透骨草提取物对人卵巢SKOV-3细胞Caspases蛋白表达的影响

目的：研究透骨草提取物对人卵巢SKOV-3细胞凋亡的影响及其机制。方法：吖啶橙染色法观察透骨草提取物对SKOV-3细胞形态的影响;免疫组化法检测透骨草提取物对SKOV一3细胞Caspas-es蛋白表达的影响。结果：37．8μg／ml透骨草提取物作用于SKOV-3细胞24h后,SKOV-3细胞形态不规则,细胞核固缩、呈月牙形紧贴在核膜周围。SKOV-3细胞Caspase-9、Caspase-3、Caspase-7蛋白表达明显低于与对照组（P〈0．05）,表明透骨草提取物可下调SKOV-3细胞Caspase-9、Caspase-3、Caspase-7蛋白的表达。结论：透骨草提取物可以通过Caspases依赖途径诱导SKOV-3细胞凋亡。     

胡桃醌对人前列腺癌PC-3细胞生长作用研究

目的 探讨胡桃醌对前列腺癌PC-3细胞的生长的影响.方法 光学显微镜观察细胞形态变化;MTT法检测不同剂量胡桃醌对PC-3细胞生长影响;采用PI染色实验,流式细胞仪检测PC-3细胞凋亡情况.蛋白印迹法检测Caspase-3表达量.结果 与对照组比较,胡桃醌能够抑制前列腺癌PC-3细胞生长并且呈剂量依赖性(P＜0.05).胡桃醌高剂量组细胞形态呈现凋亡状态.流式细胞仪检测胡桃醌作用12 h后诱导PC-3细胞发生凋亡率显著高于对照组(P＜0.05).随着胡桃醌浓度不断增加,Caspase-3表达逐渐升高.结论 胡桃醌能够抑制前列腺癌PC-3细胞增殖,诱导细胞凋亡.     

寨卡有效部位提取物对人结肠癌LoVo细胞体外抑制作用的研究

目的 研究寨卡有效部位提取物体外抑制人结肠癌LoVo细胞的量-效和时-效关系,并对其可能的作用机制进行初步探讨.方法 寨卡有效部位提取物不同浓度、不同时间分别处理LoVo细胞,以MTT法和荧光显微镜观察其对细胞生长增殖的抑制作用,利用分光光度法检测试剂盒检测Caspase-3和Caspase-9的活化程度.结果 寨卡有效部位提取物对体外培养的人结肠癌LoVo细胞有明显的抑制作用,呈剂量和时间依赖关系,IC50值为550 μg/ml.Caspase-3和Caspase-9的活性与药物浓度呈正相关,当浓度为1 000 μg/ml时其活性与阳性药物组基本相当.结论 寨卡有效部位提取物在体外能有效抑制人结肠癌LoVo细胞的生长,并可能通过激活Caspase-3和Caspase-9诱导细胞凋亡.     

青蒿素对人白血病细胞Caspase-3及细胞色素C表达的影响

目的:研究青蒿素对人白血病细胞Caspase-3及细胞色素C表达的影响,探讨其对白血病的作用机制,为进一步临床研究及应用提供依据。方法:体外培养K562细胞,用细胞计数法绘制生长曲线;荧光显微镜检测药物作用前后细胞凋亡作用;RT-PCR检测Caspase-3的表达;Western-blot测定药物作用前后线粒体、细胞浆细胞色素C的表达。结果:青蒿素的浓度为1×10-4,1×10-5,1×10-6mol/L时,细胞生长受到显著抑制,并呈剂量依赖性;Hoechst33342/PI双荧光染色可观察到明显的核浓缩、凝集等细胞凋亡表现;RT-PCR检测到Caspase-3的表达;Western-blot检测1×10-5mol/L药物处理细胞后线粒体细胞色素C表达水平下调,细胞浆出现明显细胞色素C蛋白条带。结论:青蒿素能显著抑制人白血病细胞K562的生长,并诱导其凋亡,而促进细胞色素C的释放,激活Caspase-3可能是其作用机制之一。     

辣椒素通过Fas/FasL死亡受体通路诱导胃癌细胞发生凋亡的研究

目的 观察辣椒素对人胃癌细胞(MKN-45)细胞增殖及死亡受体通路的影响,从而为其抑制胃癌进展提供研究依据.方法 用CCK-8实验检测细胞活力,透射电镜和流式细胞仪检测细胞凋亡.酶联免疫吸附检测各组样本caspase-3,caspase-8活性,蛋白印迹法检测各组样本Fas,FasL表达.结果 辣椒素可抑制MKN-45...     

