PPAR-γ对放射诱导成纤维细胞分泌PAI-1和TGF-β的影响

目的 分析过氧化物酶增殖体活化受体-γ(PPAR-γ)配体(匹格列酮)对X射线诱导纤溶酶原抑制物-1(PAI-1)、转化生长因子-β(TGF-β)在小鼠肺成纤维细胞(L929细胞)中的mRNA表达和L929细胞增殖活性的影响.方法 用RT-PCR证实L929细胞表达PPAR-γmRNA.分别采用10、4、2 GyX射线照射L929细胞,观察照射前后PAI-1、TGF-βmRNA的表达情况.照射+匹格列酮处理L929细胞,用RT-PCR方法观察对PAI-1、TGF-βmRNA的表达影响,用MTT法观察对细胞增殖活性影响.结果 RT-PCR检测结果显示10 Gy照射48 h后L929细胞中PAI-1、TGF-βmRNA表达明显升高[0.18∶0.78、0.22∶0.76(F=3.70,P=0.010)],2 Gy和4 Gy有类似趋势[0.18∶0.43、0.18∶0.44和0.22∶0.39、0.22∶0.40(F=3.40,P=0.090)];10 Gy照射+匹格列酮48 h后明显降低[0.78∶0.45、0.76∶0.54(F=3.90,P=0.010)],2 Gy和4 Gy的也有类似趋势[0.43∶0.37、0.44∶0.35和0.39∶0.32、0.40∶0.32(F=2.40,P=0.210)].MTT结果显示与空白对照比较2、4、10 Gy照射和单用匹格列酮均会抑制L929细胞增殖[0.44∶0.39、0.36、0.34和0.32(F=3.90,P=0.040)],2、4、10 Gy照射+匹格列酮更能抑制L929细胞增殖[0.44∶0.27、0.26、0.25(F=2.50,P=0.005)].结论 X射线照射L929细胞后出现促纤维化因子PM-1、TGF-β表达升高.匹格列酮使PAI-1、TGF-β高表达降低,也会抑制成纤维细胞的增殖.

Abstract：

Objective To observe the influence of peroxisome proliferator activated receptor-γligand (PPAR-γ, pioglatazone) on expression of PAI-1 and TGF-β mRNA and proliferation in fibroblast cells before and after X-ray radiation, and to study the effect of PPAR-γon normal cells during radiation induced fibrosis process. Methods RT-PCR method was used to measure PPAR-γgene expression in L929 cells.After X-ray irradiation of 10 Gy,4 Gy or 2 Gy, the expressions of PAI-1 and TGF-β mRNA in mouse lung fibroblast cells (L929) were measured using RT-PCR. After X-ray irradiation and pioglatazone treatment,the influence of pioglatazone on PAI-1 and TGF-β was measured using RT-PCR method. MTT method was used to test cell proliferation after the treatment of irradiation and pioglatazone. Results PPAR-γ mRNA expression was observed in L929 cells. Expression of PAI-1 and TGF-β mRNA reached the highest level 483.40,P =0. 090) ). At 48 h after the treatment of pioglatazone and 10 Gy radiation, pioglatazone decreased 0. 36, 0. 34 and 0. 32( F = 3.90, P = 0. 040) ). The inhibitory effect was significantly increased when L9292. 50,P =0. 005)). Conclusions X-ray irradiation can increase the expression of PAI-1 and TGF-β in L929 cells. Pioglatazone can decrease the expression of radiation-induced PAI-1 and TGF-β, and restrain the fibroblast proliferation.     

