精子冻存技术及上游法精子处理技术对精子DNA完整性的影响

目的通过对冷冻前后及精子处理前后精子DNA完整性的比较,探讨冷冻技术、冷冻时间及上游法精子处理技术对精子DNA完整性的影响。方法（1）精液常规检测正常的患者30例,手淫法取精,精液液化混匀后分4份,分别用于精子染色质扩散（SCD）实验检测精子DNA完整性、上游法处理精液、以及两组冻存实验（不加保护剂直接冻存的为冻存1组;添加蛋黄葡萄糖保护剂冻存的为冻存2组）;（2）上游法处理后的精液一部分用于检测精子动力和形态,一部分用于精子DNA完整性检测;（3）冻存1组分别于冻存第7天和第90天解冻,SCD实验检测精子DNA完整性;（4）冻存2组分别于第7天和第90天解冻,0．1ml用于精子DNA完整性检测,剩余精液应用上游法处理,检测上游处理前后精子DNA的完整性。结果（1）冻存1组中,冻存90d后解冻的精子DNA损伤率[（25．6土7．3）％]显著高于冻存7d者[（22．4±7．4）％]（P〈0．05）,且均显著高于新鲜精液的精子DNA损伤率[（20．6±7．3）％]（P〈O．05）;冻存2组中,冻存90d后精子DNA损伤率显著高于冻存7d者[（25．9±7．2）％VS．（23．6土7．8）％]（P〈O．05）,且均显著高于新鲜精液（P〈0．05）;而冻存7d和90d后,两个冻存组间比较,精子DNA损伤率均无显著差异（P〉0．05）。（2）新鲜精液经上游法处理后,精子DNA损伤率由处理前的（20．6±7．3）％降为（6．4±2．5）％（P〈O．05）;冻存2组中精液冻存7d和90d后复苏上游法处理后,精子DNA损伤率较未经上游法处理者均显著降低[分别为（9．38±2．8）％VS．（23．6±7．8）％和（9．7±2．6）％VS．（25．9±7．2）％]（P％0．05）。结论冻存对精子DNA有损伤,冻存时间对于精子DNA完整性有影响。不添加保护剂直接冻存和添加保护剂对精子DNA完整性的影响无显著差异。不论是新鲜精液还是冻存复苏精液,上游法处理并不会增加精子DNA的损伤,且有利于筛选出具有更好DNA完整性的精子。     

不良生活习惯对精子DNA碎片的影响

目的分析吸烟、喝酒、桑拿生活习惯对精子DNA碎片化的影响,寻找不育症患者的不育影响因素。方法在113例门诊患者中,77例男性不育症患者分为3组;A组为有吸烟/喝酒习惯31人,B组为有桑拿习惯21人,C组为其他不育症25人。另外D组为生育能力正常36人。应用精子染色质结构分析(SCSA)检测以上各组的精子DNA碎片化指数(DFI),分别比较各组间的差异。结果精子DNA碎片化指数(DFI):A组为(29.03±11.41)%、B组为(28.12±9.56)%、C组为(24.08±6.27)%、D组为(14.87±3.54)%。A、B组分别高于C组,A、B组间比较差异无统计意义(P0.05),A、B组分别与C组比较有差异(P0.05);A、B、C组分别与D组比较差异有显著性意义(P0.01)。结论男性不育症患者精子DNA碎片化指数(DFI)与正常生育人群有显著性差异,不良生活习惯会加重精子DNA碎片化指数(DFI),可能是引起男性不育的因素。     

精子DNA碎片检测的临床专家共识

精子DNA碎片(sperm DNA fragmentation, SDF)在男性不育症中发生率较高。SDF常伴发少、弱精子症,也可发生于常规精液指标正常的不育症患者。其发生机制包括精子成熟障碍、凋亡异常和氧化应激过高等。由于很多文献报道其与自然妊娠和辅助生殖技术结局存在负相关,SDF检测已在男性不育症和辅助生殖技术中得到越来越广泛的应用。本专家共识复习和评估了SDF相关文献,对SDF的危险因素、检测方法、临床意义和处理等提出2项良好实践要点和9项推荐建议。本共识大部分推荐建议的证据和级别属于低或中等,表明仍需要进一步的研究证实临床应用SDF检测的价值。     

