海藻甘草反药组合在海藻玉壶汤中加减应用对甲状腺肿大模型大鼠肝脏氧化应激的影响

目的 观察海藻和甘草反药组合在2020年版《中华人民共和国药典》高限2倍剂量条件下于海藻玉壶汤中加减配伍应用对甲状腺肿大模型大鼠肝脏氧化应激的影响。方法 将128只雄性Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、优甲乐组（20 μg·kg^-1）、海藻玉壶汤（HYT）组（12.06 g·kg^-1）、HYT去海藻（HYT-H）组（9.90 g·kg^-1）、HYT去甘草（HYT-G）组（10.26 g·kg^-1）、HYT去海藻甘草（HYT-HG）组（8.10 g·kg^-1）、海藻甘草（HG）组（3.96 g·kg^-1）,空白组给予去离子水灌胃,其余各组灌胃丙硫氧嘧啶（PTU）复制甲状腺肿大病理模型,以优甲乐作为阳性药,其余各中药组给予相应药液灌胃,在末次给药后12 h进行取材。检测各组大鼠血清天冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、碱性磷酸酶（ALP）水平;肝脏组织中超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、丙二醛（MDA）、活性氧（ROS）的水平;苏木素-伊红（HE）染色观察肝脏病理学变化;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测肝组织Kelch样ECH相关蛋白1（Keap1）、核因子E₂相关因子2（Nrf2）、血红素加氧酶-1（HO-1）、p53、胱天蛋白酶-3（Caspase-3）mRNA表达情况;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肝组织氧化应激相关信号通路Nrf2、HO-1蛋白表达情况。结果 与正常组比较,模型组大鼠血清ALT水平、肝脏组织中MDA和ROS含量明显升高（P<0.05,P<0.01）,SOD、GSH-Px活性显著降低（P<0.01）,Keap1 mRNA表达显著升高（P<0.01）,Nrf2、HO-1 mRNA及蛋白表达明显降低（P<0.05,P<0.01）;与模型组比较,HYT组大鼠血清AST、ALT、ALP水平明显降低（P<0.05,P<0.01）,肝脏组织中MDA和ROS含量显著降低（P<0.01）,SOD、GSH-Px活性显著升高（P<0.01）,Keap1、p53、Caspase-3 mRNA表达显著降低（P<0.01）,Nrf2、HO-1 mRNA及蛋白表达明显升高（P<0.05,P<0.01）。结论 在2020年版《中华人民共和国药典》高限2倍剂量条件下,海藻甘草反药组合于HYT中加减配伍应用对甲状腺肿大模型大鼠肝脏氧化应激产生了不同的影响,含有海藻和甘草的HYT对甲状腺肿大模型大鼠肝脏起到了一定的保护作用,效果优于HG组、优甲乐组及各拆方组,其作用机制可能与激活Nrf2/HO-1信号通路以减轻肝脏氧化应激,抑制p53/Caspase-3信号通路以减少肝细胞凋亡有关。     

