Podocin与nephrin在多柔比星诱导肾病大鼠模型肾皮质部的表达及共定位分布

目的观察podocin与nephrin在多柔比星诱导肾病（adriamyciwinducing nephrotic,ADN）大鼠模型病变过程中的表达及共定位分布,探讨podocin和nephrin在肾病病变过程中的作用机制。方法将60只雄性Spraque-Dawley（SD）大鼠分为模型组（尾静脉注射6．5mg／kg多柔比星,n=30）和对照组（尾静脉注射0．8mL生理盐水,n=30）。分别于造模后的第1、第2、第4、第6和第8周末处死大鼠,并观察各项指标的变化：①24h尿蛋白定量,血浆白蛋白、血胆固醇、血肌酐和血尿素氮水平;②两组上述各时间点取肾皮质进行光镜和电镜检测;③采用双标准曲线法进行荧光定量PCR检测肾皮质部podocin mRNA和nephrin mRNA表达;④应用双重免疫荧光法观察肾小球podocin和nephrin的共定位分布。结果①模型组大鼠出现大量蛋白尿、低白蛋白血症、高脂血症,肾功能减退,表现为典型的肾病综合征;模型组病理改变由微小病变逐渐发展至局灶节段性肾小球硬化,电镜下可见足细胞在病变早期出现足突增宽、融合,晚期足突消失、细胞核固缩;②模型组podocin mRNA表达第1周末时升高95．8％（P〈0．01）,第2周末时升高252．5％（P〈0．01）且达高峰,第4周末时开始下降27．6％（P％0．05）,第6和第8周末分别下降52．9％和48．0％,与对照组比较,差异有显著意义（P〈0．01）。模型组nephrin mRNA表达第1周末时升高140．8％（P〈0．05）且达高峰,第2周末时持续升高80．4％（P〈0．05）,第4、第6和第8周末时分别下降39．2％,47．5％和52．5％,与对照组比较,差异有显著意义（P〈0．01）。③模型组免疫荧光染色可见podocin与nephrin在大鼠肾小球内分布,且随病变进展而增加,由正常的沿肾小球血管襻呈均匀线性分布转变为呈不连续分布,而且重叠程度减少。结论Podocin和nephrin在多柔比星肾病大鼠肾病进展过程中出现表达及分布异常,导致两者不能形成正常的复合体结构,这可能是蛋白尿发生的重要分子机制。     

福辛普利对大鼠肾小球系膜细胞增殖及转化生长因子β1表达的影响

目的观察新型血管紧张素转化酶抑制剂（angiotension—converting enzyme inhibitor，ACED——福辛普利（fosinopril，FOS）对脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）诱导的大鼠肾小球系膜细胞（glomerular mesangial cell，GMC）增殖及转化生长因子（transforming growth factor，TGF）β1表达的影响。方法建立体外培养大鼠肾小球系膜细胞，鉴定后3～10代用于实验。实验分为5组：对照组（Ctrl组）、脂多糖刺激组（LPS组）、福辛普利高、中、低剂量组（分别为FOS1组、FOS2组和FOS3组），分别于24h和48h两个时间点甲基噻唑基四唑（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）比色法测定各组细胞增殖情况；于6h，12h，24h后酶联免疫测定（enzyme—linked immunosorbent—assay，ELISA）法测定细胞培养上清液中转化生长因子β1蛋白的表达量，荧光半定量RT～PCR法检测转化生长因子β1mRNA表达的变化。结果脂多糖可诱导大鼠肾小球系膜细胞增殖，福辛普利可抑制脂多糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖；正常培养的大鼠肾小球系膜细胞均有一定量的转化生长因子β1蛋白分泌和mRNA表达；LPS组在各时间点转化生长因子β1蛋白分泌和mRNA表达均高于Ctrl组（P〈0．01），而FOS1组、FOS2组、FOS3组转化生长因子β1蛋白分泌和mRNA表达均低于LPS组（P〈0．01）。结论脂多糖可诱导大鼠肾小球系膜细胞增殖。福辛普利可抑制脂多糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖。福辛普利能够从蛋白水平和mRNA水平抑制脂多糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞转化生长因子β1的表达，为福辛普利的肾脏保护作用提供理论依据。     

