氧化苦参碱对人白血病K562细胞株凋亡作用的研究

目的探讨氧化苦参碱（Oxymatrine,Oxy）对人慢性粒细胞白血病（CML）K562细胞凋亡的影响。方法用Oxy处理K562细胞,MTT法检测药物对细胞的抑制作用;荧光显微镜及透射电镜观察细胞形态变化;流式细胞仪分析细胞DNA含量变化及凋亡细胞的比例,琼脂糖凝胶电泳技术观察DNA降解。结果 Oxy能够抑制K562细胞生长,对K562细胞的IC50约为2.33mg.mL-1。Oxy作用后的K562细胞呈现凋亡形态学改变,流式细胞仪可在2倍体前检测到凋亡峰,凋亡细胞比例为7.03%～54.99%,琼脂糖凝胶电泳呈现出细胞凋亡特征性的DNA梯状带。结论 Oxy能够诱导K562细胞发生凋亡。     

枸杞多糖对K562白血病细胞抑制作用及凋亡的研究

目的 探讨枸杞多糖（LBP-X）诱导人类慢性髓系白血病K562细胞株凋亡。方法 用吖啶橙（AO）荧光染色观察细胞结构的变化，用MTT、比色法测定抑制率，琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测法分析细胞凋亡。结果 LBP-X可明显抑制K562细胞的生长，凋亡率呈时间和剂量依赖性。LBP-X作用48h后，荧光显微镜下可见细胞核不规则，浓缩成大小不等的团快，核碎裂呈新月形改变，琼脂糖凝胶电泳可见DNA梯带。流式细胞仪分析图上可见明显的凋亡。结论 LBP-X能诱导K562细胞的凋亡，并呈一定的时间浓度依赖关系。     

线粒体膜电位在三氧化二砷诱导 K562 细胞凋亡中的作用

目的 探讨三氧化二砷 (As2O3) 诱导 K562 细胞凋亡的发生机制。方法 分别以 1、2、4、8、16 μmol/L As2O3 诱导 K562 细胞凋亡,MTT法检测不同时间点细胞增殖抑制率,DNA Ladder 法检测细胞凋亡,Annexin V/PI 染色结合流式细胞术检测细胞凋亡率,Rhodamine 123 染色流式细胞术检测线粒体膜电位 (ΔΨm) 变化,ELISA 法检测胞浆细胞色素C (CYTC) 水平,分光光度法检测 Caspase-3 活性,流式细胞术检测 Bcl-2 和 Bax 表达。结果MTT结果显示 As2O3 能抑制 K562 细胞生长,且呈现时间剂量依赖性;4～16 μmol/L 的 As2O3 作用 24 h 均可诱导 K562 细胞凋亡,同时伴有ΔΨm下降,胞浆内 CYTC 蛋白浓度及 Caspase-3 活性增高,胞浆 Bcl-2/Bax 值下降,且均呈剂量依赖性。结论 As2O3 诱导 K562 细胞凋亡可能是通过降低ΔΨm,激活线粒体凋亡途径实现的,Bcl-2/Bax 值下降可能与其有关。     

白血病细胞株耐药与核因子κB蛋白质诱导表达的关系

目的:探讨慢性粒细胞性白血病细胞K562与其耐药株K562/ADR细胞中IκB-α和NF-κB的表达,以及三氧化二砷(As2O3)诱导白血病细胞凋亡的关系.方法:应用不同浓度的As2O3诱导K562和K562/ADR细胞凋亡,以Western-blot免疫印迹电泳检测NF-κB、IκB-α的表达,流式细胞术检测细胞凋亡及分析IκB-α的阳性表达率变化.结果:As2O3诱导K562/ADR细胞凋亡率明显低于K562细胞,当As2O3浓度为1 μmol/L时,两种细胞凋亡率分别是(6.33±1.51)%、(13.25±1.83)%,当As2O3浓度增高到4 μmol/L时,细胞凋亡率则分别为(8.00±1.47)%、(50.56±8.62)%(P＜0.05).在K562细胞胞浆中,IκB-α阳性表达率则由(88.07±0.99)%减少到(49.21±0.95)%(P＜0.01),胞核中P65量逐渐增加;而K562/ADR细胞中无明显变化.结论:As2O3可诱导K562细胞凋亡,伴有IκB-α的降解及NF-κB的激活;K562/ADR细胞NF-κB表达增加,对As2O3诱导的反应无明显改变.     

