脑缺血与小胶质细胞

近几年来人们注意到小胶质细胞作为中枢神经系统(ＣＮＳ)固有的免疫效应细胞参与其免疫反应[1 ] 。经研究发现小胶质细胞在脑缺血后异常活跃 ,缺血性脑损伤所激发的小胶质细胞反应极其复杂 ,已经远远超出了对神经元的营养作用和清除变性坏死组织的范围。现将小胶质细胞在脑缺血病理过程中的形态变化及免疫反应综合如下。1　小胶质细胞的来源和分类早在 2 0世纪西班牙学者ＤｅｌＲｉｏ Ｈｏｒｔｅｇａ在形态学的基础上 ,推测小胶质细胞在胚胎早期来自中胚层的骨髓前驱细胞 ,即单核吞噬细胞系统 ,至今这一观点仍被大多数学者所接受。成年期这…     

神经肽Y对小神经胶质细胞活化状态和生成TNF-α的影响及其作用机制

目的：探讨神经肽 Y（neuropeptide Y,NPY）对原代小神经胶质细胞生物活性及生成肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）的影响及其作用机制。方法培养原代大鼠皮层小胶质细胞,将细胞分为 Control组、脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）组、NPY＋LPS 组、NPY 组和 BIBP3226＋NPY＋LPS 组,分别用无血清胶质细胞培养液、含 LPS 的无血清胶质细胞培养液、含 NPY 和 LPS 的无血清胶质细胞培养液、含 NPY 的无血清胶质细胞培养液和含 BIBP3226、NPY 和 LPS 无血清胶质细胞培养孵育细胞6 h。经免疫细胞化学荧光染色后,显微镜下观察小胶质细胞的形态学变化。ELISA 方法检测培养液中 TNF-α蛋白含量,RT-PCR 方法检测小胶质细胞中TNF-αmRNA 表达水平。结果 LPS 组 TNF-α的含量及细胞中 TNF-αmRNA 表达水平显著高于 Control 组（P ＜0．05）,小胶质细胞处于活化状态;LPS＋ NPY 组与 LPS 组相比,TNF-α蛋白和 mRNA 表达水平明显降低（P ＜0．05）,小胶质细胞活化水平降低;BIBP3226＋NPY＋LPS 组与 LPS＋NPY 组相比,TNF-α蛋白和 mRNA 表达水平显著增高（P ＜0．05）;LPS 组与 BIBP3226＋NPY＋LPS 组差异无统计学意义;NPY 组与 Control 组差异无统计学意义。结论 NPY 可以降低小神经胶质细胞的生物活性,抑制其生成 TNF-α,作用机制可能与 NPY Y1受体有关。     

脂多糖活化小鼠大脑小胶质细胞后炎性细胞因子的表达

目的采用细菌脂多糖（LPS）对原代培养的BALB/c小鼠大脑皮质小胶质细胞进行刺激,检测小胶质细胞IL-1bI、L-6和TNF-α等细胞因子的基因表达情况。方法分离纯化小胶质细胞,采用1μg/ml LPS刺激24h,再采用RT-PCR检测IL-1bI、L-6和TNF-a mRNA表达水平。结果体外培养的小胶质细胞经LPS刺激后,细胞因子IL-1bI、L-6和TNF-a mRNA表达水平明显上调。结论 LPS活化的小胶质细胞可产生大量的炎性细胞因子。     