生长抑素对脂多糖刺激的大鼠库普弗细胞抑制作用的观察

目的探讨生长抑素（SST）对脂多糖（LPS）刺激的原代培养大鼠库普弗细胞NO、TNFα和5-脂氧合酶（5-LO）表达的影响。方法分离培养SD大鼠库普弗细胞,分为对照组、LPS刺激组、SST干预组;于12、24、48h收集不同实验组细胞培养上清液,硝酸还原酶法测定NO水平,ELISA法检测TNFα含量,半定量RT-PCR法检测细胞5-LO mRNA的表达。结果分离的库普弗细胞产生低水平的NO、TNFα和5-LO mRNA,LPS刺激后各时间点NO、TNFα和5-LO mRNA含量均明显高于对照组（P〈0.05）;SST干预后各时间点NO、TNFα和5-LO mRNA含量低于LPS刺激组（P〈0.05）,其中NO、TNFα含量在各时间点均高于对照组（P〈0.05）,5-LO mRNA表达在12、24h时间点高于对照组（P〈0.05）,而在48h时间点与对照组相比,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论生长抑素能抑制LPS诱导的库普弗细胞NO,TNFα和5-LO的表达。     

槐杞黄对IgA肾病大鼠蛋白尿及肾组织nephrin及podocin的影响

目的观察槐杞黄对IgA肾病（IgAnephropathy,IgAN）大鼠蛋白尿及肾组织nephrin及podocin的影响,探讨槐杞黄对IgA肾病大鼠蛋白尿的治疗作用及其机制。方法将24只雄性Sprague—Dawley（SD）大鼠按随机数字表法分为对照组、模型组、槐杞黄组,每组8只。模型组和槐杞黄组建立1gA肾病模型,槐杞黄组给予槐杞黄颗粒治疗。应用定量尿沉渣计数法检测尿红细胞个数,考马斯亮蓝法检测24h尿蛋白定量,全自动生化分析仪检测血生化指标。应用直接免疫荧光法检测肾小球IgA沉积强度,间接免疫荧光法检测肾小球nephrin及podocin蛋白的表达及分布,采用实时荧光定量PCR技术检测肾皮质nephrinmRNA和podocinmRNA的表达。结果①槐杞黄组大鼠的尿红细胞计数、尿蛋白,较模型组显著减少,差异有显著意义（P〈0．05）;②槐杞黄组大鼠肾组织病变,较模型组减轻;③槐杞黄组大鼠肾小球nephrin表达量,较模型组显著升高,差异有显著意义（P〈0．01）,podocin表达量较模型组稍有下降,但差异无显著意义（P〉0．05）;槐杞黄组大鼠肾皮质nephrinmRNA及podocinmRNA的表达,较模型组显著升高,差异有显著意义（P〈0．01）;④槐杞黄组大鼠肾小球nephrin及podocin的不连续斑片状、团块状异常分布,较模型组改善。结论IgA肾病大鼠肾组织nephrin及podocin出现表达变化及分布异常,槐杞黄能降低IgAN大鼠尿蛋白,其作用可能与调节nephrin及podocin的表达及分布有关。     

依那普利和限食对肥胖相关肾病大鼠足细胞损伤的干预作用

目的观察肥胖相关肾病（ORG）大鼠肾小球足细胞WT1表达，探讨依那普利和限食对ORG肾脏保护机制。方法高脂饲料喂养Wistar大鼠24周建立ORG模型后，分为对照组（A）、模型组（B）、依那普利治疗组（C）、限食组（D）、限食加依那普利组（E）继续饲喂8周，观察24h尿白蛋白（24hUA1b）、肾组织形态学及超微结构，免疫组化检测足细胞WT1表达（足细胞密度）。结果B组足细胞数和密度显著低于A组（P〈0．01），24hUA1b和肾小球硬化显著高于A组（P〈0．01）；C、D、E治疗组足细胞数和密度明显高于B组（P〈0．05，P〈0．01），24hUA1b和肾小球硬化较B组明显降低（P〈0．01），且E组联合疗效明显优于单个治疗组。结论ORG足细胞改变与蛋白尿程度和肾损伤呈一定相关性。依那普利加限食能明显抑制ORG足细胞WT1表达，减少尿蛋白，减轻肾损伤。     

