甲壳胺对老年人牙周膜细胞分化功能的影响

目的：探讨甲壳胺（Chi）对老年人牙周膜细胞碱性磷酸酶活性和骨钙素分泌的影响。方法：将不同浓度的Chi（0．05g／L，0．1g／L，0．2g／L）分别与体外培养的老年人牙周膜细胞一同培养后，采用酶动力学方法和放射免疫法检测老年人牙周膜细胞碱性磷酸酶活性和骨钙素分泌水平，并与青年人牙周膜细胞进行比较。结果：①在老年组，Chi（0．05g／L）组细胞裂解液中和Chi（0．1g／L）及Chi（0．2g／L）组细胞培养液中碱性磷酸酶活性明显高于对照组（P〈0．05，P〈0．01）。老年组和青年组差值比较，甲壳胺各组无论是细胞裂解液还是培养液中碱性磷酸酶活性青年组均明显高于老年组（P〈0．05，P〈0．01）。②在老年组，只有21d时的Chi（0．1g／L）组、Chi（0．2g／L）组骨钙素分泌高于对照组（P〈0．05）。在青年组，7d时Chi（0．05g／L）和Chi（0．1g／L）组、14d时Chi（0．1g／L）组及21d时Chi（0．1g／L）组骨钙素分泌均明显强于对照组（P〈0．05，P〈0．01）。老年组和青年组差值比较，7d和21d时Chi（0．05g／L）、（0．1g／L）组骨钙素分泌青年组明显高于老年组。结论：一定浓度的甲壳胺不论对青年人还是老年人的牙周膜细胞向成骨样细胞转化和成骨能力均有明显的增强作用，对青年人牙周膜细胞的作用程度强于老年人。     

盐酸小檗碱对体外培养人牙周膜细胞生物活性的影响

目的:探讨盐酸小檗碱对原代培养的人牙周膜细胞(PDLC)生物活性的影响。方法:采用细胞培养技术、噻唑蓝(MTT)比色法、考马斯亮蓝法、酶动力学方法观察盐酸小檗碱对PDLC增殖活性、蛋白合成及碱性磷酸酶(ALP)活性的影响。结果:①与对照组比较,作用24h,盐酸小檗碱(0.005～0.030g/L)能明显增强人牙周膜细胞增殖能力(P<0.05);作用48h,盐酸小檗碱(0.005～0.020g/L)能明显增强人牙周膜细胞增殖能力(P<0.05);作用72h,盐酸小檗碱(0.010～0.020g/L)能明显增强人牙周膜细胞增殖能力(P<0.05)。②盐酸小檗碱(0.005～0.020g/L)细胞培养液中蛋白总含量均明显高于对照组(P<0.05)。③盐酸小檗碱(10～20g/L)细胞培养液中ALP活性均明显高于对照组(P<0.05)。结论:盐酸小檗碱在0.010～0.020g/L浓度范围内有促进PDLC的增殖及生物合成作用,能增强牙周膜细胞ALP活性。     

TGF-β1对老年人牙周膜细胞分化功能的影响

目的：探讨转化生长因子-β1（TGF-β1）对老年人牙周膜细胞碱性磷酸酶活性和骨钙素分泌的影响。方法：将不同浓度的TGF-β1（0．5μg／L，1μg／L，2μg／L）与体外培养的老年人牙周膜细胞-同培养后，采用酶动力学方法和放射免疫法检测碱性磷酸酶活性和骨钙素分泌水平，并与青年人牙周膜细胞进行比较。结果：①在老年组，TGF-β1各浓度组细胞裂解液和培养液中碱性磷酸酶活性均明显高于对照组（P〈0．05，P〈0．01）。老年组和青年组差值比较，除TGF-β1（0．5μg／L）组细胞培养液外，无论是细胞裂解液还是培养液中碱性磷酸酶活性青年组均明显高于老年组（P〈0．05，P〈0．01）。②在老年组，只有7d时的TGF—β1（0．5μg／L）组骨钙素分泌高于对照组（P〈0．05）；在青年组，7d时各组和21d时TGF—β1（1μg／L）组骨钙素分泌均明显高于对照组（P〈0．05，P〈0．01）。老年组和青年组差值比较，7d时TGF-β1（1μg／L）、（2μg／L）组和21d时的TGF-β1（0．5μg／L）、（1μg／L）组骨钙素分泌青年组明显高于老年组。结论：合适浓度的TGF-β1不仅可以促进青年人而且可以促进老年人牙周膜细胞向成骨样细胞转化，增强其成骨能力；其对青年人牙周膜细胞的作用强于老年人。     

