LY333531下调大鼠糖尿病模型肾组织结缔组织生长因子表达

目的　探讨LY333531对大鼠糖尿病模型肾组织结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响。方法　建立链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病模型,随机分对照组,糖尿病组及LY333531给药组 ( 10mg/(kg·d),灌胃。8周后观察各组体重、肾重、肾重 /体重、24h尿白蛋白排泄率 (AER)及肾组织蛋白激酶C(PKC)活性的变化,行PAS染色肾小球病理形态学观察及CTGF免疫组化。结果　LY333531给药组大鼠体重明显高于模型组 (P<0 05),肾重、肾重 /体重、AER及肾小球面积(AG)、肾小球容量 (VG)及系膜区面积 (AM)明显低于糖尿病组(P<0 05,P<0 01);模型组肾组织PKCt活性、PKCc活性、PKCm活性及PKCm/PKCc明显高于对照组(P<0 05, P<0 01);LY333531给药组PKCt活性、PKCc活性、PKCm活性及PKCm/PKCc明显低于模型组 (P<0 05)。模型组肾小球CTGF表达明显高于对照组 (P<0 01),LY333531对其有明显抑制作用 (P<0 05 )。结论　LY333531对糖尿病肾脏有明显保护作用,机制可能与抑制肾组织CTGF过度表达有关。     

PKC-β抑制剂LY333531对糖尿病肾脏NADPH氧化酶与SOD蛋白表达的影响

目的研究蛋白激酶C(protein kinase,PKC)-β抑制剂LY333531对糖尿病肾脏尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nicotinamide dinucleotide phosphate,NADPH)氧化酶与超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的影响。方法 24只SD雄性大鼠(240~260 g),采用抽签法随机分为正常对照组(normal control,NC)、糖尿病组(diabetes mellitus,DM)及LY333531(LY)治疗组。LY组灌胃给予PKC-β抑制剂LY333531〔1 mg/(kg.d)〕治疗4周后测量血糖、肾质量/体质量、24 h尿蛋白、内生肌酐清除率(creatinine clearance rate,Ccr)、游离15-F2t-Isoprostane、总抗氧化浓度及SOD活性。Western blotting分析NADPH氧化酶亚基P22phox与P67phox,SOD亚型Cu/Zn-SOD与Mn-SOD蛋白改变。结果与NC组比较,DM组血糖、肾质量/体质量、24 h尿蛋白、Ccr、血浆与肾脏中15-F2t-Isoprostane、血浆总抗氧化浓度及P22phox与P67phox表达明显增加,而肾脏总抗氧化物浓度、血浆与肾脏SOD活性、Cu/Zn-SOD及Mn-SOD蛋白表达明显减少(P<0.05)。LY333531除对血糖与Mn-SOD的表达无显著影响外,均能显著逆转上述变化。结论 LY333531通过抑制糖尿病肾脏NADPH氧化酶的活化与表达,及促进Cu/Zn-SOD的表达而恢复SOD活性,以减少早期糖尿病肾脏的氧化损伤,从而发挥其保护肾脏作用。     

PAF通过PKCβ途径对系膜细胞分泌细胞外基质的影响

目的 探讨血小板活化因子(PAF)是否通过高糖可激活蛋白激酶C-β(PKCβ)途径调节高糖高脂环境下细胞外基质(ECM)的分泌.方法 将人肾小球系膜细胞分成6组:正常对照组、PAF组、PAF+ LY333531组、高糖高脂组、高糖高脂+ PAF组、高糖高脂+PAF+ LY333531组;ELISA法测定各组中纤维联接蛋白(Fn)及Ⅳ型胶原(ColⅣ)含量,实时定量PCR测定PKCβ Ⅰ mRNA表达水平.结果 与正常对照组比较,其他5组Fn、ColⅣ、PKCβ Ⅰ mRNA表达增加(P＜0.05);与PAF组比较,PAF+ LY333531组Fn、ColⅣ、PKCβ Ⅰ mRNA表达减少(P＜0.05);与高糖高脂+ PAF+LY333531组比较,高糖高脂组、高糖高脂+ PAF组Fn、ColⅣ、PKCβ Ⅰ mRNA表达显著增加(P＜0.05).结论 高糖高脂环境下PAF通过促进PKCβ Ⅰ表达刺激Fn、ColⅣ分泌;当加入LY333531时,ECM分泌减少,PKCβ Ⅰ抑制剂对肾脏可能具有一定的保护作用.     

