大鼠视网膜缺血再灌注后IL一1β的免疫组化研究

观察大鼠视网膜缺血再灌注(retinal ischemiareperfusion,RIR)后,白细胞介素1β(IL-1β)多肽在视网膜表达变化.方法采用前房灌注生理盐水,形成1 30mmHg(17.3kPa)高眼压,诱导大鼠视网膜缺血 60min,解除高眼压,建立RIR模型.缺血 60min,再灌注1 2h、48h作视网膜冰冻切片,IL-1β免疫组化观察.结果正常对照组未见IL β表达,RIR后12h、48h,视网膜神经节细层可见IL-1β表达.结论结果提示IL-1β多肽在蛋白质水平参与RIR损伤发生.     

大鼠视网膜缺血再灌注后细胞间粘附分子-1的表达

目的　探讨大鼠视网膜缺血再灌注后不同时间视网膜细胞间粘附分子 1(inter cellularadhesionmolecule 1,ICAM 1)表达和白细胞浸润的变化。方法　选择健康成年Wistar大鼠 70只 ,随机分成 7组 :正常组和再灌注 0、2、6、12、2 4、4 8h组 ,每组 10只。用眼内灌注法建立视网膜缺血再灌注动物模型。制作大鼠视网膜冰冻及石蜡切片 ,分别作免疫组化SP染色和常规HE染色 ,并对SP染色结果作计算机图像分析。结果　ICAM 1在正常视网膜血管内皮细胞胞膜微量表达 ,缺血 6 0min后 ,ICAM 1表达上调 ,至再灌注2 4h达高峰 ,在再灌注 4 8h仍维持较高水平。再灌注 6h ,视网膜开始有白细胞浸润 ,随再灌注时间延长而增多 ,再灌注 2 4、4 8h组 ,视网膜中发现较多浸润的白细胞。结论　视网膜缺血再灌注早期 ,视网膜血管内皮细胞ICAM 1表达上调 ,继而 ,视网膜中白细胞浸润增多 ,这一过程是视网膜缺血再灌注损伤的重要机制之一。     

视网膜缺血再灌注损伤大鼠视网膜中白细胞介素-23和白细胞介素-17的表达及意义

目的　通过建立视网膜缺血再灌注损伤（ｒｅｔｉｎａｌｉｓｃｈｅｍｉａ-ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｊｕｒｙ,ＲＩＲＩ）模型,观察白细胞介素-２３（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ-２３,ＩＬ-２３）和白细胞介素-１７（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ-１７,ＩＬ-１７）在Ｓｐｒａｇｕｅ-Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）大鼠视网膜上的表达,探讨其在ＲＩＲＩ中的可能作用机制。方法　采用随机数字表法将７５只健康无眼疾ＳＤ大鼠随机分为正常对照组和模型组。正常对照组不作任何处理,模型组采用前房灌注生理盐水升高眼压法建立ＲＩＲＩ模型。分别在建模后１２ｈ、２４ｈ、７２ｈ、１４４ｈ处死ＳＤ大鼠,免疫组织化学染色法检测ＩＬ-２３和ＩＬ-１７蛋白在视网膜上的表达及分布情况;Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ和ＥＬＩＳＡ检测分析各时间点视网膜ＩＬ-２３和ＩＬ-１７的表达水平和变化规律。结果　免疫组织化学染色法显示ＩＬ-２３和ＩＬ-１７蛋白在正常对照组视网膜中表达极少,而在模型组表达明显增多。两者主要表达于视网膜神经节细胞层和内核层细胞的细胞浆。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法检测发现ＩＬ-２３和ＩＬ-１７蛋白在ＲＩＲＩ视网膜中的表达明显增强,ＩＬ-２３蛋白在建模后２４ｈ表达最强,而ＩＬ-１７蛋白在建模后７２ｈ表达达到最高峰。ＥＬＩＳＡ法结果显示建模后１２ｈ、２４ｈ、７２ｈ、１４４ｈ,模型组视网膜ＩＬ-２３和ＩＬ-１７蛋白的表达水平均较正常对照组明显升高,差异均有显著统计学意义（均为Ｐ＜０．０１）。结论　ＩＬ-２３和ＩＬ-１７在ＲＩＲＩ模型ＳＤ大鼠视网膜中表达明显增强,ＩＬ-２３／ＩＬ-１７通路作为致病因素,通过加重视网膜炎症反应参与ＲＩＲＩ的病理损伤。     

