丁酸钠诱导K562细胞肺耐药相关蛋白表达的初步研究

目的；研究丁酸钠（NaB)对K562细胞肺耐药相关蛋白（LRP）表达的诱导作用，方法：以K562细胞为体外模型，采用半定量逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）检测NaB诱导前后K562细胞LRP mRNA的水平，采用流式细胞仪检测比较NaB诱导前后K562细胞LRP蛋白表达的变化。结果：2mmol/L诱导后LRP mRNA水平，蛋白表达均明显增加，结论：NaB诱导可使K562细胞LRP mRNA水平和蛋白质表达的增加。     

艾迪注射液对SKOV3人卵巢癌细胞作用的研究

目的 探讨艾迪注射液对SKOV3人卵巢癌细胞的抗肿瘤作用.方法 应用MTT法和RT-PCR 法、ELISA方法分别检测艾迪注射液对SKOV3细胞增殖及SKOV3细胞中VEGF mRNA、VEGF蛋白含量的影响.结果 艾迪组SKOV3人卵巢癌细胞增殖受到抑制,48 h达高峰,抑制率59.51%;SKOV3细胞中VEGF mRNA含量艾迪组较对照组减少,差异有显著性(P＜0.01).结论 艾迪能抑制SKOV3人卵巢癌细胞的增殖,在mRNA、蛋白水平抑制VEGF的表达,进而实现其抗肿瘤作用.     

5-氮杂脱氧胞苷和苯丁酸钠对卵巢癌细胞SKOV3的影响

目的 观察5-氮杂脱氧胞苷(5-Aza-2'-CdR)和苯丁酸钠(SPB)对卵巢癌细胞SKOV3生长及侵袭能力的影响.方法 应用相差显微镜观察SKOV3用5-Aza-2'-CdR和SPB处理前后细胞的形态变化;应用细胞生长曲线、四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察细胞生长的抑制作用;采用流式细胞术测定细胞周期分布的变化;用Transwell小室法检测药物处理前后细胞侵袭力的变化.结果 5-Aza-2'-CdR和SPB联用时,卵巢癌细胞SKOV3的核形态变化明显,细胞的生长速度明显减慢,细胞周期被阻滞在G0/G1期,S期细胞数减少;药物处理后SKOV3卵巢癌细胞的侵袭能力降低与对照组、单用药组相比,P<0.05.结论 5-Aza-2'-CdR和SPB联用时有明显的增效作用.     

丁酸钠诱导的人大肠癌细胞成熟分化中的表型变化

目的：探索食物纤维成分之一丁酸钠对人大肠癌细胞生长,分化的影响。方法：应用MTT、流式细胞仪、光镜及电镜技术、观察经丁酸钠诱导后低分化大肠癌细胞系Clone-A细胞生长及形态学变化。结果：经丁酸钠诱导后,Clone-A细胞生长受到明显抑制：G0／G1期细胞百分比增加,S期细胞百分比减少,细胞增殖指数下降,诱导后Clone-A细胞变长,出现胞浆突起,由圆形、不规则形变为扁平的成纤维细胞样形态,同时,丁酸钠作用2d后,细胞表面伸出丝状伪足,4d后明显变长,胞浆内质网、高尔基体数量及密度增加,内质网集核周围并铺展于胞质内,形态趋于正常。结论：丁酸钠能够抑制低分化人大肠癌细胞生长,诱导其成熟分化,使其一些恶性表型逆转。     

RNAi抑制卵巢癌SKOV3细胞MMP-24基因表达及对细胞侵袭的影响

目的 探讨应用RNA干扰技术沉默MMP-24基因表达,研究其对人卵巢上皮癌SKOV3细胞侵袭力的影响.方法 设计合成2条特异性针对MMP-24基因的siRNA,转染至SKOV3中,采用RT-PCR和Western blotting检测MMP-24mRNA和蛋白表达情况,细胞侵袭实验观察转染后细胞侵袭能力的变化.结果 转染siRNA后,卵巢癌细胞MMP-24mRNA表达受抑制,蛋白表达降低,细胞侵袭力减弱.结论 RNAi沉默MMP-24基因可影响卵巢癌细胞的侵袭,有可能成为治疗卵巢癌的新途径.     

