氯胺酮诱导的热休克蛋白70在大鼠脑组织中不同区域的表达

目的 研究氯胺酮诱导的热休克蛋白70(HSP70)在大鼠脑组织中不同区域的表达.方法 SD大鼠20只,随机均分为氯胺酮组(K组)和生理盐水组(N组),分别在腹腔注射氯胺酮80mg/kg和生理盐水3ml.24h后取鼠脑,应用HSP70单克隆抗体免疫组化染色检测胼胝体压部后皮质、海马、大鼠后扣带回和枕叶皮质中HSP70的表达,并用MIAS-2000图文分析系统分析上述区域HSP70阳性细胞百分率、阳性细胞密度(个/mm2)和阳性产物灰度值.结果 氯胺酮可诱导大鼠大脑特定区域表达HSP70;大脑各区域HSP70表达不同.结论 氯胺酮诱导HSP70在大脑特定区域的表达,提示可能产生神经细胞损害;氯胺酮对大脑特定区域产生损害.     

异丙酚对氯胺酮诱导的热休克蛋白70基因在大鼠后扣带回皮质区表达的影响

目的：观察异丙酚对氯胺酮诱导的热休克蛋白70（HSP70）基因在大鼠后扣带回皮质区表达的影响，探讨异丙酚抑制氯胺酮所致精神症状和神经损害的机制。方法：雄性Wistar大鼠30只，随机分为生理盐水5ml组、氯胺酮100mg/kg组、异丙酚100mg/kg组、异丙酚50mg/kg-氯胺酮100mg/kg组、异丙酚100mg/kg-氯胺酮100mg/kg组。于用药后24h，大鼠断头取脑，用半定量RT－PCR技术和免疫组织化学方法检测各组HSP 70 mRNA和HSP 70蛋白在大鼠后扣带回皮质区的表达。结果：氯胺酮可明显诱导HSP 70 mRNA与HSP 70蛋白在大鼠后扣带回皮质区的表达；异丙酚自身不能诱导HSP 70基因的表达；预先给予异丙酚可显著抑制氯胺酮诱导的HSP 70 mRNA和HSP 70蛋白在这一区域的表达，且抑制效应呈剂量依赖性。结论：异丙酚可抑制氯胺酮的HSP 70 mRNA与HSP 70蛋白在大鼠后扣带回皮质区的表达，这可能是其预防或减轻氯胺酮所致精神症状和神经损害的机制之一。     

咪唑安定对氯胺酮诱导的c-fos基因在大鼠后扣带回皮质区表达的影响

目的 观察咪唑安定对氯胺酮诱导的c-fos基因在大鼠后扣带回皮质区表达的影响，探讨咪唑安定预防或减轻氯胺酮所致精神症状及神经损害的机制。方法 雄性Wistar大鼠30只，随机分为生理盐水5ml组、咪唑安定15mg／kg组、氯胺酮100mg／kg组、咪唑安定15mg／kg加氯胺酮100mg／kg组、氯胺酮100mg／kg加咪唑安定15mg／kg组。咪唑安定与氯胺酮两药间隔15min给药，所用药物均由腹腔注射。各组动物于用药后2h开胸经心脏灌流脑固定，用免疫组织化学方法检测后扣带回皮质区c-fos蛋白的表达，用彩色病理图像分析系统测定c-fos阳性细胞的百分率和阳性细胞的密度。结果氯胺酮可明显诱导c-fos蛋白在大鼠后扣带回皮质区的表达；咪唑安定自身不能诱导c-fos的表达；咪唑安定预处理可显著抑制氯胺酮诱导的c-fos在这一区域的表达；先用氯胺酮后给予咪唑安定仅能部分抑制c-fos的表达。结论 咪唑安定预处理可抑制氯胺酮诱导的c-fos基因在大鼠后扣带回皮质区的表达，这可能是其预防或减轻氯胺酮所致精神症状和神经损害的机制之一。     