血管内皮生长因子在视网膜缺血再灌注损伤中的表达

目的了解VEGFmRNA在大鼠视网膜缺血再灌注损伤中的表达及意义。方法建立大鼠视网膜缺血再灌注模型，以原位杂交法检测VEGFmRNA在大鼠视网膜中的表达，进行统计学处理。结果VEGFmRNA大鼠视网膜缺血再灌注12小时开始表达，第48小时达到最高，以后逐渐减弱。结论VEGFmRNA在大鼠视网膜缺血再注灌注损伤中起重要作用。     

姜黄素对视网膜缺血再灌注损伤大鼠视网膜组织结构及IL-23和IL-17表达的影响

目的:通过建立视网膜缺血再灌注损伤(retinal ischemia-reperfusion injury,RIRI)模型,观察姜黄素对Sprague-Dawley(SD)大鼠视网膜组织结构及白细胞介素-23(interleukin-23,IL-23)和白细胞介素-17(interleukin-17,IL-17)表达的影响.方法:采用随机数字法将60只雄性SD大鼠随机分为正常对照组(normal control group,NCG)、模型组(model group,MG)、姜黄素低剂量组(low-dose curcumin group,LDCG)和姜黄素高剂量组(high-dose curcumin group,HDCG),每组15只.MG、LDCG、HDCG组SD大鼠右眼均采用前房灌注生理盐水升高眼压法建立RIRI模型.LDCG、HDCG组均于建模前30min和建模后每24h定时分别以20、100mg/kg的剂量腹腔注射姜黄素溶液.建模后72h作视网膜石蜡切片,采用HE染色观察各组视网膜组织结构及炎症细胞浸润程度.同时,提取视网膜分别作Western-blot、ELISA法检测和分析各组视网膜IL-23和IL-17的表达水平及变化情况.结果:光学显微镜观察发现NCG组视网膜结构正常,层次清楚,细胞排列均匀整齐,视网膜厚度正常,无炎症细胞浸润.MG、LDCG组视网膜组织水肿,各层排列紊乱,可见细胞空泡、核浓缩和炎症细胞浸润等病理改变.HDCG组视网膜组织结构与NCG组相似,视网膜组织结构完整,炎症反应相对较轻.Western-blot、ELISA法检测和分析均显示IL-23、IL-17在MG组的表达明显增强,与NCG组相比差异均具有显著统计学意义(P<0.01),但LDCG、HDCG组中IL-23、IL-17的表达较MG组明显降低,差异均有显著统计学意义(P<0.01).结论:姜黄素可以减轻视网膜的炎症反应,保护视网膜组织结构;抑制视网膜IL-23、IL-17的表达,且呈剂量依赖性,这为姜黄素在亚急性期治疗RIRI提供了新的理论依据.     

大鼠视网膜缺血再灌注后HIF-1α的表达与视网膜细胞凋亡的研究

目的:探讨大鼠视网膜细胞缺血再灌注后低氧诱导因子(HIF-1α)的表达、视网膜细胞凋亡的发生以及二者之间的关系.方法:采用前房灌注生理盐水升高大鼠眼压到110mmHg(1kPa=7.5mmHg)持续1 h的方法制作实验性视网膜缺血再灌注损伤模型,分别于再灌注不同时间点取材,行免疫组织化学法染色观察HIF-1α在视网膜细胞的阳性表达;采用DNA原位末端标记(terminal dUTP nick end labelling,TUNEL)法定位凋亡的视网膜细胞来检测视网膜凋亡细胞.结果:缺血再灌注2h组视网膜神经节细胞层及内核层细胞出现HIF-1α弱阳性表达,12h组阳性表达至高峰,24h组HIF-1α表达渐减少.视网膜组织细胞凋亡见于缺血再灌注12,24及48h组,凋亡细胞主要位于内核层,且24h组凋亡阳性表达最强.结论:缺血再灌注后大鼠视网膜HIF-1α的表达增加.参与视网膜缺血再灌注损伤;视网膜细胞的损伤部分以凋亡的形式发生,HIF-1α的表达可能与视网膜细胞凋亡有密切的关系.     

