小鼠肺腺癌LA795细胞系具不同转移潜能亚系的体内侵袭力…

利用肾包膜下体内侵袭模型，对小鼠肺腺癌具不同转移潜能亚系ＬＡ１、ＬＡＤ和ＬＡ５的体内侵袭能力进行比较观察。结果表明：３个亚系的体内侵袭均呈进行性，瘤组织侵袭生长区面积不断增大，所占总面积的百分比不断升高。其中转移潜能较强的ＬＡ５亚系侵袭程度、瘤组织所占面积的百分比均较高，显示了较强的体内侵袭能力；转移潜能较弱的ＬＡＤ居中；不转移的ＬＡ１亚系瘤组织侵袭程度、所占面积的百分比均较低。３个亚系的体内侵袭     

小鼠肺腺癌LA795细胞不同转移率克隆株的分离及其膜脂性质的研究

从LA795细胞系的15个克隆株中选出LA1,LAE,LAD,和LA5株,其细胞电泳率分别为:0.865,0.869,1.101,1.320。结果表明:瘤细胞电荷性质的变化同它在同基因动物体内的自发肺转移能力有明显的相关性,其转移率分别为0％(0/25),0%(0/25),16%(4/25)和32%(8/25)。对四个克隆株瘤细胞膜脂性质的测试显示,克隆株瘤细胞转移能力的变化与膜脂性质的变化也显示了明显的相关性。总结果提示,LA795瘤细胞克隆株转移潜能的变化与其细胞整体性质的变化有关。这一结果对进一步认识肿瘤转移的机制有重要意义。     

细胞外基质对小鼠肺腺癌不同转移潜能细胞运动性的影响

利用体外实验方法，观察细胞外基质对ＬＡ７８５细胞系具不同转移潜能亚系体外移动能力的影响，将亚系瘤细胞形成的球体放入混有纤维粘连蛋白（ＦＮ）或层粘连蛋白（ＬＮ）之培养液中培养，培养不同时间进行瘤细胞移出距离测定。结果表明：ＦＮ或ＬＮ能促进转移潜能较强的ＬＡ５亚系和转移潜能较弱的ＬＡ１亚系的运动，其中以ＬＡ５亚系移动更快，说明ＦＮ或ＬＮ与肿瘤细胞侵袭转移能力有关，且高转移的瘤细胞与ＬＮ，ＦＮ的相互作用     

具有肝转移倾向的结肠癌细胞亚系的筛选与鉴定

目的 筛选人结肠癌SW480细胞中具有特定肝脏转移倾向的亚克隆,比较它与母系生物学特性的差异,为结肠癌肝转移机制的研究提供基本的实验材料.方法 采用外科原位接种、组织块细胞培养法从裸鼠体内获得SW480细胞系中具有肝脏转移倾向的亚克隆SW480/M5;体内体外实验验证它与母系细胞在生物学特性上的差异.结果 体内实验证明SW480具有广泛转移的潜能,而SW480/M5细胞只具有向肝脏转移的潜能;SW480/M5细胞原位瘤的质量较SW480细胞大且皮下瘤生长速度较快:体外实验证明SW480/M5细胞的克隆形成能力,体外增殖能力、体外运动及侵袭能力较SW480细胞强,而对FN的粘附能力较SW480细胞弱.结论 从结肠癌细胞系SW480中筛选出的细胞亚系SW480/M5转移方向明确,是结肠癌肝转移机制研究的理想细胞模型.     

CXCR4在不同转移潜能肝癌细胞中的表达及意义

  目的研究趋化因子受体CXCR4在高、低转移潜能肝癌细胞中的表达,并探讨其在肝癌细胞增殖和侵袭转移过程中的作用。方法 利用3B肝癌细胞株对人工基底膜穿透能力的差异获得不同转移潜能肝癌细胞亚系,并通过transwell小室侵袭实验比较两细胞亚系的侵袭能力从而对其进行验证, 应用RT-PCR和Western Blot检测CXCR4在两细胞亚系中的表达。CCK8法检测两细胞亚系生长曲线和倍增时间,流式细胞仪检测两细胞亚系细胞周期和凋亡率。结果成功筛选出高、低转移潜能肝癌细胞亚系,并通过transwell小室侵袭实验证实高转移潜能肝癌细胞的侵袭能力高于低转移潜能肝癌细胞;RT-PCR和Western Blot均显示高转移潜能肝癌细胞在基因水平和蛋白水平的CXCR4表达均显著高于低转移潜能肝癌细胞;且两细胞亚系体外生长速度、倍增时间、细胞周期和凋亡率均具有明显差异。结论上述结果表明CXCR4在肝癌进展中发挥了重要的作用,可能为未来肝癌的诊疗提供理论依据。     

