Blastocyst MHC 基因转染延长小鼠移植心脏存活时间

目的 探讨Blastocyst MHC基因经供心冠状动脉转染对移植心脏存活时间的影响. 方法 分别以近交系健康雄性Balb/c小鼠和C57BL/6小鼠为供、受者,制备小鼠颈部心脏移植模型,对照组供心以0～4℃托马斯Ⅱ溶液灌注;环孢素A(CsA)组供心用前述方法灌注,术后受者腹腔注射CsA 5 mg·g1·d-1;转染组供心以含Blastocyst MHC基因转染质粒的托马斯Ⅱ溶液灌注;联合处理组供心以含Blastocyst MHC基因转染质粒的托马斯Ⅱ溶液灌注,术后腹腔内注射CsA.观察各组移植心脏存活时间和组织学变化,测定移植心脏组织中Blastocyst MHC基因mRNA表达以及外周血CD4+ CD25+调节性T淋巴细胞(Treg细胞)及CD3+ CD8+ T淋巴细胞的变化. 结果 CsA组、转染组和联合处理组移植心脏存活时间较对照组明显延长(P＜0.115),其中以联合处理组最为显著,达(20.50±5.61)d.转染组术后1、3 d的Blastocyst MHC基因mRNA表达水平较对照组明显升高(P＜0.05).术后7 d,联合处理组的排斥反应程度最轻,其冠状动脉内膜增生也最轻.术后7 d,CsA组和联合处理组Treg细胞明显多于对照组(P＜0.05),而CD3+ CD8+ T淋巴细胞明显少于对照组(P＜0.05). 结论 移植前转染Blastocyst MHC基因能够通过上调Treg细胞、抑制CD3+ CD8+ T淋巴细胞而延长小鼠移植心脏存活时间,与CsA联合有协同作用.     

供体脾细胞胸腺注射对大鼠肢体移植存活的研究

目的 :通过大鼠肢体移植模型 ,旨在分析供体脾细胞注射对大鼠肢体移植中免疫耐受的诱导作用。方法 :选择雄性Wistar和SD大鼠为供、受体 ,对照组为胸腺注射脾细胞培养液 ,实验组为供体脾细胞注射 ,进行了 1 6例异体肢体移植动物实验。观察大鼠移植肢体排斥反应时间及存活时间。结果 :对照组肢体平均存活时间为 ( 9.38± 1 .92 )d ;实验组移植肢体存活时间为 ( 1 5.38± 2 .97)d。结论 :供体脾细胞胸腺注射大鼠肢体移植术后能够明显延长移植肢体的存活时间。     

供者基因转染受者细胞诱导特异性免疫耐受的实验研究

目的　探讨供体特异性基因片段MHCClassI类抗原分子RT1.AacDNA在诱导免疫耐受中的作用和可能机制。方法　采用大鼠同种异体心脏异位移植模型,通过供体MHCClassI类抗原的RT1.AacDNA基因片段转染受体成肌细胞（MB）并接种自体胸腺,观察移植物存活时间,判断受体免疫耐受产生和维持的状态。结果　经胸腺接种转染供体基因的自体成肌细胞并同时服用CsA,移植物平均存活时间高达(96.13±12.91)d,明显高于其它实验组（P＜0.05）;动态混合淋巴细胞反应（MLR）,无论外周输注或胸腺接种其对照组cpm值均高于各自实验组;CD4     

骨髓细胞胸腺内注射对移植肠CD4、 CD8和CD25的影响

目的 探讨异基因骨髓注射在大鼠小肠移植中的免疫耐受作用和意义.方法 选用近交系大鼠F344/N和Wistar/A进行全小肠异位移植,实验组在异基因移植前7d取供体BMC行受体胸腺内注入,对照单纯同基因及异基因大鼠移植模型了解异基因供体骨髓在受体胸腺内注射能否减少移植后急性排斥反应的发生,观察其生存时间、病理结果及CD4、CD8、CD25的变化.结果 (1)A组移植大鼠平均存活时间为(7.33±1.03) d;B组为(43.76 ±4.57) d;C组为(55.28±7.48)d.(2)异基因大鼠异位全小肠移植术后3、7、15 d可出现典型的轻、中、重度排斥反应,而同基因组和实验组中未出现排斥反应.(3)异基因移植组术后CD4、CD25+,高于其他组(P＜0.05).而CD8的变化差异无统计学意义(P＞0.05).结论 移植术前7d异基因供体骨髓在受体胸腺内注射能显著减少小肠移植后急性排斥反应的发生,并可以抑制移植肠CD4、CD25细胞的表达.     