川芎嗪联合大黄素抑制腹水癌细胞HIF-1α通路相关因子表达的作用研究

目的 从抑制癌细胞缺氧诱导因子（HIF）信号通路中核转录因子-κB（NF-κB），HIF-1α及血管内皮生长因子-C（VEGF-C）的角度探讨川芎嗪和大黄素合用抑制腹水癌细胞新生血管的作用。方法 50只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、川芎嗪组、大黄素组、川芎嗪+大黄素组，各实验组采用原位注射法对正常大鼠肝脏注射大鼠腹水癌细胞（Walker-256细胞），假手术组注射同等体积生理盐水，并分组灌胃给药川芎嗪（10 mg·kg^-1），大黄素（10 mg·kg^-1），川芎嗪+大黄素（川芎嗪10 mg·kg^-1+大黄素10 mg·kg^-1），给药7 d后取实验组肝脏肿瘤接种组织样本制作病理切片，观察肿瘤细胞存留状态和VEGF的表达情况。分别构建Walker-256细胞体外氧糖剥夺模型（缺氧缺糖模型）、单缺氧模型和单缺糖模型。川芎嗪组、大黄素组及川芎嗪+大黄素组均选择不影响Walker-256增殖的3个连续浓度作为考察浓度，造模前给药，模型处理时间4 h，检测各组细胞培养上清液中HIF-1α，VEGF-C，NF-κB的水平。结果 大鼠肝脏在接种Walker-256细胞后，肝脏总质量明显升高（P<0.05），川芎嗪组，大黄素组和川芎嗪+大黄素组肝脏总质量较模型组明显降低（P<0.05），组织病理学检测显示，各给药组肝脏组织中的VEGF表达响应均低于模型组；在细胞水平，川芎嗪组和川芎嗪+大黄素组缺氧缺糖模型的HIF-1α，VEGF-C，NF-κB水平均明显降低（P<0.05），呈一定的剂量依赖性，对单缺氧模型作用有一定降低作用；大黄素1×10^-2，1×10^-3 mol·L^-1组和川芎嗪+大黄素1×10^-2，1×10^-3 mol·L^-1组明显降低缺氧缺糖和单缺糖模型中HIF-1α，NF-κB的水平（P<0.05），而所有给药组对单缺糖模型中VEGF-C作用不显著，差异无统计学意义。结论 川芎嗪和大黄素单用和川芎嗪+大黄素联合使用均可抑制大鼠肝脏在接种Walker-256细胞后重量的异常升高，并抑制肝脏组织的VEGF表达；川芎嗪和大黄素可以抑制NF-κB，HIF-1α的蛋白表达，从而减少了HIF-1α转录激活的转移相关靶基因蛋白VEGF的表达、限制肿瘤细胞新生血管的生成以达到抑制腹水癌细胞侵袭和扩散。其中川芎嗪对缺氧的作用最显著，葡萄糖对川芎嗪的作用有干预，与大黄素合用时葡萄糖的干预作用降低，合用对肿瘤细胞的作用更稳定。     

护肝布祖热颗粒通过抑制凋亡减轻小鼠免疫性肝损伤＊

目的 研究护肝布祖热颗粒治疗刀豆蛋白A（Concanavalin A， ConA）诱导的小鼠急性免疫性肝损伤的作用机制。方法 对小鼠尾静脉注射ConA（20 mg·kg^-1）诱导免疫性肝损伤。小鼠随机分空白组、模型组、1.6 g·kg^-1和3.2 g·kg^-1护肝布祖热颗粒治疗组、泼尼松龙治疗组。灌胃给药10天，第11天注射ConA，4 h后取肝脏组织，苏木精-伊红（H&E）染色观察肝脏病理学变化，采用DCFH-DA探针检测活性氧（ROS）水平。免疫组织化学法测定磷酸化c-Jun氨基末端激酶（p-JNK）的表达。TUNEL（TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling）染色检测肝脏细胞凋亡情况。Western blot测定Bax、Bcl-2的表达。结果 经检测发现，ConA造模后的小鼠肝脏出现大量肝细胞死亡和肝脏结构损伤。与模型组相比，1.6 g·kg^-1和3.2 g·kg^-1护肝布祖热颗粒治疗组ROS表达明显降低；肝脏内p-JNK的表达得到明显下降；肝细胞凋亡得到显著改善。结论 以上结果表明护肝布祖热颗粒减轻小鼠免疫性肝损伤的机制为抑制ROS的产生，从而减少JNK激活引起的细胞凋亡。     

参芪复方对GK大鼠骨骼肌线粒体膜电位及相关促凋亡蛋白的影响研究＊

目的 探讨参芪复方对自发性糖尿病（Goto-Kakizaki，GK）大鼠骨骼肌线粒体膜电位及相关凋亡蛋白的影响。方法 采用高脂饲料喂养GK大鼠，建立糖尿病大鼠动物模型，造模成功后将GK大鼠随机分为模型组、罗格列酮组、参芪复方组，每组10只；10只Wistar大鼠作为空白对照组，普通饲料喂养。罗格列酮组灌胃给予0.67 mg/（kg·d）罗格列酮混悬液，参芪复方组灌胃给予14.33 g生药/（kg·d）参芪复方混悬液，空白对照组、模型组均每日灌胃给予同等体积生理盐水，连续给药8周。采用流式细胞检测线粒体膜电位；RT-qPCR和Western blot检测大鼠腓肠肌凋亡诱导因子（Aapoptosis inducing factor，AIF）、细胞色素C（Cytochrome c，Cyt c）、第二个线粒体衍生的半胱天冬蛋白酶激活因子（Second mitochondrial activator of caspase/direct IAP binding protein with low PI，Smac/DIABLO）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9（Cysteinyl aspartate specific proteinase-9，Caspase-9）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Cysteinyl aspartate specific proteinase-3，Caspase-3）的蛋白和mRNA表达情况。结果 与空白对照组比较，模型组GK大鼠腓肠肌线粒体膜电位降低（P < 0.05），AIF、Cyt c、Smac/DIABLO、Caspase-9、Caspase-3蛋白表达、mRNA表达增加（P < 0.05）；与模型组比较，罗格列酮组和参芪复方组线粒体膜电位均升高（P < 0.05），罗格列酮组AIF、Cyt c、Smac/DIABLO、Caspase-9、Caspase-3蛋白表达、mRNA表达均降低（P < 0.05），参芪复方组AIF、Cyt c、Caspase-9、Caspase-3蛋白表达、mRNA表达降低（P < 0.05），Smac/DIABLO 蛋白表达降低（P < 0.05），Smac/DIABLO mRNA表达具有下降趋势，但差异无统计学意义（P > 0.05）。结论 参芪复方可通过上调线粒体膜电位，抑制促凋亡蛋白AIF、Cyt c、Smac /DIABLO从线粒体内释放出来，进而抑制Caspase-9、Caspase-3表达，减少骨骼肌细胞凋亡，发挥骨骼肌保护作用。     