儿童原发性肾病综合征肾脏C-myc表达的意义

目的观察C-myc在儿童原发性肾病综合征不同肾脏病理的表达以及与肾病理损害的相关性，说明C-myc再表达在儿童原发性肾病综合征的作用。方法采用免疫组化法分析C-myc在30例原发性肾病综合征不同病理的表达，并与肾病理积分作相关性分析。结果（1）所有肾病理切片均存在不同程度C-myc阳性显色，正常对照组无阳性表达。肾小球区主要在足细胞表达，个别内皮细胞有表达；肾小管区表达较为强烈，主要部位在近端肾小管，远端肾小管表达较少，集合管及肾小管间质、血管部位未见阳性表达。（2）不同肾脏病理类型间C-myc表达在足细胞和远端肾小管部位差异不明显，近端肾小管的表达FSGS与MsPGN、MCD比较均明显减少（P＜0．05）。（3）C-myc表达与肾小球和肾小管病理积分均呈负相关（P＜0．05）。结论C-myc再表达参与了儿童原发性肾病综合征的病理发生，可能与损伤上皮细胞的增殖与再生有关。     

IgA肾病肾小球足细胞损伤与高脂血症的关系

目的 探讨IgA肾病患者高脂血症对肾小球足细胞损伤的作用.方法 选择51例经肾穿刺活检明确诊断的IgA肾病患者,肾组织病理定量采用免疫组织化学技术借助肾小球足细胞表面特异性标记物WT1对肾小球足细胞进行准确的密度定量分析.结果 IgA肾病患者三酰甘油与足细胞病变呈正相关(r=0.549,P＜0.05),与血清肌酐、肾小球硬化程度呈正相关(r=0.770、0.698,P＜0.01),与24h尿蛋白定量无相关性.随着病变加重,硬化肾小球增加,肾小球内足细胞表达减少(P＜0.01),IgA肾病患者足细胞病变与24h尿蛋白定量无相关性,但与血清肌酐、肾小球硬化程度呈正相关(r=0.765、0.679,P＜ 0.01).结论 IgA肾病脂代谢紊乱可能导致肾小球足细胞损伤,加重IgA肾病进展.     

低剂量电离辐射对HBE细胞氧化应激及损伤修复影响

目的 探讨低剂量电离辐射（LDIR）对HBE细胞氧化应激及损伤修复的影响。方法 将HBE细胞分为0、50、100、200 mGy组，采用X射线照射后分别培养24 h和48 h，检测细胞存活率、谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）、8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）以及DNA损伤修复相关基因PPP2R2D和TP53基因转录水平。结果 与对照组相比，辐照后24 h，各剂量组细胞存活率差异无统计学意义（P> 0.05）；各剂量组MDA水平均显著升高，GSH水平呈剂量依赖性降低，8-OHdG水平呈剂量依赖性升高，PPP2R2D基因mRNA水平均显著升高，差异具有统计学意义（P <0.05）;50 mGy组TP53基因mRNA表达水平显著升高，差异具有统计学意义（P <0.05）。与对照组相比，辐照后48 h,50 mGy组细胞存活率达到最高，MDA水平显著降低，8-OHdG水平显著降低，PPP2R2D基因和TP53基因m RNA表达水平均显著升高，差异具有统计学意义（P <0.05）;100 mGy组细胞GSH水平显著升高，差异具有统计学意义（P <0.05）。结论...     

