国内首次发现携带耶尔森菌HPI毒力岛irp-2基因的阴沟肠杆菌

目的 研究感染性腹泻患者粪便中分离的阴沟肠杆菌携带的小肠结肠炎耶尔森菌HPI毒力岛irp-2基因,并评价其菌株的毒力和耐药情况.方法 PCR扩增法检测毒力岛irp-2基因,小白鼠腹腔注射法检测毒力,药敏试验采用K-B纸片扩散法.结果 从感染性腹泻患者粪便中分离的9株阴沟肠杆菌均扩增出irp-2基因片段,其相对分子量与对照菌株小肠结肠炎耶尔森菌WA株(O8型)的相应PCR片段一致,并具有较强的毒力.结论 检出的阴沟肠杆菌含有小肠结肠炎耶尔森菌HPI毒力岛irp-2基因且为具有毒力的菌株,与致病性密切相关.     

西南战区腹泻患者携带耶尔森菌HPI毒力岛大肠艾希菌调查

目的收集西南战区部队和地方医院腹泻患者粪便标本,做细菌分离与鉴定,分析病原菌组成。对分离的部分生化反应符合大肠艾希菌,但血清学证明不属于肠侵袭性大肠杆菌（EIEC）、肠产毒性大肠杆菌（ETEC）、肠致病性大肠杆菌（EPEC）和肠出血性大肠杆菌（EHEC）的菌株,做耶尔森菌HPI毒力岛irp-2基因检测,了解西南战区腹泻病人粪便中分离的大肠艾希菌携带耶尔森菌HPI毒力岛irp-2基因的存在情况。方法常规法分离,用肠杆菌科细菌生化鉴定编码系列（API-20E或GYZ-11e系统）和VITEK32全自动微生物生化分析仪以及弧菌科细菌生化鉴定编码系列（GYZ-9V系统）进行系统鉴定,PCR扩增法检测耶尔森菌HPI毒力岛。结果在1 352例腹泻病人中检出36个属种594株病原菌,检出率为43.93%,弗劳地枸橼酸杆菌检出率为6.14%、肺炎克雷伯菌为5.62%、变形杆菌4.66%、志贺菌4.07%,EIEC 1.85%,检出36株携带耶尔森菌HPI毒力岛irp-2基因大肠艾希菌,检出率为2.66%。结论从1352例腹泻患者粪便标本中分离到弗劳地枸橼酸杆菌占首位,肺炎克雷伯菌次之,变形杆菌、志贺菌分别居第三、第四位。西南战区存在携带耶尔森菌HPI毒力岛irp-2基因的大肠艾希菌。     

携带小肠结肠炎耶尔森菌HPI毒力岛大肠杆菌的毒力基因分析

目的探索HPI毒力岛阳性大肠杆菌的毒力基因存在情况。方法使用PER和杂交技术对152株HPI毒力岛阳性的大肠杆菌进行相关毒力基因检测。结果在152株携带HPI毒力岛的大肠杆菌中，基本上未栓出常见的5类致泻性大肠杆菌的毒力基因，但是部分菌株检出泌尿道致病性大肠杆菌PAI毒力岛基因yc73和prrA以及RTX毒力岛基因rtx615。结论这些大肠杆菌和已知的致泻性大肠杆菌有明显不同，携带HPI毒力岛的大肠杆菌可能包括几个不同的群，可能存在其它的尚未发现的毒力因子，有必要继续进行进一步研究。     

耶尔森菌HPI毒力岛全岛缺失突变载体的构建

目的 构建耶尔森菌HPI毒力岛全岛缺失突变载体,为进一步构建HPI全岛缺失株打下基础。方法根据已知小肠结肠炎耶尔森菌HPI毒力岛基因序列设计PCR引物,扩增并克隆irp8结构基因,作为同源重组的一侧序列,以irp5的部分序列作为同源重组的一侧序列,并将之克隆入同一载体,中间插入有卡那霉素(Km)基因(kan)、抗性标记。以自杀质粒pcvD442为载体．构建了含有irp8基因和Irp5部分序列的缺失突变载体pCO85。结果构建的突变载体经酶切及PCR鉴定克隆片段大小与预期一致。结论成功构建了致耶尔森菌HPI毒力岛全岛缺失突变载体,这个以小肠结肠炎耶尔森菌为靶序列构建的重组自杀质粒可应用于肠杆菌科及其他菌属HPI毒力岛全岛缺失株的构建。     

