日本血吸虫26kDa谷胱甘肽S—转移酶在大肠杆菌的温控高？…

以重组质粒ｐＳｊ２６为模板，ＰＣＲ扩增出编码２６ｋＤａ谷胱甘肽Ｓ－转移酶（Ｓｊ２６ＧＳＴ）的ｃＤＮＡ，双酶切后克隆到ｐＢＶ２２０ＤＮＡ，构建ｐＢＶ２２０－Ｓｊ２６温控表达载体，ＣａＣｌ２法转化大肠杆菌ＤＨ５α，氨苄青霉素筛选转化子，酶切图谱分析及ＰＣＲ鉴定阳性克隆。阳性克隆菌在３０℃培养，４２℃温控表达Ｓｊ２６。测定表达产物ＧＳＴ活性，并用ｒＳｊ２６抗原免疫的鼠血清及日本血吸虫感染鼠血清进行Ｄｏｔ     

日本血吸虫26kDa谷胱甘肽S—转移酶DNA疫苗的研究及其保 …

本文对大陆株日本血吸虫２６ｋＤａ谷胱甘肽Ｓ－转移酶（Ｓｊ２６ＧＳＴ）的ＤＮＡ疫苗进行研究，并观察了其免疫保护效果。分别构建含Ｓｊ２６ＧＳＴ基因的重组质粒ｐＣＤ－Ｓｊ２６和ｐＢＫ－Ｓｊ２６，采用脂质体介导的基因转移将ｐＣＤ－Ｓｊ２６和ｐＢＫ－Ｓｊ２６分别导入ＮＩＨ３Ｔ３成纤维细胞，用免疫荧光法（ＩＦＡ）证实Ｓｊ２６ＧＳＴ在真核细胞中的表达。分别将ｐＣＤ－Ｓｊ２６和ｐＢＫ－Ｓｊ２６及ｐＢＫ－ＣＭＶ肌注     

一种曼氏血吸虫26kDa谷胱甘肽S-转移酶的分子克隆和组织分布

谷胱甘肽S-转移酶(GST)除在血吸虫的解毒系统中起中心作用外,还可能增加虫体肠道中羟高铁血红素的溶解度。宿主针对GST的特异性免疫反应对虫体也许是致命的。因此,认为GST可能是一种潜在的疫苗。用重组的曼氏血吸虫28kDa谷胱甘肽S-转移酶(SmGST28)免疫多种动物均已获得显著的抗曼氏血吸虫(Sm)攻击感染作用。     

血吸虫谷胱甘肽硫转移酶的研究进展

血吸虫谷胱甘肽硫转移酶 (GST)是一组以谷胱甘肽为共同底物的具有解毒功能的同工酶 ,在血吸虫生长过程中起关键性的作用 ,是近来较受关注的一种血吸虫抗原。其中日本血吸虫和曼氏血吸虫体内的GST (SjGST和SmGST)是当前研究较深入的血吸虫候选疫苗 ,二者的同源性很高[1] ,构建的疫苗免疫小鼠和猪等都收到了较好的效果 ,除产生抗感染的免疫保护作用外还具有降低虫荷数及雌虫生殖率等作用 ,有些疫苗已进入临床试验阶段[2 ,3 ] 。对于GST疫苗产生的保护性免疫效果已有较深的研究 ,故在此不再赘述。然而GST在虫体的具体位置 ,GST的理化…     

血吸虫谷胱甘肽硫转移酶的研究进展

血吸虫谷胱甘肽硫转移酶(GST)是一组以谷胱甘肽为共同底物的具有解毒功能的同工酶，在血吸虫生长过程中起关键性的作用，是近来较受关注的一种血吸虫抗原。其中日本血吸虫和曼氏血吸虫体内的GST(SjGST和SmGST)是当前研究较深入的血吸虫候选疫苗，二者的同源性很高，构建的疫苗免疫小鼠和猪等都收到了较好的效果，除产生抗感染的免疫保护作用外还具有降低虫荷数及雌虫生殖率等作用，     

日本血吸虫 26 kDa 谷胱甘肽S-转移酶DNA疫苗的研究及其保护性免疫效果观察

本文对大陆株日本血吸虫２６ｋＤａ谷胱甘肽Ｓ－转移酶（Ｓｊ２６ＧＳＴ）的ＤＮＡ疫苗进行研究，并观察了其免疫保护效果。分别构建含Ｓｊ２６ＧＳＴ基因的重组质粒ｐＣＤ－Ｓｊ２６和ｐＢＫ－Ｓｊ２６，采用脂质体介导的基因转移将ｐＣＤ－Ｓｊ２６和ｐＢＫ－Ｓｊ２６分别导入ＮＩＨ３Ｔ３成纤维细胞，用免疫荧光法（ＩＦＡ）证实Ｓｊ２６ＧＳＴ在真核细胞中的表达。分别将ｐＣＤ－Ｓｊ２６和ｐＢＫ－Ｓｊ２６及ｐＢＫ－ＣＭＶ肌注ＢＡＬＢ／ｃ小鼠。免疫３次后，免疫鼠产生一定水平的抗血吸虫抗体。用日本血吸虫尾蚴攻击感染免疫小鼠，结果ｐＣＤ－Ｓｊ２６和ｐＢＫ－Ｓｊ２６免疫鼠减虫率分别为３７．１９％和４４．４４％，肝组织减卵率为７３．８０％和４７．２０％，每对成虫产卵减少５６．８８％和１５．６７％。实验结果表明，日本血吸虫Ｓｊ２６ＤＮＡ疫苗免疫小鼠后能诱生一定水平的抗血吸虫抗体，免疫鼠可形成一定水平的保护性免疫力，预防血吸虫尾蚴感染。同时可减轻宿主肝组织血吸虫卵所致的病理损害作用     

