α-芋螺毒素构效关系的研究进展

α-芋螺毒素（α—CTX）是芋螺毒素的重要家族，由12～19个氨基酸、2～3对二硫键组成，是迄今发现的最小的神经肽类毒素。α-芋螺毒素能特异性地抑制肌肉型或神经元型的烟碱型乙酰胆碱受体（nAChR），并能进一步区分不同的神经元型nAChR亚型。由于其相对分子质量小、活性高，不仅可直接开发为疗效特异的镇痛及抗癫痫等药物，还可作为研究神经生物学工具，鉴定nAChR亚型功能。本文对α—CTX研究的最新进展予以评述，着重介绍了α—CTX的作用靶位特性、构效关系及其应用进展。     

神经型烟碱乙酰胆碱α4β2受体显像剂研究进展

神经型烟碱乙酰胆碱受体(nAChRs)与中枢神经系统多种功能和临床症状密切相关，如阿尔茨海默病(AD)、帕金森病(PD)、癫痫及精神分裂症等。神经型nAChRs显像可为从分子水平研究受体功能、神经衰退症状等涉及烟碱受体的病理过程，以及药物的作用机理提供有效的方法；同时还有利于疾病的早期诊断，针对性治疗策略的制定，以及疗效的监测，nAChRs显像剂的研究。     

α-芋螺毒素Lt1.1的克隆、合成及靶点鉴定

目的 发现作用于神经元烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)的拮抗剂,为研制新型镇痛药和神经生物学工具奠定基础.方法 根据芋螺毒素A超家族DNA中保守的内含子及3′端非转录区(3′UTR)设计引物,从中国南海信号芋螺(Conus litteratus)中克隆获得新芋螺毒素Lt1.1序列.固相法合成Rink树脂肽,经裂解、空气氧化折叠、纯化后获得目的肽,利用两步氧化折叠法鉴定其二硫键连接方式.将神经元nAChR各亚基的cRNA在爪蟾卵母细胞中表达,利用双电极电压钳检测通道电流.结果 获得一种新α-芋螺毒素Lt1.1序列(GCCSHPACNVNNPDIC-NH2),其二硫键连接方式为"C1-C3、C2-C4",作用靶点为nAChR α3β2和α3β4亚型,IC50 分别为166.76和190.00 nmol/L.结论 Lt1.1是一种典型的4/7型α-芋螺毒素,其选择性抑制了nAChR α3β2和α3β4亚型.     

神经元烟碱受体研究进展

神经元烟碱受体 (nAChR)是由乙酰胆碱控制开放的阳离子通道。该受体由多种亚基组成 ,结构复杂 ,因而具有不同的药理学和生物物理学性质。本文根据有关nAChR的文献 ,从不同方面综述其研究进展     

芪参益气滴丸对急性心梗大鼠α7nAChR抗炎通路的影响

目的 探讨芪参益气滴丸对急性心肌梗死(AMI)大鼠α7烟碱型乙酰胆碱能受体(α7nAChR)抗炎通路的影响,分析其作用机制.方法 选用45只成年雄性(Sprague-Dawley,SD)大鼠,随机分为假手术组,模型组及治疗组,每组15只.采用结扎左冠状动脉前降支建立AMI动物模型,假手术组仅手术不结扎血管.术后第2d,...     

U50,488H对正常及缺氧心肌细胞L型钙电流的作用

目的 探讨心脏阿片受体和β-受体相互作用的机制。方法 采用全细胞膜片钳技术,观察U50,488H(β-阿片受体选择性激动剂)对正常和缺氧心肌细胞L型钙电流的作用。结果 U50,488H剂量依赖性(0．1～100μmol／L)抑制正常心肌细胞的L型钙电流及异丙肾上腺素(0．1μmol／L)激动的钙电流,而细胞缺氧后,这一抑制作用减弱;U50,488H对Forskolin(10μmol／L)激动的L型钙电流无明显影响。结论 β-阿片受体对β-受体信号的负性调节作用在细胞缺氧后减弱,其作用位点可能发生于β-受体与腺苷酸环化酶环节之间。     