富血小板血浆对人牙周膜细胞增殖及分化的影响

目的:探索不同浓度富血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP)对人牙周膜细胞体外增殖和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性的影响.方法:两步离心法制备PRP,用酶联免疫吸附法检测血浆、PRP、激活后PRP上清液中转化生长因子-β1(transforming growth factors-β1,TGF-β1)和血小板衍生生长因子(platelet-derived growth factorAB,PDGF-AB)的水平.分别用2%、5%、105、20%激活后的PRP作用于人牙周膜细胞,以DMEM培养液为阴性对照.在作用24h和72h后,用细胞计数试剂盒检测细胞增殖状况,以对硝基磷酸二钠为底物,检测细胞ALP的活性.用SPSS10.0软件包中的方差分析和配对t检验进行统计学分析.结果:激活后的PRP上清中,TGF-β1和PDGF-AB的水平均高于未经激活的PRP和血浆.各浓度PRP促细胞增殖和ALP活性的作用均显著强于阴性对照组(P＜0.001);各浓度PRP 72h时促细胞增殖和ALP活性的作用均高于24h时(P＜0.01);不同浓度PRP组问存在显著差异(P＜0.001),PRP浓度从2%渐增至10%时,细胞增殖和ALP活性随之增加;当PRP浓度达到20%时,促细胞增殖作用开始下降,而促ALP活性作用继续增强.结论:在1～3d内,PRP对人牙周膜细胞的体外增殖和ALP活性均有促进作用,并在一定范围内呈剂量依赖关系.     

TGF-β3对成骨细胞的增殖和成骨能力的影响及其机制初探

目的 观察不同浓度的转化生长因子-β3(transforming growth factor-β3, TGF-β3)对成骨细胞增殖和成骨能力的影响及其机制。方法 分离获得新西兰幼兔颅盖骨成骨细胞,纯化并鉴定后用不同浓度的TGF-β3(0.1、1、10、100μg/L)诱导成骨细胞,CCK-8法检测增殖活性,定量检测法测定碱性磷酸酶(ALP)含量;免疫细胞化学染色观察Ⅰ型胶原Α1(COL-1A1)、Runt相关骨形成蛋白-2(Runx-2)和骨钙素(OCN)蛋白表达;qPCR法检测ALP、骨桥蛋白(OPN)、骨涎蛋白(BSP)、成骨细胞特异性转录因子(Osx)和Smad4基因的表达;Western blotting法检测Smad2/3蛋白的表达情况。结果 成功分离获得并鉴定成骨细胞;10、100μg/L的TGF-β3能明显促进成骨细胞增殖(P<0.05);10μg/L TGF-β3组ALP含量始终高于对照组(P<0.05);免疫细胞化学染色结果显示10、100μg/L的TGF-β3组各蛋白表达均强于对照组;qPCR结果示10、100μg/L的TGF-β3能促进ALP、OPN、...     

