低强度脉冲超声对脂多糖诱导炎性活化的RAW264.7巨噬细胞迁徙和吞噬的影响

目的 探讨低强度脉冲超声（LIPUS）对脂多糖（LPS）活化和未经活化的RAW264.7细胞迁徙和吞噬能力的影响。方法 LPS诱导RAW264.7巨噬细胞建立体外炎症活化模型;通过CCK-8法研究LIPUS对不同环境下RAW264.7细胞活力的影响,划痕实验观察LIPUS对RAW264.7巨噬细胞迁徙的影响,Transwell实验观察LPS作为趋化因素时RAW264.7细胞趋化迁徙能力的变化情况,共聚焦显微镜及流式细胞术分析细胞内FITC荧光强度以探究巨噬细胞吞噬pHrodo Green标记的大肠埃希菌生物颗粒的能力。结果 成功构建活化RAW264.7炎症模型,筛选LPS浓度为100 ng/mL;LIPUS抑制未活化的RAW264.7巨噬细胞向划痕区域内迁徙和未活化巨噬细胞的趋化迁徙;但在当前参数下LIPUS不影响巨噬细胞的细胞活力和吞噬能力。结论 LIPUS抑制经LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞的迁徙,但不影响其吞噬作用。     

低强度脉冲超声对兔关节软骨细胞增殖及Ⅱ型胶原表达的影响

目的 探讨低强度脉冲超声(LIPUS)对体外培养兔关节软骨细胞增殖及其合成Ⅱ型胶原的影响.方法 选取生长状况良好的第3代兔膝关节软骨细胞,随机分为空白组及3种强度的LIPUS干预组,其超声强度分别为40、50、80mW/cm2,其余作用参数相同,中心频率:1.0 MHz,脉冲重复频率:1.0 KHz,脉冲宽度:200 μs,作用周期:50.各LIPUS干预组每日照射20 min,连续照射3d后,采用CCK-8比色法检测软骨细胞增殖情况,免疫组化染色分析Ⅱ型胶原表达量的变化.结果 强度50、80 mW/cm2的LIPUS干预组软骨细胞增殖较空白组显著增多(P＜0.01),且50 mW/cm2LIPUS的作用最为明显,而40 mW/cm2 LIPUS促软骨细胞增殖效应与空白组相比差异无统计学意义(P =0.249);各强度LIPUS组Ⅱ型胶原表达量均高于空白组(P＜0.01),尤以50 mW/cm2 LIPUS组Ⅱ型胶原表达量增加最为显著,优于40、80 mW/cm2 LIPUS的效应(P＜0.01).结论 LIPUS能够促进体外培养关节软骨细胞增殖,增加软骨细胞Ⅱ型胶原的分泌,且强度为50 mW/cm2时效应较为明显.     

低强度脉冲超声波对体外培养的兔骨髓基质细胞成骨作用的影响

目的：研究低强度脉冲超声波（LIPUS）对体外培养的兔骨髓基质细胞（BMSCs）成骨能力的影响。方法：抽取新西兰白兔的骨髓，体外分离纯化获取BMSCs，加入条件培养基后随机分为实验组和对照组；实验组应用LIPUS对BMSCs每天作用20min，对照组未予作用。通过倒置相差显微镜观察细胞增殖分化情况，分别于1、2、3周后停止LIPUS作用，应用碱性磷酸酶（ALP）和Von Kossa染色的方法鉴定细胞成骨性能。结果：BMSCs经LIPUS刺激后，细胞形态变大，核增大，核质比减小；而对照组细胞相对扁平，折光率降低。BMSCs经LIPUS刺激1、2、3周后，ALP活性均较对照组明显增高（P〈0．05）。LIPUS刺激3周后，实验组钙结节像素值较对照组像素值明显增多（P〈O．05）。结论：LIPUS能促进条件培养基中的BMSCs向成骨细胞转化。     

