LPS对晶状体上皮细胞TLR4和CD14 mRNA表达的影响

目的:探讨脂多糖(LPS)对晶状体上皮细胞(LECs)Toll样受体4(TLR4)和CD14表达的影响。方法:采用不同浓度的LPS与体外培养的牛LECs共同孵育不同时间,再用一步法反转录多聚酶链反应(PCR)检测LECs中TLR4mRNA和CD14mRNA的表达。结果:50μg/LLPS组、100μg/LLPS组、200μg/LLPS组、500μg/LLPS组、1000μg/LLPS组的LECs中TLR4mRNA的表达均分别显著高于对照组(P0.01);100μg/LLPS作用24h、48h、72h后LECs的TLR4mRNA表达均显著高于对照组(P0.01);100μg/LLPS作用24h后LECs的CD14mRNA表达亦显著高于对照组(P0.05)。结论:LPS可促进LECs中TLR4mRNA和CD14mRNA的表达,提示白内障手术后眼内细胞反应和后发性白内障的发生发展可能与TLR4和CD14表达增加有关。     

α-MSH对内毒素诱导小鼠腹腔巨噬细胞CD14和TLR4 mRNA表达的影响

目的 :内毒素 (LPS)是革兰氏阴性细菌细胞膜的主要成分 ,能引起机体广泛的免疫反应 ,短时间内通过其相应的受体产生大量的促炎因子和共刺激因子。CD14和TLR4是内毒素跨膜信号转导的关键受体。α -黑色素细胞刺激素 (α -melanocyte -stimulatinghornone ,α-MSH)有拮抗内毒素的作用 ,但是其作用环节及机制还不清楚。本实验通过研究α -MSH对LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞CD14和TLR4mRNA表达及NO产生的影响 ,进一步探讨α-MSH的抗内毒素作用机制 ,从而为防治内毒素引起的疾病提供理论依据。方法 :用半定量RT -PCR技术检测LPS诱导…     

α-MSH对脂多糖诱导小鼠腹腔巨噬细胞SOCS-3mRNA表达的影响

目的:观察α-黑色素细胞刺激素(α-MSH)对脂多糖(LPS)诱导小鼠腹腔巨噬细胞SOCS-3mRNA表达及NO释放的影响,以探讨α-MSH拮抗LPS的作用机制。方法:用半定量逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)的方法检测LPS诱导体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞SOCS-3mRNA表达水平和给予α-MSH后对SOCS-3mRNA表达的影响;用Griess试剂检测单独给予LPS与同时给予α-MSH和LPS作用巨噬细胞后对NO生成量的影响。结果:未受LPS刺激的小鼠腹腔巨噬细胞表达低水平的SOCS-3。LPS组SOCS-3的表达和NO的生成显著高于对照组,而同时给予α-MSH和LPS培养,巨噬细胞的SOCS-3的表达明显低于LPS组,NO的生成则几乎完全阻断。结论:LPS在启动炎症的过程中可能也激活了SOCS介导的负调节机制;但SOCS可能不参与α-MSH的抗LPS作用。     

八肽胆囊收缩素抑制脂多糖诱导的大鼠肺间质巨噬细胞CD14的表达

目的:初步探讨八肽胆囊收缩素(CCK-8)对体外脂多糖(LPS)激活大鼠肺间质巨噬细胞(IM)的调节作用。方法:分离大鼠肺IM,经LPS、CCK-8、CCK受体拮抗剂丙谷胺及溶剂单独或共同孵育后,测定细胞CD14的表达及上清中TNF-α含量。 结果:LPS(1 mg/L)孵育12 h,肺IM mCD14表达上调,上清中sCD14及TNF-α含量均明显增加;CCK-8(10^-7-10^-6 mol/L)抑制了LPS的上述效应,且可被丙谷胺所拮抗。结论:CCK-8对LPS激活的肺IM的部分功能具有抑制性调节作用,该作用是由其受体介导的,可能是CCK-8减轻内毒素血症时肺组织炎性变化的重要机制之一。     

