新生小鼠全身炎症反应综合征时肺组织糖皮质激素受体的表达及意义

目的 检测小鼠全身炎症反应综合征(SIRS)时肺组织糖皮质激素受体(GR)的表达,探讨GR在内毒素引起SIRS过程中的作用.方法 40只新生小鼠随机分为4组,每组10只:实验组A、B、C及对照组D.实验组以尾静脉注射脂多糖(LPS)法建立SIRS模型,其中实验组A予麻醉后尾静脉注射LPS(5 mg/kg);实验组B、C均先予LPS预处理:实验组B予腹腔注射LPS(0.25 mg/kg),24 h后处理同实验组A;实验组C予腹腔注射LPS(0.25 mg/kg),24 h后再次腹腔注射LPS(0.5 mg/kg),第2次注射24 h后处理同实验组A;对照组D仅予以麻醉.各组末次注射24 h后采集肺脏标本,行HE染色肺组织病理评分,免疫组化检测GR蛋白、逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)检测GR mRNA的表达.结果 (1)小鼠肺组织病理评分实验组A(6.44±1.16)、B(4.12±1.07)和C组(4.10±1.31)均高于对照组D(2.52±0.93,P均＜0.05);LPS预处理组B、C的肺组织病理评分明显低于实验组A(P均＜0.05).(2)对照组D小鼠肺组织GR蛋白及GR mRNA的表达水平高于实验组A,低于预处理组B和C,差异有统计学意义(P均＜0.01).结论 新生小鼠SIRS时肺组织GR表达减少,其与SIRS的发展、转归相关;LPS重复刺激可使新生小鼠产生耐受性,耐受性的产生与GR的表达调高相关.     

乌司他丁对脂多糖致大鼠急性肺损伤肺组织糖皮质激素受体的影响

目的探讨乌司他丁(UTI)对脂多糖(LPS)致大鼠急性肺损伤(ALI)组织糖皮质激素受体(GR)的影响,并了解其可能机制。方法清洁级成年雄性SD大鼠54只,随机分为3组:空白对照组(Con组,n=18),LPS组(n=18),脂多糖+乌司他丁组(LPS+UTI组,n=18)。各组又按照不同的时间点被分为4 h、8 h、12 h三个亚组。在各时间点处死大鼠,利用Western blot检测大鼠肺组织中GR的表达,实时荧光定量PCR检测GR m RNA的表达,同时酶联免疫吸附法(ELISA)检测肺组织匀浆液中肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-10的浓度以及肺组织病理学的变化。结果与对照组相比,LPS组GR蛋白表达在各时间点降低(P<0.05),LPS+UTI组GR蛋白在各时间点的表达水平高于LPS组,低于Con组(P<0.05);与对照组相比,LPS组GR m RNA表达降低(P<0.05),LPS+UTI组GR m RNA在各时间点的表达水平略高于LPS组(P>0.05),低于Con组(P<0.05);与对照组相比,LPS组TNF-α的表达在各时间点升高(P<0.05),LPS+UTI组TNF-α的表达水平在各时间点低于LPS组,高于Con组(P<0.05);与对照组相比,LPS组IL-10的表达在各时间点升高(P<0.05),LPS+UTI组IL-10的表达水平在各时间点高于LPS组(P<0.05)。组织病理学检查显示:LPS组肺组织见肺泡结构破坏,炎性细胞浸润,肺泡间隔增宽,出血,水肿,LPS+UTI组肺组织病理损害较LPS组明显减轻。结论 UTI能提高GR的表达;TNF-α和IL-10出现高峰的时间不同。     

