多器官保存液的现状及研究进展

随着器官移植领域的飞速发展，对器官保存液的要求也越来越高。从单器官保存液至多器官保存液，从单纯的保存发展为集保存与治疗于一体。目前常用的多器官保存液有：美国威斯康星大学设计的UW保存液，欧洲设计的HTK保存液及我国自行设计的长征－１号多器官保存液等。本文仅对以上几种多器官保存液的优势及存在的问题以及基因疗法在多器官保存液中的应用作一综述。１器官保存液的原理与要求目前临床上对器官多采取低温冷冻保存，其作用是降低细胞间酶的作用，减慢反应的速度和细胞死亡；从生化意义上说，多数正常体温下的酶的活性，如果每…     

HTK心肌保存液组分及其特性的研究近况

HTK液是由Bretschneider 于1975年创制的，并于1979年用于心脏手术，开始仅作为心脏停跳液来使用，随后在动物实验及临床研究中发现，HTK液在热缺血状态下对器官具有保护功能。这个液体被认为是理想的器官保存液，并于1985年德国心脏外科界应用HTK液作为心肌保存液成功地进行了心脏移植手术，1987年应用HTK液进行肾移植，1987年应用HTK液进行肝移植，1989年应用HTK液进行胰腺胰植。目前，HTK液是欧洲应用最广泛的器官保存液。     

含组氨酸和钾通道开放剂的细胞内液型心脏保存液的研制

目的：探讨含组氨酸和钾通道开放剂的心脏保存液（HBS）的处方设计、制备方法及质量控制标准。方法：确定HBS的处方，研究其制备方法，对主要组分组氨酸、棉子糖及各种离子进行含量测定，观察离体鼠心的保存效果。结果：HBS配方合理，质量控制方法稳定，在离体鼠心实验中效果良好。结论：含组氨酸和钾通道开放剂的细胞内液型胶体液HBS设计合理，制订的质量标准能保证保存液的质量，动物实验证明低温保存鼠心24h效果明显优于临床上常用的托马斯Ⅱ号液（STS）。     

断肢(指)保存的研究进展

正本文主要对断肢(指)保存的相关研究进展作综述,如下:1低温保存在低温的状态下,胞内酶对断肢(指)细胞破坏速度会有所减慢,且能够对细胞代谢速率进行控制,从而减少其能量的消耗。对于恒温动物,其组织器官温度降低的同时,会降低相关酶的活性,因此,在器官处于4℃左右的低温状态时,其细胞代谢速度也会有所降低~([1])。2低温+器官保存液保存根据器官保存液成分的不同可以分为非液体型保存液、载氧保存液、血浆类     

改良欧氏(Ehrlich)重氮试剂的配制及其应用

一般文献记载,欧氐重氮试剂须用甲、乙两种溶液。乙溶液只能保存六周左右。临用时新鲜配制,其比例:甲液5毫升,乙液0.15毫升,剩余的次日不能再用(下称原法)。有人认为乙液须每隔一周新鲜配制,也有人认为甲乙两液均须两周配一次。这样,试剂消耗大,时间花得多,故我们对此试剂的配制及应用作了以下改进。配制方法(下称改良法) 1、甲液:氨基苯磺酸1克,盐酸10毫升,蒸馏水加至500毫升。必要时微热溶解,冷后备用,能长期保存。 2、乙液:亚硝酸钠0.5克,蒸馏水100毫升,热天于冰箱中能长期保存。 3 应用液:甲液10毫升,乙液0.5毫升,混匀备用。在冰箱内可保存15天。     

器官保存液中腺苷和别嘌呤醇的含量测定

目的:建立同时测定器官保存液中腺苷和别嘌呤醇含量的方法。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱为LichrospherC18,流动相为甲醇-50mmol·L-1磷酸二氢钾溶液(20∶80),流速为1.0mL·min-1,检测波长为260nm,进样量为20μL;外标法测定含量。结果:腺苷和别嘌呤醇检测浓度线性范围分别为0.03～0.3、0.003～0.03mg·mL-(1r均为0.9999),回收率分别为98.58%～100.19%和98.32%～100.18%,RSD分别为0.44%、0.55%。结论:本方法准确可靠、简便易行,可用于器官保存液中腺苷和别嘌呤醇的含量测定。     