蛋白激酶Cβ抑制剂LY333531对小鼠阿霉素肾病血管内皮生长因子表达的影响

目的 探讨蛋白激酶Cβ(PKCβ)抑制剂LY333531对阿霉素肾病小鼠肾脏VEGF表达和肾损害的影响.方法 30只雄性、8周龄BALB/c小鼠随机分为阿霉素肾病组、LY333531治疗组和正常对照组,阿霉素肾病组和治疗组一次性尾静脉注射阿霉素(10 mg/kg),对照组注射等量生理盐水;阿霉素注射后第5天、出现蛋白尿...     

PKC 抑制剂 LY333531对阿霉素肾病小鼠肾组织氧化应激的影响

目的：探讨PKC抑制剂LY333531对阿霉素肾病小鼠肾组织氧化应激的影响。方法建立小鼠阿霉素肾病模型,24只小鼠随机分成对照组、阿霉素肾病组和LY33353110 mg／（ kg· d）灌胃治疗组,每组8只。阿霉素肾病组和LY333531治疗组一次性尾静脉注射阿霉素（10 mg／kg）,建立小鼠阿霉素肾病模型,对照组注射等量生理盐水;阿霉素注射后第5天、出现蛋白尿时,LY333531治疗组予LY33353110 mg／（ kg· d）灌胃,阿霉素肾病组和对照组予等量溶媒灌胃。2周时处死小鼠。处死前留取血尿标本检测尿蛋白、尿肌酐和血生化。观察肾脏病理,并检测肾组织和尿中丙二醛（ MDA）含量及肾组织超氧化物歧化酶（ SOD）、过氧化氢酶（ CAT）与谷胱甘肽过氧化物酶（ GSH－PX）活性。结果 LY333531可明显抑制阿霉素肾病小鼠尿蛋白排泄。与对照组相比,阿霉素肾病组肾组织及尿MDA含量明显增加（P＜0.05,P＜0.01）,肾组织SOD、CAT、GSH－PX活性明显下降（P＜0.05,P＜0.01）;与阿霉素肾病组比较,LY333531治疗组肾组织及尿MDA含量明显降低（P＜0.05）,肾组织SOD、CAT、GSH－PX活性显著增高（P＜0.05）。结论 LY333531对阿霉素肾病小鼠肾脏有明显保护作用,其机制可能部分与抑制肾组织氧化应激有关。     

PKCβ2途径抑制药物LY333531延缓高糖诱导心肌纤维化的实验研究

目的 观察高糖对心脏成纤维细胞增殖及活化的影响及PKCβ₂途径抑制剂LY333531的干预作用。 方法 将大鼠心脏成纤维细胞在正常糖或高糖环境下培养,检测两组细胞的增殖数量、胶原蛋白的合成及PKCβ2蛋白的表达,并检测使用LY333531干预后心脏成纤维细胞增殖及活化指标的变化。 结果 高糖可使PKCβ₂蛋白表达增加,并能增加心脏成纤维细胞的增殖及Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白的合成,LY333531阻断PKCβ₂途径后可减少成纤维细胞增殖的数量及减少胶原蛋白的合成。 结论 LY333531作为干预药物抑制PKCβ₂途径可以在一定程度上延缓高糖诱导的心肌纤维化过程。     

蛋白激酶C激活与糖尿病血管并发症研究的新进展

蛋白激酶C(PKC)是一类由多种同工酶组成的丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶家族。高血糖和游离脂肪酸(FFA)可影响信号传导通路，特别是激活二酰甘油(DG)-PKC途径，PKC的激活可引起胰岛素抵抗(IR)及糖尿病血管并发症。PKC-β选择性抑制剂(LY333531)和维生素E对糖尿病血管并发症治疗方面已显示出良好的前景。     