TGF-β1促进rhBMP-2对成骨前体细胞增殖分化的观察

目的:观察TGF-β1对rhBMP-2促进成骨前体细胞(MC3T3-E1)增殖和分化能力的影响。方法:MC3T3-E1加入不同浓度的rhBMP-2和TGF-β1+rhBMP-2进行组织学观察,用MTT法检测细胞增殖,通过ELISA检测细胞ALP含量。结果:随着加入rhBMP-2浓度的增加,MC3T3-E1细胞的增殖逐渐增加,TGF-β1+rhBMP-2组增加更为显著(P<0.05)。TGF-β1+rhBMP-2组和rhBMP-2组在rhBMP-2浓度为25、50、100μg/L间存在统计学意义(P<0.05)。随着rhBMP-2浓度的增加,ALP值逐渐增加,TGF-β1+rhBMP-2组ALP值升高更为显著(P<0.01),TGF-β1+rhBMP-2组和rhBMP-2组在rhBMP-2浓度为25、50μg/L间有统计学意义(P<0.05)。结论:TGF-β1可促进rhBMP-2对MC3T3-E1的增殖和成骨分化作用。     

淫羊藿苷对人牙周膜细胞增殖及骨向分化的影响

体外培养人牙周膜细胞,矿化诱导条件下将第3代细胞与10～0.001mg/L,6个浓度的淫羊藿苷作用,通过噻唑蓝(MTT)比色法、ALP活性测定及BSP表达水平,反应其对人牙周膜细胞增殖及分化的影响。结果:作用24h,各药物浓度均能促进人牙周膜细胞增殖(P<0.05)。作用48h,1～0.001mg/L组可促进人牙周膜细胞增殖(P<0.05)。作用72h,0.1～0.001mg/L组可促进人牙周膜细胞增殖(P<0.     

TGF-β1对人根尖牙乳头干细胞增殖和分化的影响

目的:研究转化生长因子(TGF-β1)在体外对根尖牙乳头干细胞(SCAP)增殖和分化的影响。方法:采用酶消化法获得原代培养人SCAP,并对获得克隆化的SCAP进行免疫组化染色和多向分化能力的初步鉴定。用MTT比色法观察不同浓度的TGF-β1对细胞增殖情况,并通过检测ALP活性和矿化诱导后COL1、DSPP、OCN mRNA表达,分析TGF-β1对SCAP分化能力的影响。结果:5、10、20、40 ng/mL组的TGF-β1在SCAP培养1周内可显著促进细胞增殖(P<0.05);在TGF-β1作用8 d后,细胞ALP活性增强(P<0.05);SCAP矿化诱导2周后,TGF-β1组中COL1、OCN、DSPP的mRNA表达上调(P<0.05)。结论:TGF-β1促进SCAP细胞增殖,并通过提高ALP活性和上调COL1,OCN、DSPP mRNA的表达促进SCAP分化。     

成骨细胞对人牙周膜成纤维细胞生物学特性的影响

[摘要] 目的 观察成骨细胞(osteoblast cells,OBs)对人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblast cells,HPLFs)生物学特性的影响,为进一步探讨正畸牙齿移动的生物学机制奠定基础。方法 建立人OBs与HPLFs共培养系统,通过细胞计数及生化检测法观察成骨细胞对人牙周膜成纤维细胞增殖和分化的影响。结果 3 d和5 d时,共培养组HPLFs细胞计数分别为3.5×10~4个/ml及7.5×10~4个/ml,均明显低于对照组HPLFs细胞计数,且差异有统计学意义(P<0.05)。HPLFs碱性磷酸酶(ALP)活性比较中,transwell共培养组HPLFs ALP活性高于对照组。在3 d时,差异有统计学意义(P<0.05),5 d及7 d时差异也有统计学意义(P<0.01)。结论 人OBs可能抑制HPLFs的增殖,促进HPLFs ALP活性。     

辛伐他汀对人牙周膜细胞增殖和分化的影响

目的:研究辛伐他汀对人牙周膜细胞增殖和成骨分化的影响.方法:将第4 代人牙周膜细胞在条件矿化培养液中诱导培养,同时加入不同浓度的辛伐他汀(10-9、10-8、10-7、10-6 mol/L),噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测细胞增殖情况,4-硝基苯基磷酸二钠盐(4-nitrophenyl phosphate,hexahydrate,PNPP)偶氮法检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性.结果:辛伐他汀各浓度组均能促进人牙周膜细胞的增殖和分化,其中10-8、10-7、10-6 mol/L组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),10-7 mol/L的辛伐他汀组促进细胞增殖和ALP活性的作用最明显.结论:适宜浓度的辛伐他汀可有效促进人牙周膜细胞的增殖和成骨分化.     