视网膜缺血再灌注损伤和细胞因子的研究进展

视网膜缺血再灌注（retinal ischemia reperfusion,RIR)损伤是由多种因素，如自由基，炎性细胞因子，白细胞等介导的复杂病理生理过程，RIR损伤和细胞因子之间存在密切联系，一方面，RIR损伤可以诱导多种炎性细胞因子，如白细胞介素1和6的表达，另一方面，多种外源性神经营养因子，如碱性成纤维细胞生长因子，重组人肝细胞生长因子，脑源性神经生长因子等，具有保护RIR损伤的作用，研究RIR损伤和细胞因子关系具有重要意义，因此我们报告了国外有关RIR损伤和细胞因子的最新研究进展。     

大鼠视网膜缺血再灌注后IL-1β的免疫组化研究

目的：观察大鼠视网膜缺血再灌注(retinal isehemia reperfusion，RIR)后，白细胞介素1β(IL-1β)多肽在视网膜表达变化。方法：采用前房灌注生理盐水，形成130mmHg(17．3kPa)高眼压，诱导大鼠视网膜缺血60min，解除高眼压，建立RIR模型。缺血60min，再灌注12h、48h作视网膜冰冻切片，IL-1β免疫组化观察。结果：正常对照组未见IL-1β表达，RIR后12h、48h，视网膜神经节细层可见IL-1β表达。结论：结果提示：IL-1β多肽在蛋白质水平参与RIR损伤发生。     

自由基与视网膜缺血-再灌注损伤

自由基在视网膜缺血-再灌注损伤中占有重要地位。视网膜缺血-再灌注时黄嘌呤氧化酶（XO）增加，花生四烯酸代谢系统环氧化旁路，线粒体功能障碍，一氧化氮合成酶（NOS）激活及中性粒细胞系统被激活，使自由基生成大大增加。体内清除自由基的酶系统和抗氧化剂不足以清除生成的自由基而引起脂质，蛋白质和核酸等生物大分子的氧化损伤。给予外源性的自由基清除剂和抗氧化酶等通过加速自由基清除或抑制自由基生成而减轻视网膜缺血-再灌注损伤。     

视网膜缺血--再灌注损伤的保护

视网膜缺血-再灌注损伤是目前研究较多的一个课题,其损伤机制复杂,目前通过各种实验研究探索其损伤机制以及减轻或防止缺血-再灌注损伤的药物和方法很多.现就视网膜缺血-再灌注损伤的保护机制进行总结归纳.     

神经生长因子对视网膜缺血再灌注损伤中凋亡相关基因c-fos/c-jun表达的影响

目的 探讨神经生长因子(NGF)对视网膜缺血再灌注损伤中凋亡相关基因c-fos/c-jun表达的影响. 方法将28只Wistar大鼠随机分为正常组、缺血组和治疗组,后两组又按照不同再灌注时间分为再灌注后1、6、12、24、48、72 h6个时间段.建立视网膜缺血再灌注损伤动物模型,以NGF或平衡盐溶液玻璃体腔注射,通过免疫组织化学法检测各组视网膜组织中c-fos/c-jun基因的表达变化.结果缺血组视网膜再灌注后1 h可发现有c-fos/c-jun蛋白的表达,12 h达到高峰,24 h表达明显下降.治疗组变化规律与缺血组相似,但表达量明显减弱,再灌注1～24 h各时段差异有统计学意义(P<0.05). 结论视网膜缺血再灌注损伤时c-fos/c-jun基因在视网膜神经节细胞层(RGCL)与内核层表达增高;NGF可以抑制视网膜缺血再灌注损伤时c-fos/c-jun基因在视网膜的表达.     