二十碳五烯酸(EPA)体外诱导FRH-0201细胞凋亡机理的初步研究

目的:观察EPA体外诱导FRH-0201细胞凋亡机理的初步研究。方法:在处于指数生长期的人肝胆管癌细胞株FRH-0201培养剂中添加二十碳五烯酸(EPA),采用流式细胞仪对FRH-0201细胞线粒体跨膜电位的影响、细胞色素c免疫组化染色及Western Bolt检测Casepase-9和Casepase-3的表达。结果:FRH-0201细胞线粒体Δψm下降随EPA剂量的增大而显著增多(P0.05),EPA处理组细胞内棕色颗粒的强弱和阳性细胞的比例明显高于对照组,差异具有统计学意义(P0.05,P0.001),EPA不同浓度处理FRH-0201细胞48h后,Caspase-3和Caspase-9蛋白表达显著提高。结论:EPA可能通过降低线粒体膜电位,释放细胞色素C,激活Caspase-9,从而引发Caspase-3的级联反应,诱导FRH-0201细胞凋亡。     

大蒜素对脑出血大鼠细胞凋亡影响的实验研究

目的探讨脑出血大鼠血肿周边组织细胞凋亡的变化规律;观察大蒜素治疗对血肿周边组织细胞凋亡的影响及可能机制。方法将90只 Wistar 大鼠随机分成对照组、脑出血组及大蒜素组;脑出血组和大蒜素组又分为6h 及1、3、7天几个时相点。脑出血动物模型采用立体定位技术及“二次注血,二次退针”方法,将50μl 自体血注入大鼠尾状核;对照组只进针不注血。大蒜素组给予大蒜素注射液0.2mg/100g 体重,股静脉注射,于造型成功即刻及每日1次;TdT 介导的 dUTP 缺口末端标记法检测 TUNEL 阳性细胞的表达;免疫组化二步法测 Caspase-3 IR 细胞。结果 (1)脑出血组血肿周边 TUNEL 阳性细胞表达显著高于对照组,于3天时达高峰(P<0.01);Caspase-3IR 细胞出现较早,于造模后6h 即显著增高,1天达高峰(P<0.01);(2)大蒜素组治疗后 TUNEL 阳性细胞、Caspase-3IR 细胞表达显著降低(P<0.05)。结论脑出血后血肿周边组织出现凋亡性损伤,大蒜素治疗可减轻出血性细胞凋亡,其机制可能与大蒜素抑制 Caspase-3蛋白表达有关。     