地塞米松对急性肺损伤肺组织中foxml基因的作用

目的 探讨脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)内毒素所致的小鼠急性肺损伤(acute lung in-jury,ALI)时肺组织foxml转录因子和foxml基因表达及其在ALI中的保护作用,并观察地塞米松(dex-amethasone,DEX)对foxml基因表达和病情转归的影响.方法 72只健康小鼠随机(随机数字法)分为3组:对照组(A组,n=24),模型组(B组,n=24),地塞米松治疗组(C组,n=24).对照组小鼠腹腔注射0.9%生理盐水(0.3 mL).模型组小鼠腹腔注射LPS(5 mg/kg).地塞米松治疗组小鼠腹腔注射u)s(5 mg/kg),6 h后腹腔注射地塞米松(5 mg/kg),三组分别选取24 h,48 h,72 h三个观测点.免疫组织化学方法检测各组小鼠肺组织foxml蛋白的表达,应用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测各组小鼠肺组织foxml基因的表达强度,并观察肺组织病理变化.结果 组间比较,在24 h,48 h,72 h时,模型组小鼠肺组织foxml mRNA与foxml蛋白均显著高于对照组(P<0.05),地塞米松治疗组小鼠肺组织foxml mRNA与foxml蛋白均显著高于模型组(P<0.05);组内比较,在48 h无论模型组和地塞米松治疗组小鼠肺组织foxml mRNA与foxml蛋白均达到高峰,48 h小鼠肺组织foxml mRNA与foxml蛋白显著高于72 h(P<0.05),72 h显著高于24 h(P<0.05).地塞米松治疗组和模型组比较,肺组织病理改变明显减轻.结论 在模型组和地塞米松治疗组,肺组织中foxml mRNA和foxml蛋白均明显增加.地塞米松通过促进肺组织中foxml mRNA和foxml蛋白表达,修复受损的内皮细胞和上皮细胞,减轻肺损伤的程度.     

氨溴索对急性肺损伤的保护作用

目的 通过建立急性肺损伤大鼠模型和体外肺泡巨噬细胞培养体系,观察急性肺损伤中,肺泡巨噬细胞在氨溴索干预前后细胞因子表达的情况,探讨氨溴索可能的肺损伤保护机制.方法 一、体内实验:大鼠24只,随机分成3组,每组8只:(1)正常对照组;(2)急性肺损伤组:采用腹腔注射酵母悬液方法复制大鼠急性肺损伤模型;(3)氨溴索治疗组:建立ALI大鼠模型后用氨溴索干预.观察指标主要有:肺部病理学改变、测量大鼠肺系数、血氧分压,肺泡巨噬细胞TNF-α、IL-10、IL-24 mRNA的表达则采用通过逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测.二、体外实验:收集肺泡巨噬细胞后分3组:(1)正常对照组:肺泡巨噬细胞中加无菌生理盐水;(2)LPS组:予LPS 10 mg/L刺激肺泡巨噬细胞;(3)LPS+氨溴索组:予LPS10 mg/L和氨溴索180 μmol/L刺激肺泡巨噬细胞.分别于刺激前(0 h),刺激后(6、12、24 h)留取细胞.通过RT-PCR技术检测肺泡巨噬细胞TNF-α、IL-10、IL-24 mRNA的表达变化.结果 氨溴索治疗组在病理改变,肺系数,动脉血氧分压等各项指标均优于急性肺损伤组,氨溴索干预治疗组,TNF-α、IL-10、IL-24 mRNA表达水平均明显下降,与急性肺损伤组比较差异有统计学意义(P＜0.05),但仍高于正常对照组.体外实验也得出了相同的结论.结论 氨溴索可抑制急性肺损伤或LPS刺激的肺泡巨噬细胞TNF=α、IL-10、IL-24细胞因子mRNA的表达水平.     

