二甲双胍作用于3T3-L1前脂肪细胞诱导阶段对v-SNAREs蛋白家族mRNA表达的影响

目的 观察3T3-L1前脂肪细胞诱导分化过程中二甲双胍对囊泡相关膜蛋白(VAMPs)mRNA表达变化,探讨二甲双胍促进葡萄糖转运子4(GLUT4)转运中的作用机制。方法 在3T3-L1前脂肪细胞诱导分化过程中,分别持续给予不同浓度的二甲双胍(0、0.5mmol/L、1mmol/L、2mmol/L)干预12d后,比较不同浓度的二甲双胍对AMPK、GLUT4及VAMP2、VAMP3、VAMP4、VAMP5、VAMP7、VAMP8的mRNA水平。结果 与0mmol/L组相比,0.5mmol/L组GLUT4、VAMP2、VAMP3、VAMP8mRNA表达水平差异无统计学意义(P>0.05);与0mmol/L组相比,1mmol/L组上调GLUT4、VAMP2、VAMP3、VAMP8mRNA水平升高(P<0.05);与1mmol/L组相比,2mmol/L组下调GLUT4及VAMP2、VAMP3、VAMP5、VAMP8mRNA表达水平(P<0.05)。各组间AMPK1、VAMP4、VAMP7的mRNA表达水平比较差异无统计学意义。结论 二甲双胍可以作用于前脂肪细胞的诱导分化过程,且呈剂量依赖性地上调脂肪细胞中GLUT4及VAMP2、VAMP3、VAMP8mRNA的表达。     

氯沙坦钾对棕榈酸所致骨骼肌细胞凋亡的干预作用

目的从细胞水平探索氯沙坦钾对骨骼肌损伤的保护作用及其机制。方法用2%马血清诱导分化L6成肌细胞; CCK-8试剂盒及Western Blot确定合适的氯沙坦细胞处理浓度。实验分为4组:对照组,二甲基亚砜组,棕榈酸(1 mmol/L)组以及棕榈酸(1 mmol/L)+氯沙坦钾(50μmol/L)组。Western Blot检测凋亡相关蛋白(cleaved caspase-3、cleaved PARP、Bcl-2、Bax)、自噬相关蛋白(LC3、Beclin 1),实时荧光定量PCR (quantitative real-time PCR,q PCR)检测P53和P21 m RNA表达水平。结果显微镜下观察及Western Blot检测myogenin蛋白表达增加,证明骨骼肌细胞诱导分化成功。CCK-8试剂盒检测示氯沙坦钾浓度为50、100、200、400μmol/L时L6成肌细胞活力分别为0.87±0.087、1.11±0.037、1.21±0.099、1.30±0.068,其中50μmol/L时细胞活力最大,且对cleaved caspase-3蛋白表达抑制最明显。与未作处理的对照组比较,qPCR显示棕榈酸处理组骨骼肌细胞P53、P21 m RNA表达量分别从0.36±0.03、0.50±0.05上调至0.68±0.08、1.07±0.02 (P0.05),cleaved caspase3、cleaved PARP蛋白表达均增加,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ及Beclin 1蛋白表达减低;与棕榈酸单独处理组比较,氯沙坦钾与棕榈酸共处理组P53、P21 m RNA表达量分别从0.68±0.08、1.07±0.02下调至0.44±0.01、0.67±0.03 (P0.05),cleaved caspase-3、cleaved PARP蛋白表达减低,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ及Beclin1蛋白无显著改变。结论氯沙坦钾通过抑制cleaved caspase3及其底物cleaved PARP表达抑制细胞凋亡,但这种保护效应并不是通过自噬途径实现的。     