海南首次从腹泻病人分离出小肠结肠炎耶尔森氏菌

国内外已从人畜、食品和饮水分离到小肠结肠炎耶尔森氏菌(下简称耶氏菌),确认它是引起人类腹泻的重要病原菌之一。1988年夏秋,我们在海府地区从痢疾样腹泻患者检出2株耶氏菌,现报告如下。材料和方法材料1.标本:从海南省人民医院、海口市人民医院、驻军一八七医院收集临床诊断为细菌性痢疾(菌痢)的腹泻病人大便或肛拭子标本129份,放入Cary-Blair二氏培基保存送检。     

山东省宿主动物中小肠结肠炎耶尔森菌分布状况及毒力研究

目的了解山东省动物宿主中小肠结肠炎耶尔森菌分布及病原学特征。方法对从家畜和家禽宿主中分离到的菌株进行生化鉴定、血清学分型和聚合酶链反应(PCR)检测。结果 2225份标本中共检出72株小肠结肠炎耶尔森菌,检出率为3.24%,包括生物1A型和生物4型。其中共检测到13种血清型,从猪的标本中分离到3株致病菌株,占细菌总数的4.17%,仅携带ystB基因的占81.94%。结论本地区动物宿主中普遍存在小肠结肠炎耶尔森菌感染,本地区应进一步加强该菌的监测工作。     

blaNDM-1基因敲除对阴沟肠杆菌毒力的影响

目的 比较blaNDM-1基因敲除前后阴沟肠杆菌毒力的变化,阐明blaNDM-1基因对其毒力的影响。 方法 将携带blaNDM-1基因的阴沟肠杆菌分为携带耐药基因blaNDM-1的阴沟肠杆菌T2（T2组）、阴沟肠杆菌T2 blaNDM-1基因敲除株（ΔT2组）和阴沟肠杆菌ATCC13047（ST组）。检测各组质粒稳定性、各组阴沟肠杆菌的菌落运动直径、生物膜吸光度（A）值、黏附细菌量、黏附率及侵袭黏附比。 结果 传代200次后,T2组阴沟肠杆菌仍携带blaNDM-1基因,ΔT2和ATCC13047组阴沟肠杆菌不携带blaNDM-1基因;T2组阴沟肠杆菌仅携带碳青霉烯类耐药基因blaNDM-1,其他碳青霉烯类耐药基因blaKPC-2、blaIMP-4、blaVIM-1和blaOXA-48均为阴性;ΔT2和ST组所检测的5种碳青霉烯类耐药基因均为阴性,T2与ΔT2组阴沟肠杆菌携带相同的毒力基因clpB、icmf和acrA。T2组菌落运动直径小于ΔT2和ST组（P<0.05）。与T2组比较,ΔT2组生物膜A值升高,但差异无统计学意义（P>0.05）。与T2组比较,ΔT2组黏附细菌量降低,但差异无统计学意义（P>0.05）。共培养24 h后,T2组和ΔT2组RAW264.7细胞的黏附率和侵袭黏附比低于ST组（P<0.05）。 结论 blaNDM-1基因未明显增加阴沟肠杆菌的毒力。     

产毒性和致病性大肠杆菌中小肠结肠炎耶尔森菌强毒力岛的检测

目的 了解小肠结肠炎耶尔森菌强毒力岛在产毒性和致病性大肠杆菌中的分布，探讨毒力岛在大肠杆菌中的结构和功能。方法 对毒力岛的关键基因irp2,fyua和asn-intB进行PCR扩增和DNA测序，并对irp2和fyua进行原位杂交。结果 在检测的93株肠产毒性大肠杆菌的10株肠致病性大肠杆菌基因irp2的检出率分别为32.25%(30/93)和30%（3/10),fyua的阳性率为21.51%(20/93)和30%（3/10）。而且这些阳性菌株中的毒力岛大部分连接到天门冬氨酸tRNA(asntRNA）位点。结论 小肠结肠炎耶尔森菌强毒力岛在产毒性和致病性大肠肝菌中较高的阳性率，对于大肠杆菌毒力的变化和毒力的调控以及细菌毒力的进化可能具有重要意义。     

