枯否氏细胞,肝细胞对疟原虫子孢子感染和发育的影响

１次接种９００万约氏疟原虫子孢子悬液，３０ｍｉｎ后的肝脏超微结构显示，枯否氏细胞吞噬复合体，邻近肝细胞线粒体空泡化，嵴突消失；枯否氏细胞内可见形态退变的子孢子；线粒体、内质网、核糖体丰富的肝细胞内子孢子结构清晰；线粒体空泡化、嵴突消失的肝细胞内子孢子退变；子孢子进入枯否氏细胞或肝细胞的时间不玫，１个肝细胞内可见２个子孢子。     

枯否氏细胞、肝细胞对疟原虫子孢子感染和发育的影响

１次接种９００万约氏疟原虫子孢子悬液，３０ｍｉｎ后的肝脏超微结构显示，枯否氏细胞吞噬复合体，邻近肝细胞线粒体空泡化，嵴突消失；枯否氏细胞内可见形态退变的子孢子；线粒体、内质网、核糖体丰富的肝细胞内子孢子结构清晰；线粒体空泡化、嵴突消失的肝细胞内子孢子退变；子孢子进入枯否氏细胞或肝细胞的时间不一，１个肝细胞内可见２个子孢子。     

聚肌胞对大鼠体内约氏疟原虫子孢子入侵及红外期发育的影响

用干扰素诱导剂聚肌胞(Poly I:C)静脉注射(iv)Wistar大鼠体内,18h后,iv约氏疟原虫子孢子,42h时,肝内红外期(EEF)数量显著减少。其子孢子发育率仅为对照组的5—12％,但大小及成熟程度均未受到影响。接种子孢子后2h,使用Poly I:C,则子孢子发育率、EEF大小及成熟程度均与对照组无异。含干扰素血清与子孢子共孵40min,不影响子孢子的入侵及随后的发育。结果提示干扰素的抗疟作用并非针对EEF本身。     

约氏疟原虫子孢子胞内游离钙的检测方法研究

目的　研究疟原虫子孢子的胞内Ca2 + 的检测方法。方法　应用共聚焦激光扫描显微镜 (CLSM )观察约氏疟原虫子孢子的胞内游离Ca2 + 分布、变化和检测的实验条件。结果　 3μmol/LFluo - 3/Am同时加入 1μl/ml2 5 %PluronicF - 12 7在37℃恒温下 ,孵育分离的子孢子 6 0min即可达到最佳的负载效果。Fluo - 3/Am浓度的提高和孵育时间延长只能增加背景染色 ,若降低孵育浓度和缩短孵育时间则难以达到最佳的负载效果。静息时子孢子胞内Ca2 + 分布均匀 ,均值为 71 2± 4 8nmol/L。结论　应用Fluo - 3/AM和PluronicF - 12 7结合CLSM技术是研究疟原虫子孢子胞浆内游离Ca2 + 的准确、灵敏的方法之一。     

IL-6对大鼠体内约氏疟原虫红外期发育的影响

目的观察ＩＬ－６对大鼠体内约氏疟原虫红外期发育的影响。方法子孢子（Ｓｐ）接种前２ｈ给Ｗｉｓｔａｒ大鼠腹腔注射１００００ＵｒＨｕＩＬ－６,４２ｈ后活杀、常规制肝切片,观察Ｓｐ发育率,外期原虫（ＥＥＦ）直径。大鼠在接种Ｓｐ前３ｈ、０．５ｈ分别经尾静脉注射１００００Ｕ、３００００ＵｒＨｕＩＬ－６,经肠系膜静脉灌注２８万Ｓｐ,１ｈ后制备肝脏样品,用电镜观察结果。结果与对照组比较,１００００ＵｒＨｕＩＬ－６对约氏疟原虫Ｓｐ发育率没有显著影响,但ＥＥＦ直径明显变小。Ｓｐ接种１ｈ后肝细胞内可见形态退变的Ｓｐ。结论ＩＬ－６作为一种免疫效应分子可抑制大鼠体内约氏疟原虫ＥＥＦ的发育。     