地塞米松对小鼠脾脏巨噬细胞内TLR4和TLR2表达的影响

为观察小鼠脾巨噬细胞内的TLR4和TLR2在脂多糖 (LPS )刺激后 ,地塞米松 (Dx )对其表达量的影响 ,在向BALB/c小鼠腹腔内注射LPS和Dx后采用贴壁法分离小鼠脾巨噬细胞 ,通过半定量RT PCR方法测定了TLR4和TLR2mRNA的表达量。结果显示 :①LPS刺激后 ,小鼠脾巨噬细胞内TLR4mRNA显著上调 (吸光度比为 0 11) ,TLR2上调不明显 (吸光度比为0 0 0 8) ;②预先注射不同剂量Dx ,分别为 0 1mg/kg、 1mg/kg、 10mg/kg ,再用LPS刺激小鼠。注射了Dx后巨噬细胞TLR4mRNA表达量较单纯注射LPS的小鼠显著降低 (吸光度比分别为 0 0 93、 0 0 5 0和 0 0 14 ) ;但TLR2mRNA表达量随着Dx使用剂量增加而增加 (吸光度比分别为 0 0 5 4、 0 0 80和 0 16 1)。该项研究表明TLR4是参与LPS引起炎症反应的主要Toll样受体 ,而TLR2不起主要作用 ;Dx对LPS刺激后TLR 4mRNA的表达有抑制作用 ,而对TLR2mRNA的表达有增强作用 ;Dx抑制LPS引起的炎症反应可能与抑制TLR4的表达有关     

蜂胶对脂多糖诱导的血管内皮细胞中PC-PLC活性和TLR4表达的影响

目的: 探讨在脂多糖(LPS)诱导的条件下中国蜂胶对血管内皮细胞(VECs)磷脂酰胆碱特异性磷脂酶C (PC-PLC)活性和TLR4表达的影响。方法: 将100 μg/L LPS 加入到含0.5%血清的培养液中培养VECs,经12.5 mg/L的中国蜂胶分别处理12 h和24 h后,SRB法测定细胞存活率;化学法测定NO含量;以L-α-卵磷脂为底物测定PC-PLC的活性;Western blotting检测TLR4、核因子κB p65(NF-κB p65)和p53的表达;细胞内活性氧(ROS)和线粒体膜电位分别通过荧光探针DCHF和JC-1检测。结果: 中国蜂胶处理LPS诱导的血管内皮细胞24 h并不影响细胞存活率,但降低NO的含量和ROS的水平;处理12 h后降低PC-PLC活性和NF-κB p65表达;处理12 h和24 h后降低TLR4和p53的表达。此外,中国蜂胶不影响细胞内线粒体膜电位的水平。结论: 中国蜂胶通过降低PC-PLC活性和TLR4表达,抑制其下游信号分子NF-κB p65、p53的表达和ROS的水平,以及抑制NO的释放,从而发挥抗炎功效。     

TNF-α对小鼠肺泡巨噬细胞CD14和清道夫受体表达的影响

本研究旨在通过观察TNF-α对肺泡巨噬细胞(AM)清道夫受体(SR)、CD14表达的影响，探讨TNF-α在内毒素血症时AM由早期防御性(清除、灭活内毒素)向后期效应性(释放大量的致炎与抗炎因子)转变中的作用。分离培养小鼠AM，以不同剂量TNF-α(0，0．001，0．01，0．1，1，10，100μg／L)刺激细胞16h或以100μg／L TNF-α刺激细胞不同时间(0，2，4，6，8，12，16，24h)，采用免疫细胞化学及RT-PCR方法观察SR、CD14表达变化。结果显示，以低至0．1μg／L TNF-α刺激16h或100μg／L TNF-α刺激6h以上就能显著增强CD14并抑制SR蛋白的表达，实验同时显示，CD14mRNA、SRmRNA表达也显著增强，SRmRNA表达变化与SR蛋白表达趋势不一致。研究结果提示，TNF-α能通过增强CD14蛋白表达并抑制SR蛋白表达而在内毒素血症时小鼠AM由免疫防御型向炎症效应型转变中发挥重要作用。     