精子DNA碎片指数对精子冷冻复苏率的影响

目的比较不同精子DNA碎片指数(DNA fragmentation index,DFI)的精子冷冻前后的浓度、活力变化及复苏率,明确DFI对精子冷冻的影响。方法 2017年在上海市第一妇婴保健院生殖中心行体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization and embryo transfer,IVF-ET)的患者中,自精冻精患者共55例,男方通过病史询问、生殖系统超声检查、染色体检查排除遗传及其他因素,入组排除因严重少弱精子症和隐匿精子症冻精的患者,入组患者36例,按DFI≥27%和DFI27%分为两组。比较两组患者精子冷冻前后的精子浓度、活力差以及复苏率。结果 36例患者分为DFI≥27%组11例,DFI27%组25例。两组间年龄、不育年限和精子形态率等一般情况比较差异无统计学意义(P=0.29;P=0.77;P=0.28)。两组间精子冷冻前后的浓度变化、活力变化及前向运动精子(PR)总数变化的差异均无统计学意义(P=0.07;P=0.76;P=0.58),比较两组冷冻复苏率差异无统计学意义(P=0.52)。结论不同DNA碎片率的精子冷冻解冻后的浓度、活力变化以及冷冻复苏率并没有显著差异,DFI异常不是精子冷冻的禁忌证。     

精子DNA碎片指数和精子畸形率对ICSI临床结局的影响

目的:通过评估ICSI治疗前的精子畸形率(SMR)和精子DNA碎片指数(DFI),探讨精子DFI和SMR对卵胞浆内单精子注射(ICSI)助孕结局的影响。方法:共入组79对因少弱精子症实施第一周期ICSI治疗的不孕夫妇,在进入治疗周期前3⁶个月,评价精子浓度、前向运动精子百分率、SMR及DFI。主要观察SMR和DFI与ICSI结局参数的关系。结果:79例少弱精子症患者DFI正常51例,异常28例,异常组的DFI值明显升高(14.18%vs 41.47%);巧合的是,SMR正常组同样为51例,异常组28例,异常组的SMR值亦明显升高(87.88%vs98.46%)。按DFI正常(DFI≤25%)与异常(DFI>25%)分组,或按SMR正常(≤96%)与异常(>96%)分组,组间的双方年龄、女方BMI、获卵数、移植胚胎数等基本情况差异无统计学意义。DFI正常和异常组间,SMR正常和异常组间的受精卵子数、可移植胚胎数、早期流产率无显著差异;异常组生化妊娠率(43.5%vs 61.5%)和临床妊娠率(39.1%vs 56.4%)降低,但差异无统计学意义(P=0.19及0.10)。精子DFI与SMR呈显著正相关(r=0.231,P<0.05)。结论:精子DFI增高(>25%),与按严格标准检测的SMR增高(>96%)男性行ICSI治疗,生化妊娠率和临床妊娠率降低,但与正常者比较未发现有统计学差异,可能与样本量小有关,有必要深入研究。     

精子DNA碎片及其在不育症诊治中的应用

精子DNA碎片(SDF)是近年来国内外生殖医学领域研究的热点,随着大量实验研究和临床研究的开展,SDF对于男性生殖能力具有重大影响已成为学术界的共识。但是,SDF产生机制不明确,治疗手段也较为有限,同时关于SDF的众多问题仍然存在较大争议,本文从SDF的产生机制、临床意义、检测方法和治疗手段4个方面对SDF的发展及应用现状予以综述,以利于对SDF进一步的深入研究。     

