雪旺细胞源神经营养因子对脊髓损伤的保护作用

目的：观察雪旺细胞源神经营养因子（Ｓｃ－ＮＴＦｓ）对损伤脊髓组织的作用。方法：以７．５ｇ物体从１０ｃｍ高处落下致的大鼠Ｔ１０脊髓，伤后５，３０，６０ｍｉｎ在务局部分别注入Ｓｃ－ＮＴＦｓ５０μｌ对照组给予等量生理盐水，２４ｈ后一半动物取伤段脊髓标本测水及离子含量，另一半动物３周后神经功能检查，结果：脊髓损伤后组织水肿Ｎａ＾＋Ｃａ＾＋离子浓度升高，Ｋ＾＋，Ｍｇ＾２＋离子浓度降低，Ｓｃ－ＮＴＦｓ可显改     

睫状神经营养因子和雪旺细胞神经营养活性物质对大鼠视神经损伤后轴突数的影响

目的　观察睫状神经生长因子 ( ciliary neurotrophicfactor,CNTF)和雪旺细胞神经营养活性物质 ( Schwann cellsneurotrophic agent,SCNA)对视神经损伤后轴突的形态和纤维数目变化的作用 .方法　采用镊夹法制作大鼠视神经损伤模型 ,损伤后立即一次性向玻璃体内注射 CNTF( 5 0 ng)或SCNA ( 10μL ) ,在损伤后 1,2 ,3和 4 wk时观察夹伤视神经的形态 ,及进行图像分析和轴突纤维计数 .结果　损伤后视神经轴突减少 ,间质增多 .CNTF组和 SCNA组的轴突数密度在 1wk时分别为正常值 ( 0 .10 65± 0 .0 0 5 6个·μm- 2 )的0 .5 9和 0 .61,而对照组为 0 .5 5 ,实验组与对照组比较差异显著 ( P<0 .0 5 ) .但在夹伤 2 wk后 3个组间、各时间点间数据差异均不显著 ( P>0 .0 5 ) .结论　 CNTF及 SCNA一次玻璃体给药能在 1wk内减缓视神经损伤后轴突数目的减少 .     

雪旺细胞源神经营养因子对端侧吻合后神经再生的影响

目的研究雪旺细胞源神经营养因子对神经端侧吻合后神经再生的影响.方法取SD大鼠24只,随机分为实验组和对照组,每组12只;随机切断一侧腓总神经,与胫神经外膜开窗处行端侧吻合,另一侧作为正常对照.术后于实验组端侧吻合侧小腿外侧肌肉注射雪旺细胞源神经营养因子(10 μg/ml),而于对照组注射等量的生理盐水,隔天一次,共用2周;术后12周,行腓总神经传导速度测定、组织学检查及胫前肌湿重测定.结果实验组再生的腓总神经纤维质量、数目、运动神经传导速度和胫前肌湿重均优于对照组,但不如正常的腓总神经和胫前肌.结论雪旺细胞源神经营养因子对神经端侧吻合后的再生具有一定的促进作用.     

阳离子脂质体介导神经营养因子-3在大鼠雪旺细胞中的表达

目的观察阳离子脂质体转染神经营养因子-3（Neurotrophin-3,NT-3）基因在大鼠雪旺细胞（schwann cell,SC）的表达和提高SC细胞分泌NT-3的能力。方法采用阳离子脂质体介入法,将脂质体转染酶介导的NT-3转染至SC细胞,以转染后及未转染作为实验组和对照组,于转染后1、2、4、8周用ELISA双抗体夹心法测定NT-3蛋白的表达,采用DNA酶切鉴定转染后NT-3的DNA,免疫组化S-100染色法检测转染前后SC纯度。电镜下观察转染后SC细胞结构。结果转染后2、4、8周NT-3蛋白表达量与转染前比较差异有统计学意义（P〈0.05）。转染后NT-3的DNA酶切鉴定结果与NT-3基因片段相符。转染前后SC纯度分别为（94.1±2.3）%及（95.8±2.1）%,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 NT-3基因可转染培养的SC并高效表达。SC作为受体细胞易于获取并能在体外大量培养繁殖,能较长时间稳定大量表达所携带基因而不衰减。     