多器官保存液的研究进展(Ⅱ)

本的第（Ⅰ）部分论述的是器官保存的关键点，以及现有的多器官保存液的成分及其特点，发表于本刊2005，5（4）：325。现论述如下内容。     

H.E染色和AKPase活性对组织细胞的组化测定方法

目前国内外关于细胞、组织、器官的保存和移植是诸多学者多年一直在研究的课题,对于保存时间、温度、保存液的配制,特别是组织细胞保存活性测定还很少有人报道,本实验采用Olympus显微镜观察冻融蟾蜍脑AKPase活性及茯苓合剂对脑的保护效应.这将为临床细胞、组织器官的保存、移植提供理论依据.     

自制多器官保存液在草犬肝脏低温保存的应用

目的研究自制SMO(上海多器官)液对草犬肝脏低温保存的效果。方法采用草犬肝脏非循环离体灌注模型,比较SMO液、UW(威斯康星大学)液和LR(乳酸林格)液对草犬肝脏保存0、12、24、36、48h后,其形态学及生物化学的改变。并进行肝脏移植,观察移植后移植动物存活时间。结果SMO液保存48h之内,肝脏的形态学观测无明显改变。保存48h的肝脏,其各项生化功能SMO组明显优于LR液组(P<0.05);与UW液组比较无显著性差异(P>0.05),但SLCM(肝窦内皮细胞病死率)、HTWC(肝细胞含水量)值两组间有显著性差异(P<0.05)。保存36、48h后保存液pH值,SMO组明显高于UW组(P<0.05)。SMO液低温保存24h后行原位肝移植5例,5例均活过术后24h。结论SMO液保存犬肝48h效果明显优于LR液,与UW液相当,在改善低温保存及再灌注肝脏能量代谢、预防细胞内酸中毒及肝脏原位灌洗等方面,SMO液略优遇UW液。     

脑活素

[组成]脑活素(Cerebrolysin)是无蛋白质的标准化器官特异性氨基酸混合物的水溶液。这种由生物过程获取的溶液含有游离氨基酸及分子量在一万以下的低分子肽。各种必需氨基酸(异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、苏氨酸、色氨酸、缬氨酸)及非必需氨基酸(丙氨酸、精氨酸、门冬氨酸、胱氨酸、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、脯     

一种肺器官保存液的配制

随着器官保存液的不断改进和发展,器官移植的成功率得到了很大提高,近年来,LPD(low potassium dextran)液,逐渐引起人们的重视,在大量的动物实验中证实该器官保存液在心、肺等移植中效果良好[1～2].我们比较了EC液(euro-collins)、UW液(university of wisconsin)、HTK液(histidine tryptophane ketoglutarate)、KH液(krebs henseleit)、LPD液,决定在对一患者实施的心肺联合移植中采用LPD液,并对处方稍作了改变.其配制情况如下:     

特异性磷酸二酯酶抑制剂米力农对供体肺的保护作用

目的:利用大鼠离体肺再灌注模型,观察特异性磷酸二酯酶抑制剂米力农在器官摘取及保存期对大鼠供体肺的保护作用。方法:24只SD大鼠随机分成对照组和实验组,每组12只。对照组为常规保存组,低钾右旋糖酐液(LPD)灌洗后摘取心肺器官,4℃恒温冰箱中保存12h后取出,以5mL·min~(-1)流量再灌注60 min;实验组供体肺灌洗液及保存液中含有666μg·L~(-1)米力农,余同对照组。结果:实验组供体肺的换气功能、肺血流动力学指标、湿重干重比及超微结构均显著优于对照组(P<0.05),再灌注后肺组织丙二醛(MDA),髓过氧化物酶(MPO)和白细胞介素-8(IL-8)含量均显著低于对照组(P<0.05)。结论:使用特异性磷酸二酯酶抑制剂米力农处理供体肺能够减轻缺血再灌注损伤,明显改善移植后早期供体肺功能。     

