猪乙脑病毒IgG抗体间接免疫荧光检测方法的建立与初步应用

目的建立检测猪血清中流行性乙型脑炎病毒(JEV)IgG抗体的间接免疫荧光试验(IFA)。方法用乙脑病毒感染C6/36白蚊伊蚊细胞制备抗原片,建立检测猪血清中JEV-IgG抗体的IFA方法,并用于猪乙脑血清流行病学调查。结果成功建立特异的猪JEV-IgG的IFA检测方法,并对50份母猪、55份仔猪和65份屠宰猪的血清进行检测。乙脑血清抗体效价≥1:200的分别为88.00%,10.91%和24.62%。结论建立的IFA方法能较好的用于猪血清乙脑流行病学调查。     

西尼罗病毒诊断的研究进展

西尼罗病毒（WestNileVirus,WNV）首次于1937年12月在乌干达西尼罗地区的一名发热成年女性血液标本分离到,属黄病毒科（Flavivirdae）黄病毒属（Flavivirus）的乙型脑炎病毒血清群。可导致人类西尼罗热（westNileFever）或西尼罗脑炎（WestNileEncephalitis）。发病者常常出现发烧、头痛、皮疹、淋巴结肿大等症状,严重时表现为无菌性脑膜炎,甚至死亡。该病毒在自然界的传播循环     

西尼罗病毒RT-PCR检测方法的建立及其初步应用

目的　建立西尼罗病毒 (WestNilevirus ,WNV)RT PCR检测方法 ,为WNV感染的诊断和流行病学调查奠定基础。方法　选择Vero E6细胞进行WNV培养 ,通过乳鼠脑内接种病毒培养液获得WNV感染脑组织。在病毒基因组E区和C区设计 3对引物 ,以WNV培养液 ,建立并优化病毒核酸RT PCR分析方法。然后 ,以此对感染蚊虫模拟标本和乳鼠脑组织进行检测。PCR产物测序后 ,用Blast进行同源性分析。结果　用RT PCR在WNV培养液中扩增出与预期大小一致的核苷酸片段 ,并通过改变循环数 ,模板稀释倍数等参数对该方法进行了优化 ;将建立的方法用于检测感染蚊虫模拟标本和感染乳鼠脑组织 ,均检测出WNV目的基因片段 ,且扩增效果与病毒培养液无明显差异 ;套式PCR能显著提高检测的敏感性 ( 10 8-10 9倍 )。结论　本研究建立的WNVRT PCR检测方法具有较高的敏感性 ,可用于WNV感染的流行病学调查研究     

两种抗原基质快速间接免疫荧光法检测抗核抗体的临床应用和评价

间接免疫荧光法 (ＩＦＡ)是检测抗核抗体 (ＡＮＡ)的标准方法 ,该方法采用的抗原基质有多种 ,包括动物肝、肾组织冰冻切片和人工培养的组织细胞等。据文献 [1,2 ]报道 ,进行ＡＮＡ检测时 ,采用的抗原基质不同 ,检测结果存在较大差异。其中一些用培养的组织细胞如人喉癌上皮细胞 (Ｈｅｐ 2 )能检测到ＡＮＡ的血清 ,如用肝、肾等冰冻组织切片检测则ＡＮＡ为阴性。相反 ,有一小部分血清即使ＡＮＡ滴度高也不能用Ｈｅｐ 2细胞检出 ,却能用肝组织或其他器官的组织切片检测。为了避免单独采用一种基质检测的缺点 ,我们采用德国欧蒙实验免疫制品有…     

西尼罗病毒抗体酶联免疫吸附试验检测方法的评价

目的系统地评价血清西尼罗病毒(West Nile virus,WNV)抗体的酶联免疫吸附试验(ELISA)检测方法,为在人群和宿主动物中进行WNV感染血清流行病学调查提供技术支持。方法利用构建的包膜蛋白重组质粒(pQE-30)表达纯化西尼罗病毒包膜蛋白,以此为抗原进行ELISA检测。在对抗原包被量、酶标抗体浓度、血清稀释度进行优化的基础上,对本方法的灵敏度和特异度进行评价。结果确定最适抗原包被量为0.034μg,酶标抗体工作浓度和血清稀释度分别为1∶4 800和1∶80;批内变异和批间变异分别为6.7%和22.6%;对小鼠WNV抗体阳性血清53份、JEV抗体阳性血清48份和阴性对照血清94份进行检测,灵敏度为86.8%,特异度分别为93.8%和92.6%。结论本研究建立的ELISA方法灵敏、检测抗体特异,结果可重复,是一种有价值的血清学调查方法。     

RESA-间接荧光抗体试验检测恶性疟RESA抗体的研究

由体外培养的恶性疟原虫获得的含环状体为主的感染红细胞制成单层感染红细胞,经戊二醛固定后空气干燥,作为RESA,抗原片,以RESA-IFA检测恶性疟患老血样中的RESA抗体。受检的58份恶性疟血样中,12份呈RESA抗体阳性反应,阳性率为20.7％,其中8份用IFA检测时抗体滴度均>1∶4096。对20份间日疟血样进行了同样试验,结果均为阴性。对RESA及其抗体在疟疾保护性免疫中的作用进行了简要讨论。     

