基于病证结合探讨糖尿病肾病阴虚证大鼠肾损害与自噬的关系＊

目的 观察阴虚证对糖尿病肾病（Diabetic kidney disease，DKD）大鼠肾损害以及自噬变化的影响，探讨DKD阴虚证大鼠肾脏病理损害与自噬之间的关系。方法 通过腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病模型，随机分为正常组、糖尿病组。12周后将糖尿病组中尿蛋白阳性的大鼠随机均分为DKD组、阴虚组，阴虚组大鼠通过左甲状腺素钠片灌胃法制备DKD阴虚证模型。每日观察大鼠一般情况。第16周处死取材，观察大鼠血肌酐（Serum creatinine，Scr）、血尿素氮（Blood urea nitrogen，BUN）、24 h尿蛋白定量（24-hour urinary protein，24 h Pro）、肾脏病理改变；ELISA法检测阴虚证指标-血清环磷酸腺苷（Cyclic adenosine monophosphate，cAMP）、环磷酸鸟苷（Cyclic guanosinc monophosphate，cGMP）及血清游离甲状腺素（Free Thyroxine 4，fT4）、血清皮质醇（Cortisol，Cort）、雌二醇（Estradiol，E₂）；透射电镜观察大鼠肾脏超微结构及自噬变化；免疫组化、Western Blot、RT-PCR法检测肾组织纤维化指标纤连蛋白（Fibronectin，FN）、平滑肌肌动蛋白（Alpha smooth muscle actin，α-SMA）、自噬相关Beclin-1、LC3-II、P62的蛋白及其mRNA表达。结果 与正常组比较，DKD组出现精神萎靡、多饮多食多尿、毛发粗糙等症状，阴虚客观指标血清fT4、Cort、E₂、cAMP、cAMP/cGMP比值升高、cGMP下降（P < 0.01或P < 0.05），24 h Pro、Scr、BUN升高（P < 0.01），光镜及电镜下肾脏病理损伤加重，肾组织FN、α-SMA、P62的蛋白及mRNA表达均增高（P < 0.05或P < 0.01），LC3-II、Beclin-1的蛋白及mRNA表达均下降（P < 0.05或P < 0.01）；与DKD组相比，阴虚组大鼠死亡率增加，出现急躁易怒、饮食饮水量增加、毛发粗糙无光泽、体质量下降等现象，血清fT4、Cort、E₂、cAMP、cAMP/cGMP比值（P < 0.05或P < 0.01），24 h Pro、Scr、BUN进一步升高（P < 0.01或P < 0.05），cGMP则下降（P < 0.01），同时肾脏病理损伤加重，肾组织FN、α-SMA、P62的蛋白及mRNA表达进一步增高（P < 0.01或P < 0.05），LC3-II、Beclin-1的蛋白及mRNA表达则下降（P < 0.01或P < 0.05）。结论 在病证结合模型下，阴虚证能够加重糖尿病肾病大鼠肾脏病理损伤，可能与抑制肾脏组织的自噬功能有关。     

足细胞自噬与糖尿病肾病的关系及中医药调控研究进展

糖尿病肾病(DN)是糖尿病(DM)严重的微血管并发症之一,是世界范围内终末期肾脏病(ESRD)的主要病因.通过降糖、降压、阻断肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)等方法虽可一定程度的降低血糖、血压和尿蛋白,但有时仍难以阻止DN的进展.中医药对DN的疗效肯定,但其作用机制尚未完全阐明.自噬(autophagy)是哺乳...     

电针对糖尿病肾病大鼠肾功能及肾脏自噬表达的影响

目的:观察电针对糖尿病肾病(DN)大鼠肾功能及自噬表达的影响,探讨电针治疗DN的可能机制.方法:将Wistar大鼠随机分为正常组、模型组和电针组,每组8只.采用高脂饮食+链脲佐菌素腹腔注射(35 mg/kg)法制备DN大鼠模型.电针组电针双侧"肾俞""足三里",每次20 min,每周5次,连续6周.分别检测治疗前后24...     