精子DNA碎片与复发性流产相关性的系统评价

目的系统评价精子DNA碎片与复发性流产之间的相关性。方法以"Sperm DNA integrity","The sperm DNA integrity","sperm DNA fragmentation index","sperm DNA fragmentation","SDF","DFI","Habitual Abortion","Habitual Abortions","Miscarriage,Recurrent","Recurrent Miscarriage","Recurrent Miscarriages","Abortion,Recurrent","Recurrent Abortion","Recurrent Abortions","Recurrent Early Pregnancy Loss","recurrent spontaneous abortion"为主题词及自由词检索PubMed、The Cochrane Library、Embase、Web of science,检索时间为各数据库建库至2019年7月10日,对最终纳入的非随机对照研究根据纽卡斯尔-渥太华评分(NOS)进行质量评价,运用系统评价方法阐明两者之间的相关性。结果经过仔细的搜索和排除后,最后纳入28篇非随机对照研究。结果显示:应用Acridine orange test(AO)、Comet assay(Comet)、Sperm Chromatin Structure assay(SCSA)、Sperm Chromatin Dispersion(SCD)、The terminal deoxyuridine nick labeling assay(TUNEL)方法测定精子DNA碎片,复发性流产与精子DNA碎片存在明显的相关性。结论复发性流产患者配偶精子DNA碎片指数是高于配偶无复发性流产史的正常生育男性。     

精索静脉高位结扎术对精子DNA碎片的影响

目的:探讨精索静脉高位结扎术对精子DNA碎片影响及手术效果的评价。方法:精索静脉曲张(Varicocele,VC)患者34例,均行精索静脉高位结扎术。术前和术后3个月按WHO推荐方法进行精子运动指标(10项)、精子巴氏染色形态分析和精子DNA碎片分析检测。结果:VC患者术后正常精子形态比例明显高于术前,有显著性差异(P<0.01),术后精子DNA碎片比率、精子畸形指数(Sperm deformity index,SDI)和多种异常指数(Multiple anomalies index,MAI)均明显低于术前,有显著性差异(P<0.01);术后精子浓度、b级精子率均较术前升高,有显著性差异(P<0.05);术后a级精子比率、(a+b)级精子比率均比术前明显升高,有显著性差异(P<0.01)。VCⅠ级、Ⅱ级、Ⅲ级组术后精子DNA碎片比率均较术前明显降低,差异有统计学意义(P<0.01);亚临床型VC组术后精子DNA碎片比率与术前无显著差异(P>0.05)。VC术后大晕环精子比率较术前明显增多,有显著性差异(P<0.01);术后中晕环、小晕环、无晕环精子比率均较术前降低,有显著性差异(P<0.01)。结论:行精索静脉高位结扎术能有效改善VC患者的精子质量。     

精子DNA碎片指数与精液参数的相关性分析

目的:探讨精子DNA碎片指数(DFI)与精液参数的关系,并评价其在男性精子质量评估中的应用价值。方法:收集9 694例男性精液标本,采用流式细胞仪辅助的精子染色质结构分析法(SCSA)进行精子DFI和高DNA着色性(HDS)检测,根据WHO《人类精液检查与处理实验室手册》(第5版)精液参数参考值标准分为正常组和异常组,异常组再依据精子浓度、精子总活率和前向运动精子百分率异常程度分为A组:精子浓度(11.3～14.0)×10~6/ml,精子总活率30%～39%,前向运动精子百分率24%～31%;B组:精子浓度(7.5～11.2)×10~6/ml,精子总活率20%～29%,前向运动精子百分率16%～23%;C组:精子浓度(3.8～7.4)×10~6/ml,精子总活率10%～19%,前向运动精子百分率8%～15%;D组:精子浓度(0～3.7)×10~6/ml,精子总活率0～9%,前向运动精子百分率0～7%;按照不同DFI值分为15%、15%～30%和30%3组。分析DFI与精液参数的关系。结果:正常组DFI均显著低于异常组及其亚组(P均0.01);各异常亚组(A、B、C、D组)随着精子指标的降低DFI逐渐升高(P0.01)。根据DFI分组,发现DFI与年龄、禁欲时间、精液体积、精液pH、精子浓度、精子总活率、前向运动精子百分率、正常形态精子百分率以及HDS的差异均有统计学意义(P均0.01);相关性分析表明DFI与年龄、禁欲时间、精液体积和HDS存在正相关(r分别为0.15、0.10、0.05、0.15,P均0.01),而与精液pH、精子浓度、精子总活率、前向运动精子百分率和正常形态精子百分率存在负相关(r分别为-0.06、-0.27、-0.53、-0.52、-0.16,P均0.01)。多重线性回归分析表明精子总活率、精子浓度、年龄、禁欲时间和精液pH是与DFI相关的5个重要相关变量,标准化回归系数分别为-0.47、-0.19、0.12、0.07、-0.04,P均0.01。结论:DFI与精液参数存在中等相关性,二者可协同评估男性精子质量。     