神经营养因子与周围神经再生研究现状

神经营养因子是神经再生微环境中的重要成分 ,具有维持神经元存活和促轴索再生作用。应用外源性神经营养因子可产生类似靶源性神经营养因子的损伤神经元保护作用。虽然不同的神经营养因子对神经元的保护具有一定的选择性 ,但在多数情况下 ,不同的神经营养因子可作用于同一神经元受体 ,起协同和补充作用 ;也有同一神经营养因子激活多个受体 ,产生复合生物学效应。本文综述了几种神经营养因子对运动神经元的影响以及治疗运动神经病和神经损伤的研究进展。1　周围神经损伤与神经再生Ｈｏｕｓｅ和Ｂｒａｃｋ将面神经损伤分为 5级 :神经生理阻断…     

电信号激发雪旺细胞钙依赖性分泌神经营养因子

神经损伤后损伤部位远端雪旺细胞合成和分泌雪旺细胞的能力显著下降,在一定程度上限制了中经损伤后功能恢复。因此,寻找能够促进雪旺细胞合成和分泌神经营养因子的方法具有重要意义。本文拟探讨电信号促进雪旺细胞合成和分泌神经营养因子的可行性及内在机制。在细胞电刺激模型中,确定不同电信号参数对雪旺细胞合成和分泌神经营养冈子的影响,筛选出最佳参数,     

星形胶质细胞条件培养液影响神经干细胞突触形成的神经营养机制探讨

目的 探讨神经营养素家族蛋白[包括脑源性神经营养因子(BDNF),神经生长因子(NGF),神经营养素-3(NT-3)]是否参与星形胶质细胞条件培养液(ACM)影响神经干细胞(NSC)突触形成的过程.方法 实验分两步,(1)PC12细胞分别经10μg/ Aβ1-4诱导不同时间点(0、4、612、24 h)后分为两部分,一部分应用流式细胞技术检测不同时间点PC12细胞凋亡率,另一部分别与星形胶质细胞共育2 d,将收集的ACM分为两部分,一部分应用ELISA法检测ACM中的BDNF、NGF、NT-3蛋白含量.(2)将另一部分ACM以1:3比例同DMEM/F12培养基混合,分别对胚胎大鼠皮质神经干细胞进行诱导分化,激光共聚焦扫描显微镜观察突触素和生长相关蛋白-43(GAP-43)表达,透射电镜观察成熟突触结构数目.结果 在AB1-40作用6 h时间点,PC12细胞凋亡率达高峰(P<0.05);星形胶质细胞与Aβ1-40诱导6 h后的PC12细胞共育2 d后,收集到ACM中的BDNF蛋白总量(A值=1.53±0.25)明显增高(P<0.05),并且收集到的ACM诱导神经干细胞突触素(A值=33.39 4±2.71)、GAP-43(A值=49.18±6.45)表达明显升高、成熟突触结构数目(4.70±0.52个/视野)明显增多,与其他组比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论 星形胶质细胞与AB1-40枷诱导凋亡的PCI2细胞共育后,ACM提高了神经干细胞突触形成,ACM中BDNF可能参与了这一过程.     

BDNF在脱细胞同种异体神经移植物修复神经缺损后不同组织中的表达

目的探讨脱细胞同种异体神经移植物(ANA)修复大鼠坐骨神经缺损后促神经再生的分子作用机制。方法将36只Wistar大鼠随机分成6组:正常对照组,自体移植组,桥接2,4,8,12周组,每组6只,分别观测患侧L4脊髓及胫前肌内脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白及mRNA表达。结果ANA桥接大鼠坐骨神经缺损后2周患侧脊髓内BDNF表达增高,4周时达高峰,持续到8周,然后逐渐降低,12周时仍显著高于正常对照组,与自体移植组相比无差异。而患侧胫前肌最初4周内逐渐降低,然后逐渐升高,12周时达到正常水平,与自体移植组相比无差异。BDNF mRNA的表达基本与蛋白表达一致。结论ANA具有良好的组织相容性,也许可替代自体神经修复大鼠坐骨神经长距离缺损,此作用可能与上调脊髓BDNF蛋白及mRNA表达有关。     

