氯化两面针碱体外对人口腔鳞癌多药耐药细胞KBV200的抗癌活性

目的探讨氯化两面针碱对多药耐药癌细胞的抗癌作用。方法应用MTT比色法测定细胞存活率,流式细胞术测定细胞周期,Hoechst 33258染色法检测细胞凋亡,酶联免疫吸附法测定半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase 3)含量。结果氯化两面针碱(0.75,1.5,3,6和12mg·L-1)浓度依赖性地降低人口腔鳞癌多药耐药细胞KBV200的存活率,作用48h时IC50值为(2.43±0.19)mg·L-1;氯化两面针碱(0,3,6和9mg·L-1)与KBV200细胞作用48h,细胞凋亡率依次为(1.6±0.4)%,(2.3±0.7)%,(14.0±2.5)%和(8.3±2.2)%;氯化两面针碱6mg.L-1可使KBV200细胞caspase3含量升高,3mg·L-1作用12,24和48h可增加KBV200细胞G2/M期细胞比例。结论氯化两面针碱对多药耐药KBV200细胞具有抑制生长、促进凋亡和阻滞细胞周期的作用,可能是对多药耐药癌细胞敏感的一种中药活性成分。     

玉郎伞多糖诱导人肝肿瘤细胞株BEL7404细胞凋亡

目的研究玉郎伞多糖(YLSPS)对细胞凋亡的影响。方法用MTF法、Hochest荧光染色法及Annexin V-FITC/PI双染法等方法研究YLSPS含药血清对人肝癌细胞株BEL7404的增殖、细胞凋亡及细胞周期的影响。结果YLSPS各剂量组(0.75 g·kg~(-1)、1.50 g·kg~(-1)、3.00 g·kg~(-1))含药血清能明显抑制BEL7404细胞株的增殖,吸光值(D值)分别为0.26±s 0.04、0.22±0.06、0.182±0.026,与NS组(0.43±0.04)比较有显著差异(P<0.01)。YLSPS各剂量组凋亡指数分别为(8.1±1.5)%、(10.8±2.3)%、(11.6±2.9)%,明显高于NS组(P<0.01)。对细胞周期的影响表现为G_2/M期阻滞。结论玉郎伞多糖可诱导BEL7404细胞凋亡,其抗肿瘤活性可能与G_2/M期阻滞有关。     

长春瑞滨诱导人肺癌Calu-3细胞凋亡及机制

目的　观察长春瑞滨 (VRB)诱导人肺癌Calu 3细胞凋亡时Bcl 2和半胱天冬酶 3的表达有无变化。方法　以不同浓度的VRB( 2 0 ,40和 60 μmol·L-1)作用于体外培养的人肺癌Calu 3细胞 2 4h后 ,TUNEL法和吖啶橙染色法观察肺癌细胞凋亡形态学特征 ;流式细胞仪检测肺癌细胞凋亡率和肺癌细胞Bcl 2蛋白表达水平 ;以半胱天冬酶 3荧光分析检测试剂盒测定肺癌细胞半胱天冬酶 3活性。结果　VRB( 2 0 ,40和60 μmol·L-1)处理细胞 2 4h ,TUNEL法及吖啶橙染色均观察到典型的凋亡细胞形态学特征。流式细胞仪检测VRB处理的肺癌细胞凋亡率分别为 ( 3 .1±0 .6) % ,( 7.8± 1 .2 ) %和( 1 9.6± 4.3 ) % ,较对照组 (凋亡率为 0 )显著增高且呈剂量依赖性 (P <0 .0 1 ) ;Bcl 2蛋白阳性表达细胞率分别为 ( 3 7.6±6.9) % ,( 2 5 .4±6.2 ) %和( 8.4±2 .5 ) % ,较对照组 ( 4 8.3±7.1 ) %显著降低且呈剂量依赖性 (P <0 .0 5 ) ;肺癌细胞半胱天冬酶 3活性分别为 ( 3 3 2± 1 6) ,( 4 1 7± 1 1 )和 ( 63 1± 2 7)μmol·L-1·h-1,较对照组 ( 1 95±1 2 ) μmol·L-1·h-1显著增高且呈剂量依赖性(P <0 .0 1 )。结论　VRB可以诱导肺癌细胞凋亡 ,抑制Bcl 2表达及增强半胱天冬酶 3活性     