骨髓巨噬细胞内铁测定对贫血的鉴别诊断价值

目的研究骨髓巨噬细胞内铁测定对贫血的鉴别诊断意义。方法骨髓活检、塑料包埋、改良的骨髓组织铁染色方法和半定量分析。结果在402例各种贫血患者中,缺铁性贫血全部骨髓巨噬细胞内铁阴性,阳性率>85%的贫血有铁粒幼细胞贫血、慢性病贫血、骨髓增生异常综合征、再生障碍性贫血和脾功能亢进。阳性率<70%的贫血有骨髓纤维化、慢性粒细胞白血病、肾性贫血、慢性淋巴细胞白血病。二者的差异非常显著(P<0.01)。经对照分析,骨髓巨噬细胞内铁与骨髓涂片铁染色阴性符合率为61%～62%。与血清铁蛋白阴性符合率为78%～83%。骨髓巨噬细胞内铁阳性强度与血清铁蛋白之间显著相关,比较有统计学意义(P<0.01)。骨髓增生异常综合征的阳性强度明显高于再生障碍性贫血和巨幼细胞贫血(P<0.01)。结论骨髓巨噬细胞内铁测定在了解机体铁贮存方面其敏感性、特异性都优于骨髓涂片铁染色,并且在有些贫血的鉴别诊断上有重要价值。     

低强度脉冲超声对阿霉素联合环磷酰胺化疗后大鼠造血功能的影响

目的探讨低强度脉冲超声（LIPUS）对阿霉素联合环磷酰胺化疗后大鼠造血功能的影响。方法将80只大鼠根据性别和 体质量进行随机分层分组,对照组和LIPUS组各40只。对照组用阿霉素（2 mg/kg）+环磷酰胺（20 mg/kg）先后腹腔注射,连续给 药4 d;LIPUS组在相同剂量给药后LIPUS连续辐照7 d。于开始给药第0、4、7、9、11、14、18天测定各组大鼠白细胞、红细胞、血 小板计数;于第0、4、11天做骨髓组织病理切片、流式细胞术检测凋亡、qPCR（SCF、ICAM-1、VCAM-1）检测、ELISA检测IL-3和 GM-CSF。结果血常规结果显示,LIPUS组白细胞较对照组明显提高（P<0.05）,骨髓组织病理切片结果显示LIPUS组造血组 织的增加显著（P<0.05）,流式细胞术结果显示LIPUS组骨髓细胞凋亡低于对照组（P<0.05）,qPCR结果显示LIPUS组ICAM-1 和VCAM-1的水平明显高于对照组（P<0.05）,ELISA检测结果显示,LIPUS组IL-3和GM-CSF均显著高于对照组（P<0.05）。结 论LIPUS可改善阿霉素联合环磷酰胺化疗后的造血损伤,可能是因为其能提升ICAM-1、VCAM-1水平和IL-3、GM-CSF水平 所致。     

低强度脉冲超声波对Beagle犬牙周炎组织修复效应的初步研究

目的探讨低强度脉冲超声波(LIPUS)对Beagle犬牙周炎组织的初步修复效应。方法采用牙槽骨缺损联合弹性结方法制备慢性牙周炎的Beagle犬动物模型,在相同常规治疗基础上选用LIPUS不同强度(50mW/cm2、100mW/cm2)脉冲波和50mW/cm2连续波治疗(频率1.5MHz、调制信号波宽200μs、重复率1kHz),共治疗8周(1次/d,20min/次),并进行牙周临床指标检测与组织学切片检查。结果 LIPUS治疗8周后,治疗组牙龈组织肿胀减轻,菌斑指数(PLI)、牙龈指数(GI)、牙周探针深度(PD)均较对照组低(P<0.05),未发现明显的牙龈退缩、附着丧失和根分叉病变等;组织学切片检查发现LIPUS治疗组牙龈组织黏膜上皮增生不明显,有丰富的胶原纤维生成,牙槽骨组织中骨吸收陷窝减少,成骨细胞较活跃地排列在新骨周围。结论 LIPUS具有潜在的牙周炎组织修复效应,应进一步考虑LIPUS在引导组织再生术(GTR)治疗中的辅助修复效应。     