基于血管生成探讨补肾养精颗粒对早发性卵巢功能不全大鼠模型的影响＊

目的 基于血管生成及凋亡相关因子探讨补肾养精颗粒治疗早发性功能不全的机制。方法 选定动情周期正常的60只SD雌性大鼠，随机分为空白组、模型组、补肾养精颗粒组（低剂量组（1.75 g?kg^-1）、中剂量组（3.50 g?kg^-1）、高剂量组（7.00 g?kg^-1）、补佳乐组。通过阴道涂片观察动情周期的变化；ELISA检测大鼠血清E₂、AMH、NF-κB、MMP-2、Caspase-3、Caspase-9浓度；Western blot检测卵巢组织中MMP-2、MMP-9、VEGF、Caspase-3的表达；HE染色观察大鼠卵泡发育及血管分布情况。结果 ①模型组大鼠的动情周期明显延长，予补肾养精颗粒干预后明显缩短；②模型组的血清E₂、AMH、NF-κB、MMP-2浓度较低，予补肾养精颗粒干预后其表达升高（P < 0.05）；③模型组的Caspase-3、Caspase-9表达偏高，予补肾养精颗粒干预后其表达降低（P < 0.05）；④在卵巢组织MMP-2、MMP-9、VEGF的蛋白含量方面，模型组均低于空白组，予补肾养精颗粒干预后其表达升高；⑤在HE方面，模型组的卵泡数目及血管较少，予补肾养精颗粒干预后可改善。结论 补肾养精颗粒可通过升高血管生成相关因子NF-κB、MMP-2、MMP-9、VEGF的表达，降低凋亡相关因子Caspase-3、Caspase-9的表达，进而改善血清E2、AMH水平，促进卵巢血管的形成及卵泡的发育。     

大承气汤对急性肝衰竭大鼠FADD介导的肝细胞凋亡作用研究

目的: 研究大承气汤对急性肝衰竭大鼠Fas相关死亡结构域蛋白(FADD)介导肝细胞凋亡的干预作用。方法: 40只大鼠随机分为4组,分为正常对照组(A组),急性肝衰竭造模组(B组),大承气汤低剂量治疗组(C组),大承气汤高剂量治疗组(D组),每组各10只。C,D组大鼠于造模前2 d分别灌胃不同剂量大承气汤2 mL,A,B组予同等剂量生理盐水灌胃,继而B,C,D组大鼠均采用皮下注射硫代乙酰胺完成急性肝衰竭动物模型,造模完成后继续予药物灌胃3 d,处死所有大鼠,进行肿瘤坏死因子测定,进行肝脏病理学,FADD,肿瘤坏死因子受体1(TNFR1),Caspase-8免疫组化及肝脏组织细胞凋亡检测。结果: 硫代乙酰胺可引起急性肝衰竭并有广泛的肝细胞凋亡,同时可见FADD,TNFR1,Caspase-8蛋白在肝细胞中强表达;与模型组比较,大承气汤各组肝组织衰竭减轻,肝细胞凋亡率降低,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量下降,FADD,TNFR1,Caspase-8在肝细胞中的表达降低。高剂量组治疗效果更好。结论: 大承气汤可防治肝细胞凋亡,其作用机制可能与抑制FADD介导的肝细胞凋亡有关。     