K受体激动剂通过MAPK-ERK 1/2通路对术后认知功能保护作用研究

目的探讨K受体激动剂对体外循环(CPB)后大鼠认知功能的保护作用。方法选取健康成年清洁级雄性SD大鼠48只,按完全随机数字表法将其分为CPB手术组(C组)、CPB+K阿片受体激动剂(U50488H)组(K组)、CPB+U50488H+K阿片受体拮抗剂(Nor-BN)组(NK组)及CPB+U50488H+MAPK-ERK1/2通路特异阻断剂(U0126)组(UK组),每组各12只。应用Western-blot法观察各组大鼠海马组织NF-κB-p65、α7烟碱型胆碱能受体(α7nAChR)、p-erk蛋白水平的表达情况。结果 C组NF-KB-p65蛋白表达水平显著高于K组、NK组及UK组,且K组最低,组间比较,差异均有统计学意义(P <0. 05)。K组、NK组及UK组海马组织中α7nAChR蛋白表达水平均高于C组; NK组及UK组α7nAChR表达水平均低于K组; NK组大鼠α7nAChR表达水平低于UK组;组间比较,差异均有统计学意义(P <0. 05)。K组p-erk蛋白表达水平高于C组、NK组及UK组,组间比较,差异有统计学意义(P <0. 05)。结论 K阿片受体激动剂对认知功能的保护与MAPK-erk1/2通路上调α7n AChR激活胆碱能抗炎通路有关,可激活α7n AChR,抑制核转录因子-κB蛋白表达,减少炎症反应,从而降低CPB所致术后认知功能障碍的发生率。     

吸烟对外周血单个核细胞表达烟碱乙酰胆碱受体的影响

目的研究健康男性外周血单个核细胞（PBMCs）烟碱型乙酰胆碱受体（nAchR）亚型的表达情况及吸烟对其表达量的影响。方法抽取92例健康男性吸烟者和36例不吸烟者的外周静脉血,通过半定量RT-PCR对其nAchR11种亚基（α2～α7、α9、α10、β2～β4）mRNA在PBMCs的中表达情况进行分析。结果11种nAchR亚基只有α2、α5、α6、α7四种亚基mRNA在吸烟者和不吸烟者PBMCs中有表达,吸烟者α5、α7亚基mRNA的表达量比不吸烟者低（均P〈0.01）,而两者α2亚基mRNA的表达无显著性差异（P〉0．05）。结论烟碱与外周血免疫细胞上nAchR的相互作用可能是吸烟导致机体免疫系统功能改变的因素之一。     

神经型烟碱乙酰胆碱受体PET显像放射性配体研究进展

基于人类脑神经型烟碱乙酰胆碱受体(nAChRs) PET显像的研究已取得显著进展,尤以脑内最主要的nAChRs亚型,即α4β2亚型nAChRs(α4β2-nAChRs)显像为著.对于脑内另一种主要的nAChRs亚型,即α7亚型nAChRs(α7-nAChRs)的PET显像研究亦有报道.笔者就近年来神经型nAChRs PET显像放射性配体的研究进展予以综述.     

依色林阻断神经元烟碱受体作用机制的膜片钳研究

依色林阻断神经元烟碱受体作用机制的膜片钳研究郑建全何湘平杨爱珍刘传缋军事医学科学院毒物药物研究所北京１００８５０除了可逆性抑制胆碱酯酶的作用外，依色林尚可直接与烟碱受体相互作用，产生复杂的生物学效应，如对烟碱受体具有弱的激动作用；抑制肌肉终板电流并加...     

慢性缺氧时心脏κ-阿片受体对β-受体信号的调节作用

为研究慢性缺氧时κ—阿片受体对β—受体信号的调节作用及机制,用光谱荧光法测定电刺激引起的细胞内[Ca^2 ]i瞬变,用RT—PCR测定κ—阿片受体mRNA的表达,用Western blot观察缺氧后G蛋白的变化。结果显示,κ—阿片受体选择性激动剂U50488H可明显抑制β—受体激动剂异丙肾上腺素增加[Ca^2 ]i瞬变幅度的作用,慢性缺氧后,该作用明显减弱;κ-阿片受体mRNA的表达和Gi蛋白的活性在慢性缺氧后无明显改变,而小Gs蛋白的活性明显降低。提示κ—阿片受体对β—受体信号的负性调节作用在慢性缺氧后显著减弱。其机制可能部分与介导β—受体信号的Gs蛋白的活性降低有关。     

肾上腺素β受体在大鼠逼尿肌中的表达及功能

为研究β肾上腺素能受体（β-AR）亚型在大鼠膀胱逼尿肌中的表达及介导逼尿肌舒张功能的情况，采用离体逼尿肌条拉力实验观察β-AR亚型特异性激动剂和拮抗剂对逼尿肌舒张功能的影响，以RT-PCR方法观察逼尿肌β受体亚型的分布。结果发现，选择性β1、β2、β3-AR激动剂T-0509、沙丁胺醇与BRL37344A均呈浓度依赖性地抑制KCl诱导的逼尿肌条收缩；低浓度β3-AR拮抗剂和较高浓度的β1、β2-AR拮抗剂能抑制异丙肾上腺素的舒张作用；采用RT-PCR在大鼠逼尿肌可以检测到β1、β2、β3-ARmRNA表达，其中β3-ARmRNA的密度约占总β-AR密度的70％。提示大鼠膀胱逼尿肌上有β1、β2、β3-AR三种亚型存在，可介导大鼠逼尿肌舒张，其中β3-AR起主要作用。     