肝移植中低温机器灌注保存供肝的研究

目的通过对低温缺血保存方法与低温机器灌注保存方法的比较,探讨低温机器灌注保存供肝的效果和机制。方法对照组肝脏置入4℃高渗枸橼酸嘌呤溶液(HC-A)中保存,实验组肝脏置入机器灌注系统保存,通过比较低温缺血保存与低温机器灌注保存后再灌注肝脏流出液中丙氨酸转氨酶(ALT)及肿瘤坏死因子(TNF)-α的含量,光镜及电镜下观察形态学改变,从多方面阐明低温机器灌注保存供肝方法的优越性。结果对照组和实验组与健康组比较灌注流出液中的TNF-α含量及ALT活性明显升高(P<0.05),实验组与对照组相同时点比较,灌注流出液中TNF-α含量及ALT活性明显降低(P<0.05)。实验组肝组织病理改变均明显轻于对照组。结论低温机器灌注可以减少肝窦内皮细胞的损伤,减轻再灌注损伤,有效延长保存时间。     

汉防己甲素对低温灌洗保存大鼠供肝的肝功能影响的实验研究

目的:观察汉防己甲素(TET)在低温灌洗保存供肝时对肝细胞的钙超载及肝功能的影响。方法:低温灌洗保存大鼠肝脏4 h,按保存液的不同分为4组:A组(对照组):乳酸林格液灌洗保存;B组(TET注射组):腹腔内注射TET,乳酸林格液灌洗保存;C组(TET灌洗组):腹腔内注射TET,乳酸林格液中加入TET灌洗保存;D组(Collins组):Collins液灌洗保存,测定供肝低温灌洗保存后肝细胞内钙浓度和肝功能,并在光镜和电镜下观察肝脏的结构。结果:细胞内钙浓度和肝功能测定,各实验组与对照组、C组与B组比较,差异有统计学意义(P<0.05);组织学观察支持以上结果。结论:TET能显著减轻低温灌洗保存下肝细胞的钙超载并起到保护肝功能作用;TET溶液直接灌洗保存供肝比TET腹腔注射效果好;用TET溶液灌洗并保存供肝4 h与Collins液灌洗保存组效果相近;TET对供肝的灌洗保存有积极的作用,因此推断该药有望用于临床供肝的保存。     

AkPase活性对组织细胞的测定方法

细胞、组织、器官的保存和移植是诸多学者多年一直在研究的课题 ,对于保存时间、温度、保存液的配制 ,特别是组织细胞保存活性还很少有人报道 ,本实验采用 Olympus显微镜观察冻融蟾蜍胃、肠 Ak Pase活性及三棵针合剂对胃、肠的保护效应。这将为临床细胞、组织器官的保存、移植提供理论依据。1　材料和方法实验用冬眠状态下中华大蟾蜍 ,体温 12～ 15℃ ,体重 5 0～ 70 g,性别不限 ,随机分为两组 ,每组 10只 ,分为药物复温组、正常冬眠对照组。将实验组蟾蜍置于 - 18℃冰箱内冷冻10～ 6 0 m in,在蟾蜍冻休克状态下 ,将其从冰箱中取出 ,将蟾…     

大鼠供肝保存时TET对HCA液的优化作用及与UW液的保存效果比较

目的通过用不同的保存液低温灌洗保存大鼠供肝2 h的实验,比较汉防己甲素（TET）-高渗枸橼酸盐嘌呤（HCA）溶液与UW（University of Wisconsin）液对供肝的保护作用,并分析TET对HCA液的优化效果。方法 SD大鼠80只,随机平均分成4组：A组（TET乳酸林格液组）、B组（HCA液组）、C组（TET-HCA液组）、D组（UW液组）。经实验处理后再检测各组肝组织的高能磷酸化合物的含量及保存液中丙氨酸氨基转移酶（ALT）、乳酸脱氢酶（LDH）值。结果 A组与B组各指标比较无显著性差异（P〉0.05）;C组与B组各指标比较无显著性差异（P〉0.05）;C组与D组各指标比较具有显著性差异（P〈0.05）。结论在低温灌洗保存供肝条件下TET对HCA液具有积极的优化作用;TET-HCA液低温灌洗并保存鼠肝2 h,对供肝的保护作用具有与UW液类同的效果。     