甘草酸二铵对急性肺损伤大鼠肺组织糖皮质激素受体及核因子κB表达的影响

目的 观察甘草酸二铵(GL)对急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织核因子κB(NF-κB)、糖皮质激素受体(GR)表达的调控作用及对血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素10(IL-10)表达的影响.方法 将24只雄性SD大鼠采用随机数字表法分为生理盐水对照组、ALI模型组和GL干预组,每组8只.ALI模型组、GL干预组分别给予内毒素(LPS)5 mg/kg尾静脉注射;IPS注射前1 h,GL干预组给予GL 20 mg/kg静脉注射.观察4 h后各组大鼠肺组织病理,测定肺湿干比(W/D)、PaO_2,并采用逆转录-PCR反应检测肺组织NF-κB mRNA,GR mRNA的表达,western blot法测定肺组织Nf-κB及GR蛋白的表达,ELISA法测定血清TNF-α,IL-10质量浓度.采用SPSS 13.0软件进行统计学分析,各组间均数比较采用单因素方差分析,均数两两比较采用q检验.结果 (1)ALI模型组TNF-α为(153.68±20.42)ng/L,明显高于生理盐水组(43.96±7.57)ng/L(P<0.01)和GL干预组(87.23±7.52)ng/L(P<0.01).ALI模型组IL-10为(42.48±6.81)ug/L,明显高于生理盐水组(24.72±8.03)ng/L(P<0.01),但低于GL干预组水平(58.33±9.62)ug/L(P<0.05).(2)ALI模型组NF-κBmRNA和蛋白的表达水平[分别为(3.414±0.521),(254.7±16.4)]明显高于生理盐水组[分别为(0.432±0.085),(45.6±7.3)](P<0.01),而GRmRNA和蛋白的表达[分别为(0.152±0.025),(11.5±2.3)]则明显低于生理盐水组[分别为(0.434±0.013),(54.6±6.5)](P<0.01);GL干预组NF-κB mRNA和蛋白的表达水平[分别为(1.894±0.272),(133.5±11.7)]明显低于ALI模型组(P<0.01),GR mRNA和蛋白的表达[分别为(0.308±0.033),(28.2±5.6)]则明显高于ALI模型组(P<0.05,P<0.01).(3)ALI模型组肺组织出现充血、水肿、中性粒细胞浸润,GL干预组肺部炎症较ALI模型组减轻.结论 甘草酸二铵可能通过下调NF-κB的表达,同时提高GR的表达,进而调节炎症因子TNF-α及抗炎介质IL-10的表达,从而起到减轻ALI的作用.     

中和IL-17A对输血相关急性肺损伤小鼠的保护作用

目的观察IL-17A在输血相关急性肺损伤小鼠中的表达,探讨中和IL-17A对输血相关急性肺损伤小鼠的影响。方法采用"二次打击"(LPS+MHC-Ⅰm Ab)模型,8~10周BALB/C雄性小鼠32只,应用随机数据表完全随机分成4组:正常(normal)组、LPS+MHC-Ⅰm Ab组、LPS+isotype组、LPS+PBS组,每组8只。腹腔注射LPS 0.1 mg/kg,24 h后尾静脉分别给予MHC-Ⅰm Ab(1 mg/kg)或等体积的isotype和PBS,2 h后检测肺泡灌洗液和外周血中IL-17的表达。另选取32只BALB/C雄性小鼠,观察anti-IL-17A抗体预处理对肺损伤的影响,随机分为4组:normal组、LPS+MHC-Ⅰm Ab+anti-IL-17A组、LPS+MHC-Ⅰm Ab+isotype组、LPS+MHC-Ⅰm Ab+PBS组,提前1 h尾静脉注射anti-IL-17A(50μg/只)、isotype(50μg/只)或等体积的PBS,二次打击造模后2 h取材,测定肺泡灌洗液中蛋白浓度和肺干湿重比,检测肺泡灌洗液和外周血中细胞因子水平,计数肺脏中性粒细胞,评估各组小鼠肺损伤和炎症反应程度。数据采用Prism5.0(Graph Pad Software,USA)软件包进行统计学处理。结果与其他三种相比,二次打击模型(LPS+MHC-Ⅰm Ab)组小鼠肺泡灌洗液和外周血中IL-17A表达显著升高,且肺组织中性粒细胞数明显增多。anti-IL-17A预处理后,肺组织中性粒细胞浸润减少,肺干湿重比减小,肺泡灌洗液蛋白含量降低,外周血促炎因子水平显著下调。结论 IL-17A在输血相关急性肺损伤中显著升高,anti-IL-17A预处理后显著改善输血相关急性肺损伤小鼠炎症反应和肺组织损伤。     