中药治疗糖尿病肾病足细胞自噬机制及作用研究进展

糖尿病肾病(DKD)主要特征为持续蛋白尿及肾小球滤过率下降。足细胞是肾小球滤过屏障的最终防线,其损害和蛋白尿关系密切。自噬是通过降解错误折叠的蛋白质和受损的细胞器来维持细胞内稳态,高糖可导致足细胞自噬异常,使肾小球滤过屏障结构发生变化,从而产生蛋白尿。中药能通过调节足细胞自噬来减轻糖尿病肾损伤。研究显示,中药对DKD足细胞自噬的调节呈现出多种方式,中药单体可直接靶向足细胞或动物实验模型自噬靶点和信号通路调节自噬发挥保护肾脏作用;中药复方多属于益气活血祛瘀、补益脾肾类方剂,其调节DKD足细胞自噬的作用与"气虚浊瘀、脾肾亏虚"存在DKD自噬紊乱的假说相吻合。从中药对DKD模型足细胞自噬的综合调节作用来看,其治疗DKD可能是多靶点、多通路和多系统共同作用的结果。     

紫苏叶提取物通过AMPK/mTOR自噬信号通路改善糖尿病肾病大鼠肾脏损伤研究

目的：研究紫苏叶提取物在STZ诱导的大鼠糖尿病肾病(DN)中的治疗作用及相关分子机制。方法：取60只SD大鼠以随机数字表法分为空白对照组、模型组、紫苏叶提取物低剂量组(给予紫苏叶提取物200 mg/kg)、紫苏叶提取物高剂量组(给予紫苏叶提取物400 mg/kg)、厄贝沙坦组(给予厄贝沙坦13.5 mg/kg)共5组,每组12只,各给药组大鼠按照其分组进行给药干预7周,1次/d,空白对照组和模型组给予等量生理盐水。实验结束后收集大鼠血、尿及肾脏样本进行分析检测。结果：与模型组相比,紫苏叶提取物干预的糖尿病肾病模型大鼠体质量、24 h尿量、随机血糖、肾脏指数、24 h尿蛋白及肾小球局部纤维化病变得到明显改善(P<0.01),自噬信号通路相关蛋白Sesn2、LC3表达水平明显增加,p-mTOR/mTOR比值增加。结论：紫苏叶提取物能够改善DN模型大鼠肾小球局部损伤,其作用机制可能与Sesn2/AMPK/mTOR自噬信号通路有关。     

基于网络药理学及Akt1/mTOR自噬通路探讨黄芪减少糖尿病肾病蛋白尿的作用机制＊

目的 通过网络药理分析及相关的动物实验探讨黄芪减少糖尿病肾病蛋白尿（Diabetic nephropathy proteinuria，DNP）的作用机制。方法 利用TCMSP数据平台筛选出黄芪中的有效成分和相关靶标，使用GeneCards、OMIM网站数据库在线搜索出DNP的疾病相关靶标，取疾病和药物相同靶标交集，再利用Cytoscape 3.8.2构建药物-效应成分-疾病-靶标相互作用网络，进行拓扑学分析；从Uniprot数据库中获取靶点蛋白的基因名称，利用STRING在线数据库进行靶点蛋白与蛋白互作（Protein-protein interaction，PPI）网络分析；再进行GO功能分析和KEGG通路功能富集分析，推断黄芪减少DNP的机制是否和Akt1/mTOR自噬通路相关，再利用黄芪干预糖尿病肾病动物模型探讨其作用机制是否和预测的一致。结果 黄芪中20种核心化合物有作用靶点174个，DNP相关靶标有1862个，交集靶标有98个，关键效应分子有10个。PPI图显示黄芪发挥效应的目标蛋白主要是AKT1、VEGFA、IL6、CASP3、MAPK1、JUN等。GO分析黄芪药效主要与细胞因子受体结合及其活性、核受体活性、转录因子活性等有关，KEGG分析表明黄芪药效基础主要作用与糖尿病并发症中AGE-RAGE、MAPK、PI3K-Akt等信号通路有关。动物实验显示黄芪能明显改善糖尿病肾病的大鼠的肾功能，尤其改善蛋白尿指标，通过上调足细胞Nephrin蛋白保护了肾小球滤过屏障，减少了蛋白尿的产生（P < 0.05），同时下调了Akt1、总mTOR及其mRNA表达（P < 0.05），从而增强了肾足细胞的自噬活性，也起到减少DNP的作用。结论 网络药理分析显示黄芪可能通过多靶点效应发挥减少DNP作用，潜在的分子机制和Akt1/mTOR自噬通路有关，再经过实验研究说明Akt1/mTOR自噬通路是黄芪减少糖尿病肾病蛋白尿作用机制之一。     