来氟米特对转化生长因子β_1诱导的体培养的大鼠肾小球系膜细胞中Smad2表达的影响

目的观察来氟米特(leflunomide,LEF)在转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β_1刺激大鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cell,GMC)表达Smad2过程中发挥的作用。方法建立体外培养大鼠肾小球系膜细胞模型,经鉴定造模成功后第7代用于实验。按照对模型大鼠体外培养的肾小球系膜细胞的处理方式不同,将其分为TGF-β_1组(TGF-β_1 5 ng/mL),LEF-1组(LEF 5μg/mL+TGF-β_1 5 ng/mL),LEF-2组(LEF 50μg/mL+TGF-β_1 5 ng/mL)和对照组(无血清RPMI 1640培养液+20%胎牛血清)。分别于15 min,30 min,1 h,2 h和6 h收集标本,用间接免疫荧光法检测各组磷酸化Smad2(phosphorylation-Smad2,p-Smad2)蛋白表达变化;采用荧光半定量RT-PCR法检测各组Smad2mRNA表达变化。结果对照组磷酸化Smad2蛋白少量表达,阳性细胞率为(21.40±1.51)%。TGF-β_1组阳性细胞率为(70.00±3.23)%,30 min时表达开始升高,1 h及2 h时表达明显增高,6 h表达开始下降。各时间点LEF-1组和LEF-2组磷酸化Smad2蛋白表达下降,阳性细胞率分别为(23.60±2.80)%和(25.81±1.29)%,细胞荧光强度呈减弱趋势。与TGF-β_1组相比,LEF-1组和LEF-2组磷酸化Smad2蛋白表达下降,差异有显著意义(P0.05)。但LEF-1组和LEF-2组与对照组比较,差异无显著意义(P0.05)。肾小球系膜细胞中Smad2mRNA相对表达量,TGF-β_1组显著高于对照组,2 h时达高峰。LEF-1组和LEF-2组Smad2mRNA显著低于TGF-β_1组,差异有显著意义(P0.01);但LEF-1组和LEF-2组间比较,差异无显著意义(P0.05)。LEF-1组和LEF-2组Smad2mRNA相对表达量1h时较低,之后逐渐升高,说明随时间延长,来氟米特对体外培养的肾小球系膜细胞干预作用逐渐减弱。结论经转化生长因子-β_1刺激后,体外培养的大鼠肾小球系膜细胞磷酸化Smad2蛋白和Smad2mRNA相对表达量分别增加,来氟米特可降低Smad2蛋白和Smad2mRNA表达水平,为来氟米特的肾脏保护作用提供理论依据。     

乙醇对胰岛β细胞功能及胰岛素基因表达影响

目的 观察乙醇对原代培养的大鼠胰岛细胞及小鼠胰岛瘤细胞（NIT-1细胞）胰岛素分泌功能的影响并探讨其机制。方法 体外培养的大鼠胰岛细胞及NIT-1细胞，不同剂量乙醇作用不同时间后，用放免法测定胰岛素分泌情况，RT-PCR方法检测胰岛素mRNA的表达。结果 （1）乙醇对NIT-1细胞胰岛素分泌及胰岛素mRNA表达影响：作用6h，胰岛素分泌增加，各剂量组（除400mmol／L）胰岛素mRNA表达升高；作用12，24h，胰岛素分泌降低，胰岛素mRNA表达均降低。（2）乙醇对原代培养的大鼠胰岛细胞的胰岛素分泌及胰岛素mRNA表达影响：作用12h，低剂量组胰岛素分泌升高，胰岛素mRNA表达升高，高剂量组胰岛素分泌下降；胰岛素mRNA表达下降；随乙醇作用时间延长，胰岛素分泌先升高（6h），然后下降（24h），胰岛素mRNA表达短时间（6h）上升，作用24h表达下降。结论乙醇对胰岛β细胞胰岛素分泌及胰岛素mRNA表达的影响与作用时间、剂量有关，胰岛素mRNA表达水平的改变可能是乙醇影响胰岛β细胞胰岛素分泌的机制之一。     

Ameliorating effects of L-carnitine on diabetic podocyte injury

High glucose levels can change podocyte gene expression and subsequently induce podocyte damage through altered glucose metabolism. l-Carnitine is known to play a beneficial role in diabetes; however, there are no studies on the effects of l-carnitine on podocyte alteration under high glucose conditions. This study investigated whether l-carnitine can attenuate diabetic podocyte injury through the prevention of loss of slit diaphragm proteins. The l-carnitine treatment group showed increased glucose uptakes compared to the control group, suggesting that glucose utilization in the podocytes was increased by l-carnitine. l-Carnitine treatment also prevented decreased mRNA expressions of nephrin and podocin in the high glucose-stimulated podocytes. However, mRNA expressions of CD2AP and α-actinin-4 were not significantly changed by the high glucose conditions. When these data are taken together, l-carnitine can increase glucose uptake in podocytes under high glucose conditions, and its mechanism may be at least partly related to the up-regulation of nephrin and podocin. Our results help clarify the beneficial effects of l-carnitine in diabetic nephropathy.     