半枝莲总黄酮对非小细胞肺癌细胞增殖及迁移的影响

目的观察半枝莲总黄酮对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移及凋亡的影响并对其机制进行初步探索。方法体外培养非小细胞肺癌 A549细胞,分为阴性对照组、实验组、阳性对照组。阴性对照组用 1640培养液 200 μL处理细胞,实验组分别用 1, 5,10,20,40 μg/mL半枝莲总黄酮处理细胞 24 h,阳性对照组用 200 μL 40 μg/mL芦丁溶液处理细胞。采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法( MTT)观察细胞增殖情况;通过流式细胞术检测细胞凋亡情况;蛋白质印迹法( Western Blot)检测凋亡抑制蛋白 Survivin和促凋亡蛋白酶 Caspase?3蛋白的表达;迁移划痕实验检测迁移的情况。结果 MTT检测结果显示,阳性对照组的增殖抑制率为( 57.234±0.533)%,实验组的增殖抑制率分别为( 14.852±1.059)%、(23.486±1.366)%、(36.396±0.321)%、(46.179± 1.334)%和( 51.530±1.054)%,随浓度增加抑制率显著升高,呈浓度依赖( F＝1 408.303,P＜0.001);式细胞术检测细胞凋亡率,阴性对照组( 9.09±0.50)%、阳性对照组( 67.27±1.48)%、实验组分别为( 24.62±0.70)%、(34.67±0.46)%、(46.92±0.29)%、(55.67±0.57)%和( 59.29±0.73)%,实验组的细胞凋亡率均高于阴性对照组( F＝1 467.681,P＜0.001); Western Blot结果显示,实验组 Survivin蛋白表达均低于阴性对照组, Caspase?3蛋白表达均高于对照组( F＝34.176,P＜0.001;F＝57.730,P＜0.001);迁移划痕实验结果显示,半枝莲总黄酮抑制肺腺癌 A549细胞迁移并呈现剂量依赖性。结论半枝莲总黄酮可抑制人肺腺癌 A549细胞的增殖,可能与 Survivin蛋白降低和 Caspase?3蛋白表达量升高有关;另外,半枝莲总黄酮可抑制人肺腺癌 A549细胞的迁移。     

不同浓度苦参碱对神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞存活率及凋亡率的影响

目的探讨不同浓度苦参碱对神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞存活率及凋亡率的影响。方法分别应用MTT法和FCM法检测苦参碱与顺铂对NB细胞株SH-SY5Y存活率的影响。结果 MTT法检测SH-SY5Y细胞的存活率(%)分别为:(90.75±6.94)、(88.61±10.22)、(55.31±1.83)、(77.37±2.24)、(61.21±7.92)、(44.71±9.51)。FCM法检测SH-SY5Y细胞的凋亡率(%)分别为:(6.89±1.03)、(7.63±1.38)、(16.36±2.57)、(8.42±1.76)、(14.79±2.37)、(18.46±2.44)。除经ATRA诱导的顺铂干预组外,各组存活率及凋亡率与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05);未经ATRA诱导的顺铂干预组存活率及凋亡率与经ATRA诱导的顺铂干预组比较差异有统计学意义(P<0.05);苦参碱0.5mg/mL组与经ATRA诱导的顺铂干预组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论苦参碱可以抑制神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞系增殖、诱导凋亡,可以提高顺铂化疗的敏感性,在本实验范围内浓度越高这种抑制增殖、诱导凋亡作用越明显。     

维生素E琥珀酸酯联合5-氟尿嘧啶抗人肝癌细胞增殖作用的研究

目的观察维生素E琥珀酸酯(VES)联合5-氟尿嘧啶(5-FU)抗人肝癌细胞SMMC-7721的增殖作用。方法体外培养的SMMC-7721细胞以VES联合5-FU分别作用24和48h,MTT法测定细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪分析细胞周期、凋亡率以及Fas的表达。结果MTT检测显示,VES6μg/mL作用细胞24h后抑制率为(2.78±0.05)%,随药物浓度的增加和作用时间的延长,抑制率显著增加(P<0.01);相同条件下,VES与5-FU合用较两药单用抑制作用显著增加(P<0.01)。流式细胞仪分析显示,SMMC-7721细胞自然凋亡率为(0.86±0.20)%,VES24μg/mL,5-FU30μg/mL及两者合用作用细胞24h后凋亡率分别为(30.08±2.32)%,(18.23±1.58)%和(63.68±2.88)%(P<0.01),细胞表面Fas表达增加。结论VES联合5-FU通过阻滞细胞周期于G0/G1期、促进细胞表面Fas的表达协同抑制肝癌细胞增殖。     

丹皮酚影响依托泊苷对人胶质母细胞瘤细胞U251的细胞毒性

目的:研究丹皮酚(Paeonol,Pae)对人胶质母细胞瘤细胞增殖的影响及其对化疗药物敏感性的影响。方法:应用水溶性四唑盐法,检测不同浓度和时间点Pae对体外培养人胶质母细胞瘤U251细胞增殖的影响,联合Pae及不同浓度依托泊苷(VP-16),检测Pae对VP-16细胞毒性的影响并以SPSS17.0系统软件计算IC50值。结果:(1)Pae可呈剂量依赖性抑制人胶质母细胞瘤U251细胞的增殖,Pae在浓度为15.63 mg.L-1即可将U251细胞存活率显著降低至82.88%±1.24%(P<0.01),IC50为203.81 mg.L-1。(2)Pae对U251细胞增殖的抑制作用随时间延长而增强。(3)Pae与VP-16联合使用,可显著增强VP-16对U251的细胞毒性,当联用Pae剂量为15.63 mg.L-1时,VP-16的IC50值降低至376.81μmol.L-1,与单独使用时的IC50值(767.34μmol.L-1)相比降低幅度达50.89%。(4)Pae增强VP-16对U251细胞毒性的作用具有时间依赖性,随给药时间延长而逐渐增强。结论:Pae可抑制人胶质母细胞瘤U251细胞增殖。Pae与化疗药物VP-16联用时可以显著增强此化疗药物对胶质母细胞瘤的细胞毒性,提高胶质母细胞瘤细胞对化疗药物的敏感性。     