Bcl-2抑制剂S1诱导人卵巢癌细胞凋亡及其机制的研究

目的:以人卵巢癌细胞SKOV3为研究对象,探讨Bcl-2抑制剂S1诱导人卵巢癌细胞凋亡的机制。方法:通过MTT法检测S1作用下卵巢癌细胞的生存率;S1 10μmol/L作用不同时间,流式细胞术检测细胞凋亡率;Western Blot检测凋亡相关蛋白Mcl-1的变化。结果:与对照组相比S1能明显抑制SKOV3的生存率;流式细胞术结果显示,S1引起SKOV3细胞凋亡明显升高;蛋白水平检测S1作用8 h能明显抑制SKOV3细胞Mcl-1蛋白表达。结论:S1可能通过抑制Mcl-1蛋白诱导人卵巢癌细胞凋亡。     

~（125）I标记反义肽核酸对SKOV3细胞CerbB-2 mRNA和Her-2蛋白表达的抑制作用

目的探讨利用脂质体转染125I标记的CerbB-2反义肽核酸（asPNA）阻断人卵巢癌细胞株SKOV3中CerbB-2mRNA翻译并抑制Her-2蛋白表达的作用。方法 （1）125I用CH-T法标记CerbB-2-asPNA,测定其标记率和放化纯。（2）分对照组、非标记分子探针组和125I标记反义肽核酸组,运用RT-PCR法检测各组细胞CerbB-2mRNA的翻译。（3）运用流式细胞仪检测各组细胞的Her-2蛋白表达率。结果 （1）125I标记CerbB-2-asPNA的标记率为（56.90±4.38）%,放射化学纯度为（87.00±0.99）%,放射性浓度为3.7MBq/ml,化学浓度为5.00μmol/L。（2）125I标记CerbB-2-asPNA作用SKOV3细胞24h后,SKOV3细胞CerbB-2在mRNA水平上明显下降,与SKOV3细胞对照组比较,差异有统计学意义（P〈0.01）。（3）125I标记CerbB-2-asPNA作用SKOV3细胞24h后,细胞的Her-2蛋白表达率降低幅度较大,与SKOV3细胞组对比,两者间差异有统计学意义（P〈0.01）。结论 125I-L-CerbB-2-asP-NA对人卵巢癌细胞株SKOV3CerbB-2基因表达在mRNA翻译和蛋白表达水平上均有抑制作用。     

骨桥蛋白促进卵巢癌细胞SKOV3侵袭潜能的实验研究

目的检测卵巢癌细胞株SKOV3中骨桥蛋白（OPN）的表达,探讨OPN对卵巢癌细胞侵袭潜能的影响。 方法pcDNA3.1(-)/OPN重组质粒转染SKOV3细胞,以空质粒转染作对照。采用RT PCR及Western blot法检测OPN mRNA和蛋白表达水平,并用基质凝胶侵袭实验检测两组细胞侵袭力。 结果重组质粒转染SKOV3细胞后OPN mRNA和蛋白表达明显升高。侵袭实验证实重组质粒转染组细胞侵袭力明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。 结论OPN对卵巢癌细胞的侵袭潜能有促进作用。     

外源性p53基因抑制卵巢癌细胞的增殖并增加其对放疗的敏感性

目的　探讨外源性p5 3基因转染对人卵巢癌细胞系SKOV - 3的生物学行为及放疗敏感性的影响。方法　用脂质体介导的方法 ,将p5 3基因的真核细胞表达载体 (PcDNA -p5 3)导入不表达p5 3的人卵巢癌SKOV - 3细胞中 ,经G4 1 8筛选 ,Northernblot及Westernblot鉴定后 ,观察细胞生长速度、集落形成能力和增殖周期的变化 ;观察p5 3基因转染与放疗联合作用对细胞集落形成的影响。结果　外源性p5 3基因的表达明显抑制了卵巢癌细胞的生长及集落形成能力 ,使细胞阻滞于G1 期。p5 3基因与放疗联合作用明显抑制了卵巢癌细胞的集落形成。结论　外源性p5 3基因能抑制卵巢癌细胞的生长 ,并增加卵巢癌细胞对放疗的敏感性     