胸腺内注射可溶性异基因主要组织相容性复合物抗原诱导皮肤移植特异性耐受

用３ｍｏｌ／ＬＫＣｌ从Ｃ５７ＢＬ／６小鼠脾细胞提取可溶性主要组织相容性复合物（ＭＨＣ）抗原，注射到ＢＡＬＢ／Ｃ受体鼠胸腺内，诱导了成年小鼠对该异基因小鼠皮肤移植物的耐受。除在胸腺注射当天及第３天给予抗Ｔ细胞单克隆抗体外，不使用免疫抑制剂。实验组移植皮肤平均存活时间（ＭＳＴ）为８３天，对照组ＭＳＴ为１１天。诱导耐受的小鼠对第３供体的移植皮肤仍正常排斥（ＭＳＴ为１２天）。单向混合淋巴细胞反应，耐受小鼠脾脏淋巴细胞对特异供体的脾细胞无反应，对第３供体的脾细胞反应正常，对丝裂原刺激的增殖反应正常。显示诱导的耐受是供体特异性的，无非特异性免疫抑制。     

转染病毒白细胞介素10基因对同种小鼠心脏移植生存的影响

目的了解病毒白细胞介素10(vIL10)基因对同种小鼠移植心脏的影响。方法用小鼠干细胞病毒(MSCVneo)逆转录病毒表达系统和vIL10cDNA构建MSCVneovIL10重组体,在体外转导CBA(H2K)小鼠的造血干细胞,输入经致死量照射(900rad)的同基因CBA(H2K)小鼠体内,8周后以vIL10表达阳性的CBA(H2K)小鼠(12只,实验组)作为受体,C57BL/6(H2b)小鼠为供体,进行同种腹部异位心脏移植,以未处理、移植无病毒转染的造血干细胞(HSCs)、移植空MSCVneo转染的HSCs鼠(均为10只)为对照组。在移植后第8天,每组受体动物各杀死5只,取出移植心脏行组织病理学、CD+4与CD+8T淋巴细胞浸润(免疫荧光抗体法)检查,IL2、IL4、IL6、小鼠IL10(mIL10)、γ干扰素(IFNγ)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、B71、B72mRNA表达的测定[逆转录聚合酶链反应(RTPCR)法],余下的动物观察移植心脏存活时间。结果(1)实验组移植心脏存活时间(800±333)d,其他对照组分别为(104±10),(116±11)与(112±17)d(P<001);(2)实验组心肌炎性细胞浸润稀少、心肌结构完整、无明显血管炎,急性排斥反应Ⅰ级,而其他对照组则出现严重的炎性细胞浸润、心肌灶性坏死、心内膜炎、血管炎和心肌出血,急性排斥反应均为Ⅲ级;(3)实验组移植物内IL2、IFNγ、B71、和B72和iNOS的mRNA表达明显下调,而其     

靶向OX40基因的siRNA抑制大鼠肝脏移植排斥反应的研究

目的 探讨RNA干扰阻断OX40-OX40L共刺激通路对大鼠移植肝存活时间的影响.方法 制作原位肝脏移植物大鼠模型,供体DA大鼠,受体Lewis大鼠.移植术毕时将5 ml含5×109pfu的pLVTHM-OX40-siRNA重组慢病毒经阴茎背静脉在10秒内注射受鼠体内,术后观察受鼠存活时间,移植肝脏进行组织病理学检查,采用ELISA法检测大鼠外周血IL-2、IFN-γ的水平,并进行受者大鼠脾细胞对供者大鼠脾细胞的混和淋巴细胞反应(MLR). 结果转染组大鼠肝脏移植物的存活时间为(74.0±9.3)d,明显长于对照组(7.3±0.5)d和未转染组(7.5±0.5)d;转染组移植肝组织炎细胞浸润、间质水肿、肝组织坏死程度较对照组和未转染组减轻;耐受组大鼠脾脏中T淋巴细胞刺激T淋巴细胞增殖的能力较对照组降低(t=25.1,P＜0.01);移植术后第7 d,转染组血清IL-2浓度为(46±8.4)pg/ml,IFN-γ浓度为(202.7±14.6)pg/ml,均显著低于对照组和未转染组(分别t=176.4,45.5,P＜0.01).结论 转染靶向OX40的siRNA,可通过阻断OX40-OX40L共刺激通路,抑制大鼠肝脏移植后的排斥反应,延长大鼠移植肝的存活时间.     

