HLA-Ⅰ类抗原的组织配型基因芯片的建立及应用

目的:应用基因芯片技术进行北方汉族人群HLA-Ⅰ类抗原中分辨度分型研究,建立稳定的HLA检测芯片.方法:采用寡核苷酸芯片分型方法,依据第十三届国际组织相容性工作会议报告及相关文献,同时考虑遗传的连锁不平衡,及强脊炎、幼年型糖尿病等与HLA密切相关的遗传病等因素,选择了中国人群基因频率较高的等位基因,根据HLA-Ⅰ类不同基因亚型的独特序列,完成了探针的设计与筛选,最后设计了122条探针(HLA-A56条,HLA-B66条)制成基因分型芯片.采用带荧光标记的引物,用合适的PCR方法扩增HLA-Ⅰ类抗原上的多态性区域,产物与芯片上探针杂交.杂交结果经荧光扫描并用特定软件分析判断阳性探针,以此确定样品基因型.结果:所有样本的HLA-Ⅰ类抗原基因分型均获成功.此中分辨度探针可分出598个Ⅰ类抗原等位基因,可检出Ⅰ类抗原特异性57个.结论:基因芯片用于HLA-Ⅰ类抗原分型可行.其分辨率高,特异性强,可用于HLA基因分型、骨髓移植、器官移植的HLA配型、与HLA有密切关系的遗传性疾病的人群筛查.     

HLAⅠ类抗原的基因芯片分型技术研究

目的：采用DNA芯片技术进行汉族人群HLAⅠ类抗原A、B位点的DNA分型研究，并实现将A、B位点的DNA分型集中于一张芯片上，同时完成。方法：根据HLAⅠ类抗原A、B位点不同基因亚型的独特序列设计探针，制成分型芯片；待检测样品经PER反应标记上荧光之后，与探针在芯片上进行杂交，通过对杂交产生的荧光信号值进行分析，确定样品的HLA-A、B基因亚型。将这一方法应用于220份样本的HLAⅠ类DNA分型并将部分样品进行基因测序。结果：所有样本的HLAⅠ类基因芯片分型均获得成功，无假阳性和假阴性出现，80份样本的重复率为100％，总耗时2．5h。分型结果经双盲验证完全符合。可准确分辨出A位点等位基因20个，B位点等位基因41个，实际检出汉族人群A抗原特异性13个、B抗原特异性32个。结论：基因芯片用于HLAⅠ类A、B分型技术可行，其分辨率高、特异性强、重复性好、操作简便快速、结果直观，可以在一张芯片上同时检测HLA-A、B位点，并实现一张芯片多人份，适合于临床应用。     

045 人类Ⅱ类组织相容性抗原HLA—DR1的三维结构

人Ｂ细胞Ⅱ类组织相容性糖蛋白ＨＬＡ－ＤＲ１经Ｘ线衍射分析测定，证明其三维结构与Ｉ类ＨＬＡ分子的三维结构相似。肽（抗原）以伸展的构型结合于抗原结合小沟（ａｎｔｉ－ｇｅｎ－ｂｉｎｇ ｇｒｏｏｖｅ），并从小沟开放的两端伸出。在接近小沟一端有一个突出的非极性袋状结构，其中容有抗原的侧链。结晶形ＨＬＡ－ＤＲ１，其Ⅱ类αβ异二聚体以二分子聚合物形式存在，提示Ⅱ类ＨＬＡ的二分子聚合是Ｔ细胞活化过程中启动胞浆信号     

HLA—Ⅱ类抗原的表达调控及其在肿瘤组织中的表达

HLA－Ⅱ类抗原在免疫应答和免疫调节中具有重要作用，其表达调节主要发生在转录水平上。在它的启动子区内存在W盒、Y盒、X盒等顺式作用元件，调节HLA－Ⅱ类抗原的表达。HLA－Ⅱ类抗原启动子区具有的高度多态性，也可通过多种途径影响HLA－Ⅱ基因的表达。肿瘤细胞可异常表达HLA－Ⅱ类抗原，干扰素、启动子多态性、CⅡTA、RB蛋白等多种因素影响其表达。     

可溶性HLA—Ⅰ类抗原及临床意义的研究进展

ＨＬＡ是一类复杂的人类遗传多肽性系统,其研究工作在医学实践中有十分重要的意义,其中,ＨＬＡ－Ｉ类抗原在移植排斥反应中起着重要作用,是组织排斥应答的主要抗原,同时对细胞毒Ｔ细胞起约束作用,ＨＬＡ－Ｉ类抗原除了以膜抗原形式存在于细胞膜表面外,目前也已从人类的血清和淋巴液,尿液及乳汁中检出,称为可溶性ＨＬＡ抗原。本文综述了ｓＨＬＡ－Ｉ分子的分泌、结构、检测,在免疫调节及在自身免疫病、器官移植,感染等生理     