重症肌无力患者血浆非IgG部分对乙酰胆碱受体功能的作用

为了探讨乙酰胆碱受体抗体阳性重症肌无力患者血浆中的抗体滴度与临床症状之间不平行的原因，作者选用１０例抗体阳性患者作为研究对象，利用ＰｒｏｔｅｉｎＧ层析柱选择性吸附ＩｇＧ的原理从患者血浆中分离ＩｇＧ和非ＩｇＧ两部分，分别观察此两部分对ＴＥ６７１细胞表达的乙酰胆碱受力功能的影响。     

雌激素对穹隆海马伞切断大鼠脑内nAchR的干预作用

目的以双侧穹隆-海马伞切断制作阿尔茨海默病(AD)大鼠模型,观察脑内海马CA1区和皮层区烟碱型乙酰胆碱受体(nAchR)表达的变化,探讨与AD相关的发病机制,并观察雌激素的干预作用。方法健康雌性W istar大鼠,随机分为3组:(1)穹隆-海马伞切断组;(2)雌激素治疗组;(3)假手术对照组;每组大鼠5只。在脑立体定位仪上切断穹隆-海马伞,建立模拟AD动物模型。应用免疫组织化学技术观察AD大鼠海马CA1区和皮层区的nAchR阳性细胞表达的变化,以及应用外源性雌激素的干预作用。结果与对照组大鼠脑内nAchR表达比较,穹隆-海马伞切断组大鼠脑内海马CA1区、皮层区nAchR表达显著减少(P<0.05);与穹隆-海马伞切断组比较,雌激素治疗组海马CA1区、皮层区nAchR表达显著增加(P<0.01),但与对照组比较无显著差异(P>0.05)。结论穹隆-海马伞切断组大鼠脑内海马CA1区、皮层区nAchR的阳性细胞显著减少,补充外源性雌激素治疗后,上述各脑区内的nAchR表达显著增加。nAchR的变化与AD的病理变化过程密切相关,补充雌激素可以干预这种病理过程。     

二苯羟乙酸-3-喹咛环酯(QNB)等与大白鼠脑内毒蕈碱样乙酰胆碱受体的作用

乙酰胆碱受体分为毒蕈碱样乙酰胆碱受体(M-AChR)和烟碱样乙酰胆碱受体(N-AChR)。前者为槟榔碱、氧化震颤素等所激动,而为阿托品、二苯羟乙酸-3-喹咛环酯即QNB等所阻断。后者为小剂量烟碱所激动,而为美加明、筒箭毒等所阻断。QNB为M-AChR阻断剂,50年代Shallk等研究解痉剂时发现它有很强的中枢抗胆碱能作用。60年代发现它对精神行为活动     

α7nAChR通过调节miR-124对心肌梗死大鼠TNF-α转化酶、炎症反应及免疫功能的影响

目的 研究α7nAChR激活对急性心肌梗死大鼠免疫炎症功能的影响并探讨机制。方法 使用成年SD大鼠构建AMI模型设立为AMI组,设立假手术（sham）组为对照;AMI大鼠注射5、10、20 mg/kg α7nAChR激动剂GTS-21,并在20 mg/kg GTS-21基础上联合注射miR-124抑制剂（Inhibitor+GTS-21-20）,每组10只大鼠。统计检测心肌组织梗死面积,试剂盒法检测肌酸激酶（creatine kinase, CK）、CK的MB同工酶（creatine kinase-isozyme MB, CK-MB）、乳酸脱氢酶（lactic dehydrogenase, LDH）、心肌肌钙蛋白（cardiac troponin, cTnT）水平;酶联免疫吸附试验（Enzyme Linked Immunosorbent Assay, ELISA）法检测血清肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α, TNF-α）、白介素-1β（interleukin-1β, IL）-1β、IL-6、核因子-κB（NF-κB）的水平。流式细胞术检测血液CD3+、CD4+和CD8+细胞亚群比例;实时荧光定量PCR（RTqPCR）检测心肌组织中miR-124的水平;荧光素酶报告基因检验miR-124和TNF-α转化酶（TACE）的相互作用。使用蛋白免疫印迹法检测心肌组织中TACE的蛋白表达。结果 与sham组比较,AMI组大鼠的梗死面积、CK、CK-MB、LDH、cTnT的水平均明显增加（P<0.05）,而且NF-κB、TNF-α、IL-1β、IL-6分泌水平和CD3+细胞比例明显上调（P<0.05）,CD4+/CD8+细胞比率下调（P<0.05）。与AMI组比较,AMI联合注射GTS-21后,miR-124的水平增加（P<0.05）,大鼠的梗死面积增加,CK、CK-MB、LDH、cTnT的水平均增加（P<0.05）;而且NF-κB、TNF-α、IL-1β、IL-6的水平下调,以及CD3+细胞比例减少（P<0.05）,但是CD4+/CD8+细胞比率上调（P<0.05）。另外,TACE在AMI中表达上调,而GTS-21明显抑制TACE的表达,并促进miR-124的表达,还确定TACE是miR-124的靶基因。miR-124的抑制剂inhibitor明显减弱GTS-21对大鼠炎症和免疫功能的改善作用（P<0.05）。结论 激活α7nAChR通过上调miR-124从而抑制TACE并改善AMI大鼠炎症和免疫功能。     