蝎毒组分Ⅰ对卵巢癌细胞SKOV3生长的抑制作用

目的：观察蝎毒组分Ⅰ(SV-Ⅰ)对卵巢癌细胞SKOV3生长的抑制作用。方法：卵巢癌细胞SKOV3分为空白对照组和SV-Ⅰ处理组(终浓度分别为200、400、800 mg•L^-1)，采用MTT法检测SV-Ⅰ对卵巢癌细胞SKOV3生长抑制率，集落形成法检测肿瘤细胞增殖，流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡的变化。结果：200、400和800 mg•L^-1-1组, SKOV3细胞集落数分别为57.00±6.16和48.00±4.11，明显低于对照组（84.00±5.29）(P<0.01)；与空白对照组比较，400 mg•L^-1组SKOV3细胞S期细胞数明显减少（P<0.01），G₂+M期细胞明显增多 (P<0.01)， 800 mg•L^-1组SKOV3细胞G₂+M期细胞数明显减少（P<0.01），G₁期细胞数有增多趋势；与空白对照组比较，400 和800 mg•L^-1组SKOV3凋亡细胞数明显增加（P<0.01）。结论：在一定浓度范围内蝎SV-Ⅰ可明显抑制卵巢癌细胞SKOV3的生长，其机制与SV-Ⅰ抑制SKOV3细胞DNA合成、诱导SKOV3细胞发生G₂+M和G₁期阻滞及诱导SKOV3细胞凋亡有关。     

肝/肾/骨型碱性磷酸酶基因ALPL抑制卵巢癌细胞系SKOV3增殖的研究

目的 研究肝/肾/骨型碱性磷酸酶基因(alkaline phosphatase,liver/bone/kidney,ALPL)在卵巢癌细胞株中的表达及其对卵巢癌细胞SKOV3增殖的影响.方法 通过qRT-PCR检测ALPL在不同卵巢癌细胞株(HEY、SKOV3、8910、ES-2、OVCAR3、3AO、A2780)mRNA中的表达,并与正常卵巢组织进行比较.在低表达ALPL的卵巢癌细胞株SKOV3中外源性过表达ALPL,通过MTT法、平板克隆实验检测细胞的增殖,流式细胞仪检测细胞周期.通过建立裸鼠皮下种植瘤模型,观察过表达ALPL的SKOV3细胞在体内的成瘤能力.结果 ALPL在卵巢癌细胞中的mRNA表达低于正常卵巢组织(P＜0.01),外源性过表达ALPL可抑制SKOV3细胞的增殖和克隆形成率(P＜0.01),阻滞细胞G1期向S的转化,并抑制肿瘤细胞的成瘤能力(P＜0.05).结论 ALPL表达的恢复可以明显抑制卵巢癌细胞SKOV3的增殖及成瘤能力.     

WT1反义核酸诱导卵巢癌细胞凋亡的实验研究

[目的]研究WT1反义寡核苷酸转染对卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响。[方法]实验分4组:正常对照组(加入转染液)、反义组(脂质体+反义寡合苷酸转染)、正义组(脂质体+正义寡合苷酸转染)和脂质体组(只加入脂质体)。分组转染卵巢癌SKOV3细胞株后,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期,MTT法检测细胞的增殖活性,RT-PCR检测WT1 mRNA表达水平,Western blot检测其蛋白表达水平。[结果]脂质体介导的WT1反义寡核苷酸转染明显抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖,抑制率为49.48%,G0-G1期细胞分布率增加达(79.10±2.79)%,凋亡细胞群明显增多,凋亡率为(13.18±2.00)%,同时转染后细胞WT1 mRNA及蛋白表达水平下降,与对照组及其他各组相比较差异均有显著性意义(P<0.05)。[结论]WT1反义核酸能抑制卵巢癌细胞增殖,诱导细胞凋亡。WT1反义核酸用于卵巢癌的基因治疗具有一定的潜在意义。     