二甲双胍对甲状腺乳头状癌TPC-1细胞凋亡的影响及其机制研究

目的 探讨二甲双胍对甲状腺乳头状癌TPC-1细胞凋亡的影响及其机制。方法 用不同浓度(0mmol/L、1mmol/L、5mmol/L、10mmol/L、20mmol/L、40mmol/L)二甲双胍分别处理TPC-1细胞24h。采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞增殖能力；采用Annexin Ⅴ-FITC/PI流式细胞术检测不同浓度二甲双胍对TPC-1细胞凋亡的影响，同时在40mmol/L组加入腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)抑制剂Compound C，观察其对TPC-1细胞凋亡的影响；采用Western blot法检测磷酸化AMPK（p-AMPK）及Caspase-9蛋白的表达。结果 与0mmol/L组比较，1mmol/L及5mmol/L组的TPC-1细胞增殖能力无明显改变（P＞0.05）；而10mmol/L、20mmol/L、40mmol/L二甲双胍均可明显抑制TPC-1细胞的增殖能力，且呈剂量依赖性（P＜0.05）。与0mmol/L组比较，不同浓度二甲双胍均可明显增加TPC-1细胞凋亡率（P＜0.001）；而加入Compound C后，40mmol/L组TPC-1细胞凋亡率较前明显下降（P＜0.001）。与0mmol/L组比较，1mmol/L、5mmol/L、10mmol/L、20mmol/L、40mmol/L组p-AMPK、Caspase-9表达量增加。结论 二甲双胍可诱导甲状腺乳头状癌TPC-1细胞凋亡，且二甲双胍诱导TPC-1细胞凋亡的过程可能与激活AMPK通路有关，可能由Caspase-9介导。     

槲皮素在心肌梗死后心力衰竭中的作用及其相关机制研究

目的 探讨槲皮素对心肌梗死后心力衰竭的保护作用及可能的作用机制。方法 将55只雄性SD大鼠随机分为假手术组10只、模型组11只、非诺贝特组(10 mg/kg)10只、槲皮素A组(50 mg/kg)11只。排除死亡13只。除假手术组外,其余各组采用左前降支结扎法建立心肌梗死模型诱导心力衰竭。术后28 d采用超声心动图检测大鼠心功能,并收集心肌组织进行染色、实时荧光定量PCR、Western blot检测。体外培养H9C2心肌细胞分为对照组、过氧化氢(H₂O₂)组(100μmol/L)、槲皮素B组(40 mmol/L)和联合组(槲皮素40 mmol/L+MHY1485 5μmol/L)。采用Western blot检测微管相关蛋白1轻链3(LC3)、自噬相关基因(Atg)3、Atg7、Beclin1、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)蛋白表达。结果 与模型组比较,槲皮素A组危险区域、梗死区/危险区域比值明显降低,LC3、Beclin1、Atg3和Atg7 mRNA及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值和Beclin1蛋白、磷酸化AMPK^T172     

二甲双胍对胰岛素抵抗状态的小鼠胚胎成纤维细胞中腺苷酸活化蛋白激酶及葡萄糖转运子4表达的影响

目的观察二甲双胍对IR状态的小鼠胚胎成纤维(3T3-L1)细胞中腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)及葡萄糖转运子4(GluT4)mRNA表达的影响。方法诱导分化3T3-L1前脂肪细胞为成熟脂肪细胞并用油红O染色证明。用地塞米松诱导建立3T3-L1细胞IR模型,以葡萄糖氧化酶法测定不同时段细胞培养基中剩余葡萄糖浓度,以确定IR模型的建立。给予二甲双胍进行药物干预后,测定细胞培养基中剩余葡萄糖浓度并运用实时荧光定量PCR技术检测细胞AMPK和GluT4的mRNA基因水平。结果药物干预组给予不同浓度二甲双胍后,细胞培养基中剩余葡萄糖浓度均较模型组降低(P0.01)。药物干预组AMPK、GluT4mRNA水平较模型组均增加(P0.01)。结论二甲双胍上调处于IR状态的3T3-L1细胞中AMPK和GluT4mRNA水平,增加细胞对葡萄糖利用。     

高糖通过调控FBW7表达影响自噬的研究

目的探索高糖调控FBW7表达对自噬的影响。方法不同浓度(10、20和30 mmol/L)葡萄糖刺激小鼠肾小球系膜细胞后,采用Western blot检测泛素连接酶FBW7、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化的哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)的表达水平,以及LC3-Ⅱ/Ⅰ比值,采用RT-PCR进一步检测FBW7的mRNA水平;采用自噬双标腺病毒检测自噬溶酶体。采用基因过表达技术过表达FBW7并检测相关蛋白水平及自噬水平。结果葡萄糖浓度越高,FBW7、LC3-Ⅱ/Ⅰ比值和自噬溶酶体水平越低,mTOR、p-mTOR的表达水平越高。基因过表达FBW7可抑制mTOR和p-mTOR(Ser2448)蛋白表达,增加LC3-Ⅱ/Ⅰ比值及自噬溶酶体数量(P0.05)。结论高糖下调FBW7表达激活mTOR信号通路,引起小鼠肾系膜细胞自噬水平的降低。     