不同转移潜能喉癌细胞株的分离及生物学特性比较

目的：获得高侵袭性喉癌细胞株,为建立高转移喉癌动物模型奠定基础.方法：改良侵袭实验筛选出高低两种侵袭潜能细胞亚群,通过生长曲线、倍增时间和流式细胞术检测两种细胞的生长和周期差异;采用侵袭实验、迁移实验检测侵袭和迁移能力的差异;各取5只裸鼠进行动物实验检测体内肿瘤生长和转移能力的差异.结果：经过改良侵袭实验筛选出了高低两种侵袭潜能细胞亚群,倍增时间分别为（31.6±1.1）,（60.2±11.1）h（P〈0.05）;增殖指数分别为（27.6±0.5）%,（16.3±0.8）%（P〈0.01）;高低亚群侵袭细胞数分别为210.2±12.9和11.6±5.0（P〈0.01）,迁移细胞数分别为229.8±12.1和6.0±4.5（P〈0.01）.动物实验中,高低侵袭组在裸鼠体内的成瘤时间分别为2,4wk,病理活检高侵袭组3只同侧腘窝淋巴结转移、4只同侧腹股沟淋巴结转移、1只对侧腹股沟淋巴结转移;低侵袭组1只同侧腹股沟淋巴结反应性增生,2只同侧腹股沟淋巴结转移;瘤重分别为（17.0±3.0）,（9.7±3.8）mg（P〈0.05）;瘤内血管数分别为21.2±4.0,1.4±0.9（P〈0.01）.结论：成功从喉癌同一亲本细胞系中分离得到了高低两种侵袭潜能细胞亚群,高侵袭性亚群的恶性程度高于低侵袭性亚群.     

皮质肌动蛋白在不同转移潜能乳腺癌细胞中的表达及意义

目的筛选不同转移潜能的乳腺癌细胞亚系,并探讨皮质肌动蛋白(cortactin)在乳腺癌细胞增殖和侵袭过程中的作用。方法经过连续人工基质膜侵袭实验后获得高、低转移潜能的乳腺癌细胞亚系,通过透射电镜观察比较两系细胞的超微结构,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测两系细胞增殖能力,流式细胞仪检测两系细胞周期,Transwell侵袭小室模型比较两系的迁移能力。应用免疫细胞化学法、反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹分析法检测cortactin蛋白在两系细胞中的表达。结果利用人工基质膜侵袭实验筛选出高、低转移潜能乳腺癌细胞亚系,并且两系细胞形态上无明显差异。MTT实验显示高转移潜能细胞体外生长速度显著快于低转移潜能细胞(P0.05)。流式细胞仪检测结果显示,高转移潜能细胞亚系与低转移潜能细胞亚系相比,G0/G1期细胞前者比后者少[(52.67±3.69)%vs(64.46±2.79)%],而S期细胞前者比后者多[(30.53±6.19)%vs(24.63±2.04)%]。高转移潜能细胞亚系增殖指数(PI)高于低转移细胞亚系[(47.32±3.69)%vs(35.53±2.80)%,P0.05],侵袭能力显著强于低转移潜能细胞亚系[(61.46±7.08)vs(25.32±4.87)个/视野,P0.05]。免疫组化、RT-PCR和蛋白质印迹分析均显示在高转移潜能细胞亚系中cortactin在基因和蛋白水平的表达均高于低转移潜能细胞亚系(P0.05)。结论 Cortactin的过表达与乳腺癌的增殖和转移过程密切相关。     