精子DNA碎片对PGT囊胚染色体异常的影响

大约10％的家庭受到不孕不育的困扰,不孕症已是当前非常普遍的医学和社会问题,影响不孕的因素举不胜数,其中精子的DNA质量是胚胎DNA完整性的重要因素,也是与不孕不育息息相关的.目前对男性精液质量的评估主要在精子数量、活力、形态等方面,精子DNA碎片也是精子比较常见的异常,是最近备受关注的一个不育因素.文献显示精子DNA...     

精子DNA碎片对体外受精-胚胎移植胚胎发育的影响

正近来有研究发现,男性生育能力可能会随精子DNA碎片指数(DNA fragmentation index,DFI)的升高而下降,且无论在自然受孕还是通过辅助生殖技术(ART)助孕时均有体现[1-2],精子DFI被认为是较常规精液参数更为有效的男性不育指标[3]。人类胚胎最早期发育由母源mRNA调控,来自胚胎的基因组到4细胞期才被激活,来自父源基因的影响在6~8细胞期才能体现,因而大部分学者认为精子     

不育男性精子DNA碎片指数与年龄和精液参数相关性分析

目的:通过对男性不育患者进行精子染色质结构分析(SCSA),探讨精子DNA碎片指数(DFI)与不育患者年龄、精子浓度及精子活率之间的关系。方法:531份精液样本来自2016年1月至2017年6月在武汉同济生殖医学专科医院就诊的男性不育患者。用计算机辅助精液分析系统(CASA)对精子浓度、活率和精液体积等参数进行常规分析,同时利用流式细胞术检测精子DFI,并分析精子DFI与受检者的年龄、精子浓度及精子活率的相关性。结果:随着患者年龄的增加,患者中精子DFI≤15%的比例明显减少,精子DFI≥25%的比例明显增加,21~30岁、31~40岁、41~52岁年龄组患者精子DFI≤15%分别为83.8%、47.8%、20.3%,精子DFI≥25%分别为8.8%、14.5%、72.9%,相关性分析表明患者年龄与精子DFI成正相关关系(r=0.653,P0.01)。而随着患者精子浓度和精子活率的增加,患者中精子DFI≤15%的比例明显增加,15%精子DFI25%和精子DFI≥25%的比例明显减少,相关性分析表明精子浓度、精子活率分别与精子DFI成负相关(r=-0.246,P0.01;r=-0.406,P0.01)。结论:精液中精子DFI与患者年龄、精子浓度及精子活率均显著相关,精子DFI可以作为评估精液质量的一个重要指标。综合分析精子DFI及精液常规参数能够对男性生育力进行更全面的评估。     

精子DNA碎片指数对精子优化处理后IUI临床结局的影响

<正>近年来不孕不育发病率呈上升趋势,相关研究发现约有50%的不育因素由男性导致[1]。男性不育原因有很多,包括染色体异常、内分泌因素、精索静脉曲张、生殖系统感染或输精管梗阻等,但最终回归到精子的数量和质量方面。以往,男性生育力检查和评估主要依赖于精子浓度、精子活力、精子形态     