二甲双胍降低2型糖尿病大鼠主动脉磷酸化丝裂原活化蛋白激酶的蛋白表达

目的:探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)与2型糖尿病大鼠主动脉病变的关系及二甲双胍的干预作用。方法:25只雄性Wistar大鼠随机分为对照组和实验组,实验组采用高脂高糖饲料喂养联合链脲佐菌素注射建立2型糖尿病大鼠模型。将成模糖尿病大鼠随机分为2组:2型糖尿病空白对照组(2型糖尿病组,n=7)、2型糖尿病+二甲双胍干预组(二甲双胍组,n=8)。二甲双胍组给予二甲双胍200 mg/kg灌胃8周,于干预末行腹腔葡萄糖耐量试验,次晨心尖取血并分离血清,全自动生化分析仪测定血糖、血脂等生化指标;放免法测定胰岛素水平;采用酶联免疫吸附方法测定血清细胞间黏附分子-1(ICAM-1),血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)和核因子-κB水平;取胸主动脉进行苏木素伊红(HE)染色,光镜下观察血管病理变化;免疫组化法检测大鼠胸主动脉磷酸化p38 MAPK、核因子-κB、单核细胞趋化蛋白-1蛋白的表达。结果:(1)HE染色可见2型糖尿病组大鼠主动脉管壁结构层次不清,内膜增厚,内皮细胞肿大变性,中膜平滑肌细胞排列紊乱,胶原纤维增生。(2)与对照组相比,2型糖尿病组大鼠空腹胰岛素[(20.00±5.91)m IU/L vs(11.34±3.88)m IU/L]、核因子-κB[(170.22±21.53)μmol/L vs(78.68±12.15)μmol/L]、ICAM-1[(130.59±16.00)pg/ml vs(75.63±19.52)pg/ml]、VCAM-1[(990.19±119.18)ng/ml vs(616.54±54.51)ng/ml]、总胆固醇[(4.15±0.41)mmol/L vs(2.18±0.93)mmol/L]、甘油三酯[(1.83±0.40)mmol/L vs(0.81±0.27)mmol/L]、低密度脂蛋白胆固醇[(2.53±0.44)mmol/L vs(1.24±0.47)mmol/L]水平明显升高(P0.05),胰岛素曲线下面积(30.78±11.25)m IU·L-1·h vs(47.55±5.23)m IU·L-1·h明显降低(P0.05),主动脉磷酸化p38 MAPK、核因子-κB、MCP-1蛋白表达水平升高(P0.05),差异均有统计学意义。(3)实验结束时二甲双胍组大鼠空腹血糖、空腹胰岛素、核因子-κB、单核细胞趋化蛋白-1、VCAM-1、甘油三酯、总胆固醇水平较2型糖尿病组明显降低(P0.05);二甲双胍组和2型糖尿病组间胰岛素曲线下面积无明显差异(P0.05)。二甲双胍组大鼠主动脉磷酸化p38 MAPK、核因子-κB、单核细胞趋化蛋白-1蛋白表达水平也较二甲双胍组明显降低(P0.05),差异有统计学意义。结论:p38 MAPK信号通路的激活在糖尿病大血管病变发生发展中起重要作用,二甲双胍通过降低p38 MAPK磷酸化水平、抑制炎症反应、调节脂代谢而起到血管保护作用。     

二甲双胍通过激活AMPK降低同型半胱氨酸对内皮细胞的损伤

目的探讨二甲双胍能否降低同型半胱氨酸(Hcy)对血管内皮细胞的损伤及其可能的机制。方法培养人血管内皮细胞株(EC304人血管内皮细胞),分为对照组、Hcy组、二甲双胍组和Hcy+二甲双胍组,采用CCK-8检测细胞活力,采用乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)试剂盒测定内皮细胞LDH、SOD活性及细胞内MDA含量,采用RT-PCR检测SOD1、过氧化氢酶(CAT)和NADPH氧化酶2(NOX2)mRNA的表达,采用Western blot检测AMPKα和p-AMPKα蛋白的表达。结果与对照组相比,Hcy组内皮细胞活力明显下降,LDH活性增加,细胞内MDA含量升高,SOD活性下降,SOD1和CAT mRNA表达水平显著下降,而NOX2 mRNA表达水平则明显升高,二甲双胍能够抑制Hcy引起的细胞活力下降及LDH、MDA增加;二甲双胍增加SOD活性,增加SOD1和CAT mRNA表达水平,减少NOX2 mRNA表达水平。AMPK抑制剂Compoud C则可以逆转二甲双胍对Hcy引起的内皮细胞损伤的保护作用。结论二甲双胍激活AMPK可能通过调控细胞内氧化应激抑制Hcy对内皮细胞的损伤。     