高眼压缺血-再灌注中脑组织c-fos的表达及神经营养因子对其表达的影响

目的 观察视网膜缺血再灌注损伤过程中脑组织中c-fos的变化及神经营养因子对c-fos表达的影响，探讨c-fos在脑组织不同部位的改变及可能作用机制，进而为临床实践提供依据。方法 建立眼缺血再灌注损伤动物模型，分为对照组、实验组（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组）。实验Ⅰ组为缺血组（Ⅰ组），实验Ⅱ组为缺血2h＋再灌注组（I／R组），实验Ⅲ组在缺血再灌注前于右侧侧脑室注射神经营养因子（神经营养因子＋I／R组）。采用HE常规染色切片光镜下观察大鼠高眼压脑外侧膝状体、嘴侧丘、视皮质结构神经细胞变化，采用免疫组织化学染色分别测定各组大鼠中脑组织以上三个部位c-fos的变化。结果 （1）脑组织不同部位（外侧膝状体、嘴侧丘、视皮质）中c-fos在对照组、缺血组、缺血再灌注组间无统计学差异（P＞0.05）。（2）在再灌注1d组脑组织不同部位的c-fos与缺血再灌注组有显著性统计学差异（P＜0．01），其中在外侧膝状体中有明显改变。（3）在再灌注1d组与再灌注2d组间两者存在统计学差异。（4）在再灌注后5d组与2d组间c-fos无统计学差异（P＞0．05）。（5）在注射神经营养因子的实验Ⅲ组，脑组织中不同部位的c-fos与对照组无统计学差异。结论 （1）c-fos在脑外侧膝状体、嘴侧丘、视皮质参与损伤的作用。（2）在外侧膝状体中c-fos的变化在中枢调节作用中起着中介作用，c-fos可能参与引起脑组织改变。（3）神经营养因子能明显减轻损伤反应。     

视网膜损伤与c-fos基因表达

c-fos基因可能是最具特征性的即早基因(immediate early gene,IEG)。c-fos基因在调控视网膜功能上有重要作用。视网膜损伤,如光、缺血、穿通伤、视网膜脱离等,可诱导视网膜c-fos基因表达的改变。损伤性刺激可能是通过第一信使和第二信使的激活使c-fos基因在核内表达;c-fos基因调控着后期效应基因的表达,在对外界刺激-转录耦联的信息传递过程中起着第三信使的重要作用。本文就视网膜损伤所致c-fos基因表达的变化及其有关机理作一综述。     

闪烁光诱导性和形觉剥夺性近视与视网膜中c-fos基因表达的关系

背景闪烁光异于正常的光学环境,研究已证实闪烁光能诱导多种动物发生近视,但其发生机制仍不明确。目的研究闪烁光诱导性近视小鼠眼视网膜内c-fos基因的表达。方法选取经屈光度检查双眼屈光度相近、28日龄的健康C57BL／6J小鼠90只,采用随机数字表法将小鼠随机分为对照组、高频闪烁光组、中频闪烁光组、低频闪烁光组和形觉剥夺组。除形觉剥夺组外,其他4个组每组15只小鼠,分别在持续白色光照下及频率为10、5、2Hz的白色闪烁光下饲养;形觉剥夺组30只小鼠右眼佩戴半透明塑料眼罩,在白色不闪烁光照下饲养。分别于实验前及实验后2周测量各组小鼠眼屈光度和眼轴长度。实验2周时,应用免疫组织化学法检测c—fos蛋白在小鼠视网膜中的表达,分别用Westernbfot法和逆转录PCR法检测视网膜内e-yo~基因的表达。结果免疫组织化学检测结果显示,实验2周后各组小鼠视网膜中c—fos蛋白阳性表达率分别为（68．000±10．368）％、（51．000±6．519）％、（46．000±6．519）％、（31．000±7．416）％、（25．000±7．071）％,各频率闪烁光诱导组及形觉剥夺组c—fos蛋白表达率明显低于对照组,差异均有统计学意义（t=3．104、4．017、6．490、7．661,均P〈0．05）,而低频闪烁光组与形觉剥夺组c—fos蛋白的表达率差异无统计学意义（t=1．309,P=0．226）。Westernbfot检测结果显示,5个组小鼠c—fos蛋白表达的平均相对值（c—fos／GAPDH）分别为0．804±O．050、0．687±O．047、0．667±0．036、0．5584-0．036和0．532±0．056,各频率闪烁光诱导组和形觉剥夺组c—fos蛋白含量均明显低于对照组,差异均有统计学意义（t=2．961、3．184、6．971、6．276,均P〈0．05）。逆转录PCR法检测表明,5个组小鼠视网膜中c—fosmRNA相对含量（c—fosmRNA／GAPDHmRNA）分别为0．820±0．056、0．663±0．061、0．627±O．034、0．521±0．041及0．474±0．045,各频率闪烁光诱导组和形觉剥夺组c—fosmRNA表达量均明显低于对照组,差异均有统计学意义（t=3．262、5．070、7．173、8．305,均P〈0．05）。结论随闪烁光频率的增加和形觉剥夺诱导近视程度的增高,视网膜中c-fos基因的表达逐渐降低。     