卵巢癌细胞和脐血树突状细胞融合瘤苗的体外培养与免疫原性的研究

目的将脐血来源的树突状细胞(DC)与人卵巢癌细胞株SKOV3细胞相融合,获得SKOV3/DC融合细胞,分析其生物学特性及其免疫原性。方法①利用PKH26红色荧光染料标记脐血来源的DC,用聚乙二醇法(PEG)融合DC与人卵巢癌细胞株SKOV3细胞,用流式细胞仪分选融合细胞(SKOV3/DC)。②应用细胞培养技术、流式细胞术及光学显微镜检测SKOV3/DC的生长特性和形态学特征,并分析其免疫原性。结果①脐血来源的单核细胞(Mo)在相关细胞因子的作用下,可诱导分化为DC,其可表达表面抗原CD1a、CD80、CD86、HLA-DR及MHC-Ⅰ,不表达CA125。②人卵巢癌细胞株SKOV3细胞为CA125及MHC-Ⅰ双阳性细胞,不表达CD1a、CD80、CD86和HLA-DR分子。③树突状细胞和SKOV3按10∶1比例融合,融合率约为8.5%。SKOV3/DC形态与亲本肿瘤细胞相似,CA125抗原表达呈阳性,并且高表达CD1a、CD80、CD86、HLA-DR和MHC-Ⅰ分子。SKOV3/DC在体外能分裂增殖,但增殖活性明显低于SKOV3细胞。结论①脐血中的DC前体细胞(单核细胞)可在体外分化扩增为成熟的功能性DC。②SKOV3/DC融合细胞兼具两种亲本细胞的部分特性,但其体外增殖活性明显降低,失去亲本肿瘤的恶性生长特性。本研究为将SKOV3/DC作为肿瘤疫苗用于卵巢癌主动免疫治疗的研究提供了前期资料。     

ISO-1在卵巢癌侵袭中的作用

目的 探讨巨噬细胞移动抑制因子MIF特异抑制剂(S, R)-3-(4-羟苯基)-4, 5-二氢-5-异噁唑乙酸甲酯(ISO-1)对卵巢癌细胞增殖、侵袭的作用以及对血管内皮生长因子受体2(vascular endothelial growth factorreceptor-2,VEGFR-2)的影响,为卵巢癌CD74靶向治疗奠定基础。方法 不同浓度ISO-1作用于人卵巢癌细胞SKOV3、A2780,对照组以相应浓度的稀释液处理。MTT法检测卵巢癌细胞增殖,L 多巴色素甲酯测定M IF互变异构酶活性,微孔迁移法检测卵巢癌细胞体外侵袭,RT- PCR检测mRNA表达情况。结果 ISO-1能显著抑制人卵巢癌细胞SKOV3、A2780的增殖及其MIF互变异构酶活性(P<0.05),且两者呈正相关性(SKOV3: r=0.841, P<0.01; A2780: r=0.862, P<0.01); 50μmol/L ISO-1作用于卵巢癌细胞SKOV3、A2780细胞24h后,其穿透聚碳酸酯膜的能力显著降低(P<0.05),同时卵巢癌细胞的CD74、VEGFR-2的mRNA水平显著降低(P<0.05)。结论 ISO-1通过抑制CD74的活性下调VEGF、VEGFR-2的表达,从而抑制卵巢癌细胞的增殖及侵袭。     

纳米雄黄对卵巢癌细胞增殖凋亡的调控作用及分子机制研究

目的：探讨纳米雄黄对卵巢癌细胞Skov3增殖和凋亡的影响及其潜在分子机制。方法：采用机械研磨法制备纳米雄黄;以Skov3细胞为靶细胞,分别采用MTT实验及流式细胞术检测细胞增殖能力和凋亡情况;同时,利用Western blot检测细胞内Bcl-2及Bax蛋白的表达变化。结果：纳米雄黄能够显著抑制细胞增殖能力;40mg/L和80mg/L纳米雄黄处理Skov3细胞48小时,细胞凋亡显著增加;40mg/L纳米雄黄处理Skov3细胞48小时,Skov3细胞内Bcl-2蛋白表达水平显著降低,Bax蛋白表达显著增加。结论：纳米雄黄能够显著抑制Skov3细胞增殖,促进其凋亡,可能通过抑制细胞内Bcl-2蛋白的表达,上调Bax蛋白表达发挥抑制卵巢癌的发生发展的作用。     