二甲双胍联合利拉鲁肽对棕榈酸诱导的内皮细胞氧化损伤具有协同保护作用

目的 探讨二甲双胍和利拉鲁肽在改善棕榈酸诱导的人脐静脉内皮细胞氧化损伤方面是否具有协同保护效应.方法 分离培养人脐静脉内皮细胞,应用不同浓度棕榈酸处理诱导细胞氧化损伤,观察不同浓度二甲双胍和（或）利拉鲁肽对细胞氧化损伤的影响.流式细胞仪检测细胞内的活性氧簇（ROS）水平,硝酸还原酶法检测上清一氧化氮（NO）的水平,组间比较采用单因素方差分析和Q检验.结果 与对照组相比,0.25和0.50 mmoL/L棕榈酸细胞内ROS水平显著升高[（125±17）％、（189±8）％比100％,P＜0.05],上清NO水平降低[（89.9±6.2）％、（79.8±4.8）％比100.0％,P＜0.05];二甲双胍（0.5 ～ 1.0 mmol/L）和利拉鲁肽（10 ～ 100 nmol/L）单独应用后,可使0.50 mmol/L棕榈酸所致的ROS产生增加和NO产生减低作用下降;低剂量的二甲双胍（0.1 mmol/L）或利拉鲁肽（3 nmoL/L）单独应用对0.5 mmol/L棕榈酸的作用均无明显的影响,但两者联合则可减低上述作用：两者联合组与棕榈酸组相比,ROS水平降低[（158±31）％比（250±27）％,P＜0.05],NO水平增加[（91.7±30.6）％比（82.3±5.0）％,P＜0.05].结论 二甲双胍和利拉鲁肽在改善棕榈酸诱导的内皮细胞氧化损伤方面具有协同效应.     

二甲双胍对多房棘球蚴囊泡和原头节自噬及凋亡的影响

目的 探讨不同浓度的二甲双胍对体外培养的多房棘球蚴囊泡及原头节自噬及凋亡的影响。方法 将体外培养的多房棘球蚴囊泡及原头节与1、 5、 10 mmol/L的二甲双胍分别共培养24、 48 h,以PBS为对照,显微镜下观察囊泡的活性、大小及透明度,使用伊红染色观察原头节的活性,并计算成活率;1、 5、 10 mmol/L的二甲双胍与多房棘球蚴原头节共培养48 h时,利用试剂盒测定原头节中与细胞凋亡相关的半胱氨酸肽酶3(caspase3)、 caspase9酶活性;收集囊泡中的生发层细胞,使用流式细胞术检测其凋亡情况;提取囊泡及原头节蛋白,使用蛋白质免疫印迹（Western blotting）分析与细胞凋亡相关的剪切-caspase3 (cleaved-caspase3)、 caspase9、B淋巴细胞瘤（Bcl-2）的相对表达量;1、 5、 10 mmol/L的二甲双胍与多房棘球蚴囊泡及原头节共培养48 h时,Western blotting分析二甲双胍对囊泡及原头节中磷酸化一磷酸腺苷（AMP）依赖的蛋白激酶（P-AMPK）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）,自噬相关基因14 (Atg1...     

谷氨酸诱导大鼠结肠 Cajal 间质细胞构建自噬模型

目的通过谷氨酸诱导离体大鼠结肠Cajal间质细胞(ICC)构建细胞自噬模型。方法使用不同浓度的谷氨酸不同时间点作用于原代培养的大鼠结肠ICC,免疫荧光鉴定大鼠结肠ICC细胞;CCK-8法检测谷氨酸对ICCs活力的影响;Western印迹检测不同浓度谷氨酸在不同作用时点对大鼠结肠ICC自噬蛋白微管相关蛋白轻链(LC)3表达水平的影响;透射电镜观察谷氨酸干预后细胞内自噬体和超微结构的变化。结果与空白组相比,谷氨酸(5 mmol/L)24 h显著降低大鼠结肠ICC活力(P<0.01)。谷氨酸(5 mmol/L)作用6 h、24 h均可显著提高自噬蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值(P<0.05),其中以5 mmol/L谷氨酸作用24 h的LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值最高(P<0.01)。透射电镜检测5 mmol/L谷氨酸干预大鼠结肠ICC 24 h发现,细胞内自噬空泡和自噬体数量明显增加。结论谷氨酸诱导大鼠结肠ICC自噬模型的最佳浓度和时间为5 mmol/L和24 h。     