β淀粉样蛋白诱导大鼠小胶质细胞脂多糖受体CD14和肿瘤坏死因子-αmRNA的表达

目的：研究不同浓度的p淀粉样蛋白（Aβ1-42）诱导大鼠小胶质细胞脂多糖受体CD14和肿瘤坏死因子-αLmRNA表达的变化。方法：小胶质细胞株复苏培养后分为2组：Aβ1-42组和抗CD14加Aβ1-42组。抗CD14加Aβ1-42组使用抗CD14抗体拮抗CD14的表达，再分别用不同浓度的Aβ1-42（0、62．5nmol／L、125nmol／L、250nmol／L）进行干预，2组均在Aβ1-42干预2h后用RT—PCR法检测CD14及TNF—αmRNA表达的量。结果：不同浓度的Aβ1-42干预小胶质细胞2h后，62．5nmol／L与0nmol／L Aβ1-42组CD14mRNA的表达相比较，差异无统计学意义。当Aβ1-42浓度为125nmol／L和250nmol／L时，CD14mRNA的表达逐渐增加（P〈0．05）。使用CD14抗体后，抗CD14加Aβ1-42组中CD14mRNA的表达与Aβ1-42组比降低（P〈0．05）。Aβ1-42组TNF-αmRNA的表达随Aβ1-42的浓度增加而增加（P〈0．05），与Aβ1-42组相比，抗CD14加Aβ1-42组中TNF-αmRNA的表达在Aβ1-42浓度为125nmol／L开始明显受到抑制（P〈0．05）。结论：Aβ1-42诱导的小胶质细胞可通过脂多糖受体CD14使TNF-αmRNA的表达增加，且与Aβ1-42的作用浓度呈正相关。     

双氢青蒿素抑制LPS诱导的小胶质细胞炎症反应

目的 观察双氢青蒿素(dih ydroartemisinin,DHA)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的BV-2小胶质细胞神经炎症反应的影响及其机制.方法 LPS诱导BV-2小胶质细胞活化建立炎症模型,用不同浓度DHA(0.5、1、2、4μmol/L)处理细胞,CCK-8检测细胞活性;选取lμmol/L DHA干预细胞,倒置相差显微镜下观察细胞形态的变化;RT-PCR检测iNOS、IL-1β、IL-6、TNF-α基因表达水平;ELISA检测培养基中IL-1β、IL-6、TNF-α的表达水平;Western blot检测NF-κB、IκBα及TLR4的蛋白表达.结果 低剂量的DHA(＜2μmol/L)对BV-2细胞活性无明显影响(P＞0.05),DHA可抑制LPS引起的BV-2细胞形态变化,DHA抑制活化的BV-2细胞iNOS、IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA的表达(P＜0.01),减少IL-1β、IL-6、TNF-α炎症因子释放(P＜0.01),明显降低TLR4的蛋白表达,减少细胞质内IκBα的表达,并抑制NF-κB向核内移位(P＜0.01).结论 DHA可能通过作用于TLR4/NF-κB通路,抑制LPS诱导的BV-2小胶质细胞NF-κB的激活,从而抑制炎症因子的产生,发挥抗炎作用.     

探索全氟辛烷磺酸对HAPI小胶质细胞炎症反应的影响

目的：探讨全氟辛烷磺酸(perfluorooctane sulfonate,PFOS)对HAPI小胶质细胞的毒性反应及作用机制。方法：用20 nmol/L PFOS处理HAPI小胶质细胞6、12 h后;采用细胞免疫荧光检测活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)的表达;酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-alpha, TNF-α)的分泌量。结果：细胞免疫荧光显示 HAPI小胶质细胞在PFOS处理后,ROS的表达显著增加(P＜0.05);ELISA检测显示TNF-α的分泌量增加并达到(81.00±2.38) pg/mL,而对照组TNF-α为(22.00±1.63) pg/mL。结论：PFOS可以引起HAPI小胶质细胞产生氧化应激并分泌TNF-α。     

氯硝柳胺抑制小胶质细胞炎症作用研究

目的:探讨氯硝柳胺对脂多糖(LPS)诱导小胶质细胞炎症作用的影响。方法:建立脂多糖(LPS)诱导小胶质细胞系BV2炎症反应模型;采用Griess法检测细胞上清中NO释放量,MTT法检测细胞活性;实时定量PCR(qPCR)检测促炎症因子iNOS、COX-2、TNF-α和IL-6的表达量。分析氯硝柳胺对小胶质细胞炎症的影响。结果:氯硝柳胺能够显著抑制LPS激活的BV2细胞中NO释放量;qPCR结果显示,与正常细胞组相比,LPS组BV2中促炎因子的表达水平明显升高;氯硝柳胺显著降低LPS诱导的BV2细胞中促炎因子表达。结论:氯硝柳胺对LPS诱导的小胶质细胞炎症反应有明显抑制作用。     