低强度超声波对兔骨折行髓腔内固定愈后影响的研究

目的 通过动物实验研究低强度超声波(LIPUS)在兔股骨骨折中的作用,探讨LIPUS对行髓腔内固定骨折愈合的影响.方法 制备48只成年新西兰兔股骨中段骨折髓内针内固定模型,并将实验兔随机分为A、B两个组.A组为实验组,对骨折处应用强度为30mW/cm2的低强度脉冲超声体外照射,每天1次,每次20min.B组为对照组,在骨折处实行假照射作为对照.两组实验动物分别于术后1、2、3、4周,采用影像学、组织学等指标评价骨折愈合情况.结果 影像学结果:X线片评分半定量分析表明,实验组骨愈合速度明显快于对照组(P<0.05).组织学:骨折断端间从纤维连接到骨性连接,实验组比对照组明显提前.结论 1)LIPUS对行髓腔内固定骨折的愈合有明显的促进作用. 2)LIPUS通过影响骨折愈合的三个主要阶段:炎症期、愈合期和塑形期而促进骨折愈合.     

LIPUS对骨性关节炎动物模型中炎症因子、细胞凋亡及整合素信号通路的影响

目的:研究低强度脉冲超声波(LIPUS)对骨性关节炎动物模型中炎症因子、细胞凋亡及整合素信号通路的影响。方法:选择雄性新西兰大白兔作为实验动物并随机分为假手术组(Sham)组、骨关节炎模型组(OA组)、LIPUS干预组(LIPUS组),建立右后肢膝关节的骨性关节炎动物模型后给予LIPUS干预。干预后6周,分离关节软骨并检测炎症因子、细胞凋亡分子及整合素信号通路分子的表达量。结果:OA组实验动物关节软骨中骨桥蛋白(OPN)、一氧化氮(NO)、白介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α、Fas、FasL、LC3-II、Beclin-1、Integrinβ1、FAK、ERK1/2、JNK、p38MAPK、基质金属蛋白酶(MMP)-1、MMP-3的蛋白表达量显著高于Sham组,Col-I、Col-II的蛋白表达量显著低于Sham组;LIPUS组实验动物关节软骨中OPN、NO、IL-1β、TNF-α、Fas、FasL、LC3-II、Beclin-1、Integrinβ1、FAK、ERK1/2、JNK、p38MAPK、MMP-1、MMP-3的蛋白表达量显著低于OA组,Col-I、Col-II的蛋白表达量显著高于OA组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:LIPUS对骨性关节炎动物模型关节软骨中的炎症反应、细胞凋亡、整合素信号通路具有抑制作用,能够促进关节软骨的修复。     

巨噬细胞株分泌的RCAS1对正常小鼠骨髓单个核细胞凋亡的影响

目的 研究巨噬细胞株分泌的RCAS1对正常小鼠骨髓单个核细胞(BMMNC)凋亡的影响.方法 RT-PCR方法检测巨噬细胞株RCAS1基因表达,10例正常小鼠骨髓基质细胞RCAS1基因表达作为正常对照组.流式细胞术检测8例经巨噬细胞株培养上清作用后正常小鼠BMMNC的凋亡,8例经正常小鼠骨髓基质细胞培养上清作用后正常小鼠BMMNC的凋亡作为正常对照组.对8例巨噬细胞株RCAS1的表达强度与8例经巨噬细胞株培养上清作用后正常小鼠BMMNC的凋亡率进行相关分析.结果 ①巨噬细胞株RCAS1 mRNA的表达强度为(1.98±0.24),明显高于正常对照组(0.84±0.21)(P＜0.01).②巨噬细胞株培养上清作用后正常小鼠BMMNC的凋亡率为(16.66±1.97)%,明显高于正常对照组(2.10±0.25)%(P＜0.01).③巨噬细胞株RCAS1 mRNA的表达强度与巨噬细胞株培养上清作用后正常小鼠BMMNC的凋亡率呈正相关(r=0.95,P＜0.01).结论 巨噬细胞株高表达RCAS1,RCAS1对正常小鼠BMMNC有促凋亡作用.     