日本血吸虫26kDa谷胱甘肽S-转移酶在大肠杆菌的温控高效表达及鉴定

以重组质粒pSj26为模板，PCR扩增出编码26kDa谷胱甘肽S-转移酶（Sj26GST）的cDNA，双酶切后克隆到pBV220DNA，构建pBV220-Sj26温控表达载体，CaCl2法转化大肠杆菌DH5α，氨苄青霉素筛选转化子，酶切图谱分析及PCR鉴定阳性克隆。阳性克隆菌在30℃培养，42℃温控表达Sj26。测定表达产物GST活性，并用rSj26抗原免疫的鼠血清及日本血吸虫感染鼠血清进行Dot－ELISA和Westernblot检测其抗原性。实验结果表明PBV220－Sj26温控表达产物具有GST酶活性。SDS－PAGE经考马斯亮蓝染色可见染色较深的26kDa条带，该条带占菌体总蛋白的33．83％。抗rSj26的免疫鼠血清及日本血吸虫感染鼠血清均可识别26kDa条带。实验结果表明日本血吸虫26kDa条带能在大肠杆菌温控高效表达。     

血吸虫谷胱甘肽-S-转移酶DNA疫苗的研究进展

采用DNA疫苗防治血吸虫病是当前研究的热点领域,本文综述了日本血吸虫、曼氏血吸虫和埃及血吸虫等谷胱甘肽-S-转移酶DNA疫苗方面的研究进展。     

日本血吸虫26kDa谷胱甘肽S-转移酶基因真核表达载体的构建及序列测定

目的 扩增日本血吸虫２６ｋＤａ谷胱甘肽Ｓ－转移酶（Ｓｊ２６ＧＳＴ）基因片段,构建其重组真核表达载体,以研制ＳｊＧＳＴ核酸疫苗。方法 根据已知基因序列设计一对引物,运用ＲＴ－ＰＣＲ技术扩增Ｓｊ２６ＧＳＴ目的基因片段,将其克隆到ｐｃＤＮＡ３质粒中,并经酶切、ＰＣＲ鉴定,测序证实。结果 获得ＧＳＴ－ｐｃＤＮＡ３重组克隆。结论：本实验获得Ｓｊ２６ＧＳＴ重组克隆,为进一步研制核酸疫苗创造了条件。     

血吸虫谷胱甘肽S-转移酶候选疫苗的研究现状

血吸虫病是一种严重危害人类健康的人兽共患寄生虫病,主要流行于亚洲、非洲和拉丁美洲的76个国家和地区.谷胱甘肽S-转移酶(GST)是WHO推荐使用的6种血吸虫疫苗候选抗原之一,用GST免疫小鼠、大鼠、牛或猴均可产生一定的保护力,提示GST是一种有希望的候选疫苗.该文综述了日本血吸虫Sj26GST和Sj28GST、曼氏血吸虫Sm28GST和埃及血吸虫Sh28GST等的研究现状.     

血吸虫疫苗候选抗原-谷胱甘肽S转移酶(GST)抗原的研究近况

GST为一组具有解毒功能的酶。曼氏血吸虫及日本血吸虫水溶性26-28KD蛋白质抗原具有GST酶活性。这类蛋白质抗原被认为是目前很有希望的血吸虫疫苗候选抗原。本文就近年来对血吸虫GST的研究情况作一概述:1理化性质;2免疫学特性;3基因克隆及表达等。     

肺癌患者谷胱甘肽S转移酶同工酶的动态

谷胱甘肽 S 转移酶(GST)是参与解毒的酶类,分为α(为碱性)、μ(为中性)、π(为酸性)3类,与治疗癌症的耐药性有关。近年,已有很多关于肺癌与 GST 同工酶的研究,例如 Di Ilio 等从38例肺非肿瘤部位与肺肿瘤部位提出蛋白质,测定 GST 的酶活性,发现肺肿瘤部分明显增高;Pasquini 等用22例同样标本分析吸烟对 GST活性的影响,发现吸烟者肿瘤部位 GST 升高,而非肿瘤部位低下;Carmichael 等对10例同样标本进行酸性、中性和碱性的研究,发现肿瘤部或非肿瘤部酸性(π类)均增加;中性(μ类)在低分化型鳞癌及低分化型腺癌增加,大细胞癌和小细胞癌无变化或降低;碱性(α类)与肿瘤组织类型无关。Singh 等的5例标本中有4例 GST-π的酶活性增高。作者对67例肺癌患者的尸检、活检及手术所得的组织进行免疫组织化学分析,发现 GST-π。结果表     