人参二醇组皂苷对LPS致休克大鼠肝脏TLR2、TLR9 mRNA表达的影响

目的：观察人参二醇组皂苷(PDS)对TLR2和TLR9 mRNA表达的影响,探讨PDS抗休克的分子生物学机制。方法:大鼠随机分为对照(control)组、LPS休克(LPS)组、人参二醇组皂苷小剂量(LPS+PDSL)组和人参二醇组皂苷中剂量(LPS+PDSM)组。大鼠舌下静脉注射LPS(4 mg/kg)4 h后测定血清中NOS活性、NO含量，肝组织中LPO含量、SOD活性以及TLR2、TLR4 mRNA的表达。结果:LPS+PDSL组和LPS+PDSM组NOS活性、NO含量和LPO含量明显低于LPS组，SOD活性明显高于LPS组(P<0.05)；LPS+PDSL组和LPS+PDSM组TLR2 mRNA表达明显低于LPS组，TLR9 mRNA表达无变化。结论:PDS通过下调肝组织中TLR2 mRNA表达，降低NOS活性、NO含量，对肝脏有保护作用。     

肝素通过TLR4减少脂多糖刺激的人内皮细胞IL-8表达

目的:观察肝素对脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)刺激的人内皮细胞白细胞介素8(interleukin-8,IL-8)水平的影响,并探讨Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR 4)在其中的可能影响。方法:用LPS(10 mg/L)刺激人肺微血管内皮细胞诱导损伤,肝素治疗组提前15 min分别加入100 U/L及10³ U/L普通肝素,正常对照组加入等量磷酸盐缓冲液。分别在刺激2、6、12 h收集细胞上清,采用酶联免疫吸附法测定上清中IL-8的浓度。在刺激2、6、12 h收集细胞提取RNA,应用实时荧光定量聚合酶链反应检测各组细胞中IL-8、CD14及TLR4 mRNA水平变化。结果:与正常对照组比较,LPS刺激组IL-8 mRNA水平增高,6 h达到高峰,其蛋白水平于12 h达到高峰。LPS刺激下TLR4 mRNA水平增高,6 h达到高峰,肝素降低其水平,差异有统计学意义(P＜0.05)。未检测到CD14 mRNA的表达。结论:LPS刺激下人肺微血管内皮细胞IL-8表达增加。肝素可能通过调节TLR4降低IL-8的水平,从而发挥保护作用。     

CCK-8抑制LPS诱导的大鼠肺间质巨噬细胞TLR4及IL-1β的表达

目的观察八肽胆囊收缩素(cholecystokinin octapeptide,CCK-8)对外源性脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)激活大鼠肺间质巨噬细胞(pulmonary interstitial macrophages,PIMs)Toll样受体4(Toll likereceptor4,TLR4)及IL-1β表达的影响,探讨CCK-8的抗炎作用机制。方法分离培养大鼠PIMs,经LPS、CCK-8及溶剂单独或共同孵育不同时间后,采用Northern blot、ELISA、RT-PCR技术检测TLR4 mRNA、IL-1β及IL-1β mRNA表达的变化。结果LPS(1mg／L)刺激可使PIMs中TLR4 mRNA表达明显增强;随着LPS孵育时间的延长,细胞中的IL-1β含量逐渐增多,24h达高峰,IL-1β mRNA表达水平同时明显升高;CCK-8可剂量依赖性抑制LPS诱导的大鼠PIMs TLR4 mRNA、IL-1β及IL-1β mRNA的表达。结论CCK-8对LPS激活的PIMs TLR4及IL-1β表达有负性调节作用,是CCK-8抗炎作用机制之一。     

