贵州民族药提取物A-3抗H22肿瘤细胞生长作用机制的初步研究

目的:对贵州民族药提取物A-3抗肿瘤作用机制进行初步研究.方法:研究A-3对小鼠皮肤迟发型超敏反应、肿瘤细胞凋亡、肿瘤血管生成及微管蛋白聚合解聚活性等四个方面的影响,初步探讨药物的抗肿瘤作用机制.结果:A-3能明显刺激正常小鼠和荷瘤小鼠的脾脏及胸腺增生,促进DTH反应.每天给予50mg/kg和100mg/kg A-3能见到明显促进H22肿瘤细胞凋亡的作用,但两剂量对H22肿瘤血管生成均无显著影响.浓度为0.1mmol/L时,A-3对兔脑微管蛋白体外的聚合解聚平衡反应无明显影响.结论:A-3可能通过提高机体免疫功能及促进肿瘤细胞凋亡等作用来抑制肿瘤生长.     

过表达热休克蛋白22抑制造血系统恶性肿瘤细胞生长的研究

目的 探讨过表达热休克蛋白22（HSP22）对造血系统恶性肿瘤细胞生长和凋亡的影响.方法 构建含HSP22或空载体的慢病毒表达载体,感染K562和Namalwa细胞;荧光显微镜及流式细胞术观察感染效率;反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot鉴定HSP22表达.采用细胞计数法测定细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期,甲基纤维素半固体集落形成实验测定集落数,Annexin VPE／7-AAD流式细胞术检测细胞凋亡.在裸鼠皮下注射K562和Namalwa细胞进行成瘤实验以观察成瘤体积.结果 与转导空载体的对照细胞相比,HSP22过表达能抑制Namalwa和K562细胞集落形成,每孔平均集落数转导pCDH1-MCS1-EF1-copGFP空载体的K562细胞为108,转导pCDH1-MCS1-EF1-copGFPHSP22的K562细胞为72,两者差异有统计学意义（P=0.000 16）;转导pCDH1-MCS1-EF1-copGFP空载体的Namalwa细胞为125,转导pCDH1-MCS1-EF1-copGFP-HSP22的Namalwa细胞为80,两者差异有统计学意义（P=0.000 37）.HSP22还能抑制Namalwa细胞体外增殖（第5天,P=0.015;第6天,P=0.042;第7天,P=0.048）,抑制K562细胞体内增殖（第21天,P=0.022）.K562、Namalwa细胞HSP22转导组与对照组间G0～G1期、G2～M期及S期细胞所占百分比差异均无统计学意义（均P＞ 0.05）.结论 过表达HSP22能够抑制造血系统恶性肿瘤K562和Namalwa细胞的生长.     

Endostatin对结肠癌生长和转移抑制作用的实验研究

背景与目的:结肠癌的生长、转移是血管生成依赖性的,血管生成抑制剂有望通过抑制肿瘤血管生成,诱导结肠癌细胞凋亡,有效地抑制结直肠癌的生长和转移。肿瘤的抗血管生成治疗对选择手术时机和方式、制定综合治疗方案,提高结肠癌患者5年生存率都具有重要意义。本实验研究血管生成抑制因子Endostatin对结肠癌生长和转移的抑制作用,并探讨其对结肠癌细胞凋亡的影响。方法:采用人结肠腺癌细胞株SW1116完整组织块裸鼠原位种植,建立类似于临床的结肠癌转移裸鼠模型。种植后第1周开始皮下注射Endostatin,每天一次,剂量为0mg/kg(对照组)、5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg(治疗组),共用6周。种植后第7周处死动物,测量原位肿瘤瘤重、抑瘤率、肿瘤微血管密度(intratumoralmicrovesseldensity,MVD)、肿瘤细胞凋亡指数(apoptoticindex,AI),观察肿瘤细胞腹膜、肝、其他脏器转移及腹水情况。结果:Endostatin剂量为0mg/kg、5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg时,原位肿瘤瘤重分别为(1.31±0.36)g、(0.42±0.17)g、(0.21±0.09)g、(0.13±0.05)g;抑瘤率分别为0%、67.9%、84.0%、90.1%;MVD分别为(12.8±4.1)、(5.9±2.5)、(2.2±1.4)、(0.74±O.3);AI分别为(3.87±2.61)%、(6.89±5.18)%、(13.24±4.76)%、(20.97±9.04)%;腹膜转移率分别为9     