华支睾吸虫成虫抗原免疫酶染色试验和间接免疫荧光抗体试验效果的比较

应用成虫冰冻切片抗原作免疫酶染色试验(IEST)及间接免疫荧光抗体试验(IFAT),对比检测了 51份华支睾吸虫病患者和 50份健康人血清,两法的阳性率分别为 92％和 88％;假阳性率分别为 2％和4％,应用 IEST和IFAT对比检查 22份急性血吸虫病患者血清、20份慢性血吸虫病患者血清及 15份并殖吸虫病患者血清。IEST 出现的交叉反应率分别为 14％、5％和0;IFAT出现的交叉反应率分别为 14％、10％和0。表明两法诊断华支睾吸虫病均有较高的敏感性和特异性,并且抗原定位好。而 IEST不需要特殊仪器,更适合于现场应用。     

IFAT检测登革热IgM抗体的初步探讨

目的探讨用间接免疫荧光试验（ＩＦＡＴ）检测登革热ＩｇＭ抗体。方法采集１９９５年７～１１月份广东省登革热Ⅰ型流行期间疑似患者发病１～７ｄ血清６２份,用ＩＦＡＴ检测登革热ＩｇＭ抗体。结果阳性率为２４．１９％（１５／６２）,发病４～５ｄ的阳性率最高为４０．００％以上。ＩｇＭ阳性滴度在１∶１０～１∶４０之间,多数为１∶１０（８／１５）。本法与乙脑血清有交叉反应,与其他非登革热血清无交叉反应。在发病５～６ｄ的患者中可同时检测出登革热的ＩｇＭ和ＩｇＧ抗体。结论发病１～３ｄ的血清可进行病毒分离,４～６ｄ的血清可检测ＩｇＭ抗体,如阴性则再检测ＩｇＧ,以提高登革热的检出率。     

间接免疫荧光法筛查抗核抗体与特异性抗体检测的相互关系

目的分析以间接免疫荧光法（indirect immunofluorescence,IIF）筛查的大样本抗核抗体（antinuclear antibody,ANA）结果与特异性抗体检测结果的相互关系,以确定其临床意义及临床实践中二者是否能够相互代替。方法采用IIF筛查2026份临床连续送检血清标本的ANA,采用线性免疫印迹法（line immunoassay,LIA）检测ANAs特异性抗体,将2026份标本分为自身免疫性疾病（autoimmune diseases,AID）组、疑似AID组、非AID组,分析检测结果的相互关系和临床意义。结果 2026份标本中,IIF阳性/LIA阳性882份,占43.53%;IIF阳性/LIA阴性266份,占13.13%;IIF阴性/LIA阴性507份,占25.02%,IIF阴性/LIA阳性206份,占10.17%。IIF与LIA检测ANA的结果总体符合率为68.56%（K=0.472,P〈0.01）,2种方法检测结果的差异有统计学意义（χ2=416.21,P〈0.01）。IIF阴性/LIA非阴性组中,抗Ro-52、抗干燥综合征抗原A（SS-A）、抗双链DNA（dsDNA）、抗线粒体抗体M2亚型（AMA-M2）、抗史密斯抗原（Sm）、抗干燥综合征抗原B（SS-B）、抗核糖核蛋白/史密斯抗原（nRNP/Sm）和抗组氨酰tRNA合成酶抗原（Jo-1）抗体的阳性率分别为6.00%～34.94%;IIF阴性/LIA非阴性的312例患者中,AID患者116例,占37.18%,高于非AID患者（22.11%）,且差异有统计学意义（χ2=16.97,P〈0.01）。IIF阳性/LIA非阳性的325例患者中,AID患者156例,占48.00%,高于非AID患者（22.15%）,而且AID患者在IIF-ANA滴度1：80、1：160～1：320和≥1：640各组中的比例均高于非AID患者,其差异有统计学意义（χ2=26.96、χ2=7.89、χ2=19.42,P〈0.01）。结论 IIF筛查ANA容易导致AID患者部分具有重要临床意义的ANA特异性抗体漏检,而ANA特异性抗体检测因其测定的抗体数量有限也容易导致AID患者的ANA漏检。IIF-ANA筛查和LIA-ANAs特异性抗体检测不能相互代替,对需要通过检测ANA来排除AID的患者标本应同时进行IIF-ANA筛查和ANAs特异性抗体的检测,以避免仅采用1种方法进行检测时导致的AID患者漏诊。     

Characteristics of Chimeric West Nile Virus Based on the Japanese Encephalitis Virus SA14-14-2 Backbone

West Nile virus disease (WND) is an arthropod-borne zoonosis responsible for nonspecific fever or severe encephalitis. The pathogen is West Nile virus belonging to the genus Flavivirus, family Flaviviridae. Every year, thousands of cases were reported, which poses significant public health risk. Here, we constructed a West Nile virus chimera, ChiVax-WN01, by replacing the prMΔE gene of JEV SA14-14-2 with that of the West Nile virus NY99. The ChiVax-WN01 chimera showed clear, different characters compared with that of JEV SA14-14-2 and WNV NY99 strain. An animal study indicated that the ChiVax-WN01 chimera presented moderate safety and immunogenicity for 4-week female BALB/c mice.     