川楝子配伍对一贯煎抑制荷H22小鼠肝癌细胞增殖的影响＊

目的 对比研究一贯煎，一贯煎去川楝子，川楝子对荷H22小鼠肝癌细胞增殖及凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2（B-celllymphoma/Leukemia-2，Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、细胞色素C（Cyt-c）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）蛋白表达的影响。方法 小鼠随机分为模型组，环磷酰胺（cyclophosphamide， CTX）组（50 mg·kg^-1），一贯煎组（23 g·kg^-1），一贯煎去川楝子组（21 g·kg^-1），川楝子组（0.1 g·kg^-1）。雄性KM小鼠每组10只右侧腋下皮下注射H22细胞构建肝癌荷瘤模型，CTX组造模后腹腔注射给药，隔日一次，共7次，余组造模前后14天均灌胃给药，统计各组瘤重。原位末端标记法（TUNEL）检测肿瘤细胞凋亡；蛋白免疫印记法（Western blot）检测Bax、Bcl-2、Cyt-c、Caspase-3蛋白表达。结果 与模型组比较，CTX组，一贯煎组，一贯煎去川楝子组，川楝子组瘤重均降低（P<0.01），肝癌细胞凋亡率均升高（P<0.01），Bax、Caspase-3和Cyt-c蛋白表达均升高（P<0.05或P<0.01），CTX组、一贯煎组Bcl-2蛋白表达降低（P<0.01）；与一贯煎组比较，一贯煎去川楝子组、川楝子组瘤重、Bcl-2蛋白表达升高（P<0.05），肝癌细胞凋亡率和Bax、Caspase-3蛋白表达降低（P<0.05或P<0.01）；与一贯煎去川楝子组比较，川楝子组肝癌细胞凋亡率，Cyt-c、Caspase-3蛋白表达均升高（P<0.01），Bcl-2蛋白表达降低（P<0.01）。结论 一贯煎中川楝子配伍能明显增强该方抑制肝癌细胞增殖的功效，其机理可能与升高Bax、Caspase-3和Cyt-c蛋白表达，降低Bcl-2蛋白表达，进而促进肝癌细胞凋亡有关。     

桔梗皂苷D通过Bax/Bcl-2/Caspase-3信号通路抑制细胞凋亡保护急性肺损伤的机制研究＊

目的 探讨桔梗皂苷D对脂多糖诱导的大鼠急性肺损伤的保护机制。方法 35只雄性SPF级SD大鼠，随机分为假手术组、桔梗皂苷D对照组、模型组、桔梗皂苷D给药组和地塞米松组，每组7只。除假手术组和桔梗皂苷D对照组外，其余各组采用脂多糖诱导大鼠急性肺损伤模型。造模24 h后，牺牲大鼠并称体重及两肺重量，计算肺指数；脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记（TUNEL）法检测肺组织细胞凋亡并计算凋亡指数（Apoptosis Index，AI）；透射电镜下观察大鼠肺组织超微结构的改变；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肺组织凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2），Bcl-2相关X蛋白（Bax），半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3），多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1（PARP1）蛋白及活化的天冬氨酸蛋白水解酶-3（Cleaved Caspase-3），Cleaved PARP1的表达水平。结果 与假手术组比较，模型组大鼠肺指数显著升高（P < 0.01），肺组织细胞凋亡指数（AI）显著升高（P < 0.01），肺组织Bcl-2及Bcl-2/Bax蛋白表达显著下调（P < 0.01），Bax，Cleaved Caspase-3/Caspase-3，Cleaved PARP1/PARP1蛋白表达均显著升高（P < 0.01）；透射电镜下可见到凋亡小体，影响并改变了肺组织细胞超微结构；与模型组比较，桔梗皂苷D给药组及地塞米松组肺指数明显降低（P < 0.01），肺组织AI明显降低（P < 0.01），肺组织中Bcl-2及Bcl-2/Bax蛋白表达显著上调（P < 0.01），Bax，Cleaved Caspase-3/Caspase-3，Cleaved PARP1/PARP1蛋白表达均显著降低（P < 0.01）；透射电镜下，桔梗皂苷D给药组和地塞米松组肺组织细胞超微结构状态较好。结论 桔梗皂苷D对脂多糖诱导的大鼠急性肺损伤具有保护作用，其作用机制与抑制Bax/Bcl-2/Caspase-3信号通路，减轻肺组织细胞凋亡密切相关。     