Endostatin体外抑制SKOV3细胞生长作用机制的初步研究

背景与目的：肿瘤的侵袭和转移与血管新生密切相关。体内外实验证实，原发性恶性肿瘤细胞中存在多种促进和抑制血管形成因子，抑制血管形成可能成为治疗人类恶性肿瘤最有价值的战略之一。Endostatin是一种特异性血管内皮生长抑制因子，尽管目前研究仍处于实验阶段，但应用前景十分广阔。动物实验已证实Endostatin具有高效抑制肿瘤血管生成，进而抑制肿瘤生长、侵袭和转移的作用，且治疗后不易复发、反复应用不产生耐药性、毒副作用极低、对各期肿瘤均有效等优点。作为治疗用药，Endostatin有希望用于任何病态的血管生成，最近有报道显示Endostatin配合外科手术、化疗、放疗和免疫治疗等传统方法，可显著提高其抗肿瘤效果。本实验研究目的在于探讨人Endostatin对卵巢癌SKOV、细胞生长的抑制作用及其机制。方法：①MTT法检测Endostatin对SKOV3细胞的生长抑制作用；②透射电镜观察Endostatin处理SKOV3细胞后的凋亡情况，流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期；③免疫细胞化学法、RT—PCR法及Western blot法检测Endostatin处理SKOV3细胞后凋亡调控基因bcl-2和bax mRNA和蛋白的表达。结果：Endostatin具有体外抑制SKOV3细胞增殖的作用15μg／ml 72h0．454（A值）明显低于对照组1．369（P〈0．01）；能诱导SKOV3细胞凋亡；Endostatin对SKOV3细胞中bcl-2和bax的表达无明显改变。结论：人Endostatin具有抑制SKOV3细胞生长的作用，其机制可能与诱发细胞凋亡相关。     

紫草素衍生物SYUNZ-7的抗肿瘤作用及其机制的初步研究

背景与目的:实验证明天然紫草素类化合物及其衍生物具有不同程度的细胞毒作用和抗肿瘤作用。本实验研究紫草素萘茜类衍生物[2或3,11-双苯硫基-6-异己萘茜]代号为SYUNZ-7的体内外抗肿瘤作用,并探讨其作用机制。方法:应用MTT法检测SYUNZ-7对多种肿瘤细胞的体外抗增殖作用,并计算IC50值;用小鼠移植肿瘤模型和人鼻咽癌裸鼠移植瘤模型进行SYUNZ-7的体内抗瘤实验;流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期的变化;免疫组化法检测SYUNZ-7对血管生成的影响。结果:SYUNZ-7对人肺癌细胞GLC-82、人鼻咽癌细胞CNE2、人口底癌细胞KB、人胃癌细胞MGC-803和人肝癌细胞HepG2的IC50值分别为(2.18±0.04)μg/ml、(4.17±0.09)μg/ml、(5.41±0.10)μg/ml、(6.41±0.14)μg/ml和(9.99±0.21)μg/ml。SYUNZ-7对GLC-82细胞的体外抗增殖作用最强。小鼠艾氏腹水癌EAC(实体型)抗瘤实验结果显示,在1mg/kg、2mg/kg、4mg/kg和8mg/kg的剂量下SYUNZ-7的抑瘤率分别为(40.5±0.1)%、(50.9±2.3)%、(61.3±1.8)%和(65.6±7.4)%(P<0.01)。1mg/kg、2mg/kg和4mg/kg的SYUNZ-7对CNE2细胞裸小鼠移植瘤的抑瘤率分别为24.7%、38.3%和41.2%(P<0.05)。流式细胞术检测结果显示,SYUNZ-7能浓度依赖性和时间依赖性诱导CNE2细胞的凋亡;随着作用时间的延长或处理浓度的增加,SYUNZ-7可以阻滞CNE2细胞由S期向G2/M期转化。免疫组化结果显示:SYUNZ-7能够呈浓度依赖性抑制CNE2细胞裸小鼠移植瘤的血管生成。结论:紫草素萘茜类衍生物SYUNZ-7具有较强的体内外抗瘤作用,其抗瘤机制与诱导细胞凋亡、阻滞细胞周期和抑制血管生成有关。     