褪黑素对肝脏低温保存损伤的保护作用

目的　探讨MT对肝脏冷保存有无保护作用及其机制。方法　收集SD♂大鼠肝脏灌洗液 ,对反映肝细胞功能的ALT、AST、LDH和反映内皮细胞功能的HA、ET1和反映细胞氧化性损伤的MDA、SOD及光镜和电镜下肝组织形态学变化进行分析 ,同时设立UW液 +褪黑素 (Mel)不同时间及不同Mel浓度冷保存组 ,比较分析Mel的冷保存保护作用及不同时间及不同浓度的Mel对肝脏冷保存保护作用的影响。结果　①UW冷保存随着时间延长肝细胞和内皮细胞损害逐渐加重。②Mel对供肝冷保存损伤有保护作用。其保护机制可能与Mel强大的抗氧化损伤作用有关。③Mel 1× 10 - 5 mol·L- 1、1× 10 - 7mol·L- 1浓度时其保护作用优于Mel 1× 10 - 9mol·L- 1,而Mel 1× 10 - 5 mol·L- 1、1× 10 - 7mol·L- 1浓度间没有差异。提示Mel对肝脏冷保存损伤保护存在着浓度效应 ,随着时间延长Mel对肝脏冷保存损伤保护作用逐渐减弱 ,但优于单纯UW液冷保存组。结论　UW冷保存液对肝脏的冷保存随时间延长保护作用逐渐减弱 ,Mel液对肝脏冷保存损伤有保护作用 ,其机制与Mel的抗氧化损伤作用有关     

抗氧化剂对某些药液放存期的影响

目的验证抗氧剂硫代硫酸钠,亚硫酸氢钠对某些制剂放存期的影响.方法将待验证的制剂配成加抗氧剂和不加抗氧剂两组液体,置不同条件下留样6个月,定期观察外观变化,测定pH值及含量.结果 0.02%呋喃西林溶液另抗氧剂硫代硫酸钠组,6个月后含量下一降至不合格;不加硫代硫酸钠组不避光保存的溶液外观变成黄色,但该组样品含量均保持在合格范围;0.1%依沙吖啶溶液,加了抗氧剂硫代硫酸钠组成10b析出黄色沉淀;复方新霉素滴鼻液加亚硫酸氢钠组保存6个月,pH值降至此2.72,不加抗氧剂组pH值保待在家.63,外观色泽稍变黄.结论 0.02%呋喃西林溶液,0.1%依沙吖啶溶液不宜加硫代硫酸钠作抗氧剂,应避光保存;复方新霉素滴鼻液不宜加亚硫酸氢钠作抗氧剂.     

抗氧化剂对某些药液放存期的影响

目的验证抗氧剂硫代硫酸钠,亚硫酸氢钠对某些制剂放存期的影响.方法将待验证的制剂配成加抗氧剂和不加抗氧剂两组液体,置不同条件下留样6个月,定期观察外观变化,测定pH值及含量.结果 0.02%呋喃西林溶液另抗氧剂硫代硫酸钠组,6个月后含量下一降至不合格;不加硫代硫酸钠组不避光保存的溶液外观变成黄色,但该组样品含量均保持在合格范围;0.1%依沙吖啶溶液,加了抗氧剂硫代硫酸钠组成10b析出黄色沉淀;复方新霉素滴鼻液加亚硫酸氢钠组保存6个月,pH值降至此2.72,不加抗氧剂组pH值保待在家.63,外观色泽稍变黄.结论 0.02%呋喃西林溶液,0.1%依沙吖啶溶液不宜加硫代硫酸钠作抗氧剂,应避光保存;复方新霉素滴鼻液不宜加亚硫酸氢钠作抗氧剂.     

海藻糖对低温保存的气管组织细胞活力的影响

目的探讨海藻糖对低温保存的气管组织细胞活力的影响。方法新鲜配制两组保存液，其中：Ⅰ组LPD DMSO，Ⅱ组LPD DMSO 海藻糖(0．10mol．L^-1)。切取SD大鼠气管后立即分别放入含上述两种溶液的冻存管，在程序降温仪降至-80℃后投入液氮中保存．分别在1，15，30，60，120d后对气管组织体外培养。并加入^3H—TdR做标记，检测细胞掺入率。结果采用^3H—TdR体外组织培养，低温保存后Ⅰ组气管^3H—TdR掺入率(88．72％～78．21％)明显高于Ⅱ组(80．99％～70．75％)，这种趋势可长时间持续(共120d)。结论含有海藻糖的LPD溶液在低温下对气管组织细胞有明显的保护作用；^3H—TdR体外组织培养的方法可以比较客观地反映了器官保存后的活力。