全反式维甲酸增强依维莫司对小细胞肺癌的体内外抗肿瘤作用

目的 探讨雷帕霉素靶蛋白(mTOR)抑制剂依维莫司与全反式维甲酸(ATRA)联用对小细胞肺癌细胞株NCI-H446增殖及迁移能力的影响.方法 将不同浓度ATRA分别和依维莫司联合作用于NCI-H446细胞,采用MTT试验检测药物作用24h、48h、72h后的细胞存活率;细胞划痕实验观测药物处理24h后的细胞迁移能力.不同药物浓度作用于荷瘤小鼠,通过裸鼠移植瘤模型观察全反式维甲酸与依维莫司的体内协同抑瘤作用.结果 MTT实验表明ATRA联合依维莫司抑制NCI-H446细胞增殖呈时间及浓度依赖性,高浓度联合用药组72h细胞存活率最低;划痕实验结果表明联合用药组抑制细胞迁移作用显著,ARTA药物浓度越高迁移抑制作用越强;裸鼠皮下抑制瘤模型中各组在给药3周后发现联合用药组抑瘤作用高于依维莫司组和对照组.结论 依维莫司与ATRA联合应用在抑制人小细胞肺癌细胞增殖、迁移方面具有协同作用,在小细胞肺癌治疗可能具有良好的临床应用前景.     

马钱子碱通过抑制Bcl-2诱导人多发性骨髓瘤U266细胞凋亡

目的探讨马钱子碱诱导人多发性骨髓瘤U266细胞凋亡的机制。方法通过噻唑蓝(MTT)法、流式细胞仪、反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测马钱子碱对人多发性骨髓瘤U266细胞株的诱导凋亡作用。结果马钱子碱诱导U266的凋亡呈时间和浓度依赖性。细胞周期分析显示随着马钱子碱浓度的增加Sub-G0/G1期细胞增加,其不同浓度下(0、0.05、0.1、0.2、0.4mg/ml)的凋亡率分别为(4.137±0.010)%、(10.550±0.031)%、(12.310±0.041)%、(27.670±0.083)%、(29.671±0.092)%,差异有统计学意义(P<0.01)。促凋亡基因Bax在马钱子碱作用的细胞中随时间延长表达量增加,其灰度值为0.0904±0.0001、0.4027±0.0023、0.4742±0.0025、0.0.5455±0.0096。结论在0.4mg/ml浓度范围内马钱子碱具有诱导U266细胞凋亡的作用。马钱子碱通过抑制Bcl-2诱导人多发性骨髓瘤细胞株U266的凋亡。     

腺苷体外对人肝癌HepG2细胞凋亡的诱导作用及其作用机制

目的研究腺苷及其代谢途径对人肝癌HepG2细胞凋亡的诱导作用及其机制。方法将腺苷2.0mmol.L-1作用于HepG2细胞24和48h,采用流式细胞术(FCM)测定细胞周期及凋亡率;观察腺苷膜转运体抑制剂双嘧达莫、腺苷脱氨酶抑制剂红-9-(2-羟基-3-壬烷基)腺嘌呤(EHNA)和腺苷激酶抑制剂5′-氨基5′-脱氧腺苷(AMDA)对腺苷抑制细胞存活的影响,应用MTT法测定细胞存活率;应用Western蛋白印迹法检测P53和Bcl-2蛋白的表达。结果腺苷与HepG2细胞作用24和48h,HepG2细胞出现特征性的亚二倍体凋亡峰,细胞凋亡百分率分别由对照组的(1.2±0.4)%和(4.1±1.6)%增加到(24.3±4.8)%和(38.6±7.4)%,细胞周期阻滞于G0/G1期。腺苷与HepG2细胞作用24h明显抑制细胞存活,P53表达明显增强,Bcl-2表达降低。预先分别给予双嘧达莫,AMDA和AMDA+双嘧达莫处理后,各处理组HepG2细胞存活率较腺苷组升高,细胞凋亡百分率和P53表达降低,Bcl-2表达无明显变化;EHNA预处理组细胞存活率、细胞凋亡百分率、P53和Bcl-2表达与腺苷组比较均无明显变化。结论腺苷可诱导HepG2细胞凋亡,腺苷在胞内可能通过腺苷激酶而不是通过转氨酶的代谢途径参与诱导细胞凋亡的过程。腺苷对HepG2细胞凋亡的诱导作用还可能与其增加P53蛋白表达有关。