约氏疟原虫卵囊、唾液腺子孢子差异表达蛋白的二维电泳—质谱分析

目的分离和鉴定约氏疟原虫卵囊、唾液腺子孢子差异表达蛋白，找出疟原虫子孢子侵入相关蛋白。方法采用二维蛋白电泳技术分离感染和未感染约氏疟原虫的斯氏按蚊中肠和唾液腺差异表达蛋白，考马斯亮蓝染色，BIOIRAD凝胶扫描仪和PDQUest图象软件分析，差异蛋白点用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱测定其肽质指纹图谱，用Mascot在相应的查询条件下搜索NCBInr数据库。结果获得了分辨率和重复性均较好的一维和二维蛋白图谱。凝胶扫描结果发现未感染蚊中肠有135个蛋白点，感染蚊中肠有158个蛋白点，相同有107个，pI偏酸性。未感染蚊唾液腺有178个蛋白点，感染蚊唾液腺有201个蛋白点，相同有167个，pI分布较均匀。选择7个差异蛋白点进行分析，得到了6个蛋白肽质指纹图谱，查询数据库初步鉴定疟原虫来源的蛋白质有5个，另1个来源于蚊组织。疟原虫来源蛋白为一些表面蛋白、代谢和运动相关的蛋白等。结论建立了一种较好的疟原虫子孢子蛋白分离和鉴定方法，并证明约氏疟原虫唾液腺子孢子表达大量差异表达蛋白，部分可能与其识别、侵入宿主细胞有关。     

约氏疟原虫动合子移行蚊中肠上皮细胞的透射电镜观察

用透射电镜观察了约氏疟原虫动合子移行斯氏按蚊中肠（胃）上皮细胞的途径，结果发现在两个上皮细胞中间有一个动合子正在细胞间隙中移行，超微结构观察，虫体结构完整，可见圆锥状顶突与蚊中肠壁基底膜相接触，在虫体圆锥状区域的内部具有１－２对呈梨形的棒状体和数量较多的微线体，同时，也看到已穿过上皮细胞间隙并附着于基底膜上的动合子仍保持圆柱状的体形，有的已定位并开始向卵囊分化。由此证实了约氏疟原虫动合子移行中肠上     

双氢青蒿对约氏疟原虫在蚊体内发育的影响

目的：观察双氢青蒿素（dihydroqinghaosu，DQHS）对约氏疟原虫在斯氏按蚊体内发育的影响。方法：受染疟原虫小鼠一次性经口灌喂不同浓度DQHS药液后，供蚊虫吸血，应用光镜和电镜观察对照组和用药组的疟原虫在蚊体内的发育情况。结果：DQHS对疟原虫配子体有一定的抑制作用，其作用强度与配子体成熟程度和用药剂量不同有关。未成熟配子体对药物较敏感；随着药物剂量的增加，卵囊和子孢子的阳性率和密度随之逐渐下降；但180mg或240mg／kg用药组对子孢子密度的影响的差别无显著性意义。电镜观察60mg／kg作用16h后，用药组的蚊胃上卵囊（12d－13d解剖蚊），出现膜受损，甚至胞质空泡化。120mg／kg药量对蚊体内3日龄卵囊作用16h，卵囊仍继续发育，比较对照组和用药组的卵囊和子孢子密度, 两组间差别无显著意义(P > 0. 05) ; 两组卵囊超微结构形态亦无明显差异。结论: DQHS 影响约氏疟原虫配子体感染性而减少蚊媒传播, 但对蚊体内子孢子增殖期不起直接的抑制作用。     

应用流式细胞光度术分析磷酸萘酚喹对约氏疟原虫DNA含量的影响

目的 磷酸萘酚是我国研制的抗疟新药,临床上在抗氯喹地区使用治疗恶性疟效果较好。为探讨该药的抗机理,本实验对其进行了较深入的研究。方法 应用流式细胞光度术,对经该药和磷酸氯喹分别处理不同时间（０、４、８和２４ｈ）的约氏疟原虫红内期虫体的ＤＮＡ含蛳进行了比较研究和分析。结果 磷酸萘酚喹和磷酸氯喹均可影响疟原虫的ＤＮＡ含量,其作用时间不同,对疟原虫ＤＮＡ含量的影响亦不同;且这种影响作用在２４ｈ与对照组具     