重组Klotho蛋白对骨髓来源M1型巨噬细胞向M2型巨噬细胞转变的影响

目的:探究重组Klotho蛋白对小鼠骨髓来源M1型巨噬细胞向M2型巨噬细胞表型转变的影响.方法:分离并鉴定小鼠骨髓来源性巨噬细胞,用巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)诱导骨髓间充质干细胞(BMSC)转变为巨噬细胞M0,流式细胞术和细胞免疫荧光鉴定细胞,普通光镜观察M0细胞形态.将成熟骨髓来源巨噬细胞细胞M0分成LPS组、LPS+Klotho组和空白组.LPS组用 100ng/mL LPS处理,LPS+Klotho组给与 1 μg/mL Klotho和 100ng/mL LPS+LPS共同处理.RT-qPCR检测巨噬细胞极化相关分子:M1亚型巨噬细胞相关标志物(IL-1β、IL-6、iNOS)mRNA和M2亚型巨噬细胞相关标记物(Arg-1、IL-10)mRNA表达.Western blotting检测iNOS、Arg-1蛋白表达水平,细胞免疫荧光检测细胞肿瘤坏死因子(TNF-a)和Arg-1蛋白含量.结果:流式细胞术显示骨髓巨噬细胞纯度为98.4％,光镜和细胞免疫荧光显示骨髓巨噬细胞呈现不规则形态.与空白组相比,LPS组IL-6、iNOS、IL-1β的mRNA和iNOS、TNF-a蛋白相对表达量明显提高(P＜0.001).而与LPS组相比,LPS+Klotho组降低Ml亚型巨噬细胞标记物IL-6、iNOS、IL-1β的mRNA和iNOS、TNF-α蛋白相对表达量(P＜0.001),显著提高了M2型巨噬细胞标志物Arg-1、IL-10 mRNA和Arg-1的蛋白的表达(P＜0.001).结论:重组Klotho蛋白可促进骨髓来源性巨噬细胞由Ml表型向M2表型转变.     

低强度脉冲式超声波机械力生物链内源性干细胞激活与功能修复的研究进展

近年来,以低强度脉冲式超声波(LIPUS)为代表的机械力治疗手段已被广泛用于康复医学、骨折修复、神经损伤修复、泌尿系统疾病等领域.目前研究表明,LIPUS可能通过激活内源性干细胞参与组织修复,但是机械力如何通过生物链的转化而激活干细胞的具体机制尚不明确,因此对机械力生物链传导过程的进一步探索有助于揭示LIPUS的作用机...     

昆布多糖对大鼠骨髓巨噬细胞生物活性的影响

目的 研究昆布多糖对大鼠骨髓巨噬细胞生物活性的影响.方法 制备并体外培养大鼠骨髓造血干/祖细胞、巨噬细胞;制备昆布多糖作用后的骨髓巨噬细胞条件培养液,测定培养液中造血生长因子促红细胞生成素(EPO)、粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素-3(IL-3)表达及活性;测定昆布多糖条件培养液作用后造血祖细胞的集落产率.结果 经昆布多糖诱导的骨髓巨噬细胞培养上清液可显著提高骨髓造血祖细胞的集落产率;经昆布多糖诱导后,骨髓巨噬细胞的EPO、GM-CSF和IL-3的表达增高.结论 昆布多糖可刺激骨髓巨噬细胞造血因子表达增高,从而促进髓系多向性造血祖细胞(CFU-Mix)、红系祖细胞(CFU-E)、粒一单系造血祖细胞(CFU-GM)的增殖分化.     