天麻素对局灶脑缺血再灌注海马中BDNF及TrkB的影响

目的 探讨天麻素对局灶性脑缺血再灌注损伤的海马脑源性神经营养因子及其受体TrkB含量变化的影响.方法 120只SD大鼠体重200～2209,随机分为三组:假手术组(n=40),局灶脑缺血再灌注组(n=40)和天麻素治疗组(n=40).线栓法制备大脑中动脉梗阻(MCAO)模型,药物组在脑缺血再灌注即刻和12h腹腔注射天麻素,模型组和假手术组均注射等量生理盐水.分别在缺血再灌注2h、4h、6h、12h和24h处死动物,运用RT-PCR技术检测缺血侧海马组织内BDNF和TrkB的mRNA的表达变化.结果 再灌注损伤后,损伤侧海马组织内BDNF和TrkB的mRNA表达均增高.在天麻素治疗组中BDNF和TrkB的mRNA于再灌注2h上升,4h达高峰.结论 脑缺血后损伤侧海马神经元内BDNF和TrkB的mRNA含量增多,可能有利于受损神经元的修复.     

脊髓损伤后大鼠甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶的表达及甲基强的松龙干预后的变化

目的：研究大剂量甲基强的松龙对脊髓损伤后甘氨酸脯氨酸二肽氨基肽酶（glycylproline dipeptidyl aminopeptidase,GPDA）基因表达变化的影响。方法：Sprague-Dawley大鼠36只。将所有大鼠随机分为三组,假手术组、脊髓损伤未使用药物干预组（创伤组）、脊髓损伤＋甲强龙干预组（甲强龙组）。在大鼠脊髓损伤后24h将损伤的脊髓组织切取,进行逆转录PCR反应并检测GDPA的表达。结果：假手术组GDPA的mRNA的表达的相对丰度为1.5403±0.1604;脊髓损伤24h后创伤组GDPA的表达的相对丰度为0.5994±0.3414,与假手术组相比差异有非常显著统计学意义（P〈0.01）;GDPA在脊髓损伤后使用甲强龙干预组中的表达相对丰度为1.8432±0.1294,与创伤组比较差异有非常显著统计学意义（P〈0.01）。结论：大剂量甲基强的松龙的早期使用能促进脊髓损伤后甘氨酸脯氨酸二肽氨基肽酶的表达恢复,发挥细胞保护作用。     

无机砷对Chang肝细胞株血红素单加氧酶-1 mRNA和蛋白表达的诱导作用

[目的]观察亚砷酸钠（sodium arsenite,NaAsO2）对Chang肝细胞株血红素单加氧酶-1（heme oxygenase-1,HO-1）mRNA和蛋白表达的诱导作用。[方法]以5μmol／L和10μmol／L的NaAsO2作用Chang肝细胞株2、6、12h和24h,分别用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western Blot法检测细胞内HO-1的mRNA和蛋白表达情况。[结果]5μmol／L和10μmol／LNaAs02暴露2h开始出现HO-1mRNA的诱导表达;6h的表达水平明显高于对照组和2h暴露组（P〈0．01）。其中,10μmol／LNaAsO2暴露12h和24h的mRNA表达均明显高于该浓度的6h暴露组（P〈0．01）;但24h的HO-1 mRNA表达水平与12h组相比没有明显升高。NaAsO2暴露诱导的HO-1蛋白表达则从6h开始出现,12h组明显高于6h组,24h组明显高于12h组（均P〈0．01）;5μmol／L和10μmol／L NaAsO2分别暴露6、12h和24h的HO-1蛋白表达量分别是对照组的2．80、9．34、18．15和3．97、12．92、23．29倍;此外,10μmol/LNaAsO2暴露12h和24h的HO-1 mRNA和蛋白表达均明显高于对应时间的5μmol／L组（P〈0．01）。[结论]NaAsO2暴露能够有效和持续性诱导Chang肝细胞株HO-1的mRNA和蛋白表达,是无机砷暴露的一种细胞保护性适应性反应。     