X线照射对不同放射敏感性鼻咽癌细胞中ATM mRNA表达的影响

[目的]研究X线照射对鼻咽癌细胞株CNE1、CNE2中ATM mRNA表达水平的影响。[方法]采用逆转录酶聚合酶链式反应（RT-PCR）技术．以β-actin为内参照,测定10GyX线照射前后CNE1、CNE2中ATM mRNA表达水平的变化：[结果]在X线照射前,CNE1中ATM mRNA基础水平与CNE2相似：存X线照射后,CNE1中ATM mRNA水平在照射4h后明显升高。12h后恢复：CNE2中ATM mRNA水平在照射后12h内无显著变化．[结论]在具有不同放射敏感性的鼻咽癌细胞株CNE1、CNE2中．ATM mRNA表达的基础水平相似,在经X射线处理后,CNE1和CNE2中ATM mRNA水平变化规律不同。这种ATM mRNA表达差异可能是导致两者放射敏感性不同的原因之一．     

电离辐射对肺癌A549细胞凋亡及细胞周期的影响

[目的]阐明电离辐射对肺癌A549细胞凋亡、细胞周期及Fas蛋白的影响。[方法]采用流式细胞术检测X射线照射对A549细胞周期、细胞凋亡及Fas蛋白表达的影响。[结果]1．0-4．0GyX射线照射后,G0／G1期细胞数与对照组相比明显减少（P〈0．05）。0．5～4．0GyX射线照射后,G2／M期细胞数与对照组相比明显增多（P〈0．05）。各照射组细胞凋亡率和Fas蛋白表达与对照组相比均明显增高,其中均以4．0GyX射线照射后增高最为显著。[结论]X射线能诱导A549细胞周期发生G2期阻滞、细胞凋亡,并诱导Fas蛋白表达增高,且在一定范围内存在时间和剂量依赖关系。     

ERK通路在中子和γ线致IEC-6细胞损伤中的变化及IL-11的调控作用

目的复制中子和γ线致肠道损伤的体外模型,探讨ERK通路的变化规律及IL-11对其调控作用,为阐明中子和1线致伤差异的分子机制并寻找有效的防治措施提供依据。方法采用4Gy中子和10Gy1射线照射IEC-6大鼠肠上皮细胞,并于照射前12h或照射后即刻给予100ng／ml的rhIL-11,采用流式细胞术、Westernblot和图像分析技术,分别检测IEC-6细胞凋亡和坏死率以及Raf-1、MEK1／2、ERK1／2表达及活化的变化。结果中子和叫线均可造成IEC-6细胞损伤,且前者损伤更重;应用IL-11后,二组凋亡率和坏死率均出现下降。1射线照射后6～24h,IEC．6细胞Raf-1表达和活化及MEK1／2活化升高,ERK1／2活化减弱,IL-11处理组于照射后5～15min可增加Raf-1和MEK1／2活性,照射后6h抑制ERK1／2活化。中子照后6～24h,Raf-1表达和活化及MEK1／2活化无明显变化,ERK1／2表达和活化升高,与照射组比较,IL-11处理后6h,Raf-1表达变化不明显,照射后6～24h,MEK1／2活化升高,IL-11在照射后6h抑制ERKl／2活化,照后24h增加ERK1／2表达及活化。结论中子照射造成IEC-6细胞ERK1／2活化,而γ射线照射则表现为抑制作用;IL-11通过调控ERK通路对二者造成的肠损伤具有防护作用。     

GW843682X对鼻咽癌细胞中PLK1和p53表达的影响

[目的]研究Polo样激酶（PLK）抑制剂GW843682X对鼻咽癌5-8F细胞中PLK1和p53表达水平的影响。[方法]用不同浓度的GW843682X处理鼻咽癌5-8F细胞,在不同时间点倒置显微镜下观察细胞形态,RT-PCR及Western blot分别检测PLK1和p53的mRNA和蛋白表达水平的变化。[结果]GW843682X能够显著抑制5-8F细胞的增殖,呈剂量和时间依赖性。RT-PCR结果表明GW843682X可下调PLK1和p53的mRNA表达水平。Western blot结果显示GW843682X降低PLK1和p53的蛋白表达水平。[结论]GW843682X抑制鼻咽癌5-8F细胞中PLK1和p53的表达。     