体内外连续筛选建立人前列腺癌高转移细胞亚系及其生物学特性

目的 建立人前列腺癌小鼠转移模型,筛选前列腺癌高转移细胞亚系.方法 采用DU145细胞悬液原位注射法接种BNX小鼠,建立前列腺癌小鼠COI模型,取肺转移灶体外培养并采用侵袭小室体外筛选高侵袭性细胞,扩增后进行原位注射,如此将肺转移灶癌细胞在小鼠体传代2次,筛选高转移细胞亚系.结果 (1)原位细胞悬液注射法接种10只小鼠均成瘤,并都伴有肠系膜、腹股沟淋巴结,其中3只发现肺转移.(2)获得高转移前列腺癌细胞亚系DU145-M3,其侵袭能力强,肿瘤转移相关基因MAPK4和TIPM-2低表达,MMP-2高表达.结论 COI法是有效的前列腺癌转移模型制作方法;体内外连续筛选可获得高转移细胞亚系.     

应用差异显示技术从高低转移癌系克隆出肿瘤转移相关基因G3BP

目的　克隆肿瘤转移相关基因。方法　应用倍比稀释法对人肺巨细胞癌PG进行单细胞克隆 ,并应用裸鼠异种接种及自发性转移体内实验对各亚系的转移潜能进行鉴定。以具有不同转移潜能的癌细胞亚系为研究对象 ,应用mRNA差异显示技术克隆差异片段 ,sanger双脱氧末端终止法测序及自动双向测序获得其碱基序列 ,与GenBank数据库进行同源性比较。在两组具有不同转移潜能的癌细胞亚系 (人肺癌 ,前列腺癌 )中Northern杂交验证表达差异。结果　两个具有不同转移潜能的亚系BE1和LH7,在完全相同的遗传背景下 ,亚系BE1在裸鼠体内 10 0 %成瘤 ,10 0 %转移 ;亚系LH7在裸鼠体内 10 0 %成瘤 ,无一例转移。二者转移表型的显著差异必然反映了转移相关基因表达与调控的差异。因此该系统是mRNA差异显示的良好模型。应用mRNA差异显示技术克隆差异片段 ,一个84 9bp片段在高转移亚系BE1中低表达 ,而在不转移亚系LH7高表达 ,二者差异显著 ,在重复实验中得到了验证。成功的回收该片段 ,连接入pGEM T载体 ,经sanger双脱氧末端终止法测序及自动双向测序获得其碱基序列 ,经GenBankBlastn检索 ,与G3BP(U32 519)同源性高达 99%。Northern杂交显示G3BP在LH7高表达 (约 3 3kb) ,而在BE1中低表达 ,验证了差异显示的结果 ,排除了假阳性的可能性     

人前列腺癌细胞PC-3M亚系u-PAR基因与蛋白质表达

为研究与人前列腺癌细胞（PC-3M）侵袭能力相关的靶分子，采用有限稀释法分离单克隆细胞株，并应用单层细胞侵袭等实验鉴定各亚系的体外侵袭能力；借助RT-PCR和免疫组化的方法，分别在转录和翻译水平检测5株侵袭能力不同的PC-3M亚系尿激酶型纤溶酶原激活物受体（u-PAR)的表达。结果显示，高侵袭亚系-u-PAR基因mRNA的表达和蛋白质水平均明显高于低侵袭亚系，提示；PC-3M亚系u-PAR的高表达与其较强的侵袭能力密切相关，而u-PAR可能是抑制高侵袭亚系侵袭效应的一个重要靶分子。     

THE INTERRELATIONSHIP BETWEEN TUMOR CELLS＇ ELECTROPHORETIC MOBILITY，ADHESIVE AND INVASIVE ABILITIES，AND THEIR METASTATIC POTE

ＴＨＥＩＮＴＥＲＲＥＬＡＴＩＯＮＳＨＩＰＢＥＴＷＥＥＮＴＵＭＯＲＣＥＬＬＳ＇ＥＬＥＣＴＲＯＰＨＯＲＥＴＩＣＭＯＢＩＬＩＴＹ，ＡＤＨＥＳＩＶＥＡＮＤＩＮＶＡＳＩＶＥＡＢＩＬＩＴＩＥＳ，ＡＮＤＴＨＥＩＲＭＥＴＡＳＴＡＴＩＣＰＯＴＥＮＴＩＡＬＧａｏＪｉｎ（...     