替米沙坦诱导大鼠肝细胞自噬促进肝脏胆固醇代谢的机制研究

目的探讨替米沙坦诱导大鼠肝细胞自噬对肝脏胆固醇代谢的影响及作用机制。方法将肝脏原代细胞分为正常对照组(Con)、替米沙坦1μmol/L组(Tel 1组)、替米沙坦3μmol/L组(Tel 3组)、替米沙坦10μmol/L组(Tel 10组)、替米沙坦10μmol/L联合PPARγ抑制剂GW 9662组(Tel+G组)。Tel 1、Tel 3、Tel 10组分别按1、3、10μmol/L浓度加入替米沙坦,Tel+G组加入10μmol/L替米沙坦及PPARγ抑制剂GW9662,培养24 h。检测肝细胞胆固醇浓度,Western blot法检测微管相关蛋白轻链3(LC3)、自噬蛋白区域(Beclin-1)、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、雷帕霉素靶分子(mTOR)表达水平。结果 Tel 3、Tel 10组胆固醇水平低于Con、Tel 1组(P<0.05)。Tel 1、Tel 3、Tel 10组LC3Ⅱ/Ⅰ比值、Beclin-1蛋白水平依次升高(P<0.05)。与Con、Tel 1组比较,Tel 3、Tel 10组p-AMPK/AMPK蛋白比值升高(P<0.05),p-mTOR/mTOR蛋白比值降低(P<0.05)。与Tel 10组比较,Tel+G组胆固醇水平、p-mTOR/mTOR蛋白比值升高(P<0.05),LC3II/I比值、p-AMPK/AMPK蛋白水平降低(P<0.05)。结论替米沙坦可通过诱导大鼠肝细胞自噬影响肝脏细胞胆固醇代谢,其机制可能与激活AMPK/mTOR途径和上调PPARγ有关。     

Metformin influences cardiomyocyte cell death by pathways that are dependent and independent of caspase-3

Aims/hypothesis Metformin has been shown to increase fatty acid oxidation, an effect mediated by AMP activated protein kinase (AMPK). We hypothesised that metformin could prevent both caspase-3 activation and apoptosis when induced by palmitic acid.Materials and methods Cardiomyocytes were incubated with 1 mmol/l palmitic acid, in the absence or presence of metformin (1–5 mmol/l). Following 1 to 16 h, cell damage was evaluated by measuring lactate dehydrogenase released into the incubation medium, and Hoechst staining. To investigate the mechanism of metformin’s effect on cardiomyocytes, substrate utilisation and phosphorylation of AMPK and acetyl-CoA carboxylase were measured. Intracellular mediators of apoptosis were also evaluated.Results Incubation of myocytes with palmitic acid for 16 h increased apoptosis, an effect that was partly blunted by 1 and 2 mmol/l metformin. This beneficial effect of metformin was associated with increased AMPK phosphorylation, palmitic acid oxidation and suppression of high-fat-induced increases in (1) long chain base biosynthesis protein 1 levels, (2) ceramide levels, and (3) caspase-3 activity. Unexpectedly, 5 mmol/l metformin dramatically increased apoptosis in myocytes incubated with high fat. This effect was associated with a robust increase in glycolysis, lactate accumulation, and a significant drop of pH in the myocyte incubation medium.Conclusions/interpretation Our study demonstrates that metformin reduces high-fat-induced cardiac cell death, probably through inhibition of ceramide synthesis. However, at high concentrations, metformin causes proton and lactate accumulation, leading to cell damage that is independent of caspase-3.     