三氧化二砷对急性淋巴细胞白血病原代细胞的作用

探讨三氧化二砷（As2O3）对急性淋巴细胞白血病（ALL）原代白血病细胞的作用及作用机制,为As2O3在急性淋巴细胞白血病中的应用提供实验依据。方法：采用MTT法检测As7O3,对ALL原代白血病细胞生长的抑制作用;采用细胞形态学和DNA琼脂糖凝胶电泳技术,观察As2O3在体外诱导ALL原代白血病细胞的凋亡作用;采用流式细胞术检测原代白血病细胞在As2O3,处理前后的Caspase-3活性水平变化及Bcl-2表达水平。结果：①As2O3浓度为1．0—10．0μmol／L的As20,可以明显抑制ALL原代白血病细胞的生长,并呈时间与浓度依赖性。②As2O3作用于ALL原代白血病细胞出现典型细胞凋亡形态学改变、DNA出现了特征性“阶梯形”条带和细胞凋亡峰。③16例ALL患者BMMNCCaspase-3活性水平为4．11±1．93;经As2O3作用后Caspase-3活性水平为26．39±8．36,明显高于对照组11．54±2．78,P〈0．001。④本组患者治疗有效者9例,As2O3作用前后Caspase-3活性水平为4．83±0．98、29．67±7．93;无效者7例Caspase-3活性水平为3．19±2．50、20．59±4．63;As2O3作用后治疗有效组Caspase-3活性明显升高,P〈0．05。⑤16例ALL患者BMMNCBcl-2表达水平为28．08±6．35,其中治疗有效组为26．32±5．79,无效组为32．63±5．47,P〈0．05。⑦As2O3作用前后Bcl-2高表达组Caspase-3活性水平分别为4．07±1．26、22．10±5．64;而Bcl-2低表达组分别为4．14±2．41、32．63±5．47。As2O3作用后两组cas—pase-3活性水平上升程度明显不同,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：Ass2O3在体外对ALL原代白血病细胞生长具有抑制作用,呈现明显的剂量及时间依赖性关系。As2O3能通过激活Caspase-3途径诱导ALL原代白血病细胞凋亡,而Bcl-2可在一定程度上抑制As2O3激活Caspase-3诱导ALL原代白血病细胞凋亡。     

Caspase-3蛋白在口腔白斑转化为口腔鳞状细胞癌中的作用

目的研究Caspase-3蛋白在口腔正常黏膜、口腔白斑（OLK）和口腔鳞状细胞癌中的表达,以了解Caspase-3在口腔癌前病变发生发展过程中的作用及临床意义,为癌变潜能监测提供诊断指标。方法采用免疫组化技术SP法对标本进行Caspase-3蛋白染色,并计算它的阳性表达。结果 Caspase-3蛋白在口腔正常黏膜及不同病变的表达,经统计学分析,随着组织异常程度的增加,Livin蛋白阳性表达强度具有递减的趋势（P〈0.05）。结论 Caspase-3蛋白随着组织异常程度的增加有逐渐下降的趋势,提示Livin蛋白的低表达可能对OLK癌变的发展起重要作用。     

针刀对类风湿性关节炎模型大鼠的治疗作用及对滑膜细胞凋亡的影响

目的:观察针刀干预对II型胶原诱导关节炎(CIA)大鼠模型的治疗作用及对CIA大鼠滑膜组织中凋亡相关基因天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白水解酶3和9(Caspase-3和Caspase-9)表达的影响,探讨针刀干预对CIA大鼠的影响。方法:将30只SD雌性大鼠随机分为空白组、模型组和针刀组,每组10只。空白组正常饲养,模型组、针刀组分别采用免疫学方法制备CIA大鼠模型。造模成功后模型组不予任何处理,针刀组于大鼠左膝关节周围寻找条索状物行针刀干预治疗,每周治疗1次,共治疗3周。观察记录各组大鼠左后足足跖厚度及大鼠四肢关节炎指数评分(AI);运用HE染色法通过光镜观察各组大鼠膝关节病理形态学变化;采用实时荧光定量PCR法(qRT-PCR法)检测各组大鼠滑膜组织中Caspase-3、Caspase-9的mRNA表达量。结果:与空白组比较,模型组、针刀组大鼠足跖厚度及AI值均明显增加,差异具有统计学意义(P0.01);与模型组比较,针刀组大鼠足跖厚度及AI值均明显降低,差异具有统计学意义(P0.01)。模型组大鼠Caspase-3、Caspase-9 mRNA表达水平明显低于空白组,差异具有统计学意义(P0.05),针刀组大鼠Caspase-3、Caspase-9 mRNA表达水平较模型组明显升高,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:针刀干预对CIA大鼠关节炎症有明确的治疗作用,其作用机理可能是通过促进滑膜细胞凋亡相关基因的表达抑制滑膜组织增生实现的。     