重楼醇提物抗鼠H22移植瘤血管生成的体内实验研究

目的:探讨重楼醇提物对KM小鼠H22细胞皮下移植瘤的生长及对血管生成的抑制作用.方法: 建立小鼠皮下肝癌H22模型,将小鼠随机分为6组,生理盐水20ml/kg阴性对照组、环磷酰胺20mg/kg阳性对照组、重楼醇提物0.5g/kg、1g/kg、2g/kg、4g/kg组,连续灌胃治疗10天,观察用药后肿瘤生长情况,计算抑瘤率,用免疫组化方法测定肿瘤组织中CD34的表达.结果: 2g/kg、4g/kg重楼醇提物组瘤重抑制率分别为 44.3%和57.4%,与生理盐水对照组相比具有显著性差异(P值分别为0.012、0.001).2g/kg、4g/kg重楼醇提物组对KM小鼠H22细胞皮下移植瘤治疗后的微血管密度计数与NS对照组比较,差异具有统计学意义(P值分别为0.015、0.001).结论: 重楼醇提物对KM小鼠H22移植瘤具有一定的生长抑制作用,同时可明显抑制肿瘤组织微血管密度,推测其抗肿瘤作用可能与血管生成抑制作用有关.     

Livin抗凋亡机制与肿瘤

细胞凋亡是由多种因子介导的细胞主动死亡的过程,对机体或组织维持内环境的稳定和生物体的生长发育、生命周期、衰老死亡都有着重要的作用。凋亡抑制也是肿瘤发生的重要机制,凋亡通路的紊乱、促进凋亡因子的抑制、凋亡因子的过表达以及凋亡基因的表达失控都会导致肿瘤的发生和发展。而且,凋亡紊乱还会导致肿瘤对化疗的抵抗。     

美洲大蠊提取物CⅡ-3对H22肝癌小鼠血管生成作用的研究

[目的]探讨美洲大蠊提取物CⅡ-3对H22肝癌小鼠肿瘤生长的抑制作用及其机制。[方法]将50只昆明种小鼠接种H22肝癌细胞,随机分为模型组、阳性组以及CⅡ-3低、中、高剂量组,比较各组抑瘤率、脏器指数以及VEGF含量。[结果]高剂量CⅡ-3对H22荷瘤小鼠肿瘤的生长有明显的抑制作用(61.41%),并且能降低小鼠血清中VEGF的含量(361.72±101.84ng/L)。[结论]CⅡ-3能抑制H22肝癌小鼠肿瘤的生长,并对肝癌小鼠的免疫器官有一定程度的保护作用,其机制可能与下调VEGF的表达而抑制肿瘤血管生成有关。     

低剂量化疗作用机制的研究进展

化疗是肿瘤综合治疗的主要方式之一,多年来在肿瘤治疗中发挥着重要作用。但近年来低剂量化疗(Low-dose chemotherapy)利用其化疗药物的作用点,采取合理的给药方式和计划,且相对于最大耐受剂量化疗具有毒副反应小、患者耐受性明显提高、疗效更佳等优势,已逐渐成为临床中常用的治疗策略。本文就低剂量化疗的作用机制的研究进展做一系统综述。     