氯胺酮对新生大鼠海马CREB磷酸化水平的影响

目的 探讨氯胺酮对新生大鼠海马环磷腺苷反应元件结合蛋白(CREB)磷酸化水平的影响.方法 SD大鼠75只,日龄7 d,雌雄不拘,随机分为对照组(C组)、氯胺酮10 mg/kg组(K1组)和氯胺酮20 mg/kg组(K2组),每组25只.K1组和K2组分别皮下注射氯胺酮10、20 mg/kg,C组注射等容量生理盐水,每间隔90 min注射1次,共注射7次.于首次注射后24 h时断头取脑,分离海马,采用TUNEL法检测凋亡神经元,计算凋亡指数;免疫荧光双标法检测p-CREB表达水平;RT-PCR法半定量检测CREB下游基因BDNF mRNA及Bcl-2 mRNA表达水平;于首次注射后6周时采用Morris水迷宫实验测定各组大鼠认知功能.结果 与C组相比,K1组和K2组大鼠海马神经元凋亡指数升高,p-CREB、BDNF mRNA及Bcl-2 mRNA表达下调(P<0.05);与K1组相比,K2组大鼠海马神经元凋亡指数升高,p-CREB、BDNF mRNA及Bcl-2 mRNA表达下调(P<0.05);与C组和K1组相比,K2组逃避潜伏期延长(P<0.05).结论 氯胺酮10、20 mg/kg均可诱导发育期大鼠海马神经元凋亡,而氯胺酮20 mg/kg可导致大鼠发育成熟后认知功能降低,可能与其抑制CREB磷酸化后BDNF及Bcl-2表达下调,导致神经元凋亡,影响大鼠神经系统发育有关.     

氯胺酮对新生大鼠海马CREB磷酸化水平的影响

目的 探讨氯胺酮对新生大鼠海马环磷腺苷反应元件结合蛋白(CREB)磷酸化水平的影响.方法 SD大鼠75只,日龄7 d,雌雄不拘,随机分为对照组(C组)、氯胺酮10 mg/kg组(K1组)和氯胺酮20 mg/kg组(K2组),每组25只.K1组和K2组分别皮下注射氯胺酮10、20 mg/kg,C组注射等容量生理盐水,每间隔90 min注射1次,共注射7次.于首次注射后24 h时断头取脑,分离海马,采用TUNEL法检测凋亡神经元,计算凋亡指数;免疫荧光双标法检测p-CREB表达水平;RT-PCR法半定量检测CREB下游基因BDNF mRNA及Bcl-2 mRNA表达水平;于首次注射后6周时采用Morris水迷宫实验测定各组大鼠认知功能.结果 与C组相比,K1组和K2组大鼠海马神经元凋亡指数升高,p-CREB、BDNF mRNA及Bcl-2 mRNA表达下调(P<0.05);与K1组相比,K2组大鼠海马神经元凋亡指数升高,p-CREB、BDNF mRNA及Bcl-2 mRNA表达下调(P<0.05);与C组和K1组相比,K2组逃避潜伏期延长(P<0.05).结论 氯胺酮10、20 mg/kg均可诱导发育期大鼠海马神经元凋亡,而氯胺酮20 mg/kg可导致大鼠发育成熟后认知功能降低,可能与其抑制CREB磷酸化后BDNF及Bcl-2表达下调,导致神经元凋亡,影响大鼠神经系统发育有关.     

丙泊酚对脑缺血-再灌注后海马组织热休克蛋白70和c-fos基因表达的影响

目的观察丙泊酚对脑缺血一再灌注后海马组织热休克蛋白70(HSP70)与c-fos基因表达的影响。方法雄性Wistar大鼠40只,随机分为假手术组、缺血一再灌注对照组和缺血一再灌注丙泊酚处理组,后者按丙泊酚用量又分为50、100和150mg／kg三个亚组。采用大鼠全脑缺血一再灌注损伤模型。全脑缺血10min再灌注60min时,断头取脑,采用免疫组织化学和半定量RT-PCR方法,对脑内HSP70与c-fos蛋白及其mRNA在海马组织的表达水平进行检测。结果缺血一再灌注后皮层、海马、纹状体及边缘区等脑区均有大量的HSP70和c-fos阳性蛋白表达,海马组织HSP70及c-fos基因mRNA的表达水平明显增高,其中以缺血一再灌注对照组表达最为显著;假手术组仅有少量阳性蛋白的表达,海马组织mRNA的表达水平极低;麻醉相关剂量的丙泊酚可显著抑制HSP70与c-fos蛋白在各脑区的表达,尤以海马CA1区最为显著,亦可明显下调HSP70和c-fos mRNA在海马组织的表达水平。结论缺血一再灌注损伤可明显诱导HSP70与c-fos基因的表达,丙泊酚的脑保护作用可能与其下调HSP70与c-fos基因的异常表达有关。     