药根碱诱导白血病K562细胞凋亡的研究

 目的 研究药根碱对白血病K562细胞的生长抑制及凋亡作用,探讨药根碱诱导K562细胞凋亡的可能途径。方法 采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测药根碱对K562细胞的生长抑制作用;吖啶橙(AO)/溴化乙锭(EB)双染法、碘化丙啶(PI)染色法观察药根碱对K562细胞凋亡的诱导作用;利用活细胞高内涵成像系统检测细胞内线粒体膜电位以及氧自由基的变化。结果 药根碱可明显抑制K562细胞的生长(IC₅₀ = 90 μmol·L-1 )。AO/EB染色可明显看到凋亡细胞和死亡细胞。PI染色显示,药根碱使K562细胞周期阻滞在G₀/G₁期。活细胞高内涵成像系统检测结果显示,37、75、150 μmol·L-1 药根碱作用后,细胞内活性氧荧光强度由1 305.1±15.3上升为26 243.6±165.3、30 106.7±153.2、34 682.6±174.1,线粒体膜电位由1 025.3±20.1下降为484.6±10.2、202.9±6.3、153.1±5.3。结论 药根碱能明显抑制白血病K562细胞生长,促进K562细胞凋亡,且其可通过增加细胞内活性氧、降低线粒体膜电位这一线粒体信号传导通路来诱导K562细胞凋亡。     

雷公藤红素对神经胶质瘤U87细胞增殖、凋亡和迁移的影响

目的研究雷公藤红素对神经胶质瘤U87细胞增殖、凋亡和迁移的影响及其机制。方法采用MTT法检测雷公藤红素对U87细胞增殖的影响;流式细胞术检测U87细胞凋亡和线粒体膜电位;Western blotting法检测U87细胞中线粒体途径相关凋亡蛋白表达水平;Transwell和划痕实验检测U87细胞的迁移能力。结果雷公藤红素可显著抑制U87细胞的增殖、降低U87细胞线粒体膜电位并诱导U87细胞凋亡;雷公藤红素显著性地调控Bcl-2、Bax、细胞色素C(Cyt C)、Caspase-9和Caspase-3的表达水平;同时雷公藤红素显著抑制U87细胞迁移能力。结论雷公藤红素抑制U87细胞增殖、迁移和诱导其凋亡,其中凋亡机制可能是通过调控线粒体途径相关凋亡蛋白来实现的。     

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??OBJECTIVE To investigage the effects of celastrol-triggered HeLa cells autophagy and the molecular mechanisms in vitro and in vivo. METHODS The antiproliferative effect of celastrol was detected using MTT assay. Apoptotic rate and cell cycle were evaluated using flow cytometric analysis. Autophagy was detected using fluorescence microscope. Protein expression was evaluated using Western blotting. Tumor growth was evaluated by subcutaneous xenograft model in vivo. RESULTS Celastrol inhibited HeLa cells proliferation and induced HeLa cells autophagy and cell cycle arrest at G₀/G₁ phase, but not induced HeLa cell apoptosis in vitro. The protein expression of Beclin 1 was up-regulated and the conversion from LC3 ?? to LC3 ?? was increase in HeLa cells in vitro after treatment with celastrol. Moreover, celastrol promoted the protein expression of PTEN??p-ERK1/2??p-MEK1/2 and inhibited the phosphorylated of Akt, p70S6K and mTOR in HeLa cells. After pretreatment with 3-methyladenine (5 mmol??L^-1), the antiproliferative and induced-autophagy effects of celastrol were reversed. Furthermore, celastrol inhibited tumor growth and the protein expression of p-Akt and p-mTOR, but up-regulated the protein expression of LC3 ?? and Beclin 1 in vivo. CONCLUSION Antitumor effect of celastrol dependent on cells autophagy in HeLa cells via inhibition of Akt/mTOR signaling pathway in vitro and in vivo.     