酸敏感离子通道-3在急性肺损伤大鼠肺组织中的表达

目的 探讨酸敏感离子通道-3(ASIC3)在急性肺损伤肺组织中的表达.方法 24只雄性SD大鼠随机分为4组(每组6只):脂多糖(LPS)刺激组(LPS 2 h,LPS 4 h,LPS 6 h),分别为LPS刺激后2,4,6 h;生理盐水对照组;LPS组静脉注射LPS复制大鼠急性肺损伤模型,对照组静脉注射同等剂量生理盐水,以肺部特征性病理改变作为ALI模型成功的主要指标.各组检测动脉血气,留取肺组织标本,观察肺湿/干质量比、肺组织病理,免疫组化检测肺组织ASIC3的表达.统计数据用均数±标准差表示,采用SPSS 13.0统计软件行单因素方差分析、Dunnett-t检验和Kendall秩相关系数(Kendall'stau_b)检测其相关性,以P<0.05为差异具有统计学意义.结果 LPS 2 h,4 h,6 h组大鼠的动脉血氧分压(PaO2)分别为(67.47±6.01)mmHg,(59.17±7.18)mmHg,(52.54±7.62)mmHg,比对照组(98.15±1.06)mmHg低,差异有统计学意义(P<0.01);pH值LPS4 h(7.28±0.04),6 h(7.24±0.03)组显著低于对照组(7.35±0.01)(P<0.01).光镜下见肺组织内的炎性细胞逐渐增多,肺泡隔增宽,肺间质水肿,肺结构破坏逐渐加重;LPS注射后4 h,6 h肺泡上皮细胞内ASIC3的表达分别是(205.91±10.12),(196.51±18.60),显著低于对照组(220.23±10.11)(P<0.05);肺的湿/干质量比6 h组(5.18±0.21)亦明显高于对照组(4.45±0.18)(P<0.05).结论 LPS诱导的大鼠急性肺损伤肺泡上皮细胞和支气管黏膜上皮有ASIC3表达.     

胰岛素对内毒素所致的急性肺损伤保护作用的研究

目的 观察胰岛素(Insulin)对脂多糖(LPS)引起的兔急性肺损伤(ALI)的预防与治疗作用,并初步探讨其作用机制.方法 将新西兰兔随机分为生理盐水(NS)对照组,LPS组,Insulin + LPS组及LPS + Insulin组,气管内滴注LPS建立兔急性肺损伤模型.采用微量注射泵经兔耳缘静脉注射液体,NS组和LPS组注射生理盐水,持续4 h;Insulin+LPS组注射胰岛素混合液,0.5 h后再于气管内滴注LPS、胰岛素混合液持续4 h;LPS+Insulin组先经气管内滴注LPS, 0.5 h后再注射胰岛素混合液,持续4 h.4.5 h后处死实验动物,取肺组织观察形态学改变、测定肺湿/干质量比值(W/D),肺泡灌洗液(BALF)中蛋白含量,肺组织匀浆中TNF-α、IL-6、LDH和MPO的含量.结果 形态学观察表明LPS组肺组织水肿,点、片状出血,大量炎性细胞浸润,肺泡间隔显著增厚,肺泡腔变窄,结构消失.Insulin+LPS组及LPS+Insulin组肺损伤明显减轻,肺组织结构均趋于正常;肺泡腔及支气管腔炎性细胞及渗出物明显减少.LPS组肺W/D与NS组相比明显增加(P＜0.05),BALF中蛋白含量显著增加(P＜0.05),肺组织匀浆中TNF-α、IL-6、LDH和MPO的含量显著增加(P＜0.05);而给予胰岛素预防及治疗后,肺W/D、BALF中蛋白含量、肺组织匀浆中TNF-α、IL-6、LDH和MPO的含量与LPS组相比均明显减少(P＜0.05).结论 Insulin能够防治LPS导致的兔急性肺损伤,这种保护作用可能与其抑制肺组织中炎症介质的作用有关.     