IL-10对小鼠肺泡巨噬细胞清道夫受体及CD14表达的影响

本研究旨在观察IL-10对肺泡巨噬细胞（AM），清道夫受体（SR），CD14表达的影响。探讨IL-10在内毒素血症时防止AM由免疫防御向炎症效应转变中的作用。分离培养小鼠AM，以不同剂量（0,0.01,0.1,1,10,100μg/L）IL-10刺激细胞16h或以100μg/LIL-10刺激细胞不同时间（0,2,4,6,8,12,16h)，采用免疫细胞化学及RT-PCR方法观察SR，CD14表达变化。结果显示低至10μg/LIL-10刺激16h或100μg/LIL-10刺激12-24h能显著增强SRmRNA并抑制CD14mRNA表达，SR蛋白表达也显著增强，但CD14蛋白表达无明显变化，IL-10刺激下对SR蛋白表达的增强能降低AM对LPS的反应性，在内毒素血症时防止AM由免疫防御型向炎症效应型转变中发挥重要作用。     

α-MSH对脂多糖部分生物学活性的影响

目的:探讨α-黑色素细胞刺激素对LPS部分生物学活性的影响。方法:本文应用比色法、倒置生物显微镜及流式细胞仪观察小鼠腹腔巨噬细胞释放H₂O₂、中性粒细胞凋亡及FITC-LPS与单核细胞的结合情况。结果:LPS可刺激小鼠腹腔巨噬细胞释放H2O2,而α-MSH与LPS共同培养,则能明显抑制巨噬细胞释放H₂O₂(P<0.01);α-MSH及LPS本身均不影响中性粒细胞凋亡(P>0.05),但在LPS作用下,α-MSH可显著促进中性粒细胞凋亡(P<0.01);并且,α-MSH可降低FITC-LPS与单核细胞的结合率及单核细胞表面的平均荧光强度(P<0.05,P<0.01)。结论:α-MSH不仅能有效抑制LPS刺激巨噬细胞释放H₂O₂、促进LPS作用下的中性粒细胞发生凋亡;而且可干扰LPS与单核细胞的结合,发挥其有效的免疫调控作用。     

失血性休克对内毒素血症小鼠CD14 mRNA表达的影响

观察家兔失血性休克合并门静脉源性轻度内毒素血症动物血压，血浆乳酸，β－Ｇ水平和死亡率的变化，结合小鼠腹腔巨噬细胞内ＣＤ１４ｍＲＮＡ的表达，并对休克增敏内毒素作用的机制进行初步分析。结果表明：输入ＬＰＳ后，失血休克＋ＬＰＳ组动物血压持续显著下降，血浆乳酸。β－Ｇ水平显著升高，且分别明显低于或高于单纯ＬＰＳ或ＨＳ组。     

地塞米松对小鼠哮喘模型脾巨噬细胞TLR2和TLR4 mRNA表达的影响

目的 检测变应性哮喘模型鼠及地塞米松（dexamethasone,DM）处理的模型鼠脾脏巨噬细胞TLR2和TLR4 mRNA的表达.方法 采用贴壁法分离BALB/c小鼠脾巨噬细胞,以SYBR-greenⅠ作荧光指示剂,次黄嘌呤磷酸核糖基转移酶基因（hypoxanthine-phosphoribosyl-transferase gene,HPRT）作管家基因,应用LightCycler实时PCR技术,检测TLR2和TLR4 mRNA与管家基因HPRT cDNA的荧光域值循环数（the number of PCR threshold value cycles,Ct）,分别记为Ct2、Ct4和CtH,计算Ct2、Ct4与CtH的比值（Ct2/CtH、Ct4/CtH）为标本的TLR2和TLR4在mRNA水平上的相对表达量.结果 对照组与哮喘组小鼠Ct2/CtH差异有统计学意义（P＜0.05）,哮喘组TLR2 mRNA表达下调;哮喘组与哮喘DM组小鼠Ct2/CtH差异有统计学意义（P＜0.05）,哮喘DM组TLR2 mRNA表达上调;对照组与哮喘组小鼠Ct4/CtH差异无统计学意义（P＞0.05）;哮喘组与哮喘DM组小鼠Ct4/CtH差异有统计学意义（P＜0.05）,哮喘DM组相对哮喘组TLR4 mRNA表达上调.结论 变应性哮喘模型鼠脾脏巨噬细胞TLR4mRNA的表达并没有变化,没有减弱对病原相关分子模式的识别;而变应性哮喘模型鼠脾脏巨噬细胞TLR2 mRNA的表达下调;DM可以上调哮喘组TLR2和TLR4 mRNA的表达;其中的机理有待进一步的深入研究.     