睫状神经营养因子促进大鼠周围神经再生的实验研究

探讨局部应用睫状神经营养因子（ｃｉｌｉａｒｙｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃｆａｃｔｏｒ,ＣＮＴＦ）对大鼠周围神经损伤后再生的影响。方法３４只大鼠分为４组,１～３组每组各１０只,切除两侧坐骨神经各１０ｍｍ并用硅胶管套接,左侧套管内注入ＣＮＴＦ５０μｇ,右侧注入生理盐水对照。术后１、３、４个月分别进行电生理和组织学检查。另４只鼠于术后３个月行ＨＲＰ逆行示踪检查。结果ＣＮＴＦ治疗组术后１、３、４个月时的电生理和组织学检查结果均明显优于对照组。相应节段脊髓前角标记辣根过氧化物酶的神经元明显多于对照组。结论ＣＮＴＦ可促进周围神经特别是运动神经损伤后的再生。     

GDNF基因修饰的雪旺细胞对大鼠坐骨神经缺损的修复作用

目的应用携带胶质细胞源性神经营养因子基因的逆转录病毒载体质粒(pLXSN-GDNF)对体外培养的雪旺细胞进行基因修饰,并结合细胞外基质凝胶及生物可降解聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物(PLGA)管构建神经移植复合体,用于大鼠坐骨神经缺损的修复,同时对其促轴突再生及神经元保护作用予以检测评价.方法 40只成年Wistar大鼠随机分为4组:A组(n=10) 细胞外基质凝胶-PLGA管桥接组;B组(n=10)雪旺细胞-细胞外基质凝胶-PLGA管桥接组;C组(n=10) GDNF基因修饰的雪旺细胞-细胞外基质凝胶-PLGA管桥接组;D组(n=10)自体神经桥接组.损伤各组12周时应用神经电生理及甲苯胺蓝染色和透射电镜观测神经再生情况,辣根过氧化物酶神经逆行示踪技术用于脊髓前角运动神经元再生评价.结果 12周时再生神经运动传导速度检测、甲苯胺蓝染色轴突形态计量学分析、透射电镜超微结构观察以及脊髓前角运动神经元再生评价结果提示:C组优于A、B组,而与D组相比无明显差异.结论雪旺细胞的转基因处理可能弥补单纯细胞移植神经营养因子含量的不足,而可能达到与自体神经移植相似的效果.     

睫状神经营养因子对面神经再生影响的实验研究

目的：以新西兰白兔面神经损伤为动物模型,研究睫状神经营养因子（CNTF）对损伤后面神经再生的作用,为临床上选择高效的神经营养因子提供实验依据。方法：选用28只新西兰白兔,将其双侧面神经上颊支离断后套入硅胶管,吻合神经断端,并将硅胶管两站与神经外膜吻合后,向套管内注射CNTF液（实验组）以及生理盐水（对照组）。于术后1,2,4,8周采用电生理、光镜、透射电镜等手段来检测。结果：术后2周、4周,实验组不论是神经传导速度还是组织学形态均明显优于对照组。8周以后,实验组和对照组无明显差别。结论：局部应用外源性CNTF短期内可明显促进损伤面神经的再生,有很大的临床应用价值。     

嗅神经鞘细胞与雪旺氏细胞在脊髓损伤修复中的作用

雪旺氏细胞和嗅神经鞘细胞都能分泌多种神经营养因子、细胞外基质及黏附因子,提供有利于脊髓神经轴突再生的微环境,且两者都能促进轴突的再髓鞘化和再生。嗅神经鞘细胞具有在中枢神经系统内长距离迁移的能力,能够促进神经轴突穿越移植物一宿主界面重新进入中枢神经系统,其与星型胶质细胞相容性也更好。而雪旺氏细胞在促进轴突髓鞘形成的能力上可能更强。该文就两者在脊髓损伤修复中的作用进行综述,以促进中枢神经再生机制的研究,并为进一步修复脊髓损伤奠定理论基础。     

睫状神经营养因子对星形胶质细胞细胞周期的影响

目的探讨睫状神经营养因子（CNTF）在有血清培养和无血清培养的情况下，对星形胶质细胞分化和增殖的影响。方法将纯化的星形胶质细胞分为有血清培养和无血清培养组，根据CNTF剂量不同，每组再分别分为0、2、20、200ng／ml 4个亚组（共8个亚组）。每个亚组分别在6、12和24h取材，应用流式细胞术检测星形胶质细胞在各细胞周期时相中的百分比。结果CNTF使无血清培养组的星形胶质细胞处于G0／G1期的细胞百分比上升，而使有血清培养组的星形胶质细胞处于G0／G1期的细胞百分比下降。结论无血清培养时CNTF可以刺激星形胶质细胞分化进入活化状态，但不刺激其增殖；有血清培养时CNTF可以协助血清中的丝裂原引起星形胶质细胞增殖。     