砷剂抗白血病作用机制研究新进展

砷剂除对急性早幼粒白血病（APL）有特效外，对其它类型白血病也具有治疗潜力，其抗白血病机制在于对白血病细胞促凋亡、诱导分化、抑制增殖并影响骨髓微血管形成。本文综述剂抗白血病机制的最新研究进展。     

Effects of emodin extracted from Chinese herbs on proliferation of non-small cell lung cancer and underlying mechanisms

To aim of this was to observe emodin-mediated cytotoxicity and its influence on Rad51 and ERCC1 expressionin non-small cell lung cancer (NSCLC). NSCLC cells were cultured in vitro with emodin at various concentrations (0, 25, 50, 75 and 100 μmol/L) for 48 h and the proliferation inhibition rate was determined by the MTT method. Then, NSCLC were treated with emodin (SK-MES-1 40 μmol/L, A549 70 μmol/L) or 20 μmol/L U0126 (an ERK inhibitor) for 48 h, or with various concentrations of emodin for 48 h and the protein and mRNA expressions of ERCC1 and Rad51 were determined by RT-PCR and Western blot assay, respectively. Emodin exerted a suppressive effect on the proliferation of NSCLC in a concentration dependent manner. Protein and mRNA expression of ERCC1 and Rad51 was also significantly decreased with the dose. Vacuolar degeneration was observed in A549 and SK-MES-1 cell lines after emodin treatment by transmission electron microscopy. Emodin may thus inhibited cell proliferation in NSCLC cells by downregulation ERCC1 and Rad51.     

中药抗肿瘤血管生成分子机理研究进展

应用现代分子医学理念研究传统中药抗血管生成作用已成为开发中药抗肿瘤作用的新领域。本文从中药对肿瘤血管生成的分子调控过程阐述了中药抗血管生成的分子机理及中药抑制血管生成作用新的筛选标准。     

地锦草水提液对H22荷瘤小鼠生长抑制及其机制探讨

目的：研究地锦草对H22荷瘤小鼠的抑瘤作用并探讨其对肿瘤组织血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）和基质金属蛋白酶-3（matrix metalloproteinases-3,MMP-3）蛋白表达的影响。方法：建立H22荷瘤小鼠模型,随机分为模型对照组、地锦草264mg／（kg·d）高剂量组、地锦草132mg／（kg·d）中剂量组、地锦草66mg／（kg·d）低剂量组和环磷酰胺组50mg／（kg·d）。灌胃给药14d后处死小鼠,剥离瘤组织,测量肿瘤体积大小。采用HE染色其形态学变化;免疫组化法观察肿瘤组织VEGF和MMP-3蛋白表达情况。结果：地锦草高剂量组的肿瘤体积为（3．125±1．711）mm2,模型对照组为（5．081±1．936）mm2;地锦草高剂量组肿瘤质量为（1．784±1．765）g,模型对照组为（4．418±2．720）g。与模型组比较,地锦草高剂量组肿瘤体积明显缩小,t=2．184,P=0．037;且其瘤质量减轻,t=2．145,P=0．041。地锦草和环磷酰胺组小鼠瘤体组织切片可见癌细胞聚积成巢,肿瘤细胞数量减少,多处组织坏死,瘤体与周围组织界限清楚,且未侵犯周围组织。免疫组化结果显示,模型组VEGF和MMP=3蛋白表达增强。地锦草高剂量组VEGF蛋白表达（0．160±0．004）下降,与模型对照组（0．228±0．020）比较差异有统计学意义,t=5．011,P〈0．001。地锦草高、中、低剂量组MMP=3蛋白表达分别为0．316±0．062、0．303±0．057和0．302±0．058,与模型组比较差异均有统计学意义,t值分别为6．322、6．845和6．534,P值均〈0．001。各组肿瘤组织的VEGF与MMP3蛋白表达无直接相关性,r=0．069,P=0．709。结论：地锦草可抑制H22荷瘤小鼠肿瘤的生长,其抗肿瘤机制可能与抑制H22荷瘤小鼠的肿瘤组织VEGF和MMP-3蛋白的表达有关。     