TLR4激动对内皮细胞粘附功能的影响及阿托伐他汀的干预研究

目的：观察Toll样受体4（TLR4）激动对脐静脉内皮细胞（HUVECs）氧化低密度脂蛋白受体LOX-1的调节和对单核细胞与HUVECs粘附率的影响，以及LOX-1在内皮细胞粘附功能中的作用，并观察阿托伐他汀的干预作用方法：RT-PCR方法检测TLR4、LOX-1 mRNA表达水平，流式细胞术检测TLR4、LOX-1蛋白表达水平，细胞计数法计算单核细胞与HUVECs粘附率。结果：脂多糖(1 mg/L) 孵育24 h上调HUVECs TLR4、LOX-1 mRNA和蛋白的表达，增加单核细胞与HUVECs粘附率,抗LOX-1抗体部分抑制LPS介导的单核细胞与HUVECs粘附率的增加，阿托伐他汀（10 μmol/L）抑制脂多糖介导的上述效应。结论：TLR4激动上调LOX-1表达及增加内皮细胞粘附功能，LOX-1在LPS介导的单核内皮细胞粘附功能中起部分作用，阿托伐他汀可能通过抑制TLR4表达及TLR4 介导的LOX-1表达而发挥其内皮细胞保护作用。     

HDM通过肺泡巨噬细胞TLR4诱导哮喘小鼠气道炎症的机制研究

目的:研究HDM通过肺泡巨噬细胞(AM)Toll样受体4(TLR4)的高表达及诱导AM的活化,探讨其对哮喘小鼠气道炎症的影响.方法:BALB/c小鼠随机分为哮喘模型组(OVA)A,HDM处理组(HDM+OVA)B,对照组(生理盐水)C.用卵白蛋白(OVA)致敏与激发建立小鼠哮喘模型;HE染色观察小鼠气道及肺组织病理变化;光学显微镜下观察小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞分类及计数;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠BALF上清中IL-4、IL-5、IL-13和IFN-γ的含量,实时定量PCR法测定AM的TLR4的表达,流式细胞技术(FCM)检测AM的CD80、CD86的表达.结果:与A组相比,B组BALF上清中IL-4、IL-5和IL-13的水平显著增高(P<0.05),而IFN-γ差异无统计学意义(P>0.05),与A组相比,AM的TLR4mRNA表达明显增高(P<0.05),CD80的表达差异无统计学意义,CD86的表达水平显著增高,差异有统计学意义(P<0.05).结论:HDM通过AM的TLR4的高表达诱导AM的活化,加重哮喘的气道炎症.     