人参皂苷Rh_2通过激活p38诱导K562细胞自噬凋亡的实验研究

为了研究人参皂苷Rh2对人白血病细胞K562的凋亡作用,并从自噬角度来探讨其机制。实验采用CCK-8方法检测人参皂苷单体Rh2对人白血病K562细胞增殖抑制作用;流式细胞术检测细胞凋亡;Hoechest染色观察细胞核染色质的形态;吖啶橙和MDC染色观察Rh2对细胞自噬的影响;Western blot和RT-PCR检测Rh2对白血病细胞自噬重要基因的表达的影响;运用自噬抑制剂(3-MA)研究自噬对细胞增殖和凋亡的影响。CCK-8显示人参皂苷Rh2在低浓度时能有效抑制白血病细胞增殖,且其抑制作用具有浓度和时间依赖性;FCM和Hoechest显示Rh2能增加细胞的凋亡和染色质呈凋亡形态改变;吖啶橙和MDC染色发现Rh2组细胞的绿色荧光增强,并出现大量酸性自噬小泡;Western blot和RT-PCR结果发现Rh2能上调Beclin-1,LC3A,LC3B,激活型Caspase-3和p-p38的表达;运用细胞自噬剂(3-MA)会削弱Rh2对K562的增殖抑制和促凋亡作用。人参皂苷Rh2可能通过激活磷酸化的p38,诱导细胞自噬途径,从而抑制K562细胞增殖和促进凋亡作用。     

基于PI3K/AKT通路研究升降通癃方对前列腺增生细胞的影响

目的:研究升降通癃方通过调节磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/丝氧酸-苏氨酸蛋白激酶(AKT)信号通路对前列腺增生细胞增殖和凋亡的影响。方法:培养人前列腺增生细胞(BPH-1),随机分为对照组、升降通癃方低、中、高浓度组、阳性组五组,分别给予各组需要的药物处理24 h后,通过四唑盐比色法(CCK8法)检测药物对BPH-1细胞增殖的影响;用细胞划痕实验测定BPH-1的水平迁移能力;通过流式细胞术(FCM)检测升降通癃方对BPH-1细胞细胞凋亡的影响;通过蛋白质印迹法(Western blot)检测药物对细胞中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、Bcl-2关联X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、丝氧酸-苏氨酸蛋白激酶(AKT)、重组人α晶状体球蛋白B(Cryab)蛋白表达的影响。结果:加入升降通癃方后,BPH-1的迁移能力明显受到抑制,升降通癃方高、中、低浓度组比较差异有统计学意义(均P<0.05);FCM检测结果显示,升降通癃方组低、中、高浓度组的细胞凋亡率明显高于对照组,差异具有统计学意义(均P<0.05)。Weste...     

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??OBJECTIVE To study the anti-leukemia activities and mechanisms of bergenin derivative D-23. METHODS CCK-8 method was applied to investigate anti-tumor activities of D-23. Flow cytometry and immunofluorescence assay were used to observe the effects of D-23 on the apoptosis and autophagy in K562 and Jurkat human leukemia cell lines. Western blot analysis was used to investigate the mechanisms that compound D-23 induced tumor cell apoptosis and autophagy. RESULTS Bergenin derivative D-23 could significantly inhibit the proliferation of K562 and Jurkat cells by inducing cell apoptosis and autophagy. The mitochondrial membrane potential was decreased,protein kinase B(Akt)and heat shock protein 70 (Hsp70) were inhibited,and the expressions of apoptotic related proteins caspase 3 and caspase 9 were activated. In addition, mammalian target of rapamycin (P-mTOR)(Ser 2448 and Ser 2481)protein was inhibited. CONCLUSION Bergenin derivative D-23 shows obvious anti-leukemia activities by inducing cell apoptosis and autophagy. The apoptosis may be associated with the reduction of mitochondrial membrane potential and activation of caspase pathway. The autophagy may be related to the inhibition of Akt/mTOR signaling pathway.     

隐丹参酮对K562细胞凋亡的影响及其机制

目的 探讨隐丹参酮诱导人慢性髓系白血病K562细胞凋亡的作用及其线粒体途径相关机制。方法 MTT法检测隐丹参酮对细胞增殖的抑制作用;Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测丹参酮对细胞凋亡的影响,DAPI染色法观察细胞形态的变化;Western blotting检测丹参酮对细胞凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-9、PARP、Bax、Bcl-2和细胞色素C（Cyt C）表达的影响,线粒体膜电位检测试剂盒检测丹参酮对线粒体膜电位的影响;检测线粒体膜通透性转运孔（PTP）抑制剂环孢霉素A和caspase抑制剂z-VAD-fmk对隐丹参酮药效的影响。结果 隐丹参酮对K562细胞的生长有显著抑制作用,可引起细胞形态发生明显改变,诱导细胞发生凋亡,提高蛋白Bax/Bcl-2的比例,降低线粒体膜电位,促进Cyt C从线粒体释放到胞浆,增强促凋亡蛋白Caspase-3、Caspase-9和PARP的活性。环孢霉素A和cz-VAD-fmk均能减弱隐丹参酮抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用。结论 隐丹参酮可显著诱导K562细胞凋亡,其机制与线粒体凋亡途径密切相关。     