Relationship of beta-glucuronidase to differentiation and invasion of human colorectal carcinoma.

OBJECTIVE To investigate the relationship between beta-glucuronidase and tumor differentiation and invasion in human colorectal carcinoma.

METHODS The expression of beta-glucuronidase in human colorectal carcinoma tissue was determined by streptavidin-peroxidase immunohistochemical method. Four human colorectal carcinoma cell lines were analysed for beta-glucuronidase in the medium by spectrophotometry method.

RESULTS Compared with well differentiated colorectal carcinomas, beta-glucuronidase expression was higher in poorly differentiated tumors. An association was found between beta-glucuronidase overexpression in colorectal carcinoma and more advanced tumor Dukes' stage (P < 0.05). With increasing maximum depth of invasion, tumors more frequently show higher beta-glucuronidase expression (P < 0.05). The analysis of colorectal carcinoma cell lines for beta-glucuronidase showed that low levels of beta-glucuronidase (activity range, 1.29 to 1.96 micrograms/10(6) cells per hour) were associated with the well differentiated cell lines which have low invasiveness (CX1, CCL187), and this was in contrast to the elevated level of the enzyme (2.46 to 2.73 micrograms/10(6) cells per hour) present in the medium derived from the poorly differentiated cells with high invasiveness (CCLI227, CCL228) (P < 0.05).

CONCLUSIONS Poorly differentiated human colorectal carcinoma cells could synthesize more beta-glucuronidase, enhance local invasion. Immunohistochemical staining for beta-glucuronidase might be helpful to diagnosing the differentiation degree and invasiveness of human colorectal carcinomas, and the secreted beta-glucuronidase might provide a useful measurement of the differentiation degree and invasiveness of cultured human colorectal carcinoma cells.

     

基底膜侵袭实验技术对人肺腺癌细胞侵袭能力的研究

目的:研究RAB5A基因转染后对肺腺癌侵袭能力的影响。方法:采用重基底膜侵袭实验,观察转染前后的细胞系对基底膜侵袭能力的改变。结果：转染PcDNA3.1-RAB5A正义表达载体的AGZY83-a细胞系基底膜侵袭能力增强,转染PcDNA3-AntiRAB5A反义RNA组质粒的Anip973细胞系侵袭能力明显减弱。结论：RAB5A在人非小细胞肺癌的侵袭及转移特性的形成中具有重要的作用,RAB5A的反义分子能够有效地阻断该基因表达的翻译过程,在细胞内发挥预期作用。     

应用重组基底膜侵袭技术对人肺腺癌细胞侵袭能力的研究

目的　研究RAB5A基因转染后对肺腺癌侵袭能力的影响。方法　采用重组基底膜侵袭实验 ,观察转染前后的细胞系对基底膜侵袭能力的改变。结果　转染pcDNA3.1 RAB5A正义表达载体的AGZY83 a细胞系基底膜侵袭能力增强 ,转染pcDNA3 AntiRAB5A反义RNA重组质粒的Anip973细胞系侵袭能力明显减弱。结论　RAB5A在人非小细胞肺癌的侵袭及转移特性的形成中具有重要的作用 ,RAB5A的反义分子能够有效地阻断该基因表达的翻译过程 ,在细胞内发挥预期作用。     

A New in vitro Invasion Model for Oral Cancer Using an Acellular Allogenic Dermal Matrix (Alloderm): The Relationship among in vitro Invasion Activity, in vivo Invasion and Metastasis

The purpose of this study was to develop a new in vitro model of cancer invasion using a human dermal equivalent, AlloDerm?. A squamous cell carcinoma line (HSC-2, HSC-3 and OSC20) and a malignant melanoma line (G361) were cultured on AlloDerm? and evaluated histologically to examine destruction of the basement membrane and invasion into the dermis of AlloDerm?. HSC-3 and G361 cells invaded through the basement membrane of AlloDerm? at 21-28 days after seeding, while HSC-2 and OSC20 cells did not. Next, these cells were transplanted into the tongues of nude mice, and the degree of local invasiveness was examined histologically. HSC-3 and G361 cells invaded diffusely to the surrounding tongue tissue, although HSC-2 and OSC20 showed only expansive growth. Further, these cells were transplanted subcutaneously in nude mice to study metastatic activity. Regional and distant metastases were rarely observed after transplantation of HSC-2 and OSC20 cells. On the other hand, HSC-3 and G361 cells frequently metastasized. These findings show a close relationship among in vitro invasiveness on AlloDerm?, in vivo invasiveness, and metastatic activity. This experimental model using AlloDerm? is a potentially new in vitro model of cancer invasion.     