丙酮酸乙酯对内毒素性急性肺损伤大鼠肺组织巨噬细胞炎症蛋白-2表达的影响

目的 观察丙酮酸乙酯(EP)预先给药对内毒素性急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织巨噬细胞炎症蛋白-2表达的影响,探讨丙酮酸乙酯可能的保护机制.方法 静脉注射脂多糖(LPS)5 mg/kg,复制大鼠ALI模型.雄性SD大鼠30只随机分为三组:A组为对照组,B组为LPS组,C组为EP+LPS组,于静脉注射LPS前1 h腹腔内注射EP(40 mg/kg).所有动物于注射LPS或生理盐水后6 h颈动脉放血处死,RT-PCR法测定肺组织巨噬细胞炎症蛋白-2 mRNA的表达;酶联免疫吸附法测定肺组织TNF-α和IL-1B的含量.结果 与A组相比,B组、C组肺组织巨噬细胞炎症蛋白-2 mRNA表达增加,肺组织TNF-α和IL-1B含量上升(P<0.05);与B组相比,C组肺组织巨噬细胞炎症蛋白-2 mRNA表达降低,肺组织TNF-α和IL-1B含量降低(P<0.05).结论 丙酮酸乙酯通过下调大鼠LPS诱导的肺组织巨噬细胞炎症蛋白-2表达,降低了TNF-α和IL-1B的释放,减轻ALI大鼠肺部的炎症反应.     

Wy14643联合Troglitazone对急性肺损伤大鼠肺组织PPAR-α表达的影响

目的 探讨Wy14643联合Troglitazone作用于急性肺损伤大鼠肺组织后PPAR-α表达的变化及其意义.方法 将96只大鼠随机分为对照组(ND组)、脂多糖(LPS)致伤组(LD组)、Wy14643处理组(LW组)、Wy14643联合Troglitazone处理组(LWT组).用LPS 5 mg/kg静脉注射复制大鼠ALI模型.静脉注射Wy14643 3 mg/kg(LW组)或顺序注入Wy14643 3 mg/kg 及Troglitazone 3 mg/kg(LWT组),30 min后静脉注射LPS(注射LPS完毕后开始计时).分别在1、2、4及8 h时处死大鼠,测定用药前后各时相点大鼠肺组织湿/干质量比(W/D);观察肺组织病理变化;采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测各时相点肺组织中PPAR-α mRNA的表达;采用免疫组织化学染色法检测各时相点肺组织中PPAR-α蛋白的表达.结果 LD组大鼠肺组织干湿质量比值(W/D值)较ND组明显升高(P＜0.05);LW组、LWT组的W/D比值均较LD组明显降低(P＜0.05),LWT组和LW组比较差异无统计学意义(P>0.05).结果显示,正常肺组织有PPAR-α表达,为棕黄色粗颗粒,主要表达在肺泡上皮细胞核内,胞浆未表达或有少许表达;LD组较ND组PPAR-α表达减弱(P＜0.05);LW组和LWT组PPAR-α表达较LD组增强(P＜0.05);LW组与LWT组比较无显著差别.结论 LPS引起急性肺损伤大鼠肺组织PPAR-α表达下降,Wy14643使PPAR-α表达增强,Wy14643联合Troglitazone同样使PPAR-α表达增强,但与单用Wy14643比较无差别.     

Glucocorticoid receptor expression on acute lung injury induced by endotoxin in rats

BACKGROUND:

In cases of severe sepsis and septic shock, a series of pathophysiological changes lead to multiple organ dysfunction syndrome. This study aimed to investigate the expression of glucocorticoid receptor mRNA in the rat lung following endotoxin (LPS) induced shock.