X线照射对人鼻咽癌细胞株耐药基因及其蛋白表达的影响

[目的]检测X射线照射前后鼻咽癌CNE-1细胞多药耐药基因(MDR1)及其编码产物P糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白基因(MRP基因)及其编码产物多药耐药相关蛋白(MRP)的表达随时间变化的情况。[方法]对CNE-1细胞进行X射线照射,总剂量10Gy/(5d·5f)。利用RT-PCR检测照射前、照射开始后第7、14、21、28和35d细胞的MDR1、MRP基因的表达;Westernblotting检测照射前后P-gp、MRP的表达;MTT法检测照射前后顺铂(DDP)对细胞的半数抑制率(IC50)。[结果]CNE-1细胞X射线照射前MDR1、MRP基因、P-gp和MRP呈弱表达;照射后35d内耐药基因及蛋白表达均显著增高(P<0.05)。[结论]CNE-1细胞X射线照射后耐药基因(MDR1、MRP)及其蛋白(P-gp、MRP)表达显著增强,同时CNE-1细胞对顺铂产生抵抗。     

Role of NOX family in PC-3cell damage induced by X-ray irradiation

目的:研究NOX家族在X射线诱导人雄激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞损伤中的作用,寻找放疗增敏的潜在靶点.方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法检测0、1、2、4和12GyX射线照射后24、48和96 h PC-3细胞存活率;采用DCFH-DA法检测0、1和4GyX射线照射后15、30、60和120 min时PC-3细胞中ROS的生成量;采用Westem blot方法检测0、1和4GyX射线照射后PC-3细胞中NOX1～NOX5 5个亚型蛋白的表达情况.结果:1、2、4和12 GyX射线照射PC-3细胞后96 h,与未照射组比较,PC-3细胞的存活率明显下降(P＜0.05).1和4GyX射线照射PC-3细胞60 min后,细胞内ROS水平最高,NOX抑制剂DPI及抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理可以减少ROS的生成.1和4GyX射线照射后PC-3细胞中NOX1、NOX2和NOX5蛋白表达显著增加.结论:X射线诱导NOX1、NOX2和NOX5蛋白过表达,细胞内产生过量的ROS是X射线诱导PC-3细胞损伤的机制之一.     

X线照射联合RNA干扰STAT3基因对人食管癌细胞增殖、凋亡的影响

背景与目的：STAT3是近期研究较多的一类癌基因,在多种实体瘤如头颈部鳞癌、食管癌、前列腺癌等中均有异常表达和活性增强。本研究探讨X线照射联合RNA干扰STAT3基因对人食管癌Eca-109细胞增殖、凋亡的影响。方法：针对STAT3 mRNA序列设计合成3对编码小干扰RNA（siRNA）的DNA模板,构建pRNAT-U6.1-siRNA-STAT3重组质粒,转染Eca-109细胞,G418筛选获得阳性克隆,分别用RT-PCR和Western blot方法检测细胞STAT3 mRNA和蛋白表达。转染细胞分别接受0、2、4、6和8GyX线照射,平板克隆形成实验检测细胞存活分数,流式细胞仪检测4GyX线照射的细胞凋亡。结果：成功构建了pRNAT-U6.1-siRNA-STAT3重组质粒,经测序鉴定正确;RT-PCR和Western blot检测显示,STAT3-siRNA有效地抑制了肿瘤细胞STAT3 mRNA和蛋白表达;平板克隆形成实验和流式细胞仪分析表明,不同剂量X线照射联合STAT3-siRNA可抑制肿瘤细胞增殖,4GyX线照射可诱导肿瘤细胞凋亡。结论：X线照射联合RNA干扰STAT3基因表达可抑制人食管癌Eca-109细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