男性年龄与精子顶体酶活性及精子DNA碎片指数的相关性分析

目的探讨男性年龄与精子顶体酶活性、精子DNA碎片指数(DFI)的相关性。方法选取2016年1~8月在我院生殖医学中心就诊的436例不育症男性患者为研究对象,所有患者均行精液常规检查、精子顶体酶活性检查和(或)精子DFI分析。将患者按年龄分为<30岁、30~39岁、≥40岁3组,分析各组的精液常规、顶体酶活性及精子核DFI的差异及其相关性。结果不同年龄段患者的体重指数(BMI)、禁欲天数、精液量无显著性差异(P>0.05);年龄≥40岁组患者的前向运动精子百分率、活动精子百分率及精子顶体酶活性显著低于<30岁和30~39岁组(P<0.05);≥40岁组患者的精子DFI显著高于<30岁和30~39岁组(P<0.05)。年龄与前向运动精子百分率及活动精子百分率之间呈负相关(P<0.05),但是相关性较弱。精子顶体酶活性与精子正常形态率、前向运动精子百分率、非前向运动精子百分率、活动精子百分率呈正相关(P<0.05);精子DFI与年龄、禁欲天数、前向运动精子百分率呈正相关(P<0.01),与精液量、精子浓度、活动精子百分率呈负相关(P<0.05);精子顶体酶活性和DFI之间无相关性(P>0.05)。结论年龄增长会导致精液前向运动精子百分率、活动精子百分率、精子顶体酶活性、DFI等参数改变,直接或间接影响男性生育力。说明年龄对男性不育的影响是多方面的,建议有生育需求的大龄(≥40岁)男性尽早进行生育咨询与评估。     

少弱精子症患者同型半胱氨酸水平与精子DNA碎片指数相关性研究

正男性因素导致的不育占不育症的比例约为30%~55%[1]。现有资料提示,弱精子症男性的血清同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)浓度明显高于正常男性,精液中的Hcy水平升高可以造成精液质量的降低[2-3]。研究表明[4-5],精子DNA碎片指数(DNA fragmentation index,DFI)增高与复发性流产有密切关系,虽然DNA受损的精子可以正常受精、     

精子DNA碎片指数与精液参数相关性的初步研究

目的研究精子DNA碎片指数(DNA fragmentation index,DFI)与精液参数的关系以及精子DFI在评价男性生育力方面的应用价值。方法收集3020例男性患者精液标本,采用吖啶橙染色配合流式细胞仪技术检测DFI,同时通过计算机辅助精液分析系统(CASA)检测精子浓度、前向运动精子百分率(PR,%)、精子总活力[PR+NP(非前向运动精子)%]、精子总数和精液量(用称量法测定精液体积)。结果精子浓度与DFI值无明显关系(r=0.003,P0.05)。精液量和DFI值有明显关系(r=0.078,P0.01),精子总活力和DFI值有明显关系(r=-0.447,P0.01)。PR和DFI值有明显关系(r=-0.444,P0.01),精子总数和DFI值有明显关系(r=0.069,P0.01),差异均具有统计学意义。结论精子DNA碎片指数与精液量、精子总数存在明显正相关,与精子总活力、前向运动精子百分率呈明显负相关。在一定程度上反映了精液参数可以为评价精子DNA完整性提供参考。     

精子DNA碎片对体外受精-胚胎移植妊娠结局的影响

目的比较不同精子DNA碎片指数(DFI)时胚胎发育和妊娠结局的差异,探讨精子DNA碎片对辅助生殖结局的影响。方法回顾性分析2016年10月至2018年12月在本院生殖医学中心接受体外受精-胚胎移植(IVF-ET)的年龄小于37岁且卵巢储备功能正常的1 041例患者的临床资料,根据男方入院时生育力评估检测的DFI值分为4组:DFI10%组(n=277)、10%≤DFI20%组(n=480)、20%≤DFI30%组(n=183)及DFI≥30%组(n=101),比较各组患者的年龄、获卵数、胚胎受精率、优质胚胎率及妊娠率和流产率等。结果 4组间获卵数、MⅡ卵率及卵裂率比较无显著性差异(P0.05)。10%≤DFI20%组的受精率(81.04%)显著低于DFI10%组(83.39%)和20%≤DFI30%组(83.59%)(P0.05)。优质胚胎率随着DFI升高呈现下降趋势,DFI10%组(44.87%)显著高于10%≤DFI20%组(41.21%)及DFI≥30%组(37.51%)(P0.05)。4组间的临床妊娠率及流产率比较均无显著性差异(P0.05)。结论对于年龄小于37岁、接受IVF的女性患者,DFI的升高会对优质胚胎率产生不良影响,但对临床妊娠结局未见明显影响。     