逼尿肌不稳定大鼠肾上腺素β及β3受体密度和功能变化的研究

为研究β肾上腺素受体(β-AR)及其亚型β3-AR在膀胱出口梗阻(BOO)型逼尿肌不稳定中的作用,建立大鼠BOO型逼尿肌不稳定动物模型,以离体逼尿肌条拉力实验观察逼尿肌不稳定时异丙肾上腺素(ISO)和选择性β3-AR激动剂BRL37344A对逼尿肌舒张功能的影响,采用放射配基结合法测定BOO型逼尿肌不稳定组和稳定组及正常对照组大鼠逼尿肌β及β3-AR的受体最大结合容量(Bmax)和平衡解离常数(Kd).结果显示,ISO和BRL37344A对不稳定组的作用强度明显低于正常对照组及梗阻后稳定组,梗阻后不稳定组β-AR密度(Bmax)较正常对照组及稳定组明显降低(分别为66.23±6.39、85.85±7.53和81.36±6.72fmol/mg蛋白),β3-AR密度不稳定组同样较对照组及稳定组明显降低(分别为42.34±3.16、61.02±6.38和60.17±5.72fmol/mg蛋白),三组之间β-AR和β3-AR的Kd无明显差异(P＞0.05).提示逼尿肌不稳定时β-AR激动剂松弛逼尿肌的作用减弱,β-AR密度变化可能参与了大鼠BOO后逼尿肌不稳定的发生,高选择性β3-AR激动剂可能用于不稳定膀胱的治疗.     

早期诊断阿尔茨海默病的PET分子探针

阿尔茨海默病(AD)是一种退行性神经功能障碍性疾病,其典型病理学特征是β-淀粉样蛋白斑块、神经纤维缠结和基底前脑乙酰胆碱能损害。PET分子探针,特别是靶向β-淀粉样蛋白斑块、乙酰胆碱酯酶或受体显像的分子探针是最可靠的AD早期检测手段之一。     

不同偶联模式的兴奋性氨基酸受体所介导非洲爪蟾卵母细胞跨膜电流的相互影响

目的 研究不同偶联模式的兴奋性氨基酸受体所介导非洲爪蟾卵母细胞跨膜电流的相互影响.方法 用异硫氰酸胍-酚-氯仿法从成年大鼠脑中提取总RNA,以寡聚脱氧胸苷酸纤维素亲和层析法分离出mRNA并注射入非洲爪蟾卵母细胞使表达,通过全细胞双电极电压钳位法,分别以M-胆碱受体Carb,谷氨酸离子型受体激动剂kainate(KA),代谢Ⅰ型受体激动剂quisqualate(QA)及代谢Ⅲ型受体激动剂L-phosphoserine(L-SOP)两两同时灌流有受体表达的非洲爪蟾卵母细胞.结果 3种偶联模式的受体激动后产生的膜电流具有交叉脱敏现象.结论 在多种受体共存的细胞中,受体之间可能存在着广泛的相互作用.     

β受体阻滞剂治疗心血管病应用问题解答

问：β受体阻滞剂抗心肌缺血的主要机制有四deg答：主要机制有以下几种：1．1降低耗氧量（MVO2）β受体阻滞剂可以通过阻断pl受体，减慢心率及传导，使心排出量减少，并使后负荷降低，从而降低MVOZ，达到抗心肌缺血的作用。1．2增加缺血区供血供氧百（1）心肌血重新分配小受体阻滞剂因阻断了冠脉的β2受体，即使是选择性β1受体阻滞剂也有微弱阻断民受体作用，致a受体占优势，引起冠脉收缩，但此时主要表现为非缺血区冠脉阻力增加，而缺血区血管阻力处于代偿性扩张，导致血液从非缺血区通过侧支流向缺血区，改善缺血区的供血供氧；（2）…