利用多重荧光STR技术分析上海地区7品系常用近交系小鼠核心群的遗传特性

目的 建立一种裸鼹鼠骨髓巨噬细胞分离培养的方法,并通过与小鼠骨髓巨噬细胞进行比较研究其吞噬功能.方法 分离裸鼹鼠骨髓细胞,在含60 ng/mL巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)完全培养基的诱导下,体外贴壁培养6～7 d,采用倒置显微镜观察细胞的生长状态.裸鼹鼠骨髓细胞诱导结束后,采用流式细胞术检测贴壁细胞表面抗原CD11b和F4/80的阳性率,鉴定骨髓巨噬细胞的纯度;采用异硫氰酸荧光素(FITC)-dextran根据荧光强度比较裸鼹鼠和ICR小鼠骨髓巨噬细胞的吞噬功能.结果 通过本方法获得的贴壁细胞具有典型的巨噬细胞的形态特征,且细胞表面抗原CD1 1b和F4/80的阳性率均高于80％;裸鼹鼠与ICR小鼠骨髓巨噬细胞的吞噬率分别为99.87％士0.13％和88.79％±0.90％.结论 本文建立的方法是一种简单实用的体外分离培养裸鼹鼠骨髓巨噬细胞的方法,且能够获得高纯度、高活性的巨噬细胞.裸鼹鼠骨髓巨噬细胞的吞噬功能高于小鼠骨髓巨噬细胞.     

人脂肪间充质干细胞体外高效扩增新方法

目的 运用低强度脉冲场超声(LIPUS)刺激促进人脂肪间充质干细胞(hASCs)增殖,为临床干细胞体外高效增殖提供新方法.方法 通过LIPUS体外刺激hASCs细胞生长,采用Scepter 2.0手持细胞计数器进行细胞计数,运用荧光倒置显微镜观察细胞形态,运用流式细胞仪检测细胞表面标志物,并进行干细胞临床前质量检测.结果 刺激组50 mW/cm2和60 mW/cm2的LIPUS刺激强度均能促进细胞增殖,60 mW/cm2强度更显著,与对照组比较差异均具有统计学意义(P<0.05);细胞倍增时间比对照组缩短,差异具有统计学意义(P<0.05),刺激后刺激组细胞表面标志物无变化,增殖后干细胞质量检测符合标准要求.结论 LIPUS刺激可促进hASCs有效增殖,低强度脉冲场超声可作为干细胞体外扩增的新方法.     

低强度超声对大鼠牙槽骨改建过程中COX-2和PGE2表达的影响

目的 探讨低强度脉冲超声(low-intensity pulsed ultrasound,LIPUS)对大鼠正畸牙移动速度及牙槽骨改建过程中环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)和前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)表达的影响.方法 健康6～8周雄性Sprague-Dawley (SD)大鼠25只,采用左右对照实验,分为单纯加力组(左上颌,对照组)以及LIPUS+加力组(右上颌,实验组),2组各又下设LIPUS刺激后1、3、5、7、14 d5个时相点.建立正畸牙移动动物模型,每只实验鼠右上颌加力后第2天行LIPUS刺激(频率1.5 MHz、强度30 mW/cm2、脉冲宽度200μs、重复频率1 kHz),每天1次,每次20 min,左上颌行不开功率的假刺激,于相应时间点处死实验鼠,取上颌第一磨牙至第三磨牙及周围牙槽骨用于牙齿移动距离测量,脱钙后取第一磨牙及周围牙槽骨行免疫组织化学染色.结果 实验组牙齿移动速度快于对照组,第5、7、14天2组比较差异有统计学意义(P＜0.01);免疫组织化学染色结果显示:实验组COX-2、PGE2的表达均高于对照组,均在第7天达到高峰,实验组第5、7天表达明显高于对照组(P＜0.05).结论 LIPUS能有效促进牙槽骨改建过程中COX-2、PGE2的表达,从而促进牙槽骨改建,对加快正畸牙移动有一定的促进作用.     

