原位酶免疫法对快速复制并致细胞病变的甲型肝炎病毒HM175A.2株作感染性滴定

作者用甲型肝炎病毒(HAV)HM175A.2株感染BS-C-1细胞,获感染性病毒,经观察细胞致病作用(CPE)测得其感染性滴度为1×10~6半数组织培养感染量(TCID_(50))/ml。分装,-70℃保存。将此HAV纯化后注射豚鼠制备抗-HAV超免疫血清,并预留豚鼠的免疫前血清。在96孔细胞培养板上接种病毒进行原位酶免疫试验(EIA)测定病毒感染性滴度,并以CPE滴定法作对照,以评价EIA的准确性和可靠性。     

胰岛素酶联免疫测定法的研究快速制备高质量胰岛素抗血清(Ⅰ)

本文报告制备胰岛素抗血清的新方法。每只免疫动物的胰岛素用量为200～300μg.免疫时间60天。经放射免疫分析,10株抗血清的50%B/T稀释度均大于1:10万,最高者达1:26万。用计算机进行Scatchard分析,10株抗血清的Ka_1均大于1.5×10~(12)L/M,Ka_2均小于4×10~(?)L/M。[Ab~·]_1,在0.5～1.6×10~(-12)M/L之间,[Ab~°]_2均大于1×10~(-11)M/L。10株抗血清与前胰岛素、胰多肽和胰高血糖素进行放免分析,均无交叉反应。     

流行性出血热病毒Rn9株的毒力研究

流行性出血热Rn9株病毒经脑内接种新生乳小白鼠,适应传代后,可使乳鼠发病死亡,并在乳鼠脑、肺、脾、肝、肾检出病毒抗原,感染后14天血清中亦可检出特异性抗体,滴度为1:20。通过乳鼠脑传5代的病毒毒力测定属于弱毒力株(ID_(50)10~(-6·6~3),LD_(50)10~(-4·95)),乳鼠于接种后16～18天内发病死亡,表现嗜神经性特征。     

采用PLC/PRF/5细胞培养甲型肝炎病毒连续生产血清学诊断用抗原

作者以甲型肝炎病毒(HAV)CF53株感染人肝癌细胞系PLC/PRF细胞后,将细胞在含有2.5%胎牛血清(FCS)的RPMI 1640营养液中32℃培育6～12个月。自开始培养后20天起,每周收获培养上清液,总共可收获5～101上清液。上清液经2000×g离心10分钟,澄清后贮存于-70℃。用放射免疫法(RIA)检出每代的HAV抗原(HAAg)滴度约为50;而传染性病毒滴度则由10~(3.7)半数组织培养感染量(TCID_(50))/ml增至10~(6.0)TCID_(50)/ml。     

用细胞培养方法大规模生产甲型肝炎病毒:感染类型对病毒产量和细胞完整性的影响

过去曾报道从持续感染甲型肝炎病毒(HAV)HAS-15株的1×10~6cm~2细胞的细胞溶解物和350L细胞上清液中能获得约5mg纯化病毒.但作者发现在持续感染过程中病毒的得率会明显下降.为此,对大量生产HAV的不同细胞培养条件进行了研究.作者将持续感染HAS-15株的恒河猴胎肾(FRHK4)细胞培养了3年,比较不同胎牛血清(FCS)浓度和培养时间对病毒产量的影响.结果发现培养液中FCS减少至10%,同     

瑞香素的抗疟作用及其高效液相色谱分析方法

目的研究中药瑞香素在体外和体内的杀疟原虫裂殖体作用、抗红细胞外期疟原虫作用及其高效液相色谱(HPLC)分析方法。方法在恶性疟原虫FCC1株常规体外培养中测试瑞香素杀裂殖体活性,并按“4d抑制试验”在感染伯氏疟原虫ANKA株的小鼠中测定不同剂量瑞香素的体内抗疟活性。于癌症研究所(ICR)小鼠腹腔注射约氏疟原虫子孢子后0.5h灌胃给药,连续4d。不同剂量的瑞香素及瑞香素与伯氨喹(PQ)配伍用药的抗疟作用分别以第8天ICR小鼠阴性率及第12天或第13天ICR小鼠每千个红细胞被原虫感染数评价。再以高效液相色谱及质谱的方法分析鉴定瑞香素及其两个结构类似物:香豆素,7-羟基香豆素。结果体外试验中瑞香素在1~10滋mol/L剂量范围内有明显杀裂殖体作用,而体内试验中按第5天减虫率与感染鼠在30d内的平均生存天数评价,50或100mg·kg-1·d-1×4d瑞香素灌胃以及10、50或100mg·kg-1·d-1×4d瑞香素腹腔注射给药在伯氏疟原虫ANKA株感染鼠中的抗疟作用与10mg·kg-1·d-1×4d氯喹(CQ)灌胃的疗效相似。瑞香素的剂量范围为每天10～100mg/kg,连服4d,第8天原虫阴性小鼠数及第12天红细胞被感染程度与对照组相比差异均无显著性;瑞香素每天50mg/kg和每天PQ5mg/kg配伍组的第8天小鼠阴性率与PQ每天10mg/kg组相当。运用特定的高效液相色     

