膀胱癌中端粒酶RNA的原位表达与肿瘤预后

观察人端粒酶mRNA(hTR）在各级膀胱移行细胞癌（TCC）中的表达,分析其与肿瘤分级及预后的关系。作者回顾性分析了67例膀胱移行细胞癌及对照组的正常膀胱上皮、膀胱良性病变各10例,对石蜡标本用地高辛标记的端粒酶反转录酶基因(hTRET)寡核苷酸作为RNA探针,原位检测端粒酶mRNA在膀胱移行细胞癌细胞中的表达。结果显示,标本的端粒酶mRNA表达强度与膀胱TCC分级、预后显著相关（P＜0．01）。提示hTR可能成为判断膀胱TCC的独立预后指标。     

人肝再生增强因子的cDNA克隆与序列分析

利用大鼠肝再生增强因子核苷酸序列，从人胎肝ｃＤＮＡ文库中筛选到人肝再生增强因子ｃＤＮＡ克隆，该克隆含有１．５ｋｂ的外源插入片段，核苷酸序列测定表明含３７５ｂｐ的读码框架，能编码１２５个氨基酸的蛋白质；与大鼠肝再生增强因子相比，核苷酸序列测定表明含３７５ｂｐ的读码框架，能编码１２５个氨基酸的蛋白质；与大鼠肝再生增强因子相比，核到序列同源性达８７％，氨基酸序列同源性达８４．８％。     

人贲门癌,食管癌细胞端粒酶RNA和端粒酶活性检测

目的：检测人贲门组织、贲门癌组织和食管组织、食管癌组织端粒酶ＲＮＡ组分表达及端粒酶活性，探讨其在贲门癌和食管癌中的作用。方法：采用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）和端粒重复扩增法（ＴＲＡＰ）检测了人贲门组织、贲门癌组织和食管组织、食管癌组织端粒酶ＲＮＡ组分及端粒酶活性。     

人CD34单链抗体基因的构建及序列测定

目的：获得抗人ＣＤ３４单链抗体基因。方法;选用一株分泌抗ＣＤ３４抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞株,提取总ＲＮＡ,经ＲＴ－ＰＣＲ扩增出此抗本的重链可变区和轻链可变区基因,与Ｋａｂａｔ抗体库比国得到其框架区和互补决定区的氨基酸序列,重新合成两引引物去掉保留的分泌信号前导序列并加入适当的限制性内切酶酶切位点,再经ＰＣＲ得到所需要的重链可变区和轻链可变区基因,经一弹性连接肽连接构建成抗人ＣＤ３４的单链抗体（ｓ     

Wistar大鼠c-ski基因部分序列的克隆、测序及实时荧光定量PCR的建立

目的 测定Wistar大鼠c-ski基因部分序列,并应用于检测大鼠c-ski基因表达的实时荧光定量PCR的建立.方法 提取培养的Wistar大鼠皮肤成纤维细胞总RNA,通过RT-PCR扩增,将扩增产物克隆到PMD-18T载体上并测序.根据获得的c-ski基因部分序列设计实时荧光定量PCR引物,建立SYBR green定量PCR检测方法,并检测培养的大鼠皮肤成纤维细胞c-ski mRNA表达水平.结果 获得的Wistar大鼠c-ski基因cDNA序列长561bp,为未曾报道的新序列,其与人、小鼠具有较高的同源性,Gen-Bank收录(收入号DQ409171).建立的SYBR green定量PCR检测标准品在103～109拷贝范围内的相关系数为0.991 49.体外培养的Wistar大鼠皮肤成纤维细胞样晶中c-ski mRNA水平为(1.024±0.18)×106拷贝/μl.结论 新获得了Wistar大鼠c-ski基因部分序列,该序列可用于实时荧光定量PCR的建立.     