西尼罗病毒感染免疫应答反应研究进展

西尼罗病毒病是由西尼罗病毒引起的一种人兽共患传染病,给人类和动物健康带来重大危害。虽现已有疫苗处在研究阶段,但仍没有人用疫苗获批上市。通过感染动物模型,有关西尼罗病毒免疫反应的研究已经开展。本文对固有免疫和获得性免疫在抵抗西尼罗病毒感染中的作用进行综述,为进一步研究西尼罗病毒激发免疫应答反应的机制和新型疫苗研制提供依据。     

三种ELISA试剂盒检测猪流行性乙型脑炎病毒血清IgG抗体比较

目的 比较国内常用商品化ELISA试剂盒检测猪流行性乙型脑炎病毒血清IgG抗体的诊断效果。方法 选用3种猪乙脑病毒血清IgG抗体ELISA检测试剂盒(Keqian,Lvshiyuan,Tianchen),以微量中和试验为金标准,对90份猪血清进行检测分析。结果 中和试验的阳性检出率为34.4%(31/90),Keqian,Lvshiyuan和Tianchen阳性检出率分别为50.0%(45/90), 47.8%(43/90)和 38.9%(35/90)。灵敏度最高的是Keqian,为90.32%,但其特异度只有71.19%;Tianchen的灵敏度和特异度分别为83.87%和79.66%;Lvshiyuan的灵敏度和特异度分别仅为41.94%和16.95%。与中和试验比较,Tianchen试剂盒的κ系数最高为0.63,其次是Keqian为0.57,Lvshiyuan仅为0.04。显示3种试剂盒具稳定性。结论 目前国内商品化猪乙脑病毒血清IgG抗体ELISA检测试剂盒诊断结果差异较大,与中和试验相比存在较高的假阴性,质量有待提高。     

West Nile virus encephalitis acquired via liver transplantation and clinical response to intravenous immunoglobulin: case report and review of the literature

C. Rhee, E.F. Eaton, W. Concepcion, B.G. Blackburn. West Nile virus encephalitis acquired via liver transplantation and clinical response to intravenous immunoglobulin: case report and review of the literature.
Transpl Infect Dis 2011: 13: 312–317. All rights reserved Abstract: A patient developed West Nile virus (WNV) encephalitis 2 weeks after receiving a liver transplant and recovered fully, following treatment with intravenous immunoglobulin (IVIg). Laboratory testing documented transmission from the organ donor. Clinicians should be suspicious for organ‐transmitted WNV in any post‐transplant patient who develops fever and neurological symptoms. We review previous cases of organ‐transmitted WNV, the use of IVIg for WNV encephalitis, and the issue of organ donor screening.     

A Potential Role for Substance P in West Nile Virus Neuropathogenesis

Of individuals who develop West Nile neuroinvasive disease (WNND), ~10% will die and >40% will develop long-term complications. Current treatment recommendations solely focus on supportive care; therefore, we urgently need to identify novel and effective therapeutic options. We observed a correlation between substance P (SP), a key player in neuroinflammation, and its receptor Neurokinin-1 (NK1R). Our study in a wild-type BL6 mouse model found that SP is upregulated in the brain during infection, which correlated with neuroinvasion and damage to the blood–brain barrier. Blocking the SP/NK1R interaction beginning at disease onset modestly improved survival and prolonged time to death in a small pilot study. Although SP is significantly increased in the brain of untreated WNND mice when compared to mock-infected animals, levels of WNV are unchanged, indicating that SP likely does not play a role in viral replication but may mediate the immune response to infection. Additional studies are necessary to define if SP plays a mechanistic role or if it represents other mechanistic pathways.     

加强对西尼罗病毒的认识

西尼罗病毒感染可引起西尼罗热和西尼罗脑炎,是一种新发传染病,为近年来全球公共卫生的新威胁。本文对西尼罗病毒的生物学特性、致病机制、临床症状和疫苗等方面的研究进展进行综述,为我国防治西尼罗病毒感染提供参考。     

Clinical Manifestations and Outcomes of West Nile Virus Infection

Since the emergence of West Nile virus (WNV) in North America in 1999, understanding of the clinical features, spectrum of illness and eventual functional outcomes of human illness has increased tremendously. Most human infections with WNV remain clinically silent. Among those persons developing symptomatic illness, most develop a self-limited febrile illness. More severe illness with WNV (West Nile neuroinvasive disease, WNND) is manifested as meningitis, encephalitis or an acute anterior (polio) myelitis. These manifestations are generally more prevalent in older persons or those with immunosuppression. In the future, a more thorough understanding of the long-term physical, cognitive and functional outcomes of persons recovering from WNV illness will be important in understanding the overall illness burden.