糖肾平对糖尿病肾病大鼠足细胞凋亡及PI3K/AKT信号通路的影响＊

目的 探讨糖肾平对采用腹腔注射链脲佐菌素（STZ）诱导的糖尿病肾病（DN）大鼠足细胞损害的抑制和对PI3K/AKT信号转导通路的调控作用。方法 雄性Wistar大鼠74只，从中随机选取10只作为空白对照组，剩余大鼠进行一次性腹腔注射STZ造模，造模成功并且存活的大鼠随机分为：模型组、厄贝沙坦组、糖肾平小剂量、糖肾平大剂量组。灌胃给药剂量为：厄贝沙坦组17.5 mg·kg^-1，1 mL/100 g；糖肾平小剂量组0.525 g·kg^-1，1 mL/100 g；糖肾平大剂量组2.1 g·kg^-1，1 mL/100 g；每4周称取大鼠体质量并测定24 h尿蛋白定量，第14周股动脉取血处死大鼠，称取肾脏质量；TUNEL染色观察肾组织足细胞凋亡；免疫组化测定肾组织PI3K、AKT、Bad蛋白表达情况；RT-PCR检测大鼠肾组织PI3K、AKT、Bad、CD2AP及nephrin mRNA表达情况。结果 与正常组比较，模型组大鼠多饮、多食、多尿、形体消瘦、皮毛干枯并且动作迟缓；大鼠肾组织中足细胞数目明显减少，PI3K及AKT表达明显降低，Bad表达明显升高（P ＜ 0.01）；经过治疗后各组大鼠一般情况均有明显好转，足细胞数目较模型组明显增多；与模型组比较，厄贝沙坦组PI3K及AKT表达明显升高，Bad阳性反应物明显较少（P ＜ 0.01）；糖肾平各治疗组PI3K及AKT表达升高，而Bad阳性反应物呈剂量依赖性得明显较少，有统计学显著差异（P ＜ 0.01）。结论 糖肾平能抵抗糖尿病肾病大鼠足细胞凋亡，其作用机制与PI3K-AKT信号通路有关。     

金匮肾气汤对糖尿病肾病大鼠HMGB1和自噬信号Beclin1表达的影响

目的:探讨金匮肾气汤(JKSQ)对糖尿病肾病(DN)大鼠高迁移率族蛋白B(HMGB1)和自噬信号Bec-lin1表达的影响.方法:60只大鼠随机分为对照组、模型组和JKSQ高、中、低剂量组(3.6g/kg/d、1.8g/kg/d、0.9g/kg/d),各12只,均采用高脂饲料联合腹腔注射40mg/kg链脲佐菌素复制DN...     

祛痰通络汤对早期糖尿病肾病大鼠足细胞nephrin蛋白表达的影响

目的 观察祛痰通络汤对糖尿病肾病大鼠足细胞裂孔隔膜蛋白分子(nephrin)表达的影响,探讨其防治DN的作用机制.方法 制作大鼠糖尿病肾病模型,分为正常对照组、模型组、贝那普利治疗组及祛痰通络汤低、中、高剂量组,干预8周.观察各组24h尿蛋白定量、肌酐、肾脏病理学变化;免疫组化观察肾组织nephrin蛋白表达的变化.结果 经过祛痰通络汤治疗后,24h尿蛋白定量下降;病理改变减轻;nephrin蛋白表达增加.结论 祛痰通络汤对DN大鼠具有一定的肾脏保护作用,其机制可能与恢复肾组织足细胞nephrin蛋白表达有关.     

消渴汤对糖尿病肾病大鼠肾小球足细胞Nephrin和Podocin表达的影响

目的:探究消渴汤对糖尿病肾病大鼠的肾小球足细胞Nephrin和Podocin表达的影响。方法:选取4周龄健康雄性Wistar大鼠45只,采用随机数字表法分为:正常组、对照组和实验组,每组各15只;对照组和实验组大鼠采用一次性腹腔注射链脲霉素(STZ)55mg/kg方法制作糖尿病肾病(DN)模型;各组大鼠分别于完成造模后第0、2、4周采用自动生化分析仪检测大鼠血肌酐、尿素氮、血糖和24 h尿蛋白含量水平;采用Western blotting检测各组大鼠肾皮质中Nephrin和Podocin蛋白表达情况;使用HE染色观察大鼠肾小球结构。结果:实验前,实验组及对照组血糖、24 h尿蛋白定量、血肌酐、尿素氮均明显高于正常组(P0.05);实验2周后,实验组及对照组血糖、24 h尿蛋白定量、血肌酐、尿素氮均明显高于正常组(P0.05);实验组及对照组相比各项指标均无差异(Ρ0.05);实验4周后,实验组及对照组血糖、24 h尿蛋白定量、血肌酐、尿素氮均明显高于正常组(P0.05);实验组与对照组相比各项指标均有下降(P0.05);相比正常组实验组及对照组大鼠肾组织nephrin和podocin蛋白表达显著降低(P0.05);实验组Nephrin和Podocin蛋白水平高于对照组(P0.05)。HE染色结果显示,使用消渴汤治疗后大鼠肾小球体积相对对照组减小,肾小管间质病变减轻,纤维化和炎细胞浸润显著改善。结论:消渴汤可以通过抑制炎症、调节糖代谢并增加大鼠足细胞数目来实现治疗糖尿病肾病。     