牛磺酸通过调控miR-126对高糖诱导的大鼠内皮细胞凋亡的影响及其作用机制＊

目的 探讨牛磺酸通过调控miR-126对高糖诱导的大鼠内皮细胞凋亡的影响及其作用机制。方法 体外培养的大鼠胸主动脉内皮细胞，分为NC组（葡萄糖浓度5.5 mmol·L^-1）、HG组（葡萄糖浓度为30.0 mmol·L^-1）、HG+低浓度牛磺酸组（葡萄糖浓度为30.0 mmol·L^-1，牛磺酸浓度为5.0 μmol·L^-1）、HG+中浓度牛磺酸组（葡萄糖浓度为30.0 mmol·L^-1，牛磺酸浓度为10.0 μmol·L^-1）和HG+高浓度牛磺酸组（葡萄糖浓度为30.0 mmol·L^-1，牛磺酸浓度为20.0 μmol·L^-1）。将模拟物（miR-126 mimics）及其阴性对照（miR-NC）、miR-126抑制物（anti- miR-126）及其阴性对照（anti-miR-NC）分别转染至大鼠胸主动脉内皮细胞。细胞计数试剂盒（CCK-8）检测细胞活力；流式细胞术检测细胞凋亡。实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测miR-126表达水平。蛋白质印迹（Western blot）检测细胞裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Cleaved-caspase3）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3前体（Pro-caspase3）蛋白表达。结果 与NC组比较，HG组大鼠胸主动脉内皮细胞活性显著降低（P<0.05）；与HG组比较，HG+低浓度牛磺酸组、HG+中浓度牛磺酸组、HG+高浓度牛磺酸组大鼠胸主动脉内皮细胞活性显著升高（P<0.05）。与NC组比较，HG组大鼠胸主动脉内皮细胞凋亡率、Cleaved-caspase3蛋白表达显著上升，Pro-caspase3蛋白表达显著降低（P<0.05）；与HG组比较，HG+低浓度牛磺酸组、HG+中浓度牛磺酸组、HG+高浓度牛磺酸组大鼠胸主动脉内皮细胞凋亡率、Cleaved-caspase3蛋白表达显著降低，Pro-caspase3蛋白表达显著升高（P<0.05）。与NC组比较，HG组大鼠胸主动脉内皮细胞中miR-126表达显著降低（P<0.05）；与HG组比较，HG+低浓度牛磺酸组、HG+中浓度牛磺酸组、HG+高浓度牛磺酸组大鼠胸主动脉内皮细胞中miR-126表达显著升高（P<0.05）。与HG+miR-NC组比较，HG+miR-126组大鼠胸主动脉内皮细胞中miR-126表达显著升高，细胞活性、Pro-caspase3蛋白表达显著升高（P<0.05）；凋亡率、Cleaved-caspase3蛋白表达显著降低（P<0.05）。与HG+牛磺酸组和HG+牛磺酸+anti-miR-NC组比较，HG+牛磺酸+anti-miR-126组大鼠胸主动脉内皮细胞中miR-126表达显著降低，细胞活性、Pro-caspase3蛋白表达显著降低，凋亡率、Cleaved-caspase3蛋白表达显著升高（P<0.05）。结论 牛磺酸通过上调miR-126促进高糖诱导的大鼠内皮细胞凋亡，为治疗糖尿病提供了理论依据。     

抗纤益心方干预线粒体通透性转换孔抑制心肌细胞凋亡的机制

目的 探讨抗纤益心方通过调控线粒体通透性转换孔（mPTP）对心肌细胞凋亡的影响及相关作用机制。方法 H9c2心肌细胞常规培养，饥饿8 h后分为正常组，模型组，抗纤益心方（0.25 g·L^-1）组，环孢素A（10 μmol·L^-1）组，药物作用24 h用于后续实验。利用去甲肾上腺素（NE）诱导H9c2心肌细胞肥大模型，通过实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测NE的最佳造模浓度，流式细胞仪检测mPTP的开放程度，同时检测mPTP开放后引起的凋亡相关因子Cyp-D，Cyt-C，Caspase-3 mRNA和蛋白的表达水平，和线粒体膜电位的水平。结果 NE浓度在200 μmol·L^-1时心房钠尿肽（ANP），脑钠肽（BNP） mRNA的表达水平最高，此浓度作为诱导H9c2心机细胞肥大模型的最佳浓度，与正常组比较，模型组mPTP过度开放，线粒体内相对荧光强度减弱和线粒体膜电位降低（P<0.05，P<0.01）；凋亡相关因子Cyp-D，Cyt-C，Caspase-3 mRNA和蛋白表达升高（P<0.05）。与模型组比较，抗纤益心方组和环孢素A组mPTP开放受到抑制，线粒体相对荧光强度和线粒体膜电位升高（P<0.05，P<0.01）；Cyp-D，Cy-tC，Caspase-3 mRNA和蛋白表达降低（P<0.05）。结论 抗纤益心方能够抑制心肌细胞凋亡，其作用机制可能是通过调控mPTP的开放，抑制相关凋亡因子Cyp-D，Cyt-C，Caspase-3的表达有关。     