输注转染FasL基因的供者树突状细胞减轻小鼠心脏移植排斥反应

目的 探讨转染FasL基因的供者树突状细胞(DC)对小鼠心脏移植排斥反应的影响.方法 分离并培养C57BL/6小鼠骨髓DC,然后采用脂质体法以自行构建的pTracer-FasL真核表达质粒转染DC.以C57BL/6小鼠为供者,Balb/c小鼠为受者,将其分为转染组(n=12)、未转染组(n=12)及移植对照组(n=12).转染组小鼠心脏移植前7 d经阴茎背静脉注射1×106个转染FasL基因的供者DC;未转染组小鼠心脏移植前7 d经阴茎背静脉注射1×106个未转染的供者DC;移植对照组仅行心脏移植,不接受供者DC输注.供心均移植于受者腹腔内.各组中,6只小鼠用于观察移植心脏存活时间,另6只于术后7 d处死,取移植心脏,进行组织学观察及移植心脏排斥反应病理分级.结果 转染组、未转染组和移植对照组小鼠移植心脏存活时间的中位数分别为20 d、8.5 d和9 d,转染组移植心脏的存活时间明显长于未转染组和移植对照组(P＜0.01).转染组中,2只排斥反应的病理分级为0级,4只为1级;未转染组中,2只为2级,4只为3级;移植对照组中,1只为2级,5只为3级.转染组排斥反应的病理分级明显低于移植对照组(P＜0.01).结论 受者于心脏移植前输注转染FasL基因的供者DC,可有效延长移植心脏的存活时间,并减轻排斥反应的程度.     

激活型Akt1转染大鼠胰岛联合免疫抑制剂在异种胰岛移植中的应用

目的 探讨腺病毒载体介导激活性Akt1基因(Adv-CA-Akt1)转染大鼠胰岛对异种移植胰岛功能和存活的影响.方法 以BALB/C糖尿病小鼠为受体,分离纯化雄性Wistar大鼠胰岛,体外培养,Adv-CA-Akt1转染后异种胰岛移植.受体小鼠分3组,实验组:Adv-CA-Akt1转染的大鼠胰岛体外培养24 h,小鼠肾被膜下移植,并口服环孢素A(CsA)30 mg·kg-1·d-1;CsA组:未转染胰岛移植,同剂量环孢素口服;对照组:单纯胰岛移植.每只接受300胰岛当量(IEQs)移植.检测术后血糖,移植物存活时间及组织病理学.结果 实验组和CsA组术后2 d血糖即降至正常,胰岛功能存活时间分别为(21.0±3.65)d和(9.0±2.54)d,而对照组血糖短暂下降后再次升高,胰岛功能存活时间(4.2±2.6)d.实验组小鼠生存时间为(31.0±5.67)d比CsA组(17.0±3.35)d和对照组(10.0±1.52)d明显延长,三组比较差异有统计学意义(P<0.05);胰岛素免疫组化染色实验组.肾被膜下见较多有功能胰岛细胞团,而CsA组和对照组胰岛素染色阳性细胞数减少.结论 Adv-CA-Akt1转染大鼠胰岛联合应用免疫抑制剂,可提高胰岛功能,延长异种胰岛移植物存活时间.     

胸腺注射供体脾细胞诱导移植心脏免疫耐受的实验研究

目的探讨诱导心脏移植免疫耐受的方法及其产生的可能机制. 方法采用大鼠腹部心脏移植模型,随机分成未处理(Ⅰ)组,胸腺注射供体脾细胞(Ⅱ)组,腹腔注射兔抗鼠淋巴细胞血清(Ⅲ)组,胸腺注射供体脾细胞联合应用兔抗鼠淋巴细胞血清(Ⅳ)组,每组6只大鼠.Ⅱ、Ⅳ组在移植前2 1 d将供体脾细胞2.5×107个注射到受体胸腺,Ⅲ、Ⅳ组受体腹腔注射兔抗鼠淋巴细胞血清(ALS)1 ml,然后行异位心脏移植.观察移植心脏存活时间,供心病理学改变及供、受体间的混合淋巴细胞反应(MLR). 结果Ⅳ组供心平均存活时间(MST)为(81.8±7.6)d,较Ⅰ组(7.3±1.0)d、Ⅱ组( 7.8±1.0)d、Ⅲ组(8.2±1.2)d显著延长,差异有显著性意义(P＜ 0.01 );供心仅见少量炎性细胞浸润;供、受体间MLR较正常对照组显著降低,差异有显著性意义(P＜0.01). 结论胸腺注射供体脾细胞联合应用ALS能成功诱导心脏移植的免疫耐受;胸腺内特异性T细胞克隆消除可能与免疫耐受的形成有关.     