c-erbB2反义寡核苷酸对人卵巢癌细胞放射敏感性的影响

目的 :探讨癌基因c -erbB2的反义寡苷酸对人卵巢癌细胞放射敏感性的影响。方法 :设立c -erbB2正义寡核苷酸组和非处理组作对照 ,用RT -PCR检测卵巢癌细胞处理前后c -erbB2表达水平的变化。用MTT法及平板克隆形成试验检测人卵巢癌细胞株SKOV3在脂质体c-erbB2反义寡核苷酸作用前后受60 Coγ射线不同剂量照射后的细胞存活分数和集落形成率。结果 :c -erbB2反义寡核苷酸能抑制c-erbB2癌基因的表达 ,经脂质体介导的c-erbB2反义寡核苷酸作用的卵巢癌细胞经γ射线照射后其存活分数和集落形成率较转染正义寡核苷酸组及单纯照射组明显下降 (P <0 .0 1) ,而转染c -erbB2正义寡核苷酸组的存活分数和集落形成率与单纯照射组相比无明显差异 (P >0 .0 5 )。结论 :c -erbB2反义寡核苷酸通过抑制c -erbB2的表达降低人卵巢癌细胞株SKOV3放射抗拒性。该作用可能与c-erbB2反义寡核苷酸抑制了引起细胞辐射抗拒的细胞信号转导途径有关。     

巨噬细胞通过分泌抗菌肽LL-37/hCAP-18调控卵巢癌细胞的增殖

目的 研究巨噬细胞是否通过分泌抗菌肽LL-37/hCAP-18对卵巢癌细胞的生长增殖进行调控。方法 采用Millicell插入式细胞培养皿共培养人巨噬细胞和卵巢癌细胞株SKOV3;通过细胞计数法检测巨噬细胞对卵巢癌细胞增殖能力的影响;流式细胞术检测共培养上清中的相关细胞因子及LL-37的水平;实时定量反转录聚合酶链反应在mRNA水平检测巨噬细胞和SKOV3细胞中LL-37 mRNA的表达水平;应用LL-37中和抗体抑制LL-37的功能及活性,进而通过MMT细胞增殖实验探讨LL-37对巨噬细胞对卵巢癌细胞增殖的调控。结果 细胞计数法检测结果显示,巨噬细胞与卵巢癌细胞SKOV3共培养后,可促进其增殖;共培养的上清中,LL-37及IL-6水平明显升高;实时定量RT-PCR在mRNA水平共培养中的巨噬细胞其LL-37基因表达升高,且其表达水平随时间的延长而增加;应用LL-37的中和抗体,可明显抑制巨噬细胞对SKOV3细胞的增殖促进作用。结论 在与卵巢癌细胞共培养的环境中,巨噬细胞通过增强抗菌肽LL-37的表达和分泌水平促进卵巢癌细胞的增殖,LL-37在巨噬细胞促进卵巢癌的发展中扮演重要角色。     

MiR-125b-5p抑制卵巢癌细胞的迁移和侵袭：基于靶向下调CD147的表达

目的 探讨miR-125b-5p靶向调控细胞外基质金属蛋白诱导因子（CD147）表达对卵巢癌细胞生物学行为的影响及作用机制。方法 应用荧光实时定量PCR技术（RT-qPCR）检测卵巢癌组织和癌细胞株中miR-125b-5p和CD147 mRNA的表达;构建过表达miR-125b-5p的SKOV3细胞或低表达miR-125b-5p的HO8910细胞。CCK-8实验、克隆形成实验、Transwell实验检测过表达或低表达miR-125b-5p对卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力的影响;使用Starbase(http://starbase. sysu.edu.cn/)生信软件预测miR-125b-5p与CD147之间的潜在互补结合位点并使用双荧光素酶报告基因实验进行验证其靶向关系;体外培养SKOV3细胞,分别转染mimic NC、miR-125b-5p mimic、miR-125b-5p mimic和pcDNA3.1、miR-125b-5p mimic和pcDNA3.1-CD147,转染后分为mimic NC组、miR-125b-5p mimic组、miR-125b-5p mimic组+pcD...