大黄素对LPS诱导的心肌细胞炎症反应和细胞凋亡的影响及机制

目的探讨大黄素对脂多糖(LPS)诱导的心肌细胞炎症反应和细胞凋亡的影响及分子机制。方法培养心肌细胞H9c2,以1μg/mL的LPS诱导心肌细胞建立炎症反应模型,实验分为正常对照组、LPS诱导组、LPS+低剂量大黄素组(5μmol/L)、LPS+中剂量大黄素组(10μmol/L)和LPS+高剂量大黄素组(20μmol/L)。采用噻唑蓝比色法(MTT)检测细胞相对存活率;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测炎症因子肿瘤坏死因子α(TNF?α)、白细胞介素1β(IL?1β)I和白细胞介素6(IL?6)水平;流式细胞术检测细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中核因子?κB(NF?κB)P65、NF?κB抑制蛋白(IκB?α)表达。在LPS+低剂量大黄素组中添加NF?κB激动剂佛波酯(PMA),观察其对心肌细胞炎症反应和细胞凋亡的影响。结果与正常对照组比较,LPS诱导组心肌细胞相对存活率降低,TNF?α、IL?1β和IL?6水平增多,凋亡率升高,NF?κB P65表达上调,IκB?α表达下调,差异均有统计学意义(P<0.05);低、中、高剂量大黄素均可逆转LPS诱导心肌细胞以上指标,且三剂量组间差异有统计学意义(P<0.05)。而PMA能够逆转大黄素的作用。结论大黄素能够抑制LPS诱导的心肌细胞炎症反应和细胞凋亡,该作用机制与大黄素抑制NF?κB信号通路的激活有关。     

和解利湿方对乙醇性慢性胰腺炎腺泡细胞凋亡的影响

目的: 探讨和解利湿方通过抑制胰腺腺泡细胞凋亡对大鼠乙醇性慢性胰腺炎(ACP)的治疗作用。 方法: 将受试动物30只,随机分为2组,正常组6只,造模组24只,给予等热量的Lieber-De-Carli 流质饮食,每日消毒后定量喂食14周;正常对照组6只,饲普通饮食14周;第8周末始模型组大鼠尾静脉注射给予脂多糖(LPS)剂量分别为1.5,1.5,2.0,2.5,3 mg·kg^-1,1周1次,共5次,对照组给予等剂量的生理盐水;10周末造模组重分为模型组、和解利湿方高、中、低剂量(21.7,10.85,5.425 g·kg^-1)治疗组,每组6只,开始 ig给药,每天1次,连续给药4周。测定其组织病理变化、细胞凋亡及其相关蛋白的表达。体外观察含药血清对胰腺腺泡AR42J细胞生长和凋亡的影响。 结果: 与模型组比较,正常组无明显炎症症状,而和解利湿方组能减少炎症细胞浸润与胰腺腺泡细胞脱落,差异有统计学意义(P<0.05);和解利湿方高剂量组减少细胞凋亡,有显著的统计学差异(P<0.05),并能抑制半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3和caspase-9活性,增加B细胞淋巴细胞/白血病2基因(Bcl-2),降低Bcl-2相关蛋白基因(Bax)表达,其中和解利湿方高剂量组中Bcl-2/Bax是模型组的1.5倍。体外试验与含30%正常大鼠血清组比较,含30%和解利湿方药物血清明显促进胰腺腺泡细胞的生长(P<0.05);与乙醛干预并加正常大鼠血清组比较,和解利湿方含药血清组细胞凋亡率减少了32.66%。 结论: 高剂量的和解利湿方对ACP有一定的治疗作用,其机制可能与减少腺泡细胞凋亡、调节胰腺细胞caspase-3,caspase-9的活性及Bcl-2和Bax蛋白的表达有关。     