HLA-Ⅱ类抗原的表达调控及其在肿瘤组织中的表达

HLA Ⅱ类抗原在免疫应答和免疫调节中具有重要作用 ,其表达调节主要发生在转录水平上。在它的启动子区内存在W盒、Y盒、X盒等顺式作用元件 ,调节HLA Ⅱ类抗原的表达。HLA Ⅱ类抗原启动子区具有的高度多态性 ,也可通过多种途径影响HLA Ⅱ基因的表达。肿瘤细胞可异常表达HLA Ⅱ类抗原 ,干扰素、启动子多态性、CⅡTA、RB蛋白等多种因素影响其表达     

HLAⅡ类抗原对细菌超抗原诱导人T细胞产生TNF的影响

本文研究不同型别的ＨＬＡⅡ类抗原对细菌超抗原，葡萄球菌肠毒素Ｂ和链球菌致热毒素Ａ，诱导人Ｔ细胞产生ＴＮＦ的影响。在ＤＲ＋细胞参与或ＤＱ＋细胞参与下，毒素刺激可诱生高水平的ＴＮＦ，但在ＤＰ＋细胞参与下，毒素诱生的ＴＮＦ产量甚低。     

小鼠轻度病毒性心肌炎急性期心肌组织MHCⅡ类抗原的表达

为研究小鼠急性病毒性心肌炎心肌MHCⅡ类抗原的表达规律,探索急性期轻度病毒性心肌炎的发病机制,以适量柯萨奇B3病毒感染BALB／c小鼠制成小鼠病毒性心肌炎模型,对病鼠的心肌进行MHCⅡ类抗原表达强度的半定量记分（MS）与心肌病变积分（PS）无相关。实验提示,心肌MHCⅡ类抗原的异常表达是轻度病毒性心肌炎急性期的发病机制之一：自身免疫反应在病毒性心肌炎急性期与心肌病变的严重程度无相关。     

慢性乙型肝炎后肝硬化与HLAⅡ类抗原等位基因相关性研究

人类白细胞抗原（human leucocyte antigen,HLA）是目前所知最复杂的遗传多态性系统,作为个体组织细胞的遗传标志,特别是免疫活性细胞上的HLA具有向抗原特异性T细胞受体传递抗原多肽的生物学特性,HLA分子在抗原识别、免疫应答和免疫调控,破坏外来抗原靶细胞方面起着重要作用.     

081 HLA-Ⅱ类抗原的表达调控及其在肿瘤组织中的表达

HLA-Ⅱ类抗原在免疫应答和免疫调节中具有重要作用,其表达调节主要发生在转录水平上.在它的启动子区内存在W盒、Y盒、X盒等顺式作用元件,调节HLA-Ⅱ类抗原的表达.HLA-Ⅱ类抗原启动子区具有的高度多态性,也可通过多种途径影响HLA-Ⅱ基因的表达.肿瘤细胞可异常表达HLA-Ⅱ类抗原,干扰素、启动子多态性、CⅡTA、RB蛋白等多种因素影响其表达.     

我国西双版纳傣族群体HLAⅡ类基因的寡核苷酸分型

我们对73名西双版纳傣族正常健康个体用第11届国际组织相容性专题讨论会的方法进行了HLA Ⅱ类基因的 PCR/SSO 分型。结果表明傣族的 HLA Ⅱ类等位基因频率分布在与中国南方人群相似以外尚有其独特性.共捡出 DRB1 等位基因20种,其中基因频率超过0.10的依次为1602、0901、1502、1401及1202,未发现01、08及1001等位基因。DRB3仅捡出0202及0301,DRB5仅捡出0101和0102。DQA1共捡出6种等位基因以0102、0101、03频率为最高。以0502为最高频率的 DQB1共捡出9种等位基因。绝大多数个体(91.8%)均具有 DPA1、0201等位基因、与目前所报道的东方人材料相一致,DPB1 0501频率最高,其次为0202、0201与1301。各位点均呈 Handy-WeinKeng 平衡.     

冠脉内皮细胞常规表达MHCⅡ类抗原的种属差异

移植物增加表达ＭＨＣ抗原，尤其是Ⅱ类抗原分子，是移植排斥反应的起点。血管内皮细胞不恰当地表达ＭＨＣⅡ类抗原被认为是许多疾病过程如炎症，血栓形成，血管炎的焦点。研究发现冠脉内皮细胞常规表达ＭＨＣⅡ类抗原存在种属间的差异，而这种差异或许是导致不同动物模型间出现实验结果差异的关键因素。     

广东汉族银屑病患者HLA—Ⅰ,Ⅱ类抗原的调查

广东汉族银屑病患者ＨＬＡ－Ⅰ、Ⅱ类抗原的调查肖露露张升肖巧珍许德清银屑病的病因及发病机理至今尚未完全清楚，但是，学者提出，银屑病具有显性基因遗传，与ＨＬＡ－Ⅰ、Ⅱ类抗原基因的遗传之间关联［１］。我们对广东籍银屑病患者和健康献血员进行了ＨＬＡ－Ⅰ、Ⅱ类...     