METHODS:

Totally 56 SD rats were randomly divided into 4 groups: LPS shock group (n=16), LPS+vasoactive intestinal peptide group(VIP) group, (n=16), LPS+VIP+ glucocorticoid (GC) group, (n=16),and control group (n=8). LPS shock was induced by intravenous injection of LPS (10 mg/kg) in rats. Within 15 minutes after LPS injection, rats in the treatment groups received VIP (5 nmol/kg) or VIP and methylprednisolone (3 mg/kg). The control group was given normal saline instead of LPS. The rats of the four groups were sacrificed at 6 hours,24 hours after injection respectively, and the lung tissues were collected. Pathological changes of the lungs were examined by light microscopy and electron microscopy. GRmRNA expression in the lung tissues was evaluated by RT-PCR.

RESULTS:

In the LPS shock group, lung histopathology demonstrated destruction of the alveolar space,widening of the inter-alveolar space, inflammatory cell infiltration and interstitial edema. However,pathological changes in the LPS+ VIP group and LPS+ VIP+GC group were milder than those in the LPS shock group. Six hours after LPS injection, GR mRNA expression was down-regulated in the LPS group (0.72± 0.24) and LPS+ VIP group (0.88±0.27) (P<0.05) as compared with the control group (1.17±0.22). The LPS shock group showed a more significant down-regualtion than the LPS+VIP group, but the difference was not statistically significant (P>0.05). In contrast, GRmRNA expression in the LPS+ VIP+GC group was significantly up-regulated at 6 hours and further at 24 hours (1.45±0.32 and 1.91±0.46 respectively) (P<0.05).

CONCLUSION:

GrmRNA expression decreased in LPS induced lung injury in rats. Combined treatment with VIP and GC mitigated lung injury ang inflammation. The mechanism may be related to up-regulation of GR mRNA expression.KEY WORDS: Glucocorticoid, GRmRNA, Vasoactive intestinal peptide, LPS, Shock, Inflammation, Lung injury, Rat     

血管活性肠肽对内毒素性休克大鼠肺损伤的保护作用

目的 观察血管活性肠肽(VIP)对内毒索性休克大鼠肺损伤的作用,并探讨其可能机制.方法 SD大鼠静脉注射内毒素(E Coil LPS O111B4)10 mg/kg制作内毒素休克模型.随机将30只大鼠分成对照组(生理盐水,n=10)、内毒素组(内毒素10 mg/kg,n=10)和VIP组(内毒素10mg/kg+VIP 5 nmol,n=10).注药6 h后留取标本,测定各组肺干/湿比(W/D值)、支气管灌洗液(BALF)蛋白浓度和中性粒细胞计数,酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清及BALF的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介紊-1(IL-1)和IL-10水平,观察肺组织病理变化(光镜+电镜).结果 内毒素组肺W/D值、BALF蛋白浓度和中性粒细胞计数比为(4.75±0.31),(68±6)%,(260±72)mg/L,对照组和VIP组分别为(3.61±0.28),(15±9)%,(70±21)mg/L和(4.02±0.25),(44±8)%,(123±44)mg/L,差异具有统计学意义(P＜0.05).内毒索组血清和BLAF中的TNF-α、IL-1β、IL-10明显升高(P＜0.05),VIP组与内毒素组比较TNF-α、IL-1β明显降低(P＜0.05),但仍高于对照组,IL-10较内毒素组进一步升高.光镜和电镜下VIP组病变轻于内毒素组.结论 VIP可减轻大鼠内毒索休克肺损伤,其作用机制可能与调控炎症细胞因子的表达有关.     