大黄素对裸鼠体内K562细胞移植瘤的抑制作用及其与调控Caspase-3和Caspase-9表达的关系

目的探讨大黄素对K562细胞裸鼠移植瘤的生长抑制作用及其与Caspase-3和Caspase-9表达变化的关系。方法建立裸鼠K562细胞皮下移植瘤模型,随机分为大黄素低、中、高剂量(25、50、100mg/kg)3个实验组,以及模型组和羟基脲(120mg/kg)阳性对照组,每组5只,ip连续给药12d,测量各组裸鼠肿瘤体积,称取瘤体质量,计算抑瘤率。采用HE染色光镜和透射电镜观察肿瘤细胞的凋亡情况,应用RT-PCR检测肿瘤组织中caspase-3和caspase-9mRNA表达水平。Western blotting法检测肿瘤组织中proCaspase-3和proCaspase-9蛋白的表达。结果大黄素低、中、高剂量组肿瘤相对体积(RTV)分别为5.23±0.24、4.38±0.17、3.57±0.31;与模型组(10.45±0.47)相比,大黄素处理组肿瘤体积明显缩小,具有统计学意义(P0.01)。光镜和电镜结果表明大黄素能够诱导K562细胞发生明显的凋亡。RT-PCR结果表明不同剂量的大黄素能够引起caspase-3和caspase-9mRNA的表达上调且有剂量依赖性。与模型组相比,大黄素处理组的proCaspase-3和proCaspase-9蛋白均出现明显的下调。结论大黄素能够明显抑制人K562细胞裸鼠移植瘤的生长,其机制可能与激活Caspase-3和Caspase-9信号转导通路有关。     

当归多糖对脑缺血再灌注损伤大鼠海马神经元的保护作用

目的探讨当归多糖(APS)对脑缺血再灌注损伤大鼠海马神经元的保护作用。方法将50只大鼠随机分为假手术组、模型组和APS高、中、低剂量(200、100、50 mg/kg)组,APS给药组于造模前3 d连续ig给予APS,假手术组和模型组ig等量生理盐水;采用线栓法制备大鼠脑缺血再灌注损伤(I/R)模型,缺血2 h、再灌注24 h后,跳台法检测大鼠学习记忆能力,TUNEL法检测大鼠海马神经元凋亡情况,ELISA法检测海马组织中cleaved caspase-3、bcl-2及bax的表达。结果与假手术组相比,模型组大鼠跳台潜伏期明显缩短,错误次数增加,神经元凋亡率增加,cleaved caspase-3、bcl-2及bax的表达显著升高。与模型组相比,APS各剂量组大鼠跳台潜伏期明显延长,错误次数减少,并降低了神经元凋亡率,减少cleaved caspase-3及bax的表达,且增加bcl-2表达。结论 APS对I/R大鼠具有明显的神经保护作用,其机制可能与抑制神经元凋亡密切相关。     

大黄素对大鼠肝纤维化形成的影响

目的；研究大黄素对肝纤维化的影响。方法：采用４０％的四氯化碳（ＣＣｌ４）给予大鼠皮下注射诱导肝纤维化，并以小，中和大剂量大黄素（２０，４０和８０ｍｇ／ｋｇ体重）干预，测定血清透明质酸，层粘连蛋白及肝组织羟脯氨酸，并通过光镜和电镜观察肝组织病理变化。结果：大黄素组较模型组；（１）血清透明质酸及层粘连蛋白显著降低；（２）肝组织胶原蛋白含量明显减少；（３）肝组织纤维化程度明显改善；（４）肝细胞损伤减轻。     

大黄素对LoVo细胞水通道蛋白2表达的调节效应

目的 探讨大黄素对体外培养LoVo细胞水通道蛋白2(aquaporin 2,AQP2)表达的调节效应.方法 体外培养LoVo细胞并予不同质量浓度大黄素含药培养液24 h处理及大黄素含药培养液(20 mg/L)不同时间处理,采用免疫细胞化学方法观察LoVo细胞AQP2蛋白表达位置并初步观察AQP2蛋白表达的变化趋势,采用Western blotting及半定量RT-PCR检测AQP2蛋白及mRNA的表达.结果 AQP2表达于LoVo细胞的细胞膜,且与大黄素用药浓度及用药时间存在着相关性.进一步的Western blotting证实,不同质量浓度大黄素含药培养液均可抑制AQP2蛋白的表达,药物质量浓度愈大,AQP2蛋白的表达愈低,其中大黄素20mg/L组及40mg/L组AQP2蛋白表达显著性降低;大黄素作用3、6 h组,AQP2蛋白表达上升,但与对照组比较,无显著差异;作用12、24、48 h组,AQP2蛋白表达呈进行性下降趋势.半定量RT-PCR结果显示,随着大黄素质量浓度的增加,AQP2 mRNA表达呈进行性下降趋势;在时间-效应方面,随着用药时间的延长,AQP2 mRNA表达呈进行性下降趋势.结论 大黄素可抑制LoVo细胞AQP2基因转录与翻译,这提示大黄素对AQP2表达的调节效应可能与大黄的泻下作用有关.     