甲状腺良恶性病变组织中端粒酶活性分析

目的 研究端粒酶在各种甲状腺肿瘤中的活性状态。方法 用改良的以PCR为基础的端粒重复序列扩增法（TRAP－PCR），在定性及定量水平上检测了100例良恶性甲状腺组织标本及15例甲状遥癌细针穿刺标本的端粒酶活性。结果 甲状腺癌组织的端粒酶阳性率（83．8％，31／37例）明显高于良性甲状腺病变（21．2％，7／33例）及病变旁正常甲状腺组织（13．3％，4／30例）；15例甲状腺癌的细针穿刺标本也均呈阳性表达，与相应的组织标本相符。定量结果显示甲状腺癌组端粒酶活性明显高于良性病变及正常组织；髓样癌及间变癌的活性又高于乳头状癌。结论 端粒酶活性为恶性甲状腺肿瘤的一个敏感标志物。TRAP－PCR定量分析对甲状腺肿瘤的鉴别诊断具有重要意义。     

中国人TTV部分基因的克隆及序列测定

目的：了解我国人群中是否存在ＴＴ病毒（ＴＴＶ）感染，分析国内ＴＴ病毒株基因结构特点。方法：用ＰＣＲ方法检测血清标本中ＴＴＶ ＤＮＡ，对ＴＴＶ ＤＮＡ阳性的标本进行序列测定。结果：１０例临床诊断为非甲至非戊型肝炎病人血清标本中，用ＰＣＲ方法检测出５例为ＴＴＶ ＤＮＡ阳性。将其中的一株命名为ＴＴＶＣＨ１（ＴＴＶ中国株１）并进行序列测定，该序列与日本ＴＴＶ部分基因（ＣＬＯＮ２２）相对位置的核苷酸同源性为     

中国人血小板生成素cDNA的克隆及测序

中国人血小板生成素ｃＤＮＡ的克隆及测序卢柏松，黄培堂（北京军事医学科学院生物工程研究所北京１００８５０）调控血小板生成的血小板生成素（ｔｈｒｏｍｂｏｐｏｉｅｔｉｎ，ＴＰＯ）基因序列最近被阐明，这为人们了解血小板的发育调节打开了缺口，同时也为临床治疗血...     

人实体瘤中端粒酶表达的意义

除生殖细胞系及增生旺盛的正常组织和良性病变外，端粒酶几乎在所有人体恶性病变中表达。由于该酶与恶性肿瘤的密切关系以及作为肿瘤治疗怕潜在靶点，端粒酶已成为肿瘤研究的热点问题之一。本文综述了当前端粒酶研究的进展。包括端粒酶活性和人体恶性肿瘤的关系、端粒酶检测方法、端粒酶对残留、复发肿瘤的监测及应用以及端粒酶在肿瘤治疗中的潜在价值。     

SEN病毒部分基因的克隆及序列测定

目的：了解我国人群中是否存在SEN病毒(SENV)感染,并分析SENV国内分离株的部分基因序列,方法：在SENV的保守区设计引物,建立巢式PCR方法检测血清中SENV DNA,并对PCR产物进行克隆,测序,结果,7例非甲－非瘐型肝炎,且输血传播病毒（TTV）阴性患者中,2例SENV阳性,其中一株的序列与意大利SENV－D株（AX－25730）相对应位置核苷酸序列同源性为90％,结论：本研究证初了我国存在SENV感染,建立了检测SENV的PCR方法,并对SENV部分基因进行了克隆及测序,对进一步开展SENV诊断和流行病学调查具有重要意义。     

人睫状神经营养因子的克隆与原核表达

目的：克隆人睫状神经营养因子基因ｃＤＮＡ，并探索其在大肠杆菌中高效表达。方法：提取总ＲＮＡ，逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ），序列测定正确后原核表达并用制备电泳纯化。结果：克隆了人睫状神经营养因子基因ｃＤＮＡ，实现了其在大肠杆菌中的高效表达，表达量至少达到２６％，制备电泳纯化后，重组蛋白纯度达到９５％。结论：从胎儿坐骨神经组织中克隆到人睫状神经营养因子基因ｃＤＮＡ，制备电泳纯化出高纯度的重组蛋白     

人脑源性神经营养因子序列的获得及鉴定

 目的 获得人脑源性神经营养因子(hBDNF)基因并进行序列分析,为基因治疗提供参考.方法 提取胚胎脑组织基因组mRNA,应用RT-PCR技术获得hBDNF基因序列酶切鉴定,并进行序列测定和分析.结果 DNA序列测定的结果与GenBank提供的已知序列(AY054406)比较,所克隆的hBDNF基因从起始密码子ATG到终止密码子TAG全长共744 bp,序列完全相同.结论 hBDNF基因序列的获得,为进一步开展面神经损伤的基因治疗积累了资料.     