氯胺酮对新生大鼠海马CREB磷酸化水平的影响

目的 探讨氯胺酮对新生大鼠海马环磷腺苷反应元件结合蛋白(CREB)磷酸化水平的影响.方法 SD大鼠75只,日龄7 d,雌雄不拘,随机分为对照组(C组)、氯胺酮10 mg/kg组(K1组)和氯胺酮20 mg/kg组(K2组),每组25只.K1组和K2组分别皮下注射氯胺酮10、20 mg/kg,C组注射等容量生理盐水,每间隔90 min注射1次,共注射7次.于首次注射后24 h时断头取脑,分离海马,采用TUNEL法检测凋亡神经元,计算凋亡指数;免疫荧光双标法检测p-CREB表达水平;RT-PCR法半定量检测CREB下游基因BDNF mRNA及Bcl-2 mRNA表达水平;于首次注射后6周时采用Morris水迷宫实验测定各组大鼠认知功能.结果 与C组相比,K1组和K2组大鼠海马神经元凋亡指数升高,p-CREB、BDNF mRNA及Bcl-2 mRNA表达下调(P<0.05);与K1组相比,K2组大鼠海马神经元凋亡指数升高,p-CREB、BDNF mRNA及Bcl-2 mRNA表达下调(P<0.05);与C组和K1组相比,K2组逃避潜伏期延长(P<0.05).结论 氯胺酮10、20 mg/kg均可诱导发育期大鼠海马神经元凋亡,而氯胺酮20 mg/kg可导致大鼠发育成熟后认知功能降低,可能与其抑制CREB磷酸化后BDNF及Bcl-2表达下调,导致神经元凋亡,影响大鼠神经系统发育有关.     

氯胺酮-咪唑安定对感染性休克大鼠心肌环磷酸腺苷及热休克蛋白70表达的影响

目的：探讨氯胺酮-咪唑安定在感染性休克中的心肌保护作用及作用机制。方法：选择健康成年SD大鼠104只，随机分为对照组(NS组、E组)和试验组(EM组、EK组、EKM组)。NS组为正常对照组，E组给予LPS20mg／kg ip，EK组、EKM组、EM组同级处理前分别给KTM80mg／kg ip、KTM80mg／kg M0．5mg／kgip、M0．5mg／kg ip，1h后追加半剂。临终时取各组大鼠心肌放免法测cAMP水平及免疫组化方法测HSP70的表达，并观察各组大鼠存活时间。同时监测EK、EKM组KTM血药浓度。结果：E组cAMP水平显著低于NS组及EK、EKM组，E组HSP70表达强于NS组，EK、EKM组HSP70表达强于E组，E，EM组、EK、EKM组cAMP、HSP70表达无明显差异。结论：氯胺酮可升高感染性休克时心肌cAMP水平，保护感染心肌，其机制可能为增强心肌HSP70的表达。咪唑安定-氯胺酮复合应用不影响氯胺酮保护感染心肌作用。     