PKC抑制剂LY333531对大鼠糖尿病模型肾组织氧化应激的影响

目的　探讨PKC抑制剂LY 3 3 3 5 3 1对大鼠糖尿病模型肾组织氧化应激的影响。方法　建立单侧肾切除糖尿病模型 ,3 0只大鼠随机分成对照组、糖尿病模型组与糖尿病LY3 3 3 5 3 1( 10mg·kg-1·d-1,灌胃 )给药组 ,每组 10只。8周末观察体重、肾重、肾重 /体重及 2 4小时尿白蛋白排泄率 (AER)变化 ,应用PAS染色观察肾组织病理变化 ,并检测肾组织与尿丙二醛 (MDA)含量及肾组织超氧化物歧化酶 (SOD)、过氧化氢酶 (CAT )与谷光甘肽过氧化物酶 (GSH -PX)活性。结果　LY3 3 3 5 3 1可明显抑制糖尿病大鼠肾重、肾重 /体重、AER及肾小球面积 (AG)、肾小球容量 (VG)及系膜区面积 (AM)的增加。与对照组相比 ,糖尿病模型组肾组织及尿MDA含量明显增加 ,肾组织SOD、CAT、GSH -PX活性明显下降 ;与糖尿病模型组比较 ,LY3 3 3 5 3 1给药组肾组织及尿MDA含量明显降低 (P均 <0 .0 5 ) ,肾组织SOD、CAT、GSH -PX活性显著增高(P均 <0 .0 5 )。结论　LY3 3 3 5 3 1对糖尿病大鼠肾脏有明显保护作用 ,其机制可能部分与抑制肾组织氧化应激有关。     

利拉鲁肽对糖尿病肾病大鼠肾脏功能和足细胞损伤的改善作用及其机制

目的:观察利拉鲁肽对糖尿病肾病(DN)大鼠肾脏功能和足细胞相关蛋白表达及病理形态表现的影响,并探讨其作用机制.方法:48只雄性SD大鼠随机选取12只作为正常对照组,其余36只大鼠采用腹腔注射链脲佐菌素(STZ)的方法制备糖尿病模型,随机分为模型组(n=12)、利拉鲁肽组(n=12)和利拉鲁肽+LY294002组(n=1...     

促红细胞生成素对大鼠再灌注心律失常的影响

目的 观察促红细胞生成素(EPO)对大鼠再灌注心律失常的影响,并对其机制进行初步探讨.方法 以左冠状动脉前降支(LAD)穿线结扎法制备心肌缺血模型,松开结扎线造成再灌注.45只SD大鼠随机分成5组:①假手术(SHAM)组、②缺血再灌注(IR)组、③磷脂酰肌醇-3-激酶(P13K)的高选择性阻断剂LY294002(LY)组、④促红细胞生成素(EPO)组和⑤促红细胞生成素+LY294002(EPO+LY)组.观察各组大鼠在整个缺血再灌注期间心律失常发生情况,进行室性心律失常评分;检测血清肌酸磷酸激酶同功酶MB(CK-MB)和肌钙蛋白l(cTnI)水平;以硫代巴比妥酸显色法测定心肌组织丙二醛(MDA)的含量;以黄嘌呤氧化酶法测定心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)的含量.结果 EPO组的心律失常评分明显低于IR、LY和EPO+LY组,差异有统计学意义(P<0.05);EPO血清CK-MB和cTnI水平组明显低于于IR、LY和EPO+LY组(P<0.001);EPO组SOD含量明湿高于IR、LY和EP0+LY组,差异有统汁学意义(P<0.001);EPO组MDA含量明显低于IR、LY和EPO+LY组,差异有统计学意义(P<0.001).结论 EP0 1000mg/kg再灌注前给药能有效降低大鼠再灌注心律失常的发生率,但此作用可被预先给予的LY294002所减弱,其作用机制与抗氧化作用有关,PI3K/AKt通路参与其信号转导.     