丙型肝炎病毒河北定州株C33c基因的克隆、序列分析及在大肠杆菌中的表达

采用反转录ＰＣＲ方法从河北定州地区献血员血清中克隆了丙型肝炎病毒（ｈｅｐａｔｉｔｉｓＣｖｉｒｕｓ，ＨＣＶ）的Ｃ３３ｃ抗原基因，序列分析结果表明，该株的Ｃ３３ｃ基因和中国泰安株的同源性为９１．０％，氨基酸序列同源性为９２．２％；与ＨＣＶ河北株的同源性分别为９１．３％和９６．２％；和日本ＪＫ１株的同源性分别为９１．６％和９４．８％。克隆的基因在大肠杆菌中得到表达和纯化，并可用作抗ＨＣＶＥＬＩＳＡ试剂的抗原组分     

SEN病毒中国分离株基因克隆及序列分析

目的：测定SENV-D亚型中国分离株的基因组序列，并对其进行初步分析。方法：根据国外已发表的SEN病毒基因序列设计特异性引物，应用套式PCR方法从一份非甲-非戊型(non-A-E)肝炎患者血清中，分段扩增了包括SENV-D型所有编码区(ORFs)长3175bp的DNA片段，将其克隆到T载体后测序。结果：测序结果经BLAST软件分析，与国外发表的3株D型SEN病毒SENV-D(AX025730)，SENV-D(AB059352)，TTV(AB028668)的核苷酸序列同源性分别为90％，88％和91％；与2株D型SEN病毒SENV-D(AX0Z5730)，TTV(AB028668)0RF1所编码蛋白的氨基酸同源性分别为93％和92％。ORF1蛋白中含有Rep蛋白(在病毒复制中起作用的一种蛋白)的两个保守基序，此外还有一个保守的ATP／GTP结合基序(P-loop)以及若干个高度保守的蛋白激酶磷酸化位点。结论：测定得到了SENV-D亚型中国分离株的基因组序列，有助于其检测方法及致病性的研究，并为研究SEN病毒的进化地位提供方便。     

EphB2受体胞外区结构域的克隆和序列测定

 目的 对酪氨酸蛋白激酶EphB2受体胞外区结构域进行克隆和序列测定.方法 从胃癌患者手术切片标本中提取RNA,进行RT-PCR,将扩增片段克隆入pUC9质粒,进行测序及酶切鉴定.结果 克隆片段序列正确.结论 为进行表达,筛选与之相互作用的蛋白,阐明其生理功能打下基础.     

幽门螺杆菌热休克蛋白A基因的克隆及论著高效分泌表达

目的 :从幽门螺杆菌 (Hp)分离热休克蛋白A基因 ,并实现在大肠杆菌中的融合分泌表达。方法 :提取Hp染色体DNA ,用PCR方法扩增hspA基因。经克隆、测序后 ,构建融合分泌表达载体 pMAL HspA ,转化大肠杆菌 ,IPTG诱导表达。 结果 :分离得到了高度保守的 354bp的hspA基因片段 ,并在大肠杆菌中实现了该基因的融合分泌表达。在 37℃诱导表达 3h后 ,其融合分泌表达蛋白可占细菌周质总蛋白的 66.6%。该表达带可被抗Hp的特异抗体所识别。 结论 :幽门螺杆菌hspA基因的克隆与表达为Hp疫苗的研制打下了基础。     

pp32表达引起人肝癌细胞HepG2形态改变

目的:研究pp32在肝癌细胞中的作用.方法:采用RT-PCR的方法钓取pp32全长基因.脂质体介导的方法将pp32基因导入HepG2细胞.观察细胞形态,血清依赖性和接触抑制等细胞表型,测量细胞生长曲线,检测ALP、LDH、γ- GT、ALB和AFP等生化指标.结果:成功钓取了pp32全长基因,筛选获得pp32稳定表达的HepG2细胞株.pp32表达使HepG2细胞伸出细长突起,但不影响HepG2细胞增殖.ALP和LDH酶活力升高,其他指标没有变化.结论:pp32表达引起人肝癌细胞HepG2形态改变,但不改变其恶性表型.