淫羊藿苷对人牙周膜细胞增殖及骨向分化的影响

目的：探讨淫羊藿苷对人牙周膜细胞增殖及骨向分化的影响,为淫羊藿苷在治疗牙周病方面的应用提供一定依据。方法：体外培养人牙周膜细胞,矿化诱导条件下将第3代细胞与10～0.001mg/L,6个浓度的淫羊藿苷作用,通过噻唑蓝（MTT）比色法、ALP活性测定及BSP表达水平,反应其对人牙周膜细胞增殖及分化的影响。结果：作用24h,各药物浓度均能促进人牙周膜细胞增殖（P〈0.05）。作用48h,1～0.001mg/L组可促进人牙周膜细胞增殖（P〈0.05）。作用72h,0.1～0.001mg/L组可促进人牙周膜细胞增殖（P〈0.05）,10mg/L组抑制人牙周膜增殖（P〈0.05）;作用72h,1～0.001mg/L组可促进人牙周膜碱性磷酸酶（ALP）活性（P〈0.05）;作用72h,0.1～0.001mg/L组的BSP表达水平较对照组显著增加（P〈0.05）。结论：淫羊藿苷在一定浓度范围内可促进人牙周膜细胞增殖及骨向分化。     

乏氧对人牙周膜细胞增殖和碱性磷酸酶活性表达的影响

目的: 探讨不同氧张力对牙周膜细胞的增殖碱性磷酸酶活性(alkaline phosphatase activity,ALP)影响.方法:采用组织块法体外培养人牙周膜细胞,取第5代培养细胞分别在210 mL/L(对照组)和10mL/LO2浓度(乏氧组)下培养1～3 d,复氧组在相同的乏氧环境下培养1 d和2 d后分别移到常氧条件下继续培养1～2 d后检测牙周膜细胞增殖能力与分泌碱性磷酸酶情况.结果:所有组别的细胞增殖率随培养时间呈依赖性的增高.乏氧组乏氧第2,3 d与对照组有统计学差异.所有组别细胞的ALP活性随时间而降低,但乏氧第1,2,3天和复氧1 d与对照组相比明显降低,差别具有统计学意义.结论:乏氧对牙周膜细胞的生物学有较大的影响,提示临床牙周炎及正畸所导致的缺氧环境对牙周膜细胞活性与功能有一定的影响.     

人外周血单个核细胞对人牙周膜成纤维细胞增殖和分化的影响

目的:观察人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)对人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblast cells,HPLFs)增殖分化的影响,为进一步探讨正畸牙齿移动的生物学机制奠定基础。方法:建立人PBMCs与HPLFs共培养系统,通过细胞计数及生化检测法观察人外周血单个核细胞对人牙周膜成纤维细胞增殖和分化的影响。结果:3 d和5 d时,共培养组HPLFs细胞计数分别为4.5×104及8.5×104,明显高于对照组,且两组分别与对照组HPLFs细胞计数有显著性差异(P<0.05)。transwell共培养组与对照组相比,在3 d时,两组HPLFs分泌型ALP活性有显著性差异(P<0.05),5 d及7 d时差异尤其显著(P<0.01),tran-swell共培养组HPLFs分泌型ALP活性低于对照组。结论:人PBMCs能促进HPLFs的增殖,但抑制HPLFs分泌型ALP活性。     