Heterogeneous populations of microglia/macrophages in the retina and their activation after retinal ischemia and reperfusion injury

Activation of Microglia/macrophages has been observed in ischemia-reperfusion injury of the brain. This study was undertaken to investigate the different subpopulations of microglia/macrophages in the normal rat retina and their activation after retinal ischemia. Retinal ischemia was induced by elevation of intraocular pressure to 120 mmHg for 60 min. Microglia/macrophages were identified on frozen retinal sections by four antibodies, namely OX42, 5D4, OX6 and ED1. In the normal retina, there were heterogeneous populations of resident microglia/macrophages as characterized by their differences in morphology, antigen expression and distribution. OX42+ cells had delicate processes and were located in the inner layers of the retina, while 5D4+ cells were highly ramified and mostly scattered in the inner plexiform layer (IPL) and the outer plexiform layer. Few amoeboid ED1+ cells were also seen in the ganglion cell layer and IPL. OX6+ (MHC-II antigen presenting) cells were not detected in the normal retinas. Double labeling with OX42 and 5D4 antibodies on normal retinal sections showed few microglia exhibited positive labeling with both OX42 and 5D4, while the majority of the microglia were labeled with either OX42 or 5D4 antibodies. After retinal ischemia single labeling with these antibodies showed increased number of these antigen-expressing cells, disappearance of normal cellular processes, and rounding or amoeboid like appearance of the cell bodies. At 1 day after ischemia, there was a significant infiltration of round OX42+, ED1+ and OX6+ cells with loss of the cellular processes in the inner retina. From 3 to 14 days, all subpopulations of microglia/macrophages differentiated cellular processes and became dendritic again. Double labeling on retinas after 1 day of recovery showed OX42+ cells were co-labeled with ED1+ or OX6+ cells, but not with 5D4+ cells. Scattered amoeboid OX42+, 5D4+, and ED1+ cells were noted in the subretinal space 3-14 days after ischemia. In summary, there were heterogeneous populations of resident microglia/macrophages in the normal inner retina and they were activated early after ischemia-reperfusion injury and exhibited different antigenic expression which were further altered in the recovery phase.     

Effect of brain-derived neurotrophic factor on c-jun expression in the rd mouse retina

AIM: To determine the location of c-jun protein, dynamic changes in c-jun mRNA and protein expression, and ultrastructure characteristics in the rd mouse retina, following a single dose of brain-derived neurotrophic factor (BDNF) in a short period of time. METHODS: A single intravitreal injection of BDNF at two dosages (25μg/L or 50μg/L) was given to the right eye of the rd mouse at age 2 and 3 weeks respectively. Two weeks after injection, the location of c-jun protein in the retina was observed by immunofluorescence detection, c-jun mRNA and protein expression in retinas were detected by quantitative real time polymerase chain reaction (RT-PCR) and western immunoblotting analysis, ultrastructure characteristics of retinas were detected by transmission electron microscope (TEM) observation. RESULTS: c-jun protein was expressed in the inner nuclear layer (INL) of retina. BDNF at two dosages (25μg/L and 50μg/L) increased c-jun mRNA expression at PN-4 weeks respectively (P1=0.019, P2= 0.021). 50μg/L BDNF increased c-jun protein expression at PN-4 weeks (P =0.000). The retinal ultrastructure was improved. CONCLUSION: The effects of BDNF exerts on the c-jun expression in the retina are dose-dependent and time-dependent, which may mediate photoreceptor rescue indirectly in the pathological process of retinitis pigmentosa (RP) at early stage.     