姜黄素对人喉癌细胞株Hep-2增殖和端粒酶活性的影响

目的研究姜黄素（curcumin）对人喉癌细胞Hep-2增殖和端粒酶活性表达水平的影响。方法CCK-8法检测不同浓度姜黄素作用于Hep-2后24h、48h、72h的细胞增殖活性：集落形成试验检测不同浓度姜黄素作用于Hep-2后的细胞增殖抑制率;StretchPCR-银染法检测细胞端粒酶活性变化。RT—PCR分析端粒酶主要组分hTERT的mRNA表达情况。结果①姜黄素对Hep-2细胞的增殖抑制作用具有时间和剂量依赖性。五种浓度（20μmol／L、40μmol／L、60μol／L、80μmol／L、100μol／L）姜黄素作用12、24、48、72小时后,IC50分别为81．17μmol／L、40．90μmol／L、33．26μmol／L、31．63μmol／L;②四种浓度（20μmol／L、40μmol／L、60μmol／L、80μmol／L）姜黄素作用于Hep-2细胞48h,-周后各组Hep-2细胞集落形成数和细胞增殖抑制率均呈浓度依赖性．其细胞增殖抑制率与对照组相比,分别为36．25％、57．4％、98．48％、100％;③60μmol／L姜黄素作用于Hep-2细胞24、48、72小时后。与对照组相比,端粒酶活性总光密度值（IOD）分别下降23．19％、60．28％和70．15％,各时间组间有显著性差异（P〈0．01）;端粒酶逆转录酶（hTERT）mRNA表达水平IOD值分别下降2．90％、58．69％和88．35％,各时间组间有显著性差异（P〈o．01）。结论姜黄素可抑制体外培养的Hep-2细胞的增殖活性,下调hTERTmR．NA的转录水平并抑制细胞的端粒酶活性,有较好的临床应用前景。     

抑制活化素受体样激酶5对严重烧伤大鼠急性肺损伤的影响

目的研究TGF-β/Smads信号转导通路对烧伤大鼠急性肺损伤后促炎性细胞因子的表达和肺部炎性损伤程度的影响,以了解该信号转导通路在肺纤维化发生的早期过程中的作用。方法用SB431542抑制活化素受体样激酶5(ALK5)来抑制TGF-β/Smads通路。将24只雄性SD大鼠,随机分为对照组、烧伤组、早期处理组、后期处理组,每组6只。除对照组外,其他3组大鼠麻醉后以98℃水烫背部15 s,造成大鼠30%TBSAⅢ度烧伤,烧伤后腹腔注射40 ml/kg乳酸林格液进行液体复苏,对照组施行假烫,背部浸入37℃水中,未补液。早期处理组分别于烧伤后、1×24 h、2×24 h后腹腔注射SB431542,后期处理组分别于3×24 h、4×24 h、5×24 h后腹腔注射SB431542,7 d后取肺组织,采用Realtime PCR法检测TNF-α和IL-1β的mRNA转录水平,并行肺脏病理学检查及Szapiel评分。结果早期抑制ALK5可提高TNF-α和IL-1βmRNA的转录水平,病理学观察见早期抑制ALK5能加重肺泡炎,急性期后抑制不会加重肺泡炎。结论TGF-β/Smads信号转导通路参与了烧伤后的肺部炎症反应,早期抑制该通路可上调促炎性细胞因子TNF-α和IL-1βmRNA的转录水平,最终增加TNF-α和IL-1β的表达,加重烧伤后的肺损伤;而在炎症反应的急性期后抑制该通路不会加重肺损伤。     