大鼠牙本质基质蛋白1对人牙髓细胞增殖和ALP活性的影响

目的 :探讨大鼠牙本质基质蛋白 1(DMP1)对体外培养的人牙髓细胞增殖和ALP活性的影响。方法 :利用MTT法研究牙髓细胞的细胞增殖情况 ,碱性磷酸酶检测试剂盒检测牙髓细胞内ALP活性。结果 :DMP1在细胞培养 3d和 5d时 ,5 μg/mL组可促进人牙髓细胞增殖 (P <0 .0 5 )。细胞培养 3d时 ,仅5 μg/mL组可促进人牙髓细胞ALP活性 (P <0 .0 5 ) ;培养 5d时 1μg/mL和 5 μg/mL均可促进人牙髓细胞ALP活性 (P <0 .0 5 ) ;培养 7d时促进作用进一步加强 (P <0 .0 5 )。结论 :DMP1在一定浓度下可促进牙髓细胞的增殖 ;DMP1对牙髓细胞ALP活性的促进作用呈浓度依赖性 ,高浓度DMP1可以促进人牙髓细胞ALP活性 ,随着时间的延长 ,促进ALP活性的作用也增强。     

血小板衍生生长因子-BB与胰岛素样生长因子-Ⅰ联合应用对大鼠正畸牙牙周膜细胞整合素β3表达的影响

目的观察血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)与胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)联合应用对大鼠正畸牙压力侧牙周膜细胞(PDLCs)中整合素β3蛋白表达的影响。方法建立SD大鼠正畸牙移动模型,隔日于正畸牙颊侧牙龈黏膜下单独或联合注射10 ng PDGF-BB及200 ng IGF-Ⅰ,加力10 d后处死大鼠,取材用免疫组织化学方法检测正畸牙压力侧牙周膜细胞中整合素β3的表达。结果 PDGF-BB、IGF-Ⅰ单独或联合应用均能增强压力侧牙周膜细胞中整合素β3表达(P<0.01);与PDGF-BB、IGF-Ⅰ单独应用比较,IGF-Ⅰ加PDGF-BB组牙周膜细胞中整合素β3表达明显增强(P<0.05和P<0.01)。结论外源性PDGF-BB和IGF-Ⅰ在大鼠正畸牙的局部注射能上调压力侧牙周膜细胞中整合素β3表达,二者联合应用具有协同效应。     

骨形成蛋白—2和碱性成纤维细胞生长因子对牙周膜细胞碱性磷酸酶活性的联合效应

目的了解重组人骨形成蛋白-2（rhBMP-2）和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)单独和联合作用对人牙周膜细胞（PDLC）碱性磷酸酶（ALP）活性的影响。方法体外培养人PDLC,分别用不同浓度的rhBMP-2和bFGF单独或联合作用,用酶动力学方法检测PDLC的ALP活性。结果50～200μg/L浓度的rhBMP-2可显著增强人PDLC的ALP活性（P<0.01）,而10μg/L浓度的bFGF可显著抑制人PDLC的ALP活性(P<0.01),rhBMP-2和bFGF联合作用仍可较明显地增强人PDLC的ALP活性（P<0.05）。结论rhBMP-2和bFGF联合应用可增强人PDLC的ALP活性。     

rhTGF-β1、rhBMP-2和rhbFGF单独或者联合应用对BMSC的ALP活性和钙化能力影响

目的 :研究重组人碱性成纤维细胞生长因子 (rhbFGF)、重组人转化生长因子 β1(rhTGF β1)和重组人骨形成蛋白 2 (rhBMP 2 )单独和联合使用 ,对骨髓基质细胞 (BMSC)碱性磷酸酶 (ALP)活性和钙化能力影响。方法 :体外培养大鼠骨髓基质细胞 ,分别用一定浓度的rhTGF β1(5 μg/L)、rhBMP 2 (2 0 0 μg/L)和rhbFGF(1μg/L)单独或者联合应用 ,测定第 12、14天的碱性磷酸酶活性 ;加入矿化诱导液 ,用Vonkossa染色 ,检测 10、2 0和3 0天的钙化情况。结果 :rhBMP 2可增强BMSC的ALP活性 ,rhbFGF和rhTGF β12种因子单独或者联合使用抑制BMSC的ALP活性 ,rhTGF β1和rhBMP 2以及rhbFGF和rhBMP 2联合使用时 ,抑制BMSC的ALP活性 ;3种生长因子联合使用时 ,抑制BMSC的ALP活性 ,研究发现f b组和b组可显著促进BMSC向成骨细胞转化 ,增强细胞的矿化能力 ;其它各组对BMSC向成骨细胞转化、矿化能力无显著作用。结论 :生长因子rhBMP 2(2 0 0 μg/L)单独应用和rhbFGF(1μg/L)在此浓度下结合使用可以提高体外培养骨髓基质细胞的钙化能力。     