Effect of brain-derived neurotrophic factor on c-jun expression in the rd mouse retina

AIM: To determine the location of c-jun protein, dynamic changes in c-jun mRNA and protein expression, and ultrastructure characteristics in the rd mouse retina, following a single dose of brain-derived neurotrophic factor (BDNF) in a short period of time. METHODS: A single intravitreal injection of BDNF at two dosages (25μg/L or 50μg/L) was given to the right eye of the rd mouse at age 2 and 3 weeks respectively. Two weeks after injection, the location of c-jun protein in the retina was observed by immunofluorescence detection, c-jun mRNA and protein expression in retinas were detected by quantitative real time polymerase chain reaction (RT-PCR) and western immunoblotting analysis, ultrastructure characteristics of retinas were detected by transmission electron microscope (TEM) observation. RESULTS: c-jun protein was expressed in the inner nuclear layer (INL) of retina. BDNF at two dosages (25μg/L and 50μg/L) increased c-jun mRNA expression at PN-4 weeks respectively (P1=0.019, P2= 0.021). 50μg/L BDNF increased c-jun protein expression at PN-4 weeks (P =0.000). The retinal ultrastructure was improved. CONCLUSION: The effects of BDNF exerts on the c-jun expression in the retina are dose-dependent and time-dependent, which may mediate photoreceptor rescue indirectly in the pathological process of retinitis pigmentosa (RP) at early stage.     

Simvastatin upregulates Bcl-2 expression and protects retinal neurons from early ischemia/reperfusion injury in the rat retina

Simvastatin has been shown to enhance the survival of retinal ganglion cells (RGCs) following ischemia-reperfusion (IR) injury by mediating the expression of stress proteins. The purpose of this study was to investigate the effect of simvastatin on retinal neurons and the expression of apoptotic proteins in a rat IR model. Wistar rats received intravitreal injection of simvastatin immediately after retinal reperfusion. Retinal ischemia was induced by increasing intraocular pressure to 150 mmHg for 60 min. The number of viable RGCs was measured after retrograde labeling with Fluoro-Gold. Ischemia-induced apoptotic cell death was studied using terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling (TUNEL). We found that simvastatin treatment enhanced RGC survival after retinal ischemia by approximately 40% and decreased retinal neuronal apoptosis. Using western blot analysis, we found that simvastatin upregulated the expression of Bcl-2 in the retina. In contrast, the level of the protein Bax was unaffected by simvastatin treatment. Our results suggest that RGC loss induced by retinal IR may be prevented by simvastatin and that the mechanism underlying this process possibly involves an alteration in the apoptotic pathway.     

五花血藤提取物对大鼠视网膜缺血再灌注损伤中凋亡相关因子表达的影响

目的　探讨五花血藤提取物（sargentodoxa cuneata extracts,SCE）对大鼠视网膜缺血-再灌注损伤（RIRI）中凋亡相关因子Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达的影响。方法　选取健康清洁级成年SD大鼠90只,随机分成对照组、RIRI组与SCE组,每组30只。于RIRI后6 h、12 h、24 h、48 h与72 h时,每组分别随机处死6只大鼠进行相关实验。通过Nissl染色观察各组大鼠视网膜神经细胞形态学的变化,免疫组织化学法检测各组大鼠视网膜内各细胞层凋亡相关因子Bcl-2、Bax和Caspase-3的表达。结果　对照组视网膜神经节细胞内Nissl小体丰富,染色较深,呈块状分布;RIRI组Nissl小体较对照组少,染色浅且分布不均;SCE组染色情况均较RIRI组有所改善。Bcl-2蛋白在对照组中几乎不表达,在24 h RIRI组中其阳性表达开始增强,48 h时达到高峰,在SCE组各个时间点上Bcl-2蛋白阳性表达均多于RIRI组,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。Bax蛋白在对照组中略有表达,在12 h RIRI组中其阳性表达持续增多,24 h时达到高峰,在SCE组各个时间点上Bax蛋白阳性表达均低于RIRI组,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。Caspase-3蛋白在对照组中几乎不表达,在6 h RIRI组中表达开始升高,12 h时达到高峰,在SCE组各个时间点上Caspase-3蛋白阳性表达均低于RIRI组,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。结论　SCE可能通过上调Bcl-2蛋白表达的同时下调Bax、Caspase-3蛋白的表达来发挥抗凋亡作用,从而对大鼠RIRI起到保护作用。     