低强度脉冲超声波对富血小板纤维蛋白释放生长因子水平的影响

[目的]观察低强度脉冲超声波(LIPUS)对富血小板纤维蛋白(PRF)释放生长因子水平的影响.[方法]选择10名健康男性,抽取静脉血,制备PRF,利用LIPUS辐照PRF释放的渗出液.根据辐照时间分为L-15min组、L-30min组和空白对照组.ELISA法测定PRF中生长因子的含量.[结果]与空白对照组比较,L-15min和L-30min组PRF中碱性成纤维细胞生长因子水平明显增高(P<0.05).[结论]LIPUS辐照可提高PRF释放的生长因子水平.     

低强度脉冲超声在肌肉骨骼疾病中的研究进展

低强度脉冲超声（LIPUS）是一种非侵入性的治疗方式,其被广泛应用于肌肉骨骼系统疾病的治疗。早期LIPUS主要应用于新鲜骨折、骨不连的治疗,近年来发现LIPUS对软骨组织损伤、椎间盘退变等软组织疾病也有治疗作用。此外,LIPUS也应用于骨科手术中,如牵拉成骨术和脊柱融合术。随着对LIPUS作用机制研究的逐渐深入,其临床应用前景将更广泛。本文对LIPUS在肌肉骨骼系统疾病中的研究及应用进展作一综述。     

非霍奇金淋巴瘤患者骨髓中巨噬细胞的观察与分析

目的观察分析非霍奇金淋巴瘤患者骨髓中巨噬细胞的形态特征及其与淋巴瘤细胞浸润的关系。方法分析46例确诊的非霍奇金淋巴瘤患者的骨髓涂片,对巨噬细胞进行计数分类。结果 46例中,骨髓淋巴瘤细胞未浸润28例,骨髓淋巴瘤细胞浸润14例（浸润组）,淋巴瘤肉瘤白血病4例（淋巴瘤白血病组）,骨髓中巨噬细胞和噬血细胞数在各组中数量不等,差异有统计学意义（P〈0.05）。淋巴肉瘤白血病患者骨髓中的巨噬细胞以单核样为主,巨噬细胞铁染色阳性率及强度减低。结论巨噬细胞的数量和形态特征与淋巴瘤骨髓浸润有一定相关性,淋巴瘤患者骨髓巨噬细胞增多应高度警惕淋巴瘤骨髓早期浸润。     

超声对大鼠牙根吸收过程中骨保护素及核激活因子受体配体表达的影响

摘要：目的研究低强度脉冲超声(LIPUS)对大鼠正畸性牙根吸收过程中骨保护素(OPG)及核激活因子受体配体(RANKL)
表达的影响。方法32只Wistar雄性大鼠(6~8周),随机分成4组：阴性空白对照1组、实验组2组(100 MW/cm2超声组和
150 MW/cm2超声组),接受LIPUS作用;对照组1组,不接受LIPUS作用,每组8只。100 g初始力值加载于大鼠右侧上颌中
切牙与第一磨牙之间10 d。每组取上颌第一磨牙及其牙周组织,制作以上颌第一磨牙为中心的、近远中方向的组织切片,
行OPG、RANKL免疫组化染色,光镜观察并作免疫组化光密度分析,对实验结果进行单因素方差分析。结果LIPUS超
声组OPG 表达上调(P<0.05),100 MW/cm2 与150 MW/cm2 超声组间OPG 表达有统计意义(P<0.05);LIPUS 超声组
RANKL表达下调(P<0.05),两超声组间RANKL表达有统计学意义(P<0.05)。结论LIPUS通过调节OPG/RANKL比值,
进一步调节破骨细胞分化,进而对大鼠正畸性牙根吸收有治疗作用。