Gene therapy

We selected bone-metastatic prostate cancer as the target form of recurrent prostate cancer and developed a suicide-gene therapy based on an adenovirus vector with an organ-specific osteocalcin promoter. Related clinical studies have already been conducted in the United States at the University of Virginia, where results so far have established the safety of this therapy. In the present paper, in addition to presenting the results of these gene-therapy studies from the basic research to the clinical stage, we discuss the clinical studies begun by our group in August 2003. In the 21st century, therapeutic systems in use are undergoing major changes. Gene therapy is likely to become an important therapeutic option in recurrent prostate cancer. In terms of theory and technology however, this form of treatment is still at a very immature stage of development. We look forward to evolution in this field to provide an established treatment for recurrent prostate cancer and are committed to actively continuing with the development of gene therapy through translational research.     

应用基因芯片技术研究成年男性精子的基因表达

目的:初步研究健康成人精子中基因的表达情况。方法:收集成年男性活力正常的精子,提取总RNA,以健康成人淋巴细胞总RNA作对照。两组RNA逆转录为cDNA之后,cDNA经酶切、加接头后进行RD扩增,在扩增同时分别掺入Cy3(精子)和Cy5(淋巴细胞)荧光染料标记,标记样品与自制的精子基因表达谱芯片杂交。结果:检测发现在560个基因片段中,有72个基因表达上调,321个基因表达下调,另外167个基因表达无差异。其中与基因复制、转录、翻译及调控等相关的基因表达基本属于无差异表达类型或低表达类型,而与精子发生相关的基因、精子本身的特异性抗原等基因显著高表达,精子中糖酵解相关基因表达上调,而与氧化磷酸化相关的基因则表达下调。结论:在健康成人精子中有丰富的基因表达,而且基因的表达与精子自身的功能和特点相一致。     

胃癌基因诊断和治疗的研究进展

目的 回顾胃癌基因诊断和治疗的研究进展.方法 复习相关资料,就近年来胃癌基因诊断和治疗方面的研究进展作一综述.结果 使用基因技术检测肿瘤标志物对胃癌的早期发现、预后监测、疗效判断等都具有较大的临床意义.胃癌的基因治疗还有许多问题需进一步解决.结论 基因检测及治疗将成为胃癌诊治的重要辅助手段.     

颅缝早闭症相关实验荧光定量PCR内参基因的选择研究

目的探讨用于颅缝早闭症相关实验的荧光定量PCR的最佳内参基因。方法应用与颅骨成骨、颅缝闭合相关的3组实验标本,分别为:Fgfr2cC342Y/+Crouzon综合征小鼠颅缝组织、颅缝早闭患者体外培养颅缝原代细胞和体外培养的小鼠Kusa 4b 10成骨细胞株。以常用的候选管家基因作为研究对象,利用geNorm软件对RT-qPCR结果进行比较分析,以筛选出在不同组织细胞中表达最为稳定的管家基因作为内参。结果Fgfr2cC342Y/+小鼠颅缝组织,Cyc1-Gapdh-Canx为最佳组合;颅缝早闭症患者体外培养颅缝原代细胞,18S rRNA和ATP5B为最佳组合;体外培养的小鼠Kusa 4b10成骨细胞株,18S rRNA和Canx为最佳组合。选择不同内参基因对目的基因RT-qPCR的结果影响显著。结论在设计RT-qPCR实验之前,应针对所选择的标本类型与种类进行管家基因稳定性分析,以增加结果的可信度。     

Gene therapy and transplantation

Advances in molecular biology and in techniques of gene transfer have resulted in the development of practical approaches to human gene therapy. Many applications are of relevance to manipulation of the immune system and have potential in organ and cell transplantation. For example, gene therapy approaches may facilitate the induction of immunological tolerance to a donor organ or protect it locally against the host's immune response. Based on a comprehensive review of the world literature, examples of current research efforts in both allogeneic and xenogeneic transplantation are presented and discussed.