氯胺酮-咪唑安定对感染性休克大鼠心肌HSP70表达的影响

目的 探讨氯胺酮（KTM）-咪唑安定（M）在感染性休克中的心肌保护作用及可能的作用机制。方法 选择健康成年SD大鼠112只,随机分入对照组（NS组、E组）和试验组（EM组、EK组、EKM组）。NS组为正常对照组,E组给予LPS 20mg/kg ip,EK组、EKM组、EM组在同E组处理前分别给予KTM 80mg/kg ip,KTM 80mg/kg M 0.5mg/kg ip,M 0.5mg/kg ip,1h后追加半剂。在LPS处理2h后及E组大鼠临终时取心肌用免疫组化方法测HSP70的表达,并观察各组大鼠存活时间。结果 E组HSP70表达强于NS组,EK、EKM组HSP70 表达强于E组,存活率也高于E组,且随时间延长HSP 70表达呈增强趋势;E组、EM组和HSP 70表达及存活率无明显差异。结论 氯胺酮可增强感染性休克时大鼠心肌HSP 70的表达,可能是氨胺酮保护感染心肌的机制之一;咪唑安定-氯胺酮复合应用不影响氨胺酮保护感染心肌的作用。     

氯胺酮—咪唑安定对感染性休克大鼠血清肿瘤坏死因子—α及心肌热休克蛋白70表达的影响

目的 探讨氯胺酮-咪唑安定对感染性休克大鼠的心肌保护作用及可能的使用机制。方法 选择健康成年SD大鼠112只，随机分为对照组（NS组和E组）和实验组（EM组、EK组及EKM组）。NS组为正常对照组，E组给予内毒素（LPS）20mg/kg，ip；EK组、EKM组及EM组同E组，但给LPS前分别给予KTM80mg/kg,ip,KTM80mg/kg M0.5mg/kg ip,M0.5mg/kg ip，1小时后追加半剂。在LPS处理2小时后及E组大鼠临终时测血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）及心肌热休克蛋白70（HSP70）的表达，并观察各组大鼠存活时间。结果 E组TNF-α显著高于NS组、EK和EKM组，E组HSP70表达强于NS组，但弱于EK及EKM组，E组与EM组，EK与EKM组的TNF-α、HSP70表达无明显差异。结论 氯胺酮可降低感染性休克时血清TNF-α，减轻其心肌损害。其机制可能为增强心肌HSP70的表达。咪唑安定-氯胺酮复合应用不影响氯胺酮保护感染心肌的作用。     

氯胺酮对严重烧伤大鼠心肌HSP 70表达的影响

目的 评价氯胺酮对严重烧伤大鼠心肌HSP 70表达的影响,探讨其心肌保护的机制.方法 雄性Wistar大鼠72只,随机分为正常对照组(C组,n=8)、烧伤组(BI组,n=32)和氯胺酮组(K组,n=32).K组或BI组于烧伤模型制备成功后15 min分别肌肉注射氯胺酮20 mg/kg或等容量生理盐水,于给药后3、6、12和24 h分别随机处死8只大鼠,取心肌组织,采用Western blot方法检测心肌HSP 70的表达,电镜下观察给药后3 h时心肌细胞的病理学结果.结果 与C组相比,K组和BI组给药后3、6、12及24 h时HSP 70表达上调(P<0.05);与B组相比,K组给药后3、6 h时HSP 70表达上调(P<0.05).K组较BI组给药后3 h时心肌病理损伤减轻.结论 氯胺酮通过上调心肌HSP 70表达,减轻严重烧伤早期大鼠心肌损伤.     

氯胺酮对法洛四联症手术患者血浆HSP70表达的影响

目的观察氯胺酮对法洛四联症矫治术患者血浆热休克蛋白70(heat shock proteins 70,HSP70)表达的影响。方法 20例择期行法洛四联症矫治术的患者,ASAⅢ~Ⅳ级,随机分为氯胺酮组(K组)和对照组(C组),每组各10例。K组于麻醉诱导和转流开始时静脉注射氯胺酮2 mg/kg,C组予等容量的生理盐水。分别于麻醉诱导前即刻(T0)、CPB开始后30 min(T1)、主动脉开放后30 min(T2)、停机后1 h(T3)采桡动脉血5 ml,以酶联免疫吸附法(ELISA)测定血浆中的HSP70浓度。结果组内与T0时比较,两组患者T1、T2、T3时HSP70水平均升高(P0.05或P0.01);组间比较,K组在T1、T2、T3时血浆HSP70水平均高于C组(P0.05或P0.01)。结论氯胺酮可增加血浆HSP70水平,改善心肌缺血再灌注损伤,提高TOF矫治术的麻醉质量。     