柿叶黄酮对同型半胱氨酸诱导小胶质细胞细胞因子表达的影响

目的：观察柿叶黄酮对同型半胱氨酸诱导的小胶质细胞表达白介素-1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的影响,并与银杏叶提取物EGb761进行比较。方法将体外培养的小鼠小胶质细胞（BV-2细胞）分成空白对照组、同型半胱氨酸组（Hcy）、Hcy＋EGb761组（100mg/L）和Hcy＋低、中、高（12.5、25、50μg/mL）剂量柿叶黄酮组,培养72h。应用RT-qPCR方法评价各组IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA表达,酶联免疫吸附法（ELISA）测定培养上清液中上述细胞因子的蛋白浓度。结果与空白对照组比较,同型半胱氨酸组细胞内IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA表达和细胞培养上清液中蛋白浓度明显增加（P〈0.05）;与同型半胱氨酸组比较,Hcy＋EGb761组和Hcy＋低、中、高剂量柿叶黄酮组各细胞因子mRNA表达及培养上清液中蛋白浓度均降低（P〈0.05）,尤其是高剂量柿叶黄酮组结果与Hcy＋EGb761组作用相似。结论柿叶黄酮能抑制同型半胱氨酸诱导小胶质细胞表达IL-1β、IL-6和TNF-α,在一定浓度条件下其作用不亚于银杏叶提取物。     

青蒿素对脂多糖活化的小胶质细胞炎症介质释放的影响

目的 探讨青蒿素(artemisinin,ART)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小胶质细胞炎症介质释放的影响，研究青蒿素对帕金森病等慢性神经退行性疾病神经细胞炎症反应的抑制作用及其机制。 方法 采用CCK8法检测ART对BV2小胶质细胞的作用浓度。使用一定浓度的ART来处理经过LPS诱导的小胶质细胞。定量PCR技术和ELISA检测ART对促炎因子白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的影响。采用Western blotting检测核因子-κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)蛋白(P65)、人核因子κB抑制蛋白α(NF-kappa-B inhibitor alpha,IKBα)的表达水平，以及ART对诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)和环氧合酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)基因表达的影响。 结果 当ART的剂量为0.1~10 μmol/L时，BV2细胞的活性无明显变化，因此选择浓度为1 μmol/L的ART用于进一步的实验。定量PCR结果表明，ART预处理组中促炎因子IL-1β、TNF-α mRNA的表达显著降低。Western blotting结果显示，ART预处理组NF-κB、IKBα的蛋白表达水平显著升高，炎症诱导酶iNOS、COX-2的表达水平显著降低。 结论 ART可调节LPS活化的BV2小胶质细胞中炎性因子及炎症诱导酶的表达，发挥抗炎作用，这一作用可能是通过调控NF-κB信号通路来实现的。      

α-硫辛酸对脑出血大鼠小胶质细胞活化的影响

目的 观察α-硫辛酸(ALA)对脑出血大鼠小胶质细胞活化的影响。方法 雄性SD大鼠右侧尾状核注射自体血建立脑出血模型,将其随机分为脑出血组、ALA组;而假手术组注射等量生理盐水。以60 mg/kg ALA灌胃ALA组,等体积花生油溶剂分别灌胃假手术组及脑出血组,均于第1、3、7天后评估神经功能评分,并检测脑组织含水量、血肿周围组织病理改变、小胶质细胞变化、BDNF及TrkB蛋白含量、TNF-α及IL-β表达水平。结果 与假手术组相比较,脑出血组神经功能评分明显降低,脑组织含水量、BDNF及TrkB蛋白含量、TNF-α及IL-β表达水平明显升高;与脑出血组相比较,ALA组神经功能评分、BDNF及TrkB蛋白含量明显升高,脑组织含水量、TNF-α及IL-β表达水平明显降低。结论 ALA对脑出血大鼠的神经保护作用,可能是由于小胶质细胞活化受到抑制,促炎反应得以减轻实现的。     