miR-24对氧化低密度脂蛋白胆固醇诱导的人脐静脉内皮细胞自噬的影响

目的探讨微小RNA(miR)-24对氧化低密度脂蛋白胆固醇(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)自噬的调控作用及相关分子机制。方法将HUVECs随机分为正常组,ox-LDL组,阴性对照组,anti-miR-24组,miR-24组。正常组细胞正常培养,ox-LDL组细胞用100μg/ml ox-LDL作用6 h诱导自噬,阴性对照组、anti-miR-24组、miR-24组先分别转染相应慢病毒载体,再以同法诱导自噬。实时荧光定量(qRT)-聚合酶链反应(PCR)验证miR-24慢病毒稳转细胞株构建情况及ox-LDL对HUVECs内miR-24表达的影响;透射电镜观察各组细胞内部自噬小体和自噬溶酶体的数量;四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各组细胞活性;Western印迹与qRT-PCR法检测LC3-Ⅰ/Ⅱ、Beclin-1、P62的蛋白和mRNA表达水平。结果慢病毒转染细胞成功后miR-24的表达受到影响;ox-LDL可诱导下调miR-24在HUVECs中的表达(P<0.05);与阴性对照组相比,anti-miR-24组细胞质内自噬小体及自噬溶酶体显著增加(P<0.05),但细胞活性无显著差异(P>0.05),LC3-Ⅰ/Ⅱ、Beclin-1的蛋白及mRNA相对表达量显著增高(P<0.05),P62的蛋白及mRNA相对表达量降低(P<0.05)。然而,miR-24组细胞质内自噬小体及自噬溶酶体显著减少,且细胞活性显著性降低(P<0.05),LC3-Ⅰ/Ⅱ、Beclin-1的蛋白及mRNA相对表达量显著降低(P<0.05),P62的蛋白及mRNA相对表达量升高(P<0.05)。结论过表达miR-24可通过抑制ox-LDL诱导的HUVECs自噬进而抑制细胞增殖,miR-24可能成为动脉粥样硬化(AS)的潜在治疗靶点。     

Metformin promotes induction of lipoprotein lipase in skeletal muscle through activation of adenosine monophosphate-activated protein kinase

Metformin is known to increase lipoprotein lipase (LPL) mass level in serum. Lipoprotein lipase is produced by adipose tissue and skeletal muscles. This study aimed to examine the effect of metformin on LPL production in adipocytes and skeletal muscle cells and to investigate the mechanism by which metformin enhances LPL production. 3T3-L1 preadipocytes and L6 skeletal muscle cells were incubated with metformin or 5-aminoimidazole-4-carboxamide ribonucleoside (AICAR). Lipoprotein lipase activity, LPL protein expression, and LPL messenger RNA (mRNA) expression were measured. Metformin increased LPL activity only in skeletal muscle cells. To clarify the mechanism of this phenomenon, AICAR, which is well known as an activator of adenosine monophosphate-activated protein kinase (AMPK), was used. Metformin and AICAR enhanced phosphorylated AMPK in skeletal muscle cells by Western blot analysis. Like metformin, AICAR increased LPL activity only in skeletal muscle cells. Both metformin and AICAR also enhanced LPL protein and LPL mRNA expressions in skeletal muscle cells but not in adipocytes. Phosphorylated AMPK protein expression was decreased when AMPK signaling was interfered by AMPKα small interfering RNA. Lipoprotein lipase activity and LPL expression, which were enhanced by 1 μmol/L metformin, were reduced by AMPKα small interfering RNA. These results suggest that metformin increases LPL activity, LPL protein expression, and LPL mRNA expression through activation of AMPK in skeletal muscle cells but not in adipocytes.     

辛伐他汀对哮喘小鼠细胞自噬和炎症的影响及其机制的实验研究

目的观察不同剂量辛伐他汀对哮喘小鼠自噬和炎症的影响及机制。方法32只小鼠随机分为正常对照组(A组)、哮喘模型组(B组)、低剂量辛伐他汀组(C组40 mg/Kg)、高剂量辛伐他汀组(D组60 mg/Kg),每组8只。B、C、D三组采用卵清蛋白+氢氧化铝造模,C、D组同时给予辛伐他汀40 mg/kg、60 mg/kg灌胃。采用H.E染色观察肺组织,Western blot法检测LC3Ⅱ/Ⅰ、mTOR、p-mTOR,RT-PCR法检测Atg5和Beclin1 mRNA。结果A组支气管未见炎症细胞浸润,管腔规则、黏膜上皮正常;B组可见大量炎症细胞浸润,管壁增厚,气道黏膜增生;C、D组上述表现较B组减轻,且D组改善更明显。与A组比较,B组LC3Ⅱ/Ⅰ、Atg5 mRNA、Beclin1mRNA增加,p-mTOR/mTOR降低,差异具有统计学意义(P<0.05);与B组比较,C、D两组LC3Ⅱ/Ⅰ、Atg5 mRNA、Beclin1 mRNA增加,p-mTOR/mTOR降低,D组上述指标变化更明显,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论哮喘小鼠自噬水平增加,p-mTOR/mTOR信号通路蛋白降低;辛伐他汀可能通过阻断mTOR信号通路进一步提高LC3Ⅱ/Ⅰ、Atg5 mRNA、Beclin1mRNA水平,从而缓解气道炎症。     