三氧化二砷诱导食管癌细胞凋亡及其对C-myc和TGF-β1表达的影响

目的探讨三氧化二砷（As2O3）对体外培养的人食管癌细胞ECA109生长的抑制和诱导细胞凋亡的作用.方法用MTT法检测药物效应,透射电镜及流式细胞仪观察As2O3处理ECA109细胞后细胞周期和细胞凋亡.细胞免疫化学观察As2O3处理ECA109细胞后,ECA109细胞TGF-β1及C-myc表达的变化.结果 （1）MTT法证实As2O3对ECA109细胞生长有抑制作用,并呈剂量-效应关系.（2）流式细胞仪分析As2O3处理ECA109细胞后细胞滞留于G2/M期,并可见凋亡峰.（3）透射电镜可见ECA109细胞出现典型的细胞凋亡及坏死形态学改变.（4）As2O3下调C-myc和TGF-β1表达.结论 As2O3对人食管癌细胞ECA109有抑制作用,其抑制作用可能通过下调C-myc基因表达,诱导食管癌细胞凋亡和坏死、阻抑细胞周期进程,抑制ECA109细胞增殖.同时通过下调TGF-β1表达阻止食管癌的恶性进程.     

As2O3对耐药的白血病细胞株UF-1和K562/D细胞增殖的影响

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)对耐药的白血病细胞株UF-1和K562/D的作用.方法:采用台盼蓝拒染法计数活细胞数,并计算细胞生长率;细胞涂片经Wright-Giemsa染色,光镜下观察细胞的形态;流式细胞仪解析细胞周期.结果:As2O3对耐药的白血病细胞株UF-1和K562/D的增殖均具有明显的抑制作用,与敏感细胞株NB4和K562细胞相比均无显著性差异.2 μmol/L的As2O3能够使UF-1细胞株的凋亡细胞占48.5%,亚G1期细胞明显增多,4 μmol/L的As2O3使K862/D细胞株的分裂期细胞占40.6%,G2/M期细胞增多.结论:耐药白血病细胞株UF-1和K562/D分别与敏感株NB4和K562相比,对As2O3的敏感性相同.As2O3诱导UF-1细胞凋亡,使K562/D细胞发生G2/M期阻滞.     

三氧化二砷抑制cdc2基因表达诱导K562白血病细胞G2/M周期停滞

目的检测三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)诱导慢性髓系白血病急变细胞K562周期停滞中细胞周期相关调节基因的转录、蛋白表达及其磷酸化改变,以期阐明As2O3诱导其周期停滞的分子生物学机制,为克服K562细胞的As2O3抵抗性提供实验基础。方法体外培养K562细胞,采用PI染色、流式细胞仪检测As2O3作用后细胞周期分布的改变;逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测细胞周期相关调节基因mRNA表达变化;Westernblot检测相关蛋白及磷酸化改变。结果As2O3作用K562细胞24h后,G2/M期细胞比例明显增加,浓度为0、2、5、10μmol/L时G2/M期细胞比例分别为(22.6±3.4)%、(27.2±2.3)%、(43.8±4.5)%、(36.7±4.1)%;K562细胞在As2O3处理前有Sur-vivin、cdc2、chk1基因表达,As2O3处理后Survivin、chk1的表达无明显变化,但cdc2表达呈浓度依赖性下调;As2O3作用前可见Survivin、cdc2、cdc2-p、chk1等4种蛋白的表达,作用24h后,Survivin的表达条带增强,cdc2蛋白表达水平呈浓度依赖性下调,cdc2-p水平在2～5μmol/L时无明显变化,在10μmol/L时受抑明显,chk1蛋白表达水平在As2O3作用前后无明显改变。结论As2O3显著诱导K562白血病细胞G2/M周期停滞,其机制与抑制cdc2转录水平,下调活性化cdc2蛋白表达有关。不能有效抑制抗凋亡蛋白Survivin的表达可能是K562白血病细胞对As2O3诱导凋亡抵抗的一个重要机制。     