清热益气通络方治疗DN大鼠蛋白尿机理研究

目的 研究清热益气通络方治疗糖尿病肾病（DN）大鼠蛋白尿的机制.方法 将60只SD大鼠随机分10只为正常组,50只为糖尿病肾病造模组（采用单侧肾切除腹腔注射链脲佐菌素的方法建立大鼠DN模型）.将造模成功的大鼠再分为模型组、中药组和厄贝沙坦组,治疗12周.检测肾/体质量指数（BW/KW）、24h尿微量白蛋白（umAlb）、24 h尿蛋白量（uPro）;酶联免疫吸附法（ELISA）检测10％肾组织匀浆超氧歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、还原型谷胱甘肽（GSH）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、丙二醛（MDA）含量;免疫荧光双标法观察肾小球P钙黏蛋白（P-cadherin）、成纤维细胞特异蛋白1（FSP1）的表达免疫荧光标记肾胚胎瘤抑制基因（WT1）并计数.结果 模型组大鼠BW/KW、24 h umAlb、24h uPro、肾组织匀浆MDA、及FSP1显著增高（P＜0.01或P＜0.05）,SOD、CAT、GSH、GSH-Px及P-cadherin显著降低（P＜0.01或P＜0.05）,模型组大鼠肾小球WT1阳性细胞密度显著降低（P＜0.01）;清热益气通络方能显著降低DN大鼠BW/KW、umAlb、uPro、MDA水平及FSP1表达（P＜0.01或P＜0.05）,提高SOD、CAT活性、GSH含量及P-cadherin表达（P＜0.01或P＜0.05）.结论 减轻DN大鼠肾组织氧化应激及拮抗足细胞P-cadherin、FSP1异常表达是清热益气通络方药治疗DN蛋白尿的部分作用机制.     

黄萸方防治大鼠早期糖尿病肾病足细胞损伤的研究

目的 观察中药复方黄萸方对实验性糖尿病大鼠微量白蛋白尿的疗效,及对足细胞的影响.方法 采用高糖高脂喂饲加低剂量STZ诱导伴胰岛素抵抗的大鼠2型糖尿病,给予黄萸方治疗12周,观察血糖及尿微量白蛋白,采用透射电镜及图像分析技术,观察对足细胞形态的影响.结果 黄萸方可降低血糖、减少尿微量白蛋白,同时可改善足细胞损伤,疗效优于ARB.结论 黄萸方可改善实验性大鼠2型糖尿病肾脏病变,主要是改善足细胞损伤,减少微量白蛋白尿.     

通络益肾汤对链脲佐菌素诱导糖尿病肾病大鼠血浆一氧化氮影响的实验研究

目的观察通络益肾汤对链脲佐菌素(STZ)糖尿病肾病大鼠的疗效,探讨其可能的作用机理。方法采用STZ糖尿病肾病大鼠模型,分为正常组、病理组、通络益肾汤治疗组、西药治疗组(糖适平 洛汀新)。观察各组大鼠治疗前后血糖、血脂、肾功能(BUN、Scr)、血浆蛋白、血浆NO等指标的变化。结果与病理组比较,通络益肾汤治疗组大鼠一般状况改善较好,血糖升高不明显(P<0.05),血清BUN、Scr显著降低(P<0.01)、TG、TC降低,HDL升高,(P<0.01或P<0.05)。血浆NO含量明显升高(P<0.01)。通络益肾汤治疗组与西药组比较,各项指标无明显差异。结论通络益肾汤能延缓糖尿病肾病的病理进展,其作用机理可能与升高血浆NO水平有关。     