约氏疟原虫动合子移行蚊中肠上皮细胞的透射电镜观察

用透射电镜观察了约氏疟原虫动合子移行斯氏按蚊中肠(胃)上皮细胞的途径,结果发现在两个上皮细胞中间有一个动合子正在细胞间隙中移行,超微结构观察,虫体结构完整,可见圆锥状顶突与蚊中肠壁基底膜相接触,在虫体圆锥状区域的内部具有1～2对呈梨形的棒状体和数量较多的微线体,同时,也看到已穿过上皮细胞间隙并附着于基底膜上的动合子仍保持圆柱状的体形,有的已定位并开始向卵囊分化。由此证实了约氏疟原虫动合子移行中肠上皮细胞的过程是通过穿透细胞间隙而后定位于基底膜。本文对疟原虫动合子的移行途径及其机制进行了讨论。     

影响约氏疟原虫红细胞外期发育因素的研究

采用正交试验设计,观察环境温度、光照周期、脾脏切除和雌激素水平对大鼠体内约氏疟原虫红细胞外期生长发育的影响。结果显示:脾脏在清除子孢子方面有重要作用,切脾组的红外期原虫密度显著高于对照组;雌激素水平的升高则明显抑制红外期的发育。低温环境对红外期的密度虽无明显影响,但使之发育变缓,不同步更为显著。光照周期的长短似乎对红外期的生长发育无明显影响。两种因素交互作用时,脾脏切除和雌激素水平升高的影响相互抵消,其他两两因素的作用,经方差分析,均未见显著性差异。     

约氏疟原虫感染大鼠和小鼠的红外期研究

约氏疟原虫约氏亚种的子抱子经尾静脉接种大鼠和三株小鼠(ICR/JCL,C57BL,KM株)后42h,在大鼠和小鼠的肝连续切片中均查见红外期裂殖体(EE裂殖体),但在KM鼠株的切片中,正常的EE裂殖体甚少。不论宿主同否,EE裂殖体均大小不等,呈圆形、椭圆形或其他形状,分化程度不同,发育不完全同步。大鼠肝中的EE裂殖体可看到明显的外膜,周围并出现细胞反应。ICR/JCL、C57BL鼠株和大鼠肝中的EE裂殖体均较KM鼠株发育良好,数量较多,但大鼠中的红内期迅速消失。结果表明;ICR/JCL和C57BL鼠株用作约氏疟原虫—斯氏按蚊系统鼠疟模型的宿主较合适。     

硝喹对鼠约氏疟原虫红内期琥珀酸脱氢酶的影响

为观察红内期约氏疟原虫线粒体内是否存在琥珀酸脱氢酶（ＳＤＨ），并观察硝喹（ＮＱ）是否抑制该酶活性进行了本研究。给感染疟原虫的小鼠，灌服单剂量硝喹（２ｍｇ／ｋｇ）后，３．５ｈ、１４ｈ取血，酶组化孵育，电镜观察疟原虫线粒体。结果表明，红内期约氏疟原虫线粒体内存在ＳＤＨ，ＮＱ不能抑制ＳＤＨ的活性。约氏疟原虫内有三羧酸循环，ＳＤＨ不是ＮＱ的起始作用点     

硝喹对体外培养的约氏疟原虫红内期膜磷脂的影响

目的:探讨硝喹抗疟作用机理。方法:用蜡烛缸法体外培养约氏疟原虫红内期,以[3H]-乙醇胺掺入疟原虫膜磷脂作指标,观察硝喹对疟原虫膜磷脂合成的影响;以DPH作为荧光探针, 测膜荧光偏振度及微粘度。结果:硝喹明显抑制[3H]-乙醇胺掺入约氏疟原虫,并增高约氏疟原虫膜荧光偏振度和微粘度。结论:硝喹可明显抑制疟原虫膜磷脂的生物合成,并明显降低膜流动性     

青蒿琥酯钠对约氏疟原虫作用的流式细胞分析

用流式细胞术检测分析了青蒿琥酯钠对鼠约氏疟原虫的作用。结果表明实验组鼠的疟原虫DNA含量随着给药后时间的推移而逐渐减少,24h后,约氏疟原虫DNA的荧光分布几乎消失,提示青蒿琥酯钠能够抑制约氏疟原虫DNA的合成。