产毒性和致病性大肠杆菌中小肠结肠炎耶尔森菌强毒力岛的检测

目的　了解小肠结肠炎耶尔森菌强毒力岛在产毒性和致病性大肠杆菌中的分布,探讨毒力岛在大肠杆菌中的结构和功能。方法　对毒力岛的关键基因irp2、fyua和asn-intB进行PCR扩增和DNA测序,并对irp2和fyua进行原位杂交。结果　在检测的93株肠产毒性大肠杆菌和10株肠致病性大肠杆菌基因irp2的检出率分别为32.25％（30/93）和30％（3/10）,fyua的阳性率为21.51％（20/93）和30％（3/10）,而且这些阳性菌株中的毒力岛大部分连接到天门冬氨酸tRNA（asn tRNA）位点。结论　小肠结肠炎耶尔森菌强毒力岛在产毒性和致病性大肠杆菌中较高的阳性率,对于大肠杆菌毒力的变化和毒力的调控以及细菌毒力的进化可能具有重要意义。     

丽江市家犬中致病性耶尔森菌流行病学调查

目的 了解丽江市鼠疫疫源地内家犬中携带致病性耶尔森菌的流行情况及其病原学特征。方法 选择丽江市古城区和玉龙县各2个乡镇,逐户采集犬肛拭子及血液标本。肛拭子经4 ℃冷增菌后,采用耶尔森选择培养基对小肠结肠炎耶尔森菌、鼠疫耶尔森菌和假结核耶尔森菌三种致病性耶尔森菌进行分离;对所分菌株再进行生化鉴定、生物分型、血清分型和毒力基因型检测;对血液标本进行鼠疫F1抗体的检测。结果 共采集467份肛拭子,分离到4株小肠结肠炎耶尔森菌,未分离到鼠疫耶尔森菌及假结核耶尔森菌;4株小肠结肠炎耶尔森菌中,2株为O∶3血清型和非1A生物型,毒力基因齐全为致病株;另2株为1A生物型血清型未定,毒力基因阴性为非致病株;467份血液标本中26份为F1抗体阳性,其中1份阳性标本与1份分离到小肠结肠炎耶尔森菌的肛拭子来自同一只家犬。结论 丽江市家犬中携带小肠结肠炎耶尔森菌,且有致病性菌株;此外,在一只家犬中,发现存在着鼠疫耶尔森菌与小肠结肠炎耶尔森菌共感染的现象。     

实时定量聚合酶链反应检测腹泻粪便中小肠结肠炎耶尔森菌的研究与评价

目的 建立一种快速准确的分子生物学方法检测腹泻粪便中小肠结肠炎耶尔森菌,以替代繁琐费时的培养鉴定方法.方法 应用针对致病性小肠结肠炎耶尔森菌染色体上yst基因而设计的特异引物和探针进行实时定量聚合酶链反应（PCR,探针法）,检测致病性（7种血清型）和非致病性（5种）小肠结肠炎耶尔森菌、耶尔森菌属内的其他菌种（8种）及其他肠道细菌（8种）.此外,实时定量PCR检测经过培养方法鉴定的腹泻粪便200例,并比较两种方法的吻合度.结果 引物和探针对致病性小肠结肠炎耶尔森菌100%特异,与其他细菌无交叉反应.在纯培养物和粪便中,最低检测浓度分别为102菌落形成单位（CFU）/ml和103 CFU/g.在200例样本中,培养鉴定方法和实时定量PCR检出同样18例阳性样本,吻合度为100%.结论 实时定量PCR反应对致病性小肠结肠炎耶尔森菌高度特异且与培养鉴定方法有很好的吻合性又方便快捷,可应用于临床检测.     