熊果酸(UA)对大鼠活化型肝星状细胞(HSC)的NADPH氧化酶(NOX)亚基及PI3K/Akt、P38MAPK信号通路活化的影响

 目的  观察熊果酸(ursolic acid,UA)对大鼠活化型肝星状细胞-6 (hepatic stellate cell T6,HSC-T6) NADPH氧化酶(NAPDH oxidase,NOX)亚基及其调控的磷脂酰肌醇-3-羟激酶/蛋白激酶(phosphatidyl inositol 3-kinase/Akt,PI3K/Akt)、P38丝裂原活化蛋白激酶(P38 mitogen activated protein kinase,P38MAPK)信号通路及其对基质金属蛋白酶组织抑制剂-1 (tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)、基质金属蛋白酶-1(metal matrix proteinase -1,MMP-1)蛋白表达的影响,并探讨其机制。方法  取对数生长期的HSC-T6细胞,随机分成6组:空白对照组、瘦素组(100 ng/mL)、UA干预组(UA 50 μmol/L+瘦素)、NOX抑制剂DPI干预组(DPI 20 μmol/L+瘦素)、P38MAPK抑制剂SB203580干预组(SB203580 10 μmol/L+瘦素)及PI3K抑制剂LY294002干预组(LY294002 10 μmol/L+瘦素)。采用Western blot法分别检测NOX亚基gp91phox、p22phox、p67phox、Rac1蛋白表达;信号通路PI3K、Akt、P38MAPK的活化及TIMP 1、MMP 1蛋白表达。结果  UA能显著抑制瘦素诱导的gp91phox、 p22phox、p67phox、Rac1蛋白表达(P均<0.01),但UA对gp91phox、p67phox蛋白表达的抑制作用不及DPI和LY294002。UA能抑制瘦素诱导的PI3K蛋白表达及Akt、P38MAPK蛋白磷酸化(P均<0.01),与DPI及LY294002作用的差异无统计学意义。UA能抑制瘦素诱导的TIMP-1蛋白表达,同时促进MMP-1蛋白表达(P均<0.01)。结论  UA能抑制瘦素诱导的大鼠HSC T6细胞NOX亚基gp91phox、p22phox、p67phox、Rac1表达及PI3K/Akt、P38MAPK信号通路的活化;其下调TIMP-1蛋白及上调MMP-1蛋白表达的机制可能与UA抑制NOX调控的PI3K/Akt及P38MAPK信号通路有关。     

糖尿病鼠早期心脏抗氧化能力及心功能改变与脂质过氧化反应的关系

目的:建立大鼠1型糖尿病模型,探讨糖尿病早期心脏抗氧化能力及心功能改变与氧自由基所致脂质过氧化反应的关系。方法:Wistar鼠16只,体重(250±10)g,随机分为对照组(n=8)及糖尿病组(n=8)。糖尿病模型通过尾静脉注射链脲佐菌素(60 mg/kg)制备。成功制备糖尿病模型后4周观察心脏功能、心肌总抗氧化能力及脂质过氧化产物15-F2t-Isoprostane变化及血清总抗氧化浓度。结果:与对照组相比,4周糖尿病鼠血清及心脏15-F2t-Isoprostane浓度无差异,但糖尿病鼠心脏组织在抗氧化剂t-butylhydroperoxide(t-BHP)刺激下,硫代巴比妥酸反应物质(TBARS)产物显著增强,反映心脏抗氧化能力降低,同时伴有心脏射血分数的显著下降(P<0.05)。结论:糖尿病鼠早期心脏抗氧化能力及心功能的减退早于脂质过氧化损伤的增加。     

NADPH氧化酶p22phox与非瓣膜性心衰左室重量指数的相关性分析

目的研究非瓣膜性慢性心衰患者吞噬细胞NADPH氧化酶p22phox表达与左室重量指数的相关性,初步探讨该途径导
致的氧化应激在非瓣膜性慢性心衰左室重构中的作用。方法收集59例非瓣膜性慢性心衰患者作为心衰组,20例健康体检者
为健康对照组。心衰组（HF）患者根据有无左室肥厚(LVM),分为单纯心衰组和心衰合并左室肥厚组。计算其体表面积（BSA）
及体质指数（BMI）,抽取其空腹外周静脉血,收集吞噬细胞,提取总RNA,进行RT-PCR反应,得到p22phox的最终表达量。同时
进行血清高敏C反应蛋白（hs-CRP）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇
（HDL-C）、尿素氮（BUN）、肌酐（CR）、尿酸（UA）测定。测量并记录左室舒张末期内径（LVEDd）、左室收缩末期内径（LVEDs）、
室间隔厚度（IVST）、左室后壁厚度（LVPWT）、EF值等参数,计算左室质量指数（LVMI）。结果心衰组p22phox表达水平（0.91±
0.37）较对照组（0.68±0.33）表达增高,差别有统计学意义（P=0.039,P<0.05）;心衰合并左室肥厚组（1.58±0.20）较单纯心衰组
p22phox水平（0.71±0.24）增高,差别有统计学意义（P=0.026,P<0.05）;p22phox与LVMI呈正相关关系（r=0.508,P<0.05）。结论
NADPH氧化酶p22phox与非瓣膜性心衰左室质量指数呈正相关性,在一定程度上可提示左室重构的水平。
     