人参皂苷Rg_3对大鼠颈动脉损伤后内膜增生及平滑肌细胞凋亡的影响

目的研究人参皂苷Rg_3对大鼠颈动脉损伤后新生内膜增生及平滑肌细胞凋亡的影响。方法 40只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和人参皂苷Rg_3低、高剂量(5、10 mg/kg)组,各10只,用球囊制备大鼠颈动脉损伤模型,术后次日ig给药,假手术组和模型组给予等量的生理盐水;14 d后取损伤的颈总动脉血管,用苏木精-伊红(HE)染色观察新生内膜组织形态学改变;采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的三磷酸脱氧尿嘧啶缺口末端标记(TUNEL)法检测平滑肌细胞凋亡;Western blotting和qRT-PCR法检测损伤血管凋亡基因Fas、抗凋亡基因Bcl-2的表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠血管新生内膜明显增厚,内膜与中膜面积比明显增加,新生内膜区平滑肌细胞凋亡率显著增加,Fas、Bcl-2基因表达明显增加;与模型组比较,人参皂苷Rg_3低、高剂量组血管内膜增生明显减轻,内膜与中膜面积比明显下降,新生内膜区平滑肌细胞凋亡率明显增加,损伤血管Fas基因表达水平明显升高,Bcl-2基因表达水平明显降低。结论人参皂苷Rg_3可能通过促进平滑肌细胞的凋亡,从而减轻球囊损伤后血管内膜的增生。     

大黄素联合吉西他滨抑制体内外胰腺癌生长及其机制研究

目的探讨大黄素联合吉西他滨对体内外胰腺癌生长的影响及其机制。方法采用吉西他滨(20μmol/L)、大黄素(40μmol/L)单独及联合作用胰腺癌细胞株SW1990后,CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Westernblot检测Bax及Bcl-2蛋白表达。建立人胰腺癌裸鼠皮下移植瘤模型,分别给予大黄素、吉西他滨单独及联合用药,监测移植瘤体积变化;免疫组化法检测移植瘤组织中Ki-67、Bax及Bcl-2表达。结果与吉西他滨组及大黄素组比较,联合用药组显著降低SW1990细胞存活率,提高细胞凋亡率(P<0.05);与对照组比较,大黄素组及联合用药组明显上调SW1990细胞中Bax蛋白表达水平,抑制Bcl-2蛋白表达(P<0.05)。与对照组比较,大黄素组及联合用药组可显著抑制裸鼠胰腺癌皮下移植瘤生长,提高Bax在肿瘤组织中阳性表达,明显降低Ki-67和Bcl-2的阳性表达(P<0.05),以联合用药组作用最佳(P<0.05)。结论大黄素可能通过上调Bax表达和下调Bcl-2表达增强吉西他滨对体内外胰腺癌的抑制作用。     

大黄素对兔主动脉平滑肌细胞CatK,CatDmRNA表达的影响

目的:探讨大黄素对兔主动脉平滑肌细胞(CCC-SMC-1)组织中蛋白酶K(Cat K),组织蛋白酶D(Cat D)mRNA表达的影响。方法:以2×104/m L密度接种细胞,实验分5个实验组,大黄素0.01,0.05,0.1,0.15,0.2,0.25 mmol·L-1组,对照组为培养基空白组,培养24 h,每组设5个复孔。MTT法观察大黄素对兔主动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用,PCR法检测大黄素对兔主动脉平滑肌细胞Cat K,Cat D mRNA的表达。结果:MTT法显示大黄素在0.05~0.25 mmol·L-1浓度对CCCSMC-1细胞增殖有抑制作用,作用24 h后的半数抑制浓度(IC50)为0.10 mmol·L-1,且IC50随作用时间的延长显著前移。PCR法显示,不同浓度的大黄素作用于兔主动脉平滑肌细胞24 h后,与正常组细胞相比,Cat K,Cat D mRNA表达上调(P0.05)。结论:大黄素能抑制CCC-SMC-1细胞的增殖,其机制可能与上调Cat K,Cat D mRNA表达有关。