N-乙酰-5-羟色胺对视网膜缺血-再灌注损伤大鼠视网膜 Fas、FasL 蛋白表达的影响

目的　探讨N-乙酰-5-羟色胺（N-acetylserotonin，NAS）对视网膜缺血-再灌注损伤（retina ischemia-reperfusion injury，RIRI）大鼠视网膜Fas、FasL蛋白表达的影响。方法　取健康成年Sprague Dawley大鼠54只，将大鼠随机分为正常组（6只）、RIRI组（24只）与NAS组（24只）；采用高眼压法建立大鼠RIRI模型，依据造模后不同时间点将RIRI组与NAS组大鼠又分为6 h、12 h、24 h及72 h四个亚组。NAS组于造模前30 min腹腔注射NAS（5 mg·kg^-1），RIRI组腹腔注射等剂量的生理盐水。通过HE染色在光学显微镜下观察各组大鼠视网膜形态学变化，并记录各组大鼠视网膜厚度及视网膜神经节细胞数，采用免疫组织化学染色法检测NAS对RIRI大鼠视网膜Fas、FasL蛋白表达的影响。结果　HE染色显示，正常组大鼠视网膜各层细胞分界清晰，形态正常，神经细胞排列整齐；RIRI组大鼠再灌注后6 h视网膜各层出现水肿，以神经节细胞层及内核层较显著，神经节细胞数较正常组减少；随后视网膜水肿进一步加重，神经节细胞继续减少；NAS组大鼠在再灌注后6 h、12 h、24 h 视网膜水肿程度较 RIRI组轻，NAS组在再灌注后72 h视网膜厚度较 RIRI组厚，NAS组各时间点神经节细胞数均较 RIRI组多，差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。免疫组织化学染色显示，正常组几乎未见 Fas⁺细胞。再灌注后6 h，RIRI组视网膜神经节细胞及内核层开始出现少量 Fas⁺细胞；再灌注后12 h，RIRI组视网膜 Fas⁺细胞表达逐渐增多；再灌注后24 h视网膜Fas⁺细胞数达到高峰，棕色阳性染色细胞分布在视网膜神经节细胞层、内丛状层、内核层及神经纤维层；再灌注后 72 h 视网膜 Fas⁺细胞较再灌注后 24 h 减少。NAS组在再灌注后6 h、12 h、24 h、72 h 视网膜 Fas⁺细胞数均较 RIRI组各时间点减少，再灌注后24 h，Fas⁺细胞数达较高水平，随后下降，差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。正常组视网膜可见 FasL 全层低表达。RIRI组再灌注后 6 h，视网膜神经节细胞层和神经纤维层存在少量 FasL⁺细胞；再灌注后12 h FasL蛋白表达逐渐增多；再灌注后24 h FasL⁺细胞数达高峰，可见深棕色的细胞膜及细胞质染色细胞分布在视网膜神经节细胞层、内丛状层、内核层及神经纤维层；再灌注后72 h FasL蛋白的阳性表达逐渐减少。NAS组再灌注后6 h、12 h、24 h、72 h 视网膜FasL⁺细胞数均少于 RIRI组各时间点阳性细胞数，差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。结论　NAS可通过抑制RIRI大鼠视网膜细胞Fas、FasL蛋白的表达，减轻缺血再灌注对大鼠视网膜细胞造成的损伤。