芪薏益肝煎对小鼠H22肝癌细胞survivin及caspase-3表达的影响

目的观察芪薏益肝煎对H22荷瘤小鼠的抑瘤作用,并探讨其作用机制。方法小鼠右腋下皮下接种传代7天的腹水型H22肝癌细胞,建立实体瘤模型。将30只小鼠分为3组,对照组、中药组和5-FU组,每组10只;用药15天后取瘤称重、计算抑瘤率,采用免疫组化技术检测survivin和caspase-3的表达。结果芪薏益肝煎对小鼠肝癌细胞的生长抑制率为37.3%,5-FU组为50.5%。survivin及caspase-3在三组中均呈阳性表达,中药组和5-FU组survivin表达减弱,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05、P〈0.01）。caspase-3表达增强（P〈0.01）。结论芪薏益肝煎对肝癌细胞的增殖有明显的抑制作用,其作用机制与survivin及caspase-3表达有关。     

复方苦参水溶液体外对人结肠癌细胞SW480的影响

目的：探讨复方苦参水沉吟液体外对结肠癌细胞的影响。方法：应用〉ＴＴ法,生长曲线,荧光染法,流式细胞仪,透射电镜技术研究复方基参水溶液体外对ＳＷ４８０细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用。结果：复方苦参疗溶液体外对ＳＷ４８０细胞有明显的抑制作用,而且这种抑制作用呈再浓度和时间的依赖性。３０ｍｇ／ｍｌ中药作用ＳＷ４８０细胞４８小时后,江镜及电莘下可见胞核固缩,荧光染色增强,胞核碎裂,凋亡小体形成等凋亡形态学变     

唑来膦酸对肺癌细胞生长抑制的观察及机制的初步研究

目的:研究唑来膦酸对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞株A-549生长抑制及诱导凋亡的作用。方法:用MTT法测定唑来膦酸、泰索帝及二药联合对肺癌细胞A-549的生长抑制率,流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡率。结果:0·1~100μmol/L的唑来膦酸对肺癌细胞A-549均有抑制作用,首先表现为G1期阻滞,继而出现细胞凋亡,呈剂量、时间依赖性,并且与泰索帝联用可以提高细胞凋亡率。结论:唑来膦酸对肺癌细胞A-549具有明显抑制作用,且与泰索帝联用有协同作用,其作用机制可能是通过诱导细胞凋亡来实现的。     

蚯蚓纤溶酶增加胃癌细胞对放射线敏感性的实验研究

目的探讨蚯蚓纤溶酶对胃癌细胞株MGC803的放射增敏作用及机制。方法采用克隆形成实验观察蚯蚓纤溶酶的放射增敏作用;流式细胞术观察药物对胃癌细胞株MGC803周期分布的影响;RT-PCR法检测药物对细胞内硒谷胱甘肽过氧化物酶(SeGPx)基因表达的影响。结果蚯蚓纤溶酶对胃癌细胞有放射增敏效应,100uku/L、300uku/L蚯蚓纤溶酶的放射增敏比分别为1.06和1.14。射线照射后MGC803细胞发生G1期阻滞,蚯蚓纤溶酶对细胞G1期阻滞无明显影响;PCR检测发现射线可诱导的SeGPxmRNA表达下调,蚯蚓纤溶酶能够增强射线诱导的SeGPxmRNA表达下调作用。结论蚯蚓纤溶酶能够增加胃癌细胞对放射线的敏感性,增敏机理可能与药物下调细胞内抗氧化酶SeGPx基因表达有关。     