精子DNA碎片指数与IVF/ICSI结局的相关性

目的分析精子DNA碎片指数(DFI)与IVF/ICSI治疗结局的相关性,探讨精子DNA损伤对IVF与ICSI治疗结局的影响。方法回顾性分析2017年1～12月在本院生殖中心行常规IVF治疗的134个鲜胚移植周期和行ICSI治疗的177个鲜胚移植周期。在行IVF或ICSI治疗前,男方同时行精液常规检查和DFI检测;根据DFI参考值将患者分为DFI≤30%组和DFI30%组,比较两组间的基础数据、精液常规参数、IVF或ICSI治疗后的胚胎发育与临床结局。结果在IVF周期与ICSI周期,DFI30%组的男方年龄、前向运动精子百分率和活动精子百分率均显著低于DFI≤30%组(P0.05),DFI与这3项参数呈负相关(P0.05)。在ICSI周期中,DFI30%组的精子浓度、非前向运动精子百分率和正常形态精子百分率也显著低于DFI≤30%组(P0.05),DFI与这3项参数均呈负相关(P0.05)。在IVF周期,DFI30%组的受精率与卵裂率均显著低于DFI≤30%组(P0.05),DFI与这两项参数均呈负相关(P0.05);在ICSI周期,DFI30%组的优胚率显著低于DFI≤30%组(P0.05),但DFI与优胚率无相关性(P0.05)。IVF治疗或ICSI治疗后,不同DFI水平的临床妊娠率无显著差异(P0.05);DFI30%组的流产率虽然高于DFI≤30%组,但无显著差异(P0.05)。结论 DFI与前向运动精子百分率呈显著负相关,提示精子DNA损伤可能影响精子前向运动功能;精子DNA损伤可能影响IVF与ICSI治疗的早期胚胎发育,但对IVF与ICSI治疗的临床妊娠结局的预测作用有限。     

精子染色质扩散实验检测精索静脉曲张及不明原因不育患者精子DNA碎片

目的了解精索静脉曲张(VC)及不明原因不育患者精子DNA碎片的发生比例。方法改进的精子染色质扩散(SCD)实验分析精子DNA碎片。检测VC不育患者39例,不明原因不育患者57例。以生育健康成年男性32例为对照组。结果VC不育患者SCD小光晕和无光晕精子(精子DNA碎片)比值平均为(36.6±18.9)%,VC不育组明显高于对照组(12.1±5.2)%(P<0.001),而大光晕和中光晕精子比值VC不育组明显低于对照组(P<0.01);不明原因不育患者精子DNA碎片比值平均为(26.8±10.2)%,与对照组[(12.1±5.2)%]比较有显著性差异(P<0.001)。结论SCD实验表明,VC及不明原因不育患者精子DNA碎片比值增高。     

精子DNA碎片指数与IVF/ICSI成功率的关系

精子DNA碎片指数(DFI)是指发生DNA链断裂的精子占全部精子的百分比。已有的一些研究显示,高DFI可能会导致男性不育或者女性早期流产。目前已有一些研究显示,DFI升高可导致自然妊娠率降低及早期自然流产率升高,并且在辅助生殖过程中,高DFI的患者更容易失败。此外,对高DFI患者已有初步的治疗方案或预防方法。本文综述了DFI对自然妊娠以及IVF/ICSI妊娠结局的影响以及对DFI增高的治疗方法的研究现状与进展。