糖肾芪(齐)对链脲佐菌素致糖尿病肾病模型大鼠的影响

目的: 研究糖肾芪(齐)对糖尿病肾病(DN)模型大鼠的保护作用。方法: SD大鼠一次性尾静脉注射链脲佐茵素(STZ),建立DN模型大鼠。成模后随机分为模型对照组、糖肾芪(齐)高、中、低剂量(生药28.0,14.0,7.0 g·kg^-1)组、糖脉康颗粒组及糖适平+卡托普利组,连续给药12周,观察动物一般状况;定期检测动物的体重、饮食、饮水、尿液指标(尿糖和尿蛋白)、血液指标(空腹血糖、肌酐、尿素、糖化血红蛋白),给药结束后,进行肾脏质量及指数、PAS染色肾小球阳性区域面积测定以及肾脏组织病理学检查。结果: 糖肾芪(齐)能降低DN模型大鼠血糖,调节糖代谢异常,促进肝糖元的转化;同时减少尿量,降低尿糖及尿蛋白含量,提高肾小球滤过率;抑制肾脏肥大,降低肾脏病变发生率及改善和修复病变程度。结论: 糖肾芪(齐)对DN模型大鼠有较好的保护作用。     

单侧肾切除STZ诱导糖尿病肾病大鼠动物模型研究

目的探讨单侧肾切除STZ诱导大鼠糖尿病肾病(DN)造模过程中的注意事项。方法通过单侧肾切除并腹腔空腹给STZ以建立大鼠糖尿病肾病模型。术后1周给药,给药72h后检测血糖,同时观察糖尿病大鼠8周和12周肾脏病理切片和电镜片的变化。血糖达到16.7mmol/L为造模成功。结果经过4批实验,正确处理造模过程中注意事项,成功复制出糖尿病大鼠模型。8周和12周肾脏病理切片和电镜片均提示显著变化。结论按有关注意事项,可完成单侧肾切除STZ诱导大鼠DN造模。     

葛根素对糖尿病肾病大鼠内皮素表达的影响

目的观察葛根素对糖尿病肾病内皮素表达的影响。方法利用链脲佐菌素腹腔注射法诱导建立1型糖尿病大鼠模型,将实验用SD大鼠随机分正常对照组、糖尿病组、葛根素治疗组。治疗12周,观察治疗期间及治疗后大鼠的一般状况、血糖、尿素氮、血肌酐,内生肌酐清除率、24 h尿蛋白排泄率,免疫组织化学检测肾小球ET表达。结果造模组大鼠均出现肾脏功能损害;葛根素能改善基本状况,降低糖尿病大鼠的尿素氮、血肌酐、24 h尿白蛋白排泄率,增加内生肌酐清除率,ET表达显著降低。结论葛根素具有确切的肾脏保护作用。     

络通对糖尿病大鼠肾脏的保护作用及机理研究

目的探讨络通对糖尿病大鼠肾功能的作用及其可能机理.方法40只SD大鼠随机分成正常对照组、模型组与络通组.络通粉末(4g/kg·     

芪卫颗粒对糖尿病肾病大鼠足细胞nephrin表达影响的实验研究

目的探讨芪卫颗粒对糖尿病肾病大鼠肾组织足细胞裂孔隔膜蛋白nephrin表达的影响。方法随机选取10只健康雄性SD大鼠为正常组,其余30只采用腹腔注射大剂量链脲佐菌素(60 mg/kg)诱导糖尿病大鼠模型,将成模大鼠随机分为模型组、西药组以及芪卫颗粒组,将西药组按缬沙坦10 mg/(kg·d)灌胃、芪卫颗粒组按生药10 g/(kg·d)灌胃,连续给药。于给药第24周检测大鼠血肌酐、血尿素氮及内生肌酐清除率;24周后将大鼠处死,采用PAS染色法将肾组织染色,在光镜下观察大鼠肾组织病理改变;采用western blot法检测肾组织足细胞裂孔隔膜蛋白nephrin表达情况。结果与正常组相比,模型组大鼠血肌酐、血尿素氮水平显著升高,内生肌酐清除率及足细胞nephrin表达水平显著下降(P0.05);与模型组相比,各给药组大鼠血肌酐、血尿素氮水平明显下降,内生肌酐清除率及nephrin表达水平明显上调(P0.05)。结论芪卫颗粒能够上调糖尿病肾病大鼠肾组织足细胞nephrin的表达,减轻足细胞损伤,保护肾功能,延缓糖尿病肾病的发生发展。