黄腐酚对顺铂诱导H1650细胞凋亡的影响

目的 以顺铂为主的非小细胞肺癌化疗方案不断更新,目前研究旨在寻求疗效的放大及毒副作用的缩小.黄腐酚被证明有抗癌及保护正常细胞的作用.本实验主要探讨黄腐酚的不同给药方式对顺铂诱导人非小细胞肺癌细胞株H1650凋亡的影响.方法 采用CCK-8法检测黄腐酚、顺铂单用及先用低浓度黄腐酚干预,后补入顺铂对H1650细胞增殖的影响;使用流式细胞术分别分析先用黄腐酚后用顺铂、先用顺铂再补入黄腐酚2种干预方式对H1650细胞凋亡率或存活率的影响.结果 CCK-8检测结果显示,2μmol/L黄腐酚干预H1650细胞48 h后,继续给予20、40和80μmol/L顺铂干预24 h,抑制细胞增殖率分别为(13.16±1.06)%、(19.14±1.67)%和(28.17±2.79)%,均低于同浓度顺铂单纯干预24 h组的(18.96±3.02)%、(23.28±1.43)%和(39.79±3.44)%,P<0.05.流式细胞术检测结果显示,10、20和40μmol/L顺铂干预细胞24 h后,继续给予7〔(85.66±3.19)%、(74.62±2.98)%和(59.55±2.70)%〕或14μmol/L〔(82.04±2.88)%、(76.50±3.11)%和(61.76±3.01)%〕黄腐酚干预24 h,其细胞存活率明显高于同浓度顺铂单纯干预48 h组的(72.60±2.69)%、(56.98±3.80)%和(44.15±2.01)%,P<0.05.3μmol/L黄腐酚干预细胞24 h,弃培养液,更换10、20和40μmol/L顺铂再干预24 h,其细胞凋亡率分别为(29.79±3.78)%、(30.53±3.89)%和(39.48±4.98)%,明显高于顺铂单纯干预24 h组的(17.21±3.01)%、(14.53±2.99)%和(18.88±4.20)%,P<0.05.结论 黄腐酚直接有效保护顺铂对H1650细胞的杀伤,但低浓度黄腐酚的前期干预间接提高了顺铂对H1650细胞的凋亡率.     

沉默pim-3基因对黑色素瘤细胞B16的抑制作用

目的:观察靶向沉默原癌基因pim-3对小鼠黑色素瘤细胞B16的抑制作用.方法:用脂质体将特异性靶向沉默pim-3载体(pim-3-shRNA)和pin-3过表达载体(pim-3-MIGR1)转染到黑色素瘤细胞B16中,荧光定量PCR和Western blotting法检测pim-3 mRNA和蛋白表达的变化,Annexin V/PI染色和TUNEL染色检测细胞凋亡情况,荧光定量PCR和Western blotting法检测p-Bad、Bcl-2、Bcl-xl、Bax、caspase-3等凋亡相关分子表达的变化,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞周期,RTCAxCELLigence系统检测细胞迁移情况,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭的变化.结果:转染pim-3-shRNA组B16细胞的pim-3mRNA及蛋白表达较对照组明显下降(P＜0.05),转染pim-3过表达质粒组B16细胞的pim-3 mRNA及蛋白表达较对照组显著增加(P＜0.05).转染pim-3-shRNA后,B16细胞的凋亡明显增加,在此基础上共转pim-3过表达质粒后则明显逆转沉默pim-3所引起的凋亡(p＜0.05);进一步检测发现沉默pim-3明显下调凋亡相关分子p-Bad、Bcl-2、Bcl-xl的表达,上调Bax的表达,最终引起caspase-3活性增加(P＜0.05).沉默pim-3后B16细胞增殖和迁移受到抑制(P.＜0.05),而细胞周期无明显变化.结论:靶向沉默pim3基因能促进黑色素瘤细胞的凋亡,抑制细胞的增殖和迁移,提示pim-3基因可以作为黑色素瘤基因治疗的新靶点.