组蛋白去乙酰化酶2基因在苯并（a）芘致神经细胞凋亡中的量效和时效表达

[目的]通过体外培养细胞途径研究组蛋白去乙酰化酶2（HDAC2）基因在苯并（a）芘[B（a）P]所致神经细胞凋亡中的量效和时效表达。[方法]大鼠原代培养的神经元细胞分为两批：第一批分4个组,以B（a）P同时加入s9对细胞染毒,分别为二甲基亚砜（DMSO）组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,使其终浓度为0、10、20、40gmol／L,继续培养48h;第二批分5个组,以20gmol／LB（a）P染毒,分别于染毒0、6、12、24、48h处理细胞。用流式细胞术检测神经细胞的凋亡率,实时荧光定量PCR法检测caspase-3,HDAC2基因的量效和时效表达情况。[结果]①流式细胞术结果显示,与DMSO组相比,中、高剂量组神经细胞的凋亡率明显增加（P〈O．05）;与低剂量组相比,高剂量组凋亡率增加（P〈0．05）。与0h组相比,染毒24、48h组神经细胞的凋亡率明显增加（P〈0．05）。②与DMSO组相比,高剂量组caspase-3、HDAC2mRNA的表达量明显增加（P〈0．01）;与低剂量组相比,高剂量组caspase-3mRNA表达量明显增加（P〈0．05）。与0h组相比,染毒48h组caspase-3、HDAC2mRNA表达量明显升高（P〈0．01,P〈0．05）。[结论]B（a）P可引起神经细胞凋亡,HDAC2基因表达上升,该基因可能在B（a）P所导致的神经细胞凋亡中起重要作用。     

Nrf2在烧伤脓毒症肺中的动态表达研究

-目的探讨Nrf2在烧伤脓毒症大鼠肺组织中的表达规律。方法将Wistar大鼠分为正常对照组、单纯烫伤组、烫伤复合金葡菌脓毒症组和烫伤复合绿脓杆菌脓毒症组。依不同时相（2、8、24h）,分为三个亚组,检测肺脏组织中Nrf2mRNA、Nrf2的蛋白质表达情况。结果正常大鼠肺组织中Nrf2mRNA较高表达（74．0±7．0）;单纯烫伤大鼠肺组织中Nrf2mRNA表达明显下调,分别为34．5±1．9、50．4±2．2、32．1±1．4（t=5．69～14．63,P〈0．01）;金黄色葡萄球菌所致烫伤脓毒症大鼠肺组织中Nrf2mRNA明显下调,分别为53．1±5．0、14．4±1．6、48．5±1．9,其中伤后8h达峰值（t=5．59-29．3,P〈0．01）;绿脓杆菌所致烫伤脓毒症大鼠伤后2hNff2mRNA表达无明显下降（71．0±8．1,P〉0．05）,但伤后8、24h均明显下调（24．8±2．1、4．1±2．0,t=21．33,68．1,P〈0．01）。结论Nrf2直接参与了烧伤后免疫应答反应。     

氯胺酮对先天性心脏病患者体外循环心肌诱导型一氧化氮合酶mRNA表达的影响

目的观察氯胺酮预处理对先天陛心脏病患者体外循环诱导心肌缺血再灌注损伤时诱导型一氧化氮合酶（iNOS）mRNA表达的影响。方法先天性心脏病房间隔缺损或室间隔缺损患者36例，随机分为三组（n=12）：对照组（C组）和氯胺酮干预组（K，组和K2组）。在劈胸骨时、主动脉插管时和主动脉开放前5min，K1、K2组分别静脉注射氯胺酮0．5mg／kg和1．0mg／kg，C组注射等量0．9％NaCl溶液。于上腔静脉插管时（T1）、主动脉阻断后30min（T2）和主动脉开放后30min（T3）取适量心肌组织，应用一步法实时荧光定量RT-PCR技术检测心肌中iNOS mRNA的表达量。结果与T1比较，三组T2和T3iNOS mRNA均升高（P〈0．01）；与C组（2．85±0．48、4．49±0．86）比较，K1、K2组T2和T3iNOS mRNA均显著降低（2．33±0．31、3．76±0．61和1．92±0．12、3．12±0．39）；K2组与K1组比较，T2和T3iNOS mRNA均降低（P〈0．05）。结论氯胺酮预处理能显著降低心肌iNOS mRNA的表达量，减少血浆心肌酶的漏出，且呈剂量依赖性。