维生素D对脂多糖致急性肺损伤大鼠肺组织血管紧张素转化酶2和维生素D受体表达水平的影响

目的 观察维生素D(vitamin D,Vit D)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)致Wistar大鼠急性肺损伤(acute lung injury,ALI)肺组织中血管紧张素转化酶2(angiotensinconverting enzyme 2,ACE2)和维生素D受体(vitamin D receptor,VDR)表达水平的影响.方法 采用尾静脉注射LPS方法制备大鼠ALI模型;将30只健康雄性Wistar大鼠随机(随机数字法)分为6组:正常对照组(NC组)、LPS组:尾静脉注射LPS 5mg/kg、Vit D组:给予Vit D活性形式(骨化三醇)25 μg/kg连续灌胃3d和(LPS+ Vit D) 1-3组:分别于骨化三醇1μg/kg、5μg/kg、25 μg/kg灌胃3d后尾静脉注射LPS 5mg/kg,所有大鼠于注射LPS的24 h后进行后续实验.分别观察大鼠一般情况,肺组织病理及肺干/湿重比变化、肺组织中VDR、ACE2蛋白及基因水平的表达.结果 LPS组大鼠病态表现(呼吸浅快、精神萎靡、口鼻可见血性分泌物)明显,(LPS+ VitD) 1-3组病态表现和肺组织病理损伤均较LPS组明显减轻.LPS组VDR和ACE2蛋白及基因水平的表达均较NC组和Vit D组显著降低(P＜0.05),(LPS+ VitD) 1-3组各组VDR和ACE2蛋白及基因水平的表达均较LPS组有所升高(P＜0.05),但仍显著低于Vit D组(P＜0.05),其中(LPS+ Vit D) 1-3组各组VDR蛋白及基因水平的表达差异无统计学意义(P＞0.05),ACE2的表达差异有统计学意义(P＜0.05).结论 Vit D能使LPS致ALI大鼠肺组织中ACE2和VDR蛋白及基因表达水平增加,故此推测ACE2和VDR表达增加可能对ALI的发生、发展起保护作用.     

法舒地尔对脂多糖诱导急性肺损伤大鼠肺组织p38丝裂原活化蛋白激酶激活的影响

目的观察法舒地尔对脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织p38MAPK磷酸化激活的影响。方法 45只雄性SD大鼠随机分为三组:对照组(NS组,n=15)、脂多糖组(LPS组,n=15)及法舒地尔干预组(FAS组,n=15),LPS组和FAS组采用股静脉注射LPS(5 mg/kg)建立ALI模型,FAS组在LPS注射前30 min腹腔注射法舒地尔(10 mg/kg)。造模后3 h、6 h、12 h观察肺组织病理形态学改变,免疫组织化学及Western Blot法检测肺组织p-p38MAPK的表达。结果造模后LPS组各时间点肺组织p-p38MAPK的表达较NS组明显增加(P<0.05),与LPS组相比,FAS组各时间点p-p38MAPK的表达明显减少(P<0.05)。光镜显示LPS组病理形态学改变明显,而FAS组则明显减轻。结论法舒地尔可明显抑制脂多糖诱导的急性肺损伤大鼠肺组织p38MAPK的磷酸化激活,减轻脂多糖诱导的大鼠肺损伤程度。     