转小鼠TNFα基因大鼠脑缺血时TNFα表达对小胶质细胞激活的影响

目的：观察转小鼠TNFα基因大鼠脑缺血再灌流不同时间TNFα表达的动态变化及其对小胶质细胞激活的影响。方法：采用线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞模型,用TNFα、整合素QM(OX42)免疫组化染色观察转小鼠TNFα基因大鼠未缺血脑组织及缺血1h再灌注3h、12h、24h、72h、7d时的TNFα表达及小胶质细胞激活状态。结果：转小鼠TNFα基因大鼠缺血1h再灌注3hTNFα表达较未缺血脑组织明显增加,并达峰值,缺血1h再灌注12～72h,TNFα表达仍较显著,但随时间的延长逐渐减少,再灌注7d时,TNFα表达接近缺血前水平。转小鼠TNFα基因大鼠脑组织小胶质细胞缺血1h再灌注3h小胶质细胞极显著地被激活,并达峰值;缺血1h再灌注12h、24h、72h、7d时脑组织小胶质细胞与未缺血脑组织比较显著被激活,但随时间的延长,小胶质细胞激活状态逐渐接近缺血前的水平。结论：脑缺血再灌注后TNFα表达的动态变化与小胶质细胞激活的动态变化完全一致,提示脑缺血再灌注后小胶质细胞的激活主要与TNFα的过度表达有关。     

小胶质细胞在大鼠气压性中枢神经损伤中的作用

目的:观察减压性中枢神经系统损伤及高压氧(HBO)处理后小胶质细胞活性的变化,探讨小胶质细胞在减压性中枢神经损伤中的作用及其可能的机制与HBO效用的机制.方法:动物分为正常对照组、安全减压对照组、致伤组、HBO治疗组.以不安全快速减压大鼠中枢神经损伤模型为实验对象,致伤后6 h给予HBO处理.观察活化小胶质细胞、TNF-α/TACE免疫阳性细胞、神经细胞凋亡,组织内TNF-α含量和脑脊液(CSF)内TNF-α的生物活性.结果:损伤后6 h就可见脑和脊髓组织内IB4阳性活化小胶质细胞,数量的高峰出现在24 h,活化的小胶质细胞出现形态改变.神经元凋亡在损伤后48 h达到高峰.小胶质细胞出现的区域与神经细胞凋亡出现的区域相同.损伤后6 h就可在CNS组织中检测到TNF-α,48 h达到高峰,与IB4阳性细胞及神经细胞凋亡指数呈正相关(P＜0.05).CSF中TNF-α的生物活性也出现相同的变化趋势.TNF-α和TACE免疫阳性细胞形态和分布与IB4阳性细胞类似.HBO治疗可显著减少中枢神经组织中活化小胶质细胞的数量,降低组织和CSF中TNF-α的含量,减少神经细胞凋亡.结论:减压性损伤中枢神经组织内小胶质细胞迅速激活,后者增加毒性物质的表达和分泌,介导继发损伤.HBO能够抑制小胶质细胞反应,降低其活性,减少毒性物质的分泌,起到神经元保护作用.     

枸橼酸铁铵对小胶质细胞释放炎性因子的作用

目的观察枸橼酸铁铵(FAC)对小胶质细胞释放炎性因子的作用。方法分别用脂多糖(LPS)、FAC、LPS+FAC刺激小胶质细胞,采用酶联免疫吸附试验方法检测培养基中白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量。结果对照组和FAC组几乎检测不到炎性因子的释放,LPS组IL-1β、TNF-α释放量较对照组显著增加(F=38.864、102.504,q=8.204、14.369,P0.01),LPS+FAC组IL-1β、TNF-α释放量较LPS组显著增加(q=4.517、5.610,P0.01)。结论 FAC可以刺激激活状态小胶质细胞释放大量炎性因子。     

小胶质细胞活化对术后认知功能障碍影响的研究进展

<正>术后认知功能障碍（postoperative cognitive dysfunction, POCD）是一种记忆力、集中力和信息处理能力方面发生障碍及人格发生改变的神经受损疾病^[1-2]。临床资料显示,手术麻醉清醒后发生认知功能障碍的现象并不罕见,高龄病人身体各项机能衰退,神经系统功能降低,发生POCD的风险更高^[3]。POCD将增加病人的住院时间和医疗费用,甚至将增加病人围手术期的死亡率。     