经阴道超声对多囊卵巢综合征和多卵泡综合征的鉴别诊断价值

目的:探讨经阴道超声检查对多囊卵巢综合征(PCOS)和多卵泡综合征(MFO)的鉴别诊断价值。方法:回顾性分析运用经阴道超声检查对20例PCOS和20例MFO进行形态学的观察和检测,参数为卵泡数(FN)、卵巢间质面积(SA)、总面积(TA)和SA/TA,进行分析。结果:PCOS患者比MFO患者SA、SA/TA明显增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:经阴道超声在对PCOS和MFO监测形态学参数中,参数SA/TA鉴别诊断PCOS和MFO的价值最高。     

多囊卵巢与多囊卵巢综合征的超声特征和激素水平相关性分析

将超声诊断为卵巢多囊样改变的104例患者按临床症状及内分泌检查分为多囊卵巢综合征（PCOS）组与单纯卵巢多囊样改变（PCO）组,同时纳入有正常排卵的妇女40人,做对照组,分别测定其卵巢面积（TA）、髓质面积（SA）及二者的比值（SA/TA）,分析激素水平与SA/TA的相关性.PCO组的卵巢TA、SA及SA/TA、血清睾酮、苗勒氏管激素AMH及抑制素B均低于PCOS组,但高于对照组,差异具有统计学意义（P＜0.05）.PCOS患者血清睾酮水平与卵巢超声参数SA/TA有显著相关性（P＜0.05）.PCOS患者的AMH和抑制素B高于PCO组和对照组,说明AMH和抑制素B与卵巢多囊样改变的程度有关,可以用于鉴别PCOS和PCO.同时,SA/TA与PCOS血清睾酮升高有关,可以作为鉴别PCOS和PCO的内分泌指标.     

经阴道B超结合经腹B超对多囊卵巢综合征的诊断价值研究

目的 :观察并对比多囊卵巢综合征 (PCOS)在经腹超声 (TAUS)和经阴道超声 (TVUS)下的形态学特点 ,寻找一些客观的实用的PCOS超声诊断指标。方法 :采用TVUS对 3 8例PCOS和 3 0例正常已婚妇女进行卵巢形态学的观察与测量 ,指标为 :卵泡数 (NF)、卵巢体积 (OV)、卵巢间质面积 (SA) ,总面积 (TA) ,及SA/TA比值 ,并用TAUS观察与测量NF和OV ,比较与TVUS对PCOS的诊断价值。结果 :PCOS组NF、OV、SV和SA/TA较对照组明显增加。两组中TAUS卵泡检出数明显少于TVUS卵泡检出数。结论 :SA的测量和SA/TA比值的计算在PCOS的诊断中具有非常重要的价值 ,TAUS和TVUS联合应用能提高诊断准确性 ,减少漏诊率。     

乳腺癌的原发与转移癌中P~(53)蛋白表达的相关性

目的　探讨P53 突变蛋白在乳腺癌原发灶与转移灶中表达差异与其侵袭性之间的关系。方法　用免疫组化ABC法检测了 42例乳腺原发癌与转移癌石蜡切片中 ,P53 蛋白表达情况。结果　乳腺癌P53蛋白的异常表达率为 5 9.5 2 % (2 5 /4 2 )。原发组阳性率为 45 .45 % (10 /2 2 ) ,转移组 75 .0 0 % (15 /2 0 )。≥ 45岁组阳性率 80 .0 0 % (16 /2 0 ) ,<45岁组 40 .91% (9/2 2 )。P53 蛋白表达在乳腺原发癌及转移癌间有显著差异(P <0 .0 5 ) ,与年龄亦显著相关。结论　乳腺原发癌与转移癌之间有明显异质性。