甲型肝炎减毒活疫苗候选株在黑猩猩中的研究

本文介绍经狨猴、恒河猴胚肾细胞(FRhK6)和人二倍体肺成纤维细胞适应传代的甲型肝炎病毒(HAV)CR326株的9株变异株在黑猩猩中进行免疫原性和保护性试验的结果。每株变异株感染2只黑猩猩,每只静脉接种1.0ml。定期采血及作肝穿刺,测定血清谷丙转氨酶(SGPT)活性、甲型肝炎抗体(抗-HAV)及肝脏病理变化;每天收集感染的黑猩猩大便标本,以固相放射免疫试验测定甲型肝炎抗原(HAAg)。攻击用毒株为CR326株13代狨猴肝标本,攻击量为10~6狨猴50％感染剂量。     

感染甲型肝炎病毒的黑猩猩模型接触后接种疫苗的效果

4只首次用于实验的黑猩猩经检测血清抗甲型肝炎病毒(HAV)抗体阴性.给每只动物口服1ml含10~2黑猩猩口服感染剂量(COID)HAV SD-11株的10%过滤的粪便悬液.1只黑猩猩在感染HAV 1天后肌肉注射1ml福马林灭活的HAV疫苗(720 ELISA单位),另1只在感染后3天注射疫苗.还有两只为不免疫对照动物.每周检测两次血清丙氨酸基转移酶     

免疫血清球蛋白及注射免疫血清球蛋白者血清中甲型肝炎病毒中和抗体

作者采用一种新的敏感的放射免疫灶抑制试验(RIFIT)检测5批免疫血清球蛋白(ISG)及注射ISG者血清中的甲型肝炎病毒(HAV)中和抗体。试验所用HAV为适合细胞培养的HM-175株。用等体积的氯仿提取2次,其滴度为8～12×10~5个放射免疫灶形成单位(RIFFU)     

破伤风的危险因素与预防接种的效益

一、危险因素: 感染破伤风的危险性是普遍存在的,但其大小则受多种因素的影响,这些因素的结合决定着“感染力”。Bytchenko等对这些因素加以分析,给出定量值,并且认为一般人群的破伤风发病率(M)可由下列公式表示: M=X·F1·F2·F3·F4·F5·F6·F7 X—1个月龄以上的人口数、10万 F1～F7—7种定量的危险因素,包括: (一)社会经济因素:F1—化脓性外伤率(0.1～0.3)。F2和F3—得到预防接种和     

一种新的甲型肝炎侯选疫苗的高度免疫原性及良好耐受性

作者在52名甲型肝炎病毒(HAV)抗体阴性的健康志愿者中评估了一种新的福马林灭活、以明矾为佐剂的甲型肝炎全病毒疫苗(VAQTA)的免疫原性及耐受性.疫苗病毒从1例感染HAV CR326F株的病人粪便中分离获得,经恒河猴肾细胞(FRhK6)及人二倍体成纤维细胞(MRC-S)连续传代得到足够量的减毒HAV,由化学方法裂解细胞培养液获取病毒,再经聚乙二醇浓缩,高压液相层析纯化至纯度达90%,福马林37℃灭活5天,期间除菌过滤两次.受试者初免剂量为1ml,经三角肌注射,6个月后加强免疫1次.初免后两周,受试者除1人外(98%),抗HAV抗体浓度均超过设定的最低保护水平10IU/L,抗体几何平均浓度(GMC)为165IU/L.4周后受试者100%抗体阳转,抗体GMC增加4倍,达728IU/L.初免后6个月,50名加强免疫的志愿者除1人外(98%),抗HAV抗体均维     