The status of drug resistance and ampC gene expression in Enterobacter cloacae

Objective To investigate the status of the drug resistance and the ampC gene expression of Enterobacter cloacae.Methods Disk diffusion tests were made for detecting the susceptibility of antimicrobial agents against Enterobacter cloacae. AmpC gene was amplified by polymerase chain reaction (PCR) and verified by DNA sequencing. AmpC gene expression was analyzed according to antimicrobial agent sensitive phenotype.Results The sensitivity rates of 144 strains to imipenam, cefepime and cefoperazone/sulbactam were 98.61%, 65.97% and 63.89%, respectively. The sensitivity rates of 144 strains to other antimicrobial agents were lower. Among the 144 strains 120 were found to be positive by PCR for ampC. The PCR product showed high homology to the GenBank ampC sequence. Stably derepressed strains, hyperinducible strains and unexpressing or lower level expressing strains accounted for 30.0% (36/120), 37.5% (45/120), and 32.5% (39/120), respectively. Fifty-six out of 120 strains (46.67%) also produced extended spectrum β-lactamases (ESBLs). The hyperinducible strains were highly sensitive to all the antimicrobial agents except amoxicillin/clavulanic acid and cefuroxime, while the stably derepressed strains were only sensitive to imipenam and cefepime. However, sensitivity to cefepime decreased if the strains also produced ESBLs.Conclusions The durg resistant status of Enterobacter cloacae is severe. Clearing out the expressive status of ampC gene will be helpful in selection of antimicrobial agents in the treatment of clinical infection.     

1株多耐药阴沟肠杆菌耐药基因研究

目的了解1株多耐药阴沟肠杆菌（MDR—ECL）耐药基因携带状况。方法采用PCR检测该株MDR—ECL菌22种基因。结果该株MDR—ECL菌携带TEM、SHV、CTX—M-1、aac（3）-Ⅱ、aac（6’）-Ⅰb、ant（2”）-Ⅰ、qnrA基因。结论该株MDR—ECL菌携带多种耐药基因是多耐药原因。     

广州地区阴沟肠杆菌Qnr基因流行调查

目的了解阴沟肠杆菌中质粒介导喹诺酮类耐药基因qnrA、qnrB、qnrS基因流行情况。方法以PCR法对62株环丙沙星耐药的阴沟肠杆菌进行qnrA、qnrB、qnrS基因检测,并结合试验了解喹诺酮耐药的可转移性。结果 62株阴沟肠杆菌中,qnrA基因阳性30株（48.6%）,qnrB基因阳性41株（66.1%）,qnrS基因阳性7株（11.3%）,qnrA基因和qnrB基因同时阳性16株,qnrA基因和qnrS基因同时阳性1株,qnrB基因和qnrS基因同时阳性2株。结论广州地区阴沟肠杆菌存在qnr基因,应加强qnr基因监测。     

临床分离阴沟肠杆菌中新型氨基糖苷类乙酰转移酶基因的检测

目的 了解临床分离阴沟肠杆菌中新型氨基糖苷类乙酰转移酶基因[aac(6')-Ib-cr基因]的分布.方法 PCR检测aac(6')-Ib-cr基因并将阳性扩增产物进行测序分析;纸片扩散法测定aac(6')-Ib-cr基因阳性菌株对13种抗菌药物的敏感性;改良三维试验检测高产AmpC酶和ESBLs; ERIC-PCR法进行aac(6')-Ib-cr基因阳性菌株同源性检测.结果 81株阴沟肠杆菌中,3株aac(6')-Ib-cr基因阳性(3.7%); aac(6')-Ib-cr基因阳性菌株对氟喹诺酮类,氨基糖苷类,氯霉素,氨苄西林,头孢西丁,第2、3代头孢菌素等显示多重耐药2株产ESBLs和AmpC,1株产ESBLs;ERIC-PCR电泳图谱型显示,3株aac(6')-Ib-cr基因阳性细菌均不属于同一型别.结论 临床分离阴沟肠杆菌中存在aac(6')-Ib-cr基因阳性菌株,为多重耐药、非克隆传播菌株,临床应加强检测和监测.     