脂氧素A4对内毒素攻击的肺泡Ⅱ型上皮细胞Na+-K+-ATP酶的影响

目的 探讨促炎症消退介质脂氧素A4(LipoxinA4,LXA4)对内毒素(endotoxin)攻击的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(Alveolar type Ⅱ epithelial cells,ATⅡ)Na+-K+-ATP酶的影响.方法 AT Ⅱ成功分离纯化后随机(随机数字法)分为5组:①空白组(PBS);②溶剂对照组(乙醇,0.7μL/mL);③脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)(1μg/mL)组;④LXA4(1×10-7mol/mL)组;⑤LPS(1μg/mL)+LXA4(1×10-7mol/mL)组.药物干预4 h后用RT-PCR法检测ATⅡ上Na+-K+-ATP酶α1,β1亚基的mRNA的表达,用高效液相法测定细胞ATP,ADP,AMP和腺嘌呤核苷酸总量(TAN),间接测得Na+-K+-ATP酶的活性和AT Ⅱ能荷.结果 RT-PCR结果显示:LPS组α1,β1亚基的mRNA表达较空白组明显降低(P＜0.05),而LPS+LXA4组的α1,β1亚基的mRNA表达较LPS模型组有明显增高(P＜0.05).酶活性检测结果显示:LPS组Na+-K+-ATP酶活性较空白组明显增高(P＜0.05).与LPS刺激组比较,LPS+LXA4组酶活性明显增高(P＜0.05).能荷结果显示:LPS组较空白组明显增高(P＜0.05),其余各组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 LXA4能上调内毒素攻击的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞Na+-K+-ATP酶α1,β1亚基mRNA表达,增强Na+-K+-ATP酶的活性,并能有效维持细胞的能量代谢平衡,提示LXA4可能通过上调Na+-K+-ATP酶的基因表达和功能活性,维持细胞代谢稳定,从而起到促进肺泡水肿液清除的作用.     

急性肺损伤大鼠肺组织血管紧张素转换酶表达的变化及其意义

目的探讨脂多糖性急性肺损伤大鼠肺组织血管紧张素转换酶的表达变化和可能的作用机制。方法 32只健康雄性Wistar大鼠随机分为正常0.9%氯化钠注射溶液对照组(NS组)、急性肺损伤后6、12、24 h三组(LPS时间组),每组8只,LPS时间组通过股静脉注射LPS(5 mg/kg)建立急性肺损伤模型。NS组给予等量NS。在相应时间点检测血气分析、肺组织湿/干重比(W/D)、HE染色、Real-timePCR方法检测肺组织ACE和ACE2 mRNA表达,免疫组织化学检测ACE和ACE2蛋白表达。结果 LPS组大鼠表现出急性肺损伤症状,随时间点延长,PaO2逐渐降低,肺W/D比值升高(P<0.05),HE染色显示肺组织损伤明显。LPS组大鼠肺组织ACE mRNA和蛋白表达随时间组延长明显增强(P<0.05),而ACE2mRNA和蛋白表达却明显减弱(P<0.05)。结论肺组织ACE、ACE2表达的改变在急性肺损伤大鼠的发病机制中可能起到重要作用。     

急性肺损伤大鼠肺组织肝脏X受体α表达的研究

目的 观察内毒素性急性肺损伤(ALI)大鼠肝脏X受体α(LXRα)的改变,探讨LXRα在ALI发病中的作用机制.方法 将48只Wistar大鼠随机均分为两组.采用尾静脉注射脂多糖(LPS)5 mg/kg复制大鼠ALI模型,对照组静脉注射生理盐水2.5 ml/kg.于致伤后1、2、4和8 h取大鼠动脉血进行血气分析及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平检测;取肺测定肺湿/干重(W/D)比值、髓过氧化物酶(MPO)活性及肺组织病理学改变;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肺组织LXRα mRNA、TNF-α mRNA表达;用酶联免疫吸附法(ELISA)检测TNF-α含量变化;用免疫组化法观察肺组织LXRα蛋白表达情况.结果 与对照组比较,ALI组致伤后各时间点动脉血氧分压(PaO2)均显著降低,肺W/D比值、MPO活性均显著升高(P均<0.05);病理观察显示肺组织受损;肺组织LXRα mRNA表达下降,TNF-α mRNA表达升高(p均<0.05),肺组织匀浆和动脉血清中TNF-α亦显著升高,4 h达高峰.免疫组化显示对照组肺组织表达较高水平LXRα蛋白,ALI组在LPS致伤后可见LXRα蛋白表达较对照组显著下降(P均<0.05).结论 正常大鼠肺组织可表达LXRα,LPS可引起ALI大鼠肺组织LXRα的基因和蛋白表达下降,这可能与ALI发病有关.