高乌甲素通过抑制小胶质细胞活化抑制炎症性疼痛

目的 探讨高乌甲素对炎症性疼痛的缓解作用及机制研究。方法 采用完全弗氏佐剂(CFA)诱导大鼠验证疼痛模型,并测定其机械性刺激缩爪域值和热痛觉过敏阈值,评估高乌甲素预处理及后处理的疼痛缓解效果;利用免疫光、荧光定量PCR、Western blot法测定脊髓腰膨大L_4-5段GFAP及OX-42的表达情况,并进行统计学分析。结果 ①高乌甲素预处理组比后处理组有更好的疼痛缓解效果。②与正常组比较,溶剂组中GFAP及OX-42表达量显著升高(P＜0.05)。③高乌甲素处理组能降低脊髓腰膨大L_4-5段OX-42的表达(P＜0.05),然而对GFAP的表达没有显著差异(P＞0.05)。结论 高乌甲素能抑制小胶质细胞的活化,进而缓解炎症性疼痛。     

高糖活化小鼠小胶质细胞BV-2模型的建立

目的 观察高糖（Glu）对小鼠神经小胶质细胞BV-2活化的影响。方法 将BV-2细胞分成：正常对照组（25mmol/L Glu）,脂多糖组（1μg/ml LPS）,高糖组（75mmol/L Glu）,培养24h,倒置相差显微镜观察细胞形态,MTT检测细胞活力,激光扫描共聚焦显微技术、Western blot法及实时荧光定量PCR技术检测BV-2活化的标志物CD11b的表达。结果 高糖组、LPS组细胞活力与正常对照组相比差异均无统计学意义（P >0.05）;高糖组BV-2 CD11b蛋白含量较正常对照组显著升高（P<0.01）,与LPS组类似（P >0.05）;高糖组BV-2 CD11b-mRNA值较正常对照组显著升高（P<0.01）,且显著高于LPS组（P<0.01）。结论 75mmol/L高糖培养BV-2 24h,在不影响细胞活力的条件下,可显著上调BV-2活化标志物CD11b蛋白及mRNA表达,作用与LPS相当。     

HCV感染后小鼠小胶质细胞瘤细胞炎性因子分泌特点的研究

目的了解丙型肝炎病毒（HCV）感染小鼠小胶质瘤细胞（BV2）后Th1／Th2类细胞因子的变化,探讨HCV感染后小胶质细胞的免疫分泌效应。方法体外培养BV2细胞,随机分为HCV阳性血清组、正常人血清组、空白对照组。分别作用24h用倒置显微镜观察细胞形态并收集上清液,ELISA法检测上清液中白介素-12（1L—12）、肿瘤坏死因子α（TNF—α）和白介素-6（IL-6）的含量。结果倒置显微镜下观察显示,HCV阳性血清感染后BV2细胞呈圆形,突起变粗短,部分细胞聚集成团。HCV阳性血清感染组TNF-α、IL-12、IL-6含量均高于正常人血清组与空白对照组,差异有统计学意义（P〈0．01）;正常人血清组和空白对照组差异无统计学意义（P〉0．05）。结论HCV感染BV2细胞后Th1类细胞因子TNF—α、IL-12、和Th2类细胞因子IL-6分泌增强,可能与HCV感染CNS引起的早期炎症损伤有关。     

HCV感染后小鼠小胶质细胞瘤细胞炎性因子分泌特点的研究

目的了解丙型肝炎病毒(HCV)感染小鼠小胶质瘤细胞(BV2)后Th1/Th2类细胞因子的变化,探讨HCV感染后小胶质细胞的免疫分泌效应。方法体外培养BV2细胞,随机分为HCV阳性血清组、正常人血清组、空白对照组。分别作用24h用倒置显微镜观察细胞形态并收集上清液,ELISA法检测上清液中白介素-12(IL-12)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素-6(IL-6)的含量。结果倒置显微镜下观察显示,HCV阳性血清感染后BV2细胞呈圆形,突起变粗短,部分细胞聚集成团。HCV阳性血清感染组TNF-α、IL-12、IL-6含量均高于正常人血清组与空白对照组,差异有统计学意义(P<0.01);正常人血清组和空白对照组差异无统计学意义(P>0.05)。结论 HCV感染BV2细胞后Th1类细胞因子TNF-α、IL-12、和Th2类细胞因子IL-6分泌增强,可能与HCV感染CNS引起的早期炎症损伤有关。