Ketamine inhibits lipopolysacharide (LPS) induced gastric luminal fluid accumulation

INTRODUCTION: Lipopolysacharide (LPS) causes gastrointestinal ileus and gastric luminal fluid accumulation. Ketamine, an anti-inflammatory anesthetic agent attenuates accumulation of luminal fluid. However, its effects on gastrointestinal transit induced by endotoxemia are unknown. The purpose of this study was to determine if the anti-inflammatory properties of ketamine improve impaired gastric emptying and gastrointestinal transit because of LPS. MATERIALS AND METHODS: Rats were given ketamine (70 mg/kg i.p.) or saline 1 h before LPS (20 mg/kg, i.p.) or saline injection. Five hours after LPS injection, rats were gavaged with 1 cc consisting of 0.1 ml of 5 mm FITC Dextran added to 0.9 ml of saline. After 30 min, rats were sacrificed, and gastric emptying, gastrointestinal transit, and gastric fluid accumulation determined. Gastric and ileal mucosa were harvested for analysis of inducible nitric oxide synthase (iNOS) (Western immunoblot). Results are reported as mean +/- SE (n > or = 5 per group; ANOVA). RESULTS: Ketamine did not prevent LPS induced gastrointestinal ileus, nor did it improve gastric emptying. More importantly, it did not worsen gastrointestinal function or gastric emptying when compared to saline controls. However, it did decrease LPS induced gastric luminal fluid accumulation and blunted iNOS expression in both the stomach and ileum. CONCLUSION: These data indicate that the ability of ketamine to attenuate gastric fluid accumulation is not because of improved gastric emptying or improved gastrointestinal transit. Moreover, while iNOS may play a role in LPS induced gastric luminal fluid accumulation, it does not appear to be a major mediator of the gastrointestinal ileus caused by LPS.     

热休克蛋白70抑制大鼠颅脑损伤诱生型一氧化氮合酶mRNA的表达

目的 探讨热休克蛋白７０（ＨＳＰ７０）对大鼠感染性脑损伤（感脑）诱生型一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）的表达及一氧化氮（ＮＯ）合成的影响。方法 将大鼠７２只随机分为正常对照组、感染性脑损伤组和热休克处理组,每组又ｈ共３个时间点。采用百日咳菌液通过左颈内动脉注入制成大鼠感染性脑损伤模型,用Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹杂交技术检测各组各时间点的ＨＳＰ７０的表达,同时用原位杂交方法检测各组ｉＮＯＳｍＲＮＡ的表达及Ｇｒｉｅｓｓ法测定各组的ＮＯ含量的变化。结果 Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹杂交分析结果表明,大鼠感脑各组及正常组有一定量的ＨＳＰ７０表达,而热休克处理组的ＨＳＰ７０的量明显高于感脑组（Ｐ〈０．０１）。原位杂交结果提示ｉＮＯＳ在感脑的大脑皮质神经细胞４、８、２４ｈ开始表达,可见明显的杂交信号,而休克处理组仅有少量的阳性颗粒。ＮＯ含量在感脑     

氯胺酮对大鼠不同脑区NOS活性和NO产量的影响

目的：了争氯胺酮对大鼠脑ＮＯＳ活性和ＮＯ产量的影响。方法：１６只ＳＤ大鼠,随机分为二组,分别ｉｐ生理盐水１０ｍｌ／ｋｇ（对照组）和氯胺酮１００ｍｇ／ｋｇ。用分光光度法测定ＮＯＳ活性和ＮＯ产量。结果：大鼠ｉｐ氯胺酮１００ｍｇ／ｋｇ能明显抑制小脑、大脑皮层、海马的ＮＯＳ活性和减少ＮＯ的产量（Ｐ〈０．０５或Ｐ〈０．０１）,脑干的ＮＯ产量亦较对照组减少（Ｐ〈０．０１）,ＮＯＳ活性下降,但无统计学意义。结论     