牙周优势菌内毒素对人牙周膜细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响

目的：研究牙周优势菌牙龈卟啉菌、中间普氏菌、具核梭杆菌的内毒素对人牙周膜细胞（PDL细胞）增殖和碱性磷酸酶活性（ALP）的影响。方法：采用MTT比色试验及酶动力学方法，测定PDL细胞的增殖和ALP活性。结果：内毒素在10μg/mL、100μg/mL高浓度时，可显著抑制PDL细胞增殖，而在0.01μg/mL、0.1μg/mL低浓度时，则促进PDL细胞增殖；在10μg/mL、100μg/mL可呈浓度依赖性方式抑制PDL细胞ALP活性。结论：内毒素对牙周膜细胞的抑制作用主要和其浓度有关，不同来源内毒素差异并不显著；内毒素可能通过影响PDL细胞功能而影响牙周组织的代谢和修复过程。     

黄芩醇提取物对牙龈卟啉菌膜泡抑制牙周膜成纤维细胞碱性磷酸酶活性的影响

目的:探讨黄芩醇提取物对牙龈卟啉菌(Porphyromonas gingivalis Pg)膜泡(extracellular vesicles,ECV)抑制牙周膜成纤维细胞碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性的影响.方法:采用体外培养的人牙周膜成纤维细胞,酶联免疫法检测ECV对人牙周膜成纤维细胞ALP活性的影响以及黄芩醇提取物对ECV这一生物活性的阻断作用.结果:与空白对照组相比P<0.01,细胞培养物中加入50 μg/mL ECV时,人牙周膜成纤维细胞ALP的活性受到明显抑制,当同时加入各浓度黄芩醇提取物时人牙周膜成纤维细胞ALP的活性明显增高,与ECV组相比均P<0.01,且随黄芩醇提取物浓度升高,ALP的活性也随之增高,呈一定浓度依赖性.结论:黄芩醇提取物可能在病变修复过程中,通过阻断ECV抑制牙周膜成纤维细胞ALP的活性,促使牙周膜成纤维细胞向成骨细胞转化,而有利于病变的愈合.     

雌激素受体β对牙周膜细胞骨向分化能力影响的研究

目的 研究小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblast cell,HPLF)中雌激素受体β(estrogen receptor β,ERβ)后,对17β-雌二醇(E2)诱导的成骨能力的影响。方法 设计并合成针对ERβ基因siRNA的寡核苷酸序列,插入载体形成重组载体。重组载体经测序鉴定后,以脂质体法转染至HPLF细胞中,蛋白质印迹法及RT-PCR法检测转染前后ERβ的表达情况。鉴定后用1×10-7mol/L的17β-E2干预经ERβsiRNA转染的HPLF细胞和未经ERβsiRNA转染的HPLF细胞,测定细胞的碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性和骨钙素(os-teocalcin,OCN)含量。结果 测序鉴定重组质粒后,蛋白质印迹法及RT-PCR结果 显示ERβsiRNA载体可特异地抑制HPLF细胞中ERβ的表达。经雌激素干预后,HPLF细胞ALP活性和OCN含量高于对照组(P<0.01),但ERβsiRNA载体稳定转染的HPLF细胞ALP活性和OCN含量与对照组相比没有显著性差异。结论 雌激素可能通过ERβ亚基促进人牙周膜成纤维细胞的骨向分化能力。