用异倍体猴传代细胞系制备的甲型肝炎灭活疫苗的特性

本文报告了甲型肝炎灭活疫苗的实验室制备方法及某些特性。选用甲型肝炎病毒(HAV)LBA-86株在健康的非洲绿长尾猴肾传代细胞系上培养,传20代后,HAV水平稳定在10~(7.5)～10~(8.0)。半数组织培养感染量(TCID_(50))/ml。接种病毒后14～21天收获的、与上清液混合的感染细胞裂解物作为原苗,然后经低速离心和进一步提纯,有效地去除细胞和血清蛋白以及底物DNA。每剂疫苗浓度降至50～90pg,即没有超过世界卫生组织专家组推荐的上限为100pg的水平。     

克拉维酸钾/羟氨苄青霉素(1∶4)分散片生物等效性的研究

目的　18名男性健康受试者采用随机交叉给药方法 ,单剂量口服试验制剂阿莫西林 克拉维酸钾分散片 (4∶1)和参比制剂阿莫西林 克拉维酸钾片 ,阿莫西林 5 0 0mg,克拉维酸钾 12 5mg,进行人体生物利用度和药代动力学比较。 方法 　用HPLC二极管阵列检测器同时测定阿莫西林和克拉维酸钾血药浓度。 结果 　试验制剂和参比制剂中阿莫西林的Tmax 分别为 1 2 5± 0 38h和 1 2 5± 0 38h ,Cmax 分别为 14 49± 1 42 μg/ml 和14 46± 1 40 μg/ml,AUC0 -Tn 分别为 5 2 87± 5 32 μg·h/ml和 5 2 79± 5 38μg·h/ml,AUC0 -inf分别为 5 5 36±5 2 3μg·h/ml和 5 5 41± 5 43μg·h/ml;试验制剂中羟氨苄青霉素的相对生物利用度 (F) :F (AUC(0 -Tn) )为10 0 2 0 % ,F(AUC(0 -inf) )为 99 97%。试验制剂和参比制剂中克拉维酸钾的Tmax分别为 0 92± 0 2 4h和 0 94±0 2 8h ,Cmax 分别为 2 2 7± 0 34 μg/ml和 2 2 6± 0 32 μg/ml,AUC0 -Tn 分别为 4 74± 0 85 μg·h/ml和 4 71±0 77μg·h/ml,AUC0 -inf分别为 4 92± 0 86 μg·h/ml和 4 89± 0 77μg·h/ml,试验制剂中克拉维酸钾的相对生物利用度 (F) :F(AUC(0 -Tn) )为 10 0 46 %、F(AUC(0 -inf) )为 10 0 5 7%。 结论 　两种制剂的     

不同相对分子质量壳聚糖乳酸盐体外抑菌实验研究

目的观察不同相对分子质量壳聚糖乳酸盐体外抑制细菌的效果。方法采用试管二倍稀释法测定不同相对分子质量壳聚糖乳酸盐对常见致病菌的最低抑菌浓度(MIC),同时对两株质控菌进行最低杀菌浓度(MBC)测定。并以盐酸左氧氟沙星作为对照药。结果相对分子质量为10、30、50kDa的壳聚糖乳酸盐对50株革兰阳性球菌和50株革兰阴性杆菌的MIC90分别为0.5～1mg·mL-1和1～4mg·mL-1、0.5～1mg.mL-1和1～4mg·mL-1、0.5～1mg·mL-1和0.5～4mg·mL-1。4mg·mL-1浓度的10kDa壳聚糖乳酸盐对金黄色葡萄球菌ATCC25923株和大肠杆菌ATCC25922株具有杀菌作用。结论相对分子质量为10、30、50kDa壳聚糖乳酸盐对4种实验细菌均有一定的体外抑菌效果,其中以相对分子质量10kDa较强。相对分子质量10kda的壳聚糖乳酸盐对金黄色葡萄球菌ATCC25923株和大肠杆菌ATCC25922株有体外杀菌作用,其他相对分子质量的壳聚糖乳酸盐在试验浓度范围内则无体外杀灭细菌的作用。     