细胞外基质金属蛋白酶诱导因子通过Toll样受体-4信号通路调节巨噬细胞自噬水平

目的 探讨细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)是否通过Toll样受体-4(TLR4)通路调节巨噬细胞自噬水平.方法 用终浓度为5ng/ml的佛波酯(PMA)诱导人单核细胞白血病细胞系(THP-1)THP-1单核细胞48h,采用分化成功的巨噬细胞进行实验.实验分为空白对照组、EMMPRIN组和TAK-242组....     

Metformin opposes impaired AMPK and SIRT1 function and deleterious changes in core clock protein expression in white adipose tissue of genetically-obese db/db mice

Aim: AMPK activates SIRT1 in liver and skeletal muscle. Impaired circadian function is associated with development of obesity. SIRT1 regulates circadian function and is suppressed in white adipose tissue (WAT) of obese patients. We examined the potential role of AMPK and SIRT1 in regulation of circadian components in WAT of obese db/db mice and in mice fed a high‐fat diet (HFD), and investigated whether metformin‐mediated activation of AMPK opposed any deleterious changes in the WAT clock mechanism. Methods: db/+ and db/db mice were administered metformin (250 mg/kg/day; 7 days). Separately, mice were fed HFD for 16‐weeks. 3T3‐L1 adipocytes were incubated with metformin, EX527 or FK866, inhibitors of SIRT1 and NAMPT, respectively. Gene and protein expression were measured by qRT‐PCR and immunoblotting. Results: AMPK activity, NAMPT expression and SIRT1 expression were decreased in WAT of db/db and HFD mice, in association with suppressed expression of the core circadian components CLOCK and BMAL1. Expression of Pparγ and the adipogenic repressors Irf3 and Irf4 were also suppressed. Metformin increased AMPK activity in WAT of db/db mice and in metformin‐treated adipocytes, with increased NAMPT, SIRT1 and circadian component expression. Metformin‐mediated induction of Clock mRNA in adipocytes was blocked by inhibition of NAMPT and SIRT1. Conclusions: Decreased AMPK‐SIRT1 signalling in db/db and HFD mice impacts WAT circadian function causing dysregulated lipid regulation, favouring an obese phenotype. Metformin mediates a phenotypic shift away from lipid accretion through AMPK‐NAMPT‐SIRT1 mediated changes in clock components, supporting chronotherapeutic treatment approaches for obesity.     

ATF3转录调控HSP110对低氧诱导的肺动脉平滑肌细胞自噬和增殖的影响

目的 探讨ATF3调控HSP110表达对低氧刺激下人肺动脉平滑肌细胞增殖及自噬的影响。 方法 体外培养人肺动脉平滑肌细胞，单独感染ATF3沉默腺病毒或共感染HSP110过表达腺病毒，48 h后加入自噬激活剂雷帕霉素预处理3 h，建立缺氧细胞模型，24 h后，CCK-8法检测细胞增殖能力，流式细胞术分析细胞凋亡，Real-time PCR检测ATF3、HSP110 mRNA的表达，Western blot检测ATF3、HSP110、LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1、p62蛋白的表达，免疫荧光观察LC3斑点形成，荧光素酶报告系统鉴定ATF3对HSP110的调控作用。 结果 缺氧组ATF3和HSP110的表达显著增加（P<0.01），ATF3沉默后，细胞增殖能力下降，凋亡率增加（P<0.01），同时自噬蛋白LC3 Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1的表达及LC3荧光斑点显著减少(P<0.01)，自噬降解底物p62的表达明显增加(P<0.01)，而加入雷帕霉素或共感染HSP110过表达腺病毒后，ATF3沉默对细胞增殖和自噬的抑制作用显著减弱(P<0.01)。双荧光素酶报告基因检测结果显示，ATF3可上调HSP110启动子活性。 结论 ATF3调控HSP110表达增加而促进人肺动脉平滑肌细胞增殖，其机制可能与介导细胞自噬有关。