人脐血间充质干细胞培养鉴定和慢病毒载体介导胶质源性神经营养因子在脐血间充质干细胞中的表达

目的 体外分离和培养人脐血间充质干细胞(UCB-MSCs),对其生物学特性进行鉴定.用含有胶质源性神经营养因子(GDNF)的慢病毒载体转染UCB-MSCs,初步评价基因转染后UCB-MSCs生物学功能变化,探讨GDNF在UCB-MSCs中的表达水平.方法 采用密度梯度离心法从脐血中分离单核细胞,通过贴壁培养和控制消化时间得到形态较均一的长梭形细胞,流式细胞仪(FACS)检测其细胞表面标记,诱导其向脂肪方向分化,对UCB-MSCs的生物学特性进行鉴定.将GDNF基因克隆人慢病毒载体,包装出病毒上清,以不同拷贝数转染UCB-MSCs,通过检测细胞表面抗原,观察细胞形态学和增殖分化能力的差异,初步评价基因转染对细胞生物学功能的影响.采用酶联免疫吸附实验(ELISA)和实时定量多聚合酶链反应(real-time PCR)技术分别测定不同转染组GDNF的蛋白及mRNA表达水平.结果 采用密度梯度离心法成功在体外分离和培养出UCB-MSCs,并诱导其向脂肪细胞分化.FACS检测结果显示,UCB-MSCs中CD90、CD73及CD105蛋白表达阳性,CD14、CD34、CD45、CD19、HLA-DR、Stro-1及CD106蛋白表达阴性.ELISA和real-time PCR检测结果显示,用含GDNF基因的慢病毒载体转染UCB-MSCs后,其GDNF蛋白分泌量和mRNA表达水平与转染拷贝数有关,转染拷贝数越高,GDNF表达量越高.GDNF基因转染后UCB-MSCs的原有生物学功能无明显改变.结论 成功在体外分离和培养出UCB-MSCs.用含有GDNF基因的慢病毒载体转染UCB-MSCs可通过转染拷贝数在一定水平上控制GDNF蛋白分泌量和mRNA表达水平,使其持续高表达GDNF.     

血小板源性生长因子B在损伤周围神经再生中的作用

目的：观察血小板源性生长因子B（PDGF-B）在损伤大鼠坐骨神经中的表达,旨在阐明其在末梢神经再生中的作用。 方法：分别构建大鼠坐骨神经切割伤和碾压伤模型,应用免疫组织化学S-P法检测PDGF-B的表达。结果：两类损伤模型中,损伤近端神经和再生轴突PDGF-B的表达均增强。两类损伤模型均可见损伤神经远端的雪旺氏细胞PDGF-B表达量明显增加,在碾压伤模型中,随着轴突-雪旺氏细胞关系的恢复,PDGF-B表达水平下降,并最终恢复正常;在切割伤模型中,二者关系不能恢复,PDGF-B减至极低水平。 结论：坐骨神经损伤后PDGF-B的表达增强在末梢神经再生中发挥重要作用。     

脑源性神经生长因子促进骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的实验研究

目的 探索脑源性神经生长因子（BDNF）在诱导骨髓间充质干细胞（BMSCs）分化为神经元样细胞过程中的作用。方法 应用Ficoll分离骨髓中单核细胞,贴壁培养细胞,观测形态并用流式细胞仪检测其细胞表面标志;用含β-巯基乙醇（BME）、BDNF及碱性成纤维细胞因子（bFGF）的条件培养基使培养的细胞向神经细胞诱导分化;采用免疫荧光染色法对分化的细胞进行鉴定。结果 分离培养的贴壁细胞具有典型的BMSCs的形态和细胞表面标志,诱导后细胞表达神经元和星型胶质细胞标志神经元特异性烯醇化酶（NSE）、和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）。结论 BMSCs在体外具有分化为神经元样细胞的能力,BDNF具有促进分化的作用。