HPLC法测定急性淋巴细胞白血病患儿血清中甲氨蝶呤浓度

目的:建立以高效液相色谱法测定急性淋巴细胞白血病患儿血清中甲氨蝶呤浓度的方法。方法:急性淋巴细胞白血病患儿在开始静脉滴注大剂量甲氨蝶呤后24、44、68h时采集血样。血清经高氯酸沉淀蛋白高速离心后,取上清液进样分析。色谱柱为Synergi-4u Fusion-RP80A,流动相为磷酸盐缓冲液(pH6·8)-甲醇(78∶22),流速为0·8mL·min-1,紫外检测波长为306nm,柱温为30℃。结果:甲氨蝶呤检测浓度在0·05~2·50μmol·L-1(r=0·9991)和2·50~100·0μmol·L-1(r=0·9998)范围内线性关系良好。日内、日间RSD分别为(4·09±1·69)%、(4·21±1·27)%;平均方法回收率为(99·86±1·38)%,平均提取回收率为(68·85±1·46)%;最低定量限为0·05μmol·L-1。20例患儿24、44、68h时血清甲氨蝶呤平均浓度分别为(38·2±10·7)、(0·46±0·36)、(0·10±0·07)μmol·L-1。结论:本方法采样量小,操作简便,测定结果准确可靠,适用于临床甲氨蝶呤的血药浓度监测。     

碘化N-正丁基氟哌啶醇对大鼠心肌细胞内钙离子的影响

目的:研究碘化N-正丁基氟哌啶醇(F2)对大鼠心肌细胞内钙离子([Ca2+]i)的影响。方法:采用钙荧光染料Fluo-3-AM负载心肌细胞,在激光扫描共聚焦显微镜上测定细胞内钙离子的变化。结果:在含钙(1.8mmol·L-1)台式液中,60mmol·L-1KCl使细胞内钙荧光强度由1.0增高至1.84±0.35(P<0.01,n=50),分别用0.1、1、10μmol·L-1F2预先孵育心肌细胞,F2可以浓度依赖地抑制钙荧光强度的增高,IC50为1.61μmol·L-1。0.1、1、10μmol·L-1F2使得KCl诱导增高的钙荧光强度从1.92±0.42分别降至1.88±0.39、1.31±0.36和1.09±0.05(P分别>0.05、<0.01和<0.01,n=50),IC50为1.78μmol·L-1。F2不影响静息状态下的细胞内钙的浓度。对咖啡因和三磷酸肌醇介导的细胞内钙的释放均无作用。结论:F2通过阻断心肌细胞膜电压依赖性钙通道降低心肌细胞内钙浓度,这可能是保护心肌缺血/再灌注损伤的机制。     

单剂量与多剂量口服格列齐特缓释片的人体生物等效性研究

目的以上市法国Servier公司格列齐特缓释片为参比药物,研究国产格列齐特缓释片的相对生物利用度,以判断两种制剂是否具有生物等效性。方法20名健康男性志愿者随机交叉单剂量与多剂量口服试验制剂与参比制剂,高效液相色谱法测定血清中药物浓度,应用3P97程序计算主要药代动力学参数,对lnCmax,lnAUC0～T,lnAUC0～∞进行方差分析、双单侧t检验等统计学处理,以80%～125%为等效标准,评价试验制剂与参比制剂的生物等效性。结果单剂量时试验制剂和参比制剂的Cmax分别为(2·07±0·61)mg·L-1和(2·26±0·61)mg·L-1,Tmax分别为(5·10±0·55)h和(5·05±0·51)h,T12Ka分别为(1·50±0·26)h和(1·52±0·27)h,T12Ke分别为(8·89±1·56)h和(8·68±1·72)h,MRT分别为(22·63±1·01)h和(22·38±0·93)h,AUC0～72分别为(39·19±8·03)mg·h-1·L-1和(39·26±8·37)mg·h-1·L-1,AUC0～∞分别为(45·80±9·51)mg·h-1·L-1和(45·57±9·76)mg·h-1·L-1,相对生物利用度F0～72和F0～∞分别为(100·19±6·22)%与(100·85±5·88)%;多剂量达稳态时试验制剂和参比制剂的Cmax分别为(4·83±0·86)mg·L-1和(4·69±0·64)mg·L-1,Cmin分别为(0·68±0·14)mg·L-1和(0·66±0·12)mg·L-1,Tmax分别为(4·10±0·45)h和(4·10±0·55)h,T12Ka分别为(2·03±0·53)h和(2·04±0·40)h,T12Ke分别为(7·24±0·87)h和(7·09±1·14)h,MRT分别为(9·17±0·30)h和(9·19±0·37)h,AUCSS分别为(41·62±6·48)和(42·18±6·03)mg·h-1·L-1,Cav分别为(1·73±0·27)mg·L-1和(1·76±0·25)mg·L-1,DF分别为(240·85%±34·07)和(230·23%±24·80%),相对生物利用度F为(98·60±4·60)%;试验制剂与参比制剂的AUC0～T,AUC0～∞或AUCSS,Cmax和Tmax均符合生物等效性要求。结论国产格列齐特缓释片与法国Servier公司格列齐特缓释片具有生物等效性。     