白细胞介素-6/信号转导和转录激活因子3信号通路在大细胞肺癌NL9980细胞系增殖中的作用及机制

背景与目的：白细胞介素-6/信号转导和转录激活因子3(IL-6/STAT3)信号通路在很多恶性肿瘤中存在过度激活及表达,包括白血病、头颈部鳞状细胞癌多发性黑色素瘤、乳腺癌以及前列腺癌等,但其在大细胞肺癌中的研究少见。该研究旨在探索大细胞肺癌NL9980细胞系中IL-6/STAT3信号通路在细胞增殖中的作用及其机制。方法：将外源性IL-6设立5个浓度梯度(终浓度分别为0、1.0、5.0、10.0和20.0 ng/mL),分别对NL9980细胞系进行干预。运用噻唑蓝(MTT)法观察细胞增殖活力改变,并确立IL-6干预的最佳浓度。采用RT-PCR技术检测IL-6/STAT3相关基因及其下游调控基因Bcl-2、VEGF和CYCD1的mRNA表达量,并将IL-6/STAT3相关基因与下游基因做相关性分析。结果：外源性IL-6可促进NL9980细胞系的增殖,其最佳干预浓度为5 ng/mL(F=8.11,P<0.05)。信号通路相关基因IL-6及STAT3的mRNA表达量均以5 ng/mL组最高,分别为4.78±0.09和5.17±0.05(P<0.05);下游调控基因中,Bcl-2、VEGF及CYCD1的mRNA表达量均在5 ng/mL组最高,分别为4.52±0.14、4.12±0.12和3.98±0.17,其余浓度组与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。相关性分析表明,下游基因中Bcl-2、VEGF、CYCD1与IL-6(r=0.952,r=0.836,r=0.880)和STAT3(r=0.995,r=0.746,r=0.800)呈正相关性。结论：IL-6可促进大细胞肺癌NL9980细胞系的增殖,其机制可能是通过活化IL-6/STAT3信号通路并上调相关基因Bcl-2、VEGF和CYCD1的表达来实现的。     

X射线照射对鼻咽癌细胞多药耐药基因表达影响初步研究

目的 RT-PCR法研究累积高剂量X射线照射后多药耐药基因MDR1 mRNA表达随时间的变化趋势,并且探讨Bcl-2、MMP7与MDR1的关系.方法 选取人鼻咽鳞癌CNE1细胞系进行体外培养及X射线照射,累积剂量50 Gy.分别收集CNE1细胞和X射线照后得到的CNE1R细胞,利用MTT法检测CNE1、CNE1R细胞对顺铂的耐药性;RT-PCR技术检测MDR1 mRNA的表达.选取CNE1和MDR1 mRNA表达最高的一组CNE1R细胞检测Bcl-2、MMP7 mRNA的表达情况.结果 CNE1R细胞对顺铂产生耐药性.RT-PCR检测CNE1细胞MDR1 mRNA半定量灰度值为0.47±0.04,照射50 Gy后1、7、21、28、35、42、49 d的CNE1R细胞MDR1 mRNA半定量灰度值均高于CNE1细胞,分别为0.67±0.06(t=-5.44,P=0.003)、0.70±0.01(t=-5.90,P=0.002)、0.73±0.01(t=-6.45,P=0.001)、0.67±0.03(t=-3.97,P=0.011)、0.65±0.01(t=-4.43,P=0.007)、0.62±0.05(t=-2.64,P=0.046)、0.62±0.02(t=-3.34,P=0.021).RT-PCR法检测CNE1细胞和CNE1R细胞中Bcl-2 mRNA表达半定量灰度值不同,分别为0.55±0.02和1.05±0.04(t=-9.93,P=0.000);MMP7 mRNA表达半定量灰度值也不同,分别为0.51±0.01和0.82±0.02(t=-8.51,P=0.000).结论 X射线累积照射50 Gy后CNE1R细胞内MDR1基因表达高于照前CNE1细胞,可能与Bcl-2、MMP7基因表达的同步变化有关.