TLR2及TLR4在侵袭性肺曲霉病小鼠中的表达

目的 研究Toll样受体(TLR)2和TLR4在侵袭性肺曲霉病小鼠中的表达,探讨TLR2和TLR4在侵袭性肺曲霉病中的作用. 方法 将小鼠分为3组:A组为正常对照组;B组为未免疫抑制但感染烟曲霉菌组;c组为侵袭性肺曲霉病(IPA)模型组,给予免疫抑制并感染烟曲霉菌.在感染后8、24、48和72 h时相点,处死小鼠,取肺组织,采用组织病理学方法观察肺组织的病理损伤,RT-PCR法检测肺组织各个时相点的TLR2、TLR4、TNF.ot和β-tublin的表达.TLR2、TLR4、TNF-α的PCR产物电泳条带的扫描密度值与同时扩增的β-tublin电泳条带的扫描密度值的比值用以表示TLR2、TLR4和TNF-α的相对表达水平. 结果 病理观察结果显示,对照组小鼠的肺组织结构正常;正常小鼠感染烟曲霉菌后,小鼠的肺组织有炎症细胞浸润、出血等炎症反应,但未见孢子萌芽生成菌丝;而IPA模型小鼠的肺组织病理损伤严重,可见炎症细胞浸润、肺泡塌陷伴随出血,孢子聚积并萌芽生成菌丝.8、24、48 h 3个时间点的TLR4和24、48 h两个时相点的TNF-α在IPA模型小鼠肺组织中的表达要低于烟曲霉菌感染的正常小鼠(P<0.05),而TLR2在烟曲霉菌感染的正常小鼠和IPA模型小鼠肺组织中呈现低表达,但24、72 h时相点的TLR2在IPA模型小鼠的表达要低于烟曲霉菌感染的正常小鼠(P<0.05). 结论 TLR4及其下游分子TNF-α在IPA模型小鼠肺组织中低表达,在组织病理镜检中可见肺曲霉病典型肺组织病理损伤和孢子生成菌丝.     

LPS对MRL/MpJ小鼠脾T细胞表达TLR4和TNFα的影响

研究Toll样受体 4 (TLR4 )在MRL/MpJ小鼠脾细胞的表达状况和革兰阴性菌脂多糖 (LPS )刺激后TLR4的表达变化以及对TNF α产生的影响。MRL/MpJ小鼠经腹腔注射LPS后在不同时间取脾细胞 ,用三色荧光标记流式细胞仪技术检测小鼠脾T细胞TLR4的表达情况 ,并与BALB/c小鼠作对照 ;通过RT PCR观察LPS刺激前后脾T细胞TNF αmRNA的表达变化。结果表明TLR4在MRL/MpJ小鼠CD3+ CD4 + T细胞和CD3+ CD8+ T细胞中均有表达 ;但TLR4 + /CD4 + 细胞表达仅BALB/c小鼠的 33% ,在受LPS刺激后 ,MRL/MpJ鼠CD4 + T细胞TLR4升高时间较BALB/c小鼠延迟 ;CD8+ T细胞TLR4在LPS刺激前后无明显变化 ;脾细胞TNF αmRNA水平升高亦延迟。通过对干燥综合征样自身免疫病鼠模型MRL/MpJ小鼠脾T细胞TLR4的表达及功能研究 ,将有助于认识天然免疫和获得性免疫间的联系和感染在自身免疫病发病中的作用。     

糖尿病大鼠肺泡巨噬细胞TLR4的表达及对LPS反应性的研究

目的 观察糖尿病大鼠肺泡巨噬细胞Toll样受体4(TLR4)的表达水平及其对脂多糖(LPS)反应性的变化,探讨该变化在糖尿病机体防御病原体感染中的作用.方法 将32只Wistar雄性大鼠用随机数字表法分为正常组(A组)、糖尿病组(B组)、正常+LPS组(C组)及糖尿病+LPS组(D组).用免疫细胞化学染色法、RT-PCR及Western blot方法检测各组大鼠肺泡巨噬细胞TLR4表达的变化.结果 B组及C组大鼠肺泡巨噬细胞TLR4表达与A组相比均明显增高(P<0.001);D组大鼠肺泡巨噬细胞TLR4表达较B组及C组升高更为明显(P<0.001).结论 与正常大鼠相比,糖尿病大鼠肺泡巨噬细胞TLR4表达明显增高,LPS刺激后其增高更加显著,提示糖尿病机体处于促炎症状态,相关的机制尚有待深入的研究.