造血干细胞移植中HLA—Ⅱ类基因分型影响因素的探讨

目的：为了准确地进行造血干细胞移植供－受体的ＨＬＡ－Ⅱ类配型，对ＨＬＡ－Ⅱ类基因分型实验的影响因素进行了探讨。方法：采用美国莱姆达公司提供的微量ＳＳＰ＾ＴＭＨＬＡ－Ⅱ类ＰＣＲ－ＳＳＰ分型试剂盒对４００例造血干细胞移植供－受体进行基因分型。结果：采用０．５％ＥＤＴＡ抗凝的血标本与肝素抗凝的血标本相比，前者的护增效果好。ＤＮＡ终浓度为２５～２００ｎｇ／ｕｌ，最佳浓度为１００ｎｇ／ｕｌ，Ａ２６０／Ａ２８     

HLAⅡ类基因PCR-SSP分型技术在骨髓移植配型中的应用

建立快速、准确的ＨＬＡ基因分型方法,满足临床移植配型的需要。方法通过序列特异性引物聚合酶链反应,对拟行骨髓移植的１０例血液病患者及１２名相关供者的ＨＬＡ－Ⅱ类基因ＤＲＢ１,ＤＱＢ１位点扩增,琼脂糖凝胶电泳分析ＰＣＲ产物并确定其基因型。结论该方法具有快速准确,特异性高,简便省时的特点。     

中国广东汉族群体HLAⅡ类基因多态性的研究

为探讨中国广东汉族群体ＨＬＡⅡ类基因多态性，采用ＰＣＲ／ＳＳＯ方法，随机选择１０２名广东籍汉族人进行了ＨＬＡⅡ类基因的ＤＮＡ分型。测定了包括ＨＬＡ－ＤＲＢ１，ＤＲＢ３，ＤＲＢ５，ＤＱＡ１，ＤＱＢ１和ＤＰＢ１等６个基因座位的等位基因。结果：共检出２３种ＤＲＢ１，３种ＤＲＢ３，４种ＤＲＢ５，８种ＤＱＡ１，１２种ＤＱＢ１和１２种ＤＰＢ１基因。该人群的ＨＬＡⅡ类等位基因多态性的典型性表现在ＨＬＡ－ＤＲＢ＊１２０２的不寻常优势和ＤＲＢ１＊０２单倍型的结构的高度复杂性。还发现了很高频率的一个近年才被正式命名的ＤＰ新型：ＨＬＡ－ＤＰＢ１＊２１０１，并且此型具有极不寻常的ＤＲＢ１＊１２０２－ＤＰＢ１＊２１０１的连锁不平衡。为分子流行病学研究提供了资料。     

HLAⅠ、Ⅱ类基因与肾综合征出血热重型与轻型的相关性研究

目的 探讨HLAⅠ、Ⅱ类基因多态性与肾综合征出血热（hemorrhagic fever with renal syndmme，HFRS）患者临床特征的相关性。方法 应用PCR-SSO（polymerase chain reaction using sequencespecific oligonucleotides）基因分型技术对中国北方地区56例汉族HFRS患者HLAⅠ、Ⅱ类基因频率分布进行了检测。结果 HFRS重型组HLA-B35携带率为20％，HLA-B62及HLA-DR11携带率皆为15％．与轻型组比较差异皆具有统计学意义（P〈0．05）。结论 HLAⅠ类基因中HLA-B35、HL4-B62及HLAⅡ类基因中HLA-DR11与中国北方地区汉族人群HFRS患者病情严重性密切相关。     

MHCⅡ类抗原的诱导性表达和同种异体软骨细胞移植的免疫排斥

本研究将不同年龄香猪的软骨细胞和可注射性材料复合物Pluronic混合在一起,以50×106/ml浓度接种到版纳猪的腹部皮下,在第1、2、4周取材作组织学检查,并进行软骨细胞表面标志的分析和测定淋巴细胞软骨细胞混合反应(MLChR)的强度.结果显示猪的软骨细胞仅表达MHCI类分子,分别来自胎猪、幼猪和成年猪的软骨细胞刺激MLChR的能力无显著差别,均表现抗原性较弱.经IFN-γ诱导后,软骨细胞表达MHC Ⅱ类抗原,能明显地刺激淋巴细胞增殖.免疫病理学检测发现,在组织化的软骨中,第1周出现大量淋巴细胞浸润,第4周组织化软骨消失.上述结果提示,体内同种异体软骨细胞被迅速排异,可能与MHCⅡ类抗原诱导性表达有关.