赤芍总苷非受体依赖途径诱导K562肿瘤细胞凋亡及相关基因变化的实验研究

目的:研究赤芍总苷诱导K562肿瘤细胞凋亡的信号途径及相关基因变化。方法:通过MTT,流式细胞仪,实时定量PCR,Western-blot等方法研究caspase-3 mRNA,caspase-9 mRNA,caspase-8 mRNA,细胞色素C,Bcl-2,Bcl-Xl,Bax蛋白水平的表达。结果:MTT法显示赤芍总苷可抑制K562细胞生长,具有量效-时效关系,caspase-3 mRNA,caspase-9 mRNA增加,细胞色素C含量增加,caspase-8 mRNA无显著变化。调节基因蛋白表达也有所变化,Bcl-2,Bcl-Xl下调,Bax上调。结论:TGC主要通过线粒体途径,当细胞受到死亡信号刺激,与Bcl-2或Bcl-Xl蛋白相结合的Bax蛋白就会被置换出来,线粒体膜通透性增加,释放出一系列物质,导致K562肿瘤细胞凋亡。     

黄芪总黄酮和毛蕊异黄酮对K562细胞的抑制作用及其机制研究

目的:探讨黄芪总黄酮(total flavonoids of Astragali Radix,TFA)和毛蕊异黄酮在体外实验条件下对人红白血病K562细胞凋亡及细胞周期的影响.方法:以K562细胞为实验对象,运用MTT方法测定不同浓度TFA和毛蕊异黄酮对K562细胞的增殖抑制作用,PI单染法检测药物对K562细胞周期的作用,Annexin V/PI双染法检测药物对K562胞诱导凋亡的影响,并且应用RT-PCR技术检测药物作用下K562细胞中Cyclin D1 mRNA水平表达的变化.结果:与阴性对照组相比,TFA及毛蕊异黄酮处理24h后,TFA和毛蕊异黄酮对K562细胞有明显的抑制作用,其IC5o分别为98.63,130.32 mg·L-1;TFA在100 mg·L-1的剂量下,对K562细胞的抑制率仅为7.8％,毛蕊异黄酮在130 mg·L-1的剂量下,对K562细胞的抑制率仅为5.8％;药物对K562细胞持续作用24h后,可以使G0/G1期细胞明显增多,S期细胞明显减少;经IC50剂量的药物处理后,K562细胞内的Cyclin D1 mRNA水平明显降低.结论:TFA和毛蕊异黄酮具有抑制K562细胞增殖作用;将细胞生长周期阻滞在G0/G1期以及降低细胞内Cyclin D1 mRNA水平可能是它们抑制K562细胞生长的主要作用机制.     

土槿甲酸对3种细胞系增殖抑制作用的比较

 目的比较土槿甲酸(PAA)对人胃癌细胞(MGC80-3),人肝癌细胞(SMMC-7721)和人红白血病细胞(K562)的增殖抑制作用,探讨其抗癌作用机制。方法采用MTT法检测不同浓度PAA对体外培养的MGC80-3细胞,SMMC-7721细胞和K562细胞的细胞毒作用。Hoechst33342/PI荧光双染色方法检测细胞凋亡。琼脂糖凝胶电泳检测K562细胞DNA裂解。结果PAA明显抑制MGC80-3,SMMC-7721和K562细胞系的增殖,其IC₅₀值分别为12.500,3.125,12.500μmol·L^-1。凋亡细胞比例在用药48h分别达83.50%,44.50%和63.20%。琼脂糖凝胶电泳呈典型的"DNA Ladder"。结论PAA能有效抑制MGC80-3,SMMC-7721和K562细胞增殖并诱导凋亡。