日本血吸虫重组谷胱甘肽转移酶可生物降解微球的制备

目的制备日本血吸虫谷胱甘肽转移酶(rSjGST)可生物降解微球。方法将含有表达质粒pET28a( )-SjGST的E.coliBL21在LB培养基中进行培养、诱导表达、过柱纯化,测其纯化后蛋白浓度;将纯化后的蛋白质以聚乳酸乙醇酸(PLGA75/25)为包裹材料,用双乳化溶剂蒸发法制备rSjGST可生物降解微球,光镜下测定粒径、跨距、分布及微球载蛋白量,冷冻干燥保存。结果测得纯化后蛋白浓度为8.323mg/ml,微球的直径为(7.3±1.2)μm,跨距为0.52,符合正态分布,载药量为7.62%。结论rSjGST可生物降解微球制备成功,为进行小鼠保护性免疫研究奠定了基础。     

日本血吸虫中国大陆株成虫谷胱甘肽S—转移酶cDNA克隆及其核苷酸？…

日本血吸虫成虫２６ｋＤ谷胱甘肽Ｓ－转移酶是成虫代谢过程中一个关键酶。为研究制备日本血吸虫重组疫苗，根据日本血吸虫菲律宾株成虫Ｓｊ２６ｋＤＧＳＴ完整编码区序列设计引物，以日本血吸虫中国大陆株成虫２６ｋＤＧＳＴｍＲＮＡ模板，采用逆转 聚合酶链反应技术，扩增了其２６ｋＤＧＳＴ完整编码区ｃＤＮＡ将ｃＤＮＡ重组于ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ质粒上，转化大肠杆菌，重组体经限制酶解图谱鉴定，用双脱氧链末端终止法对     

曼氏血吸虫尾蚴28kDa分泌性蛋白酶的组织学定位

曼氏血吸虫尾蚴钻腺释放的蛋白水解酶可能在其钻入宿主皮肤时起一定作用。已纯化出两种在童虫转变过程中释放的丝氨酸蛋白酶(28kDa和60kDa),其中28kDa蛋白酶可分解新转变童虫体表的分子,且可清除童虫表面补体(C3,C3b和Cq,降低童虫对补体杀伤的敏感性。制备了兔抗28kDa蛋白酶     

日本血吸虫SIEA28kDa分子抗原的二维凝胶电泳分析

目的分析鉴定日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原(SIEA)28kDa抗原组分.方法用高效液相离子交换法对电泳纯SIEA28kDa抗原组分进一步分离纯化,对获得的色谱纯SIEA28kDa抗原组分进行二维凝胶电泳分析.结果SIEA经双向凝胶电泳分离、银染后获得的SIEA-2D图谱蛋白斑点以pI 3～7和Mw14～66 kDa范围最多.进一步经图象采集、PDQuest 2D软件分析SIEA双向电泳图谱,计算在相同的设定值条件下获取的蛋白质斑点数,测得SIEA-2D电泳图谱平均为(948±89)个蛋白质斑点数.电泳纯SIEA28kDa抗原组分用高效液相离子交换法纯化后,280、220 nm波长色谱图均为一个两侧对称、光滑的高峰曲线,色谱洗脱液对其活性光密度图也为一个两侧对称、光滑的高峰曲线.二维凝胶电泳银染色可见一个显色饱和度高的蛋白质圆斑,免疫印迹分析为一个显色饱和度高的单一圆斑.结论色谱纯SIEA28kDa抗原组分为单一分子,其等电点为5.7.     

佐剂对血吸虫谷胱甘肽巯基转移酶融合蛋白诱导体液免疫的影响

许多研究表明人类对血吸虫的免疫力是通过重复感染逐渐获得的。因此,抗血吸虫疫苗从理论上说是可行的。由于人类使用活疫苗以及制备足够数量减毒活疫苗的困难,使非活性或修饰的抗原疫苗备受欢迎。研究表明日本血吸虫和曼氏血吸虫谷胱甘肽巯基转移酶(GST)是很有潜力的疫苗抗原。曼     

谷胱甘肽-S-转移酶是抗血吸虫疫苗的潜在组份吗?

谷胱甘肽-S-转移酶(GST_3)是一组同工酶,在血吸虫体内含量丰富。从129/J小鼠对日本血吸虫(Sj)菲律宾株抗力的研究表明,针对GST_s的免疫应答可能与宿主清除     

谷胱甘肽S转移酶系与慢性阻塞性肺疾病

谷胱甘肽S转移酶(GSTs)是一种生物转化酶系,它催化还原型谷胱甘肽(GSH)的巯基与多种亲电子物质的结合,使其还原,功能失活,最终排出体外。近年来研究发现,GSTs酶系以香烟中的多种毒性物质(如氧化剂、自由基等)作为底物,进行生物转化代谢,从而在防止慢性阻塞性肺疾病(COPD)发生发展中起重要作用。由于GSTs基因多态性改变了酶蛋白活性而与COPD易感性密切相关。本文综述近年来GSTs分子生物学研究进展及其与COPD的关系。