延边地区朝鲜族糖尿病肾病患者NADPH氧化酶p22phox亚基C242T基因多态性的相关性研究

目的:研究延边地区朝鲜族糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)患者NADPH氧化酶p22phox亚基242位点基因多态性分布,探讨延边地区朝鲜族DN患者该基因多态性与DN发病相关情况。方法:应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术对延边地区人群中186例朝鲜族DN患者及139名朝鲜族正常对照组者NADPH氧化酶p22phox亚基242位点进行基因型分析,并将住院治疗的186例朝鲜族DN患者分为男性和女性两组,分析两者基因型频率、等位基因频率的差异。结果:①NADPH氧化酶p22phox亚基C242T基因多态性在朝鲜族正常对照组和朝鲜族DN患者中的分布差异无统计学意义(χ2=1.854,P>0.05);②在男性和女性DN的患者中,NADPH氧化酶p22phox亚基242位点纯合子CC基因频率与杂合子CT及纯合子TT基因频率相比,差异有统计学意义(χ2=5.278,P<0.05);结论:①NADPH氧化酶p22phox亚基C242T基因多态性与延边朝鲜族DN患者的发病无关;②CC纯合子基因可能是男性朝鲜族DN患者的易感基因。     

不同活性氧产生途径对高糖诱导内皮细胞活性氧生成及高糖对细胞凋亡的影响

目的探讨不同活性氧产生途径对高糖诱导的内皮细胞活性氧生成的影响以及高糖对内皮细胞凋亡的影响。方法本实验分为正常对照组、高糖处理组、DPI处理组、别嘌呤醇处理组、鱼藤酮处理组和吲哚美辛处理组。用流式细胞仪检测各组细胞内活性氧的浓度;流式细胞仪及Hochest染色检测细胞凋亡;Western blot法检测NADPH氧化酶(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase)亚单位NOX2、NOX4、p22phox、p47phox、p67phox及rac的蛋白表达。结果与对照组相比,高糖组、别嘌呤醇处理组、鱼藤酮处理组和吲哚美辛处理组内皮细胞活性氧的生成明显增高,而DPI处理组内皮细胞活性氧的生成与对照组差异无统计学意义;与高糖组相比,DPI处理组内皮细胞活性氧的生成明显减少;而别嘌呤醇处理组、鱼藤酮处理组和吲哚美辛处理组与高糖组相比差异无统计学意义。与正常对照组相比,高糖处理组细胞NOX4蛋白表达显著增高,而NOX2、p47phox、p67phox、p22phox和Rac表达差异无统计学意义。与对照组相比,高糖处理组细胞凋亡比例显著增高。结论高糖可能通过增加活性氧的生成诱导内皮细胞的凋亡,其中NADPH氧化酶可能为内皮细胞活性氧产生的主要来源。     

NADPH氧化酶gp91phox与核因子-κB在子痫前期胎盘中的表达

目的 观察子痫前期患者胎盘NADPH氧化酶与NF-κB的变化,探讨二者在子痫前期的发生发展中的作用及相关性.方法 采用免疫组织化学和RT-PCR方法检测25例子痫前期患者(子痫前期组,其中轻度组15例,重度组10例)和25例正常足月孕妇(正常组)胎盘组织中的NADPH氧化酶gp91phox亚基及NF-κB p65亚基的...     

NADPH氧化酶在人真皮成纤维细胞氧化应激损伤中的作用

目的探讨NADPH氧化酶在人真皮成纤维细胞氧化应激损伤中的作用。方法H2O2 构建氧化应激模型,将实验分为正常 组、氧化损伤组和NADPH氧化酶抑制剂（DPI）组,MTT检测细胞活力,DCFH-DA 荧光探针检测细胞内活性氧（ROS）改变, Western blot分析NADPH氧化酶胞膜亚基gp91phox表达变化。结果H2O2 对成纤维细胞的氧化损伤呈时间和浓度依赖,H2O2 700 μmol/L处理24 h后细胞活力下降约40%（P<0.05）,ROS升高2倍（P<0.05）。而抑制剂组细胞活力较氧化损伤组增加20% （P<0.05）,ROS下降至正常水平（P<0.05）。Western blotting结果显示氧化损伤组gp91phox表达随H2O2 浓度逐渐升高,而抑制 剂组表达接近正常水平。结论H2O2 可通过影响NADPH氧化酶特别是胞膜亚基gp91phox引发成纤维细胞氧化损伤。