阴沟肠杆菌连续分离株菌株亲缘性分析

目的 了解临床分离的阴沟肠杆菌耐药基因研究存在状况和菌株的亲缘性。方法自临床分离44株阴沟肠杆菌,采用聚合酶链反应（PCR）检测耐药基因（14种）。结果 44株阴沟肠杆菌中TEM阳性24株（54．5％）、DHA阳性5株（11.4％）、ACT-1阳性35株（79．5％）、aac（3）-Ⅱ阳性11株（25．0％）、aac（6’）-Ⅰ阳性31株（70．5％）、ant（3”）-Ⅰ阳性15株（34．1％）、dfrA17阳性20株（45．5％）、qacE△1-sulⅠ阳性36株（81．8％）、intⅠ1阳性38株（86．4％）,其余基因均阴性。存在克隆传播现象。结论 临床分离的阴沟肠杆菌TEM、DHA、ACT-1、aac（3）-Ⅱ、aac（6’）-Ⅰ、ant（3”）．Ⅰ、dfrA17、qacE△l-sulⅠ、intⅠ1基因携带率高。阴沟肠杆菌可导致克隆传播医院内感染,并存在暴发性流行。     

74株阴沟肠杆菌抗菌药物耐药性和耐药基因的研究

目的 了解临床分离的阴沟肠杆菌耐药基因存在状况。方法 对临床分离74株阴沟肠杆菌采用聚合酶链反应检测耐药基因（14种）。结果 74株中TEM、OXA-1 group、DHA、ACT-1、aac（3）-Ⅱ、aac（6’）-Ⅰ、ant（3”）-Ⅰ、qnr、sul Ⅰ、dfrA1和dfrA17阳性率分别为58．1％、2．7％、27．0％、64．9％、16．2％、64．9％、28．4％、4．1％、74-3％、2．7％和27．0％,其余基因均阴性。结论 临床分离的阴沟肠杆菌TEM、ACT-1、aac（6’）-Ⅰ、sul Ⅰ基因携带率高。     

烧伤病房阴沟肠杆菌耐药性研究

目的探讨烧伤病房阴沟肠杆菌的耐药性。方法对我院2001年1月至2004年12月烧伤病房产阴沟肠杆菌的耐药性进行分析。结果57株阴沟肠杆菌对临床常用抗生素耐药性均不同程度增加，只对亚胺培南敏感。结论阴沟肠杆菌同样为烧伤病房常见的院内感染细菌之一，其耐药性不容乐观。临床应根据药敏试验选用抗菌药物，控制院内感染。     

阴沟肠杆菌耐药性及氨基糖苷类抗生素耐药基因分析

目的调查临床分离的阴沟肠杆菌耐药性及氨基糖苷类抗菌药物耐药基因的携带状况。方法采用ATB药敏试验板微量肉汤法,对33株临床分离的阴沟肠杆菌进行抗菌药物敏感性试验,聚合酶链反应（PCR）法检测aac（3）-Ⅰ、aac（3）-Ⅱ、aac（3）-Ⅲ、aac（3）-Ⅳ、aac（6′）-Ⅰ、aac（6′）-Ⅱ、ant（3″）-Ⅰ、ant（2″）-Ⅰ、aph（3′）Ⅵ9种氨基糖苷类修饰酶基因。结果 33株阴沟肠杆菌株呈现多重耐药,亚胺培南和厄它培南均敏感,对头孢唑啉全部耐药,氨苄西林、氨苄西林/舒巴坦、头孢替坦耐药率均在90%以上。对阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素3类氨基糖苷类抗生素的耐药率分别为33.3%、63.6%、81.8%。氨基糖苷类修饰酶基因的阳性率分别为aac（6′）-Ⅰ87.8%（29/33）、ant（3″）-Ⅰ63.6%（21/33）、aac（3-）II 54.5%（18/33）、ant（2″）-Ⅰ45.4%（15/33）及aph（3′）-Ⅵ24.2%（8/33）。aac（3）-Ⅰ、aac（3）-Ⅲ、aac（3-）IV、aac（6′-）II未检出。携带1种或1种以上基因的菌株有32株（97%）。结论临床分离的阴沟肠杆菌多重耐药严重,氨基糖苷类修饰酶基因携带率非常高。