨性关节炎诊断能提供了比较全面的资料，并对骨性关节炎早期有良好疗效，具有创伤小、恢复快、并发症少和重复治疗等优点。     

Anatomical study of distribution of valves of the cutaneous veins of adult''s limbs

Since the cutaneous veins of the four limbs have been used as autogenous grafts in the treatment of cardiovascular disorders, knowledge of distribution of the valves is increasingly required depending upon the use. In the gross anatomical study of distribution of valves of the trunci venae, there has been argument about locational relationships between the venous roots and the valves in the vicinity of the roots and the inter-valvular distance. However, there have been only few reports discussing detailed information about valves of the cutaneous veins of the four limbs. The authors observed patterns of distribution of the cutaneous venous valves of the four limbs of cadavers prepared for practice in anatomy. The following parts were excised from each cadaver: the cephalic, basilic, and the great saphenous veins, which originate from the acral venous network and flow into the proximal deep veins, and the venous roots communicating with these veins. An incision was made on each excised vein in the direction of the long axis under observation with a stereoscopic microscope, and the inter-valvular distance and the distance between the valve and the orifice of venous root in the vicinity of the valve were measured. The inter-valvular distance varied with type of the truncus venae, and it varied according to area even in the same truncus venae.     

Pathways of the realization of immunomodulating effects of neurotransmitters

Translated fromByulleten' Eksperimental'noi Biologii i Meditsiny, Vol. 115, N ^o 4, pp. 401–404, April, 1993     

Characterization of sterols of three digenetic trematodes of buffalo

Sterols of three digenetic trematodes were isolated and characterized by infrared and 1H nuclear magnetic resonance spectroscopies, and gas-liquid chromatography and gas chromatography-mass spectrometry. Sterols identified were cholesterol, cholestanol, 24-methylcholesterol, 24-methylcholestanol, 24-ethyl-22-dehydrocholesterol, 24-ethyl-22-dehydrocholestanol, 24-ethylcholesterol and 24-ethylcholestanol.     

Mechanisms of generation of slow components of bioelectric activity in diagnostics of functional state of the gastrointestinal tract

New electrophysiologic devices were used for the diagnostics of the state of excitable structures in the gastrointestinal tract and correction of their motor functions. Bioelectrical and biomechanical activities form the basis of functioning of internal organs. The mechanisms of generation of slow bioelectrical activity that are important for clinical and physiological studies are described. One of these mechanisms is a capacitance parametric transducer converting the energy of contractions into specific electric signals reflecting muscle functions. Another mechanism results from slow oscillations of resting potentials of interrelated excitable cells in large neuromuscular structures of internal organs. The elaborated procedure is efficient for preventing early postoperative paresis of the gastrointestinal tract. Translated fromByulleten' Eksperimental'noi Biologii i Meditsiny, Vol. 128, No. 10, pp. 448–452, October, 1999     

胃小弯侧血管弓的MDCT解剖

目的：研究正常胃小弯侧血管弓及其属支血管的多排螺旋CT表现。方法：回顾性分析51例正常成人的上腹部CT资料,观察胃小弯侧血管弓及其属支血管的显示情况、血管弓形态及其与胃壁的关系。结果：51例均显示胃小弯侧血管弓,血管弓贲门部属支、胃体部属支和幽门部属支分别显示46例、15例和10例;血管弓与胃壁紧邻41例。结论：MDCT检查可良好显示正常胃小弯侧血管弓及其属支血管。     

Assessment of the efficacy of treatment of hemangiomas

Assessment of the aftereffects of cryoexposure and ultrahigh-frequency cryoexposure on hemangioma tissue of various types, cavernous and squamous, showed a higher cryogenic effect in hemangiomatous tissue preexposed to ultrahigh-frequency waves. A quantitative criterion is proposed for assessing the efficacy of the studied methods of exposure. Translated fromByulleten' Eksperimental'noi Biologii i Meditsiny, Vol. 119, N ^o 6, pp. 669–672, June, 1995