氯胺酮联合亚低温对窒息性心跳骤停大鼠复苏后脑缺血再灌注损伤的影响

目的 探讨氯胺酮联合亚低温对窒息性心跳骤停大鼠复苏后脑缺血再灌注损伤的影响.方法 健康Wistar大鼠50只,4.0～4.5个月,雌雄各半,体重410～510 g,随机分为5组(n=10):假手术组(S组)仅经动、静脉穿刺置管;窒息性心跳骤停组(ACA组)制备窒息性脑缺血模型;氯胺酮组(K组)窒息前5 min腹腔注射氯胺酮100 mg/kg;亚低温组(MH组):窒息开始后维持直肠温30～35℃;氯胺酮+亚低温组(K+MH组):窒息前5 min腹腔注射氯胺酮100 mg/kg,窒息开始后维持直肠温30～35 ℃.成功复苏后,取脑组织,测定脑含水量和海马神经元p-caspase-3的表达水平.结果 与S组比较,ACA组和K组脑含水量升高,p-caspase-3表达上调,MH组和K+MH组p-caspase-3表达上调(P＜0.01),脑含水量差异无统计学意义(P＞0.05);与ACA组比较,MH组和K+MH组脑含水量降低,p-caspase-3表达下调,K组p-caspase-3表达下调(P＜0.01),脑含水量差异无统计学意义(P＞0.05);与K组比较,K+MH组脑含水量降低,p-caspase-3表达下凋,MH组脑含水量降低(P＜0.01),p-caspase-3表达差异无统计学意义(P＞0.05);与MH组比较,K+MH组p-caspase-3表达下调(P＜0.01),脑含水量差异无统计学意义(P＞0.05).结论 氯胺酮联合亚低温可减轻窒息性心跳骤停大鼠复苏后的脑缺血再灌注损伤,该效应较两者单独应用时增强.     

氯胺酮对不同性质脑损伤影响的实验研究

目的　观察氯胺酮对细胞能量代谢障碍、兴奋性氨基酸中毒和氧自由基损伤三种不同性质脑损伤的作用。方法　制备大鼠皮层和海马脑片 ,培养胎鼠皮层神经元 ,建立缺氧缺糖 (OGD)、谷氨酸和过氧化氢 (H2 O2 )三类损伤模型 ,采用脑片TTC染色和神经元MTT比色法 ,酶标仪测定4 90nm处吸光度 (A值 ) ,定量考察损伤程度和氯胺酮的作用。结果　三类损伤能够明显降低皮层、海马脑片TTC染色和神经元MTT比色吸光度A值 (P <0 0 5 )。氯胺酮对正常孵育脑片和培养神经元染色无影响 ,明显减轻OGD与谷氨酸损伤脑片和神经元所致A值降低 (P <0 0 5 ) ,对H2 O2 损伤所致A值降低无作用。结论　氯胺酮保护细胞能量代谢障碍和兴奋性氨基酸中毒所致脑损伤 ,对氧自由基损伤无保护作用。     

氯胺酮对新生大鼠海马区G蛋白偶联受体30表达的影响

目的探讨氯胺酮对新生大鼠海马区G蛋白偶联受体30(G protein-coupled receptor 30, GPR30)表达的影响。方法实验一:随机选取20只健康雄性SD大鼠作为空白对照组(S组,n=20),在饲养1、3、7、14 d时各取出5只处死,采用免疫组化法检测大鼠海马区GPR30阳性细胞数。实验二:10只出生7 d健康雄性SD大鼠随机分为两组,生理盐水组(C组,n=5)和氯胺酮组(K组,n=5)。连续3 d腹腔注射生理盐水0.1 ml(C组)或氯胺酮75 mg/kg(K组),在末次给药后24 h处死,采用免疫组化法检测大鼠海马区cleaved caspase-3阳性细胞数,采用Western blot法检测海马区GPR30蛋白含量。结果与1 d和3 d比较,7 d和14 d S组大鼠海马区GPR30蛋白含量明显升高(P0.05);与7 d比较,14 d时S组大鼠海马区GPR30蛋白含量明显升高(P0.05)。与C组比较,K组海马区cleaved caspase-3阳性细胞数明显增多,GPR30蛋白含量明显降低(P0.05)。结论氯胺酮诱导发育期大鼠海马细胞凋亡可能与GPR30表达下调有关。