非那雄胺2种片剂的人体生物等效性研究

目的 :研究 2种非那雄胺片的药动学和相对生物利用度 ,评价其生物等效性。方法 :采用随机交叉试验设计 ,2 2名健康男性志愿受试者单剂量口服 4 0mg受试品和参比品 ,以RP -HPLC法测定血药浓度。结果 :受试品和参比品的药动学参数分别AUC0 2 4 为 (15 97±s 6 10 ) μg·h·L- 1和 (15 6 9± 6 2 9)μg·h·L- 1,AUC0 ∞ 为 (16 80± 6 0 7) μg·h·L- 1和(16 75± 6 2 8) μg·h·L- 1,Tmax 为 (2 .4± 0 .3)h和(2 .3± 0 .3)h ,Cmax为 (2 80± 112 ) μg·L- 1和 (2 84±110 ) μg·L- 1,T1/ 2 分别为 (2 .9± 0 .8)h和 (3.3±1.0 )h。以进口分装非那雄胺 (商品名保列治 )片为参比制剂 ,非那雄胺片生物利用度F0 2 4 为 (10 3±18) % ,F0 ∞ 为 (10 1± 16 ) %。结论 :方差分析及双单侧t检验表明 ,2种制剂具有生物等效性。     

丁苯酞对大鼠体内硝苯地平药动学的影响研究

目的:研究丁苯酞对大鼠体内硝苯地平药动学的影响。方法:取大鼠随机分为对照组(硝苯地平10mg·kg-1)和实验组(硝苯地平10mg·kg-1+丁苯酞80mg·kg-1),每组6只,灌胃给予相应药物,于给药前和给药后0·08、0·25、0·33、0·5、1、1·5、2、2·5、3、4、5h眼底静脉丛取血0·5mL,采用高效液相色谱法测定血药浓度,以DAS2·1·1药动学程序拟合药动学参数。色谱柱为Diamon-silTMC18,流动相为乙腈-水(56:44),流速为1·0mL·min-1,检测波长为238nm。结果:硝苯地平检测浓度的线性范围为0·079～5·080μg·mL-1(r=0·9983),提取回收率为75·67%～81·38%,日内、日间RSD均<7%。对照组和实验组硝苯地平的药动学参数分别为AUC0～∞:(8·23±2·23)、(4·14±1·63)mg·h·L-1,cmax:(2·76±0·79)、(1·85±0·55)mg·L-1,t1/2z:(2·9±1·27)、(2·14±0·84)h,CL/F:(2·61±0·79)、(4·96±1·47)L·h-1·kg-1,其中AUC0～∞、cmax、CL/F差异均有统计学意义(P<0·05)。结论:丁苯酞可使大鼠体内硝苯地平吸收减少、消除加快。     

13种异喹啉类生物碱对体外GLC和HeLa细胞增殖的影响

本文报道了13种异喹啉类生物碱对体外GLC和HeLa细胞增殖影响的结果·首次发现了荷包牡丹碱.克斑宁.普罗托品的体外抗肿瘤活性。千金藤素.小檗胺.粉防己碱、荷包牡丹碱,克斑宁和普罗托品对GLC细胞系增殖的IC_(50)分别为1.61×10~(-5),8.0×10~(-5).1.6 ×10~(-5),2.9 ×10~(-5).2.9×10~(-5)和2.26 ×10~(-5)mol·L~(-1)。千金藤素,小檗胺,粉防己碱,荷包牡丹碱和普罗托品对HeLa细胞增殖的IC~(50)分别为9.7×1O~(-6).1.45×10~(-5).6.4×10~(-5).1.5 ×1O~(-6)和2.32×1~(-5)mol·L~(-1).实验结果提示分子结构中的二氧次甲基可能是该类生物碱具有抗癌活性的必需基团.