亚砷酸和STI571单用及联用对K562细胞增殖和凋亡的影响

目的研究亚砷酸(As2O3)、STI571单用及联用对K562细胞增殖和凋亡的影响,为As2O3和STI571联合应用于临床提供理论依据.方法细胞增殖采用细胞生长及活力测定;细胞凋亡采用细胞形态、Annexin-V/PI双染实验、DNA的PI染色及DNA电泳等方法测定.结果在As2O3和(或)STI571作用下K562细胞生长受抑伴随活力下降,流式细胞仪检测出凋亡细胞百分率呈时间剂量依赖关系,基因组DNA电泳出现““梯““状条带.结论 As2O3和STI571均有抑制K562细胞增殖和诱导该细胞凋亡的作用,两药联用效果更佳.     

三氧化二砷诱导慢性髓细胞性白血病K562细胞株凋亡与c-myc的表达

目的：观察三氧化二砷(As2O3)诱导慢性髓细胞性白血病K562细胞株凋亡和c-myc mRNA表达的作用，并探讨其作用机制。方法：应用MTT法、苔盼蓝拒染法、DNA凝胶电泳和细胞周期凋亡检测，观察0μmol／L、0．5μmol／L、lμmol／L、2μmol／L、4μmol／L、8μmol／LAs2O3分别作用24h、48h、72h后，对K562细胞增殖及活力的影响。应用RT-PCR和免疫组织化学法检测As2O3处理后K562细胞c-myc mRNA和蛋白表达的变化。结果：As2O3诱导后K562细胞核DNA凝缩，核片段化，最后形成凋亡小体。在一定范围内，随着As2O3浓度的增加和As2O3处理时间的延长，细胞存活率明显下降；流式细胞仪检测可见As2O3诱导K562细胞凋亡，影响细胞周期，细胞阻滞于G2／M期；As2O3处理后c-myc mRNA和c-myc蛋白表达均有先上调后回落的趋势。结论：As2O3可以抑制K562细胞增殖并诱导凋亡，其作用机制可能是使细胞受阻于G2／M期而进入凋亡程序，c-myc基因参与了As2O3诱导细胞凋亡的基因调控。     

白血病细胞固有活性氧水平与As2O3促凋亡作用的关系

目的探讨白血病细胞株的固有活性氧(ROS)水平与细胞对三氧化二砷(As2O3)促凋亡作用的敏感性之间的关系. 方法用2μmol/L As2O3作用于四种髓系来源的人白血病细胞株(NB4、HL60、K562、U937),证实As2O3促凋亡敏感性在四种细胞之间的差异.然后在不加As2O3情况下,用活性氧捕获剂双氢-乙酰乙酸二氯荧光黄(DCFH-DA)或双氢罗丹明123(DHR)捕获ROS,通过流式细胞仪检测细胞的ROS水平. 结果四种白血病细胞凋亡敏感性与ROS水平存在对应关系,由高到低的顺序为:NB4、HL60、K562、U937. 结论白血病细胞固有的ROS水平与细胞对As2O3诱导凋亡的敏感性有关.     

新生霉素衍生物FM-Nov17抑制慢粒白血病细胞增殖与其诱导DNA损伤的关系

目的研究新生霉素衍生物FM—Nov17抑制K562和K562／G01细胞增殖的作用与其诱导DNA损伤的关系。方法3－（4,5－二甲基噻唑－2）－2,5－二苯基四氮唑溴盐（MTT）及羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂（CFSE）染色法检测FM—Nov17对K562及K562／G01细胞增殖的影响;流式细胞光度术检测FM—Nov17诱导K562及K562／G01细胞DNA损伤、细胞周期阻滞和细胞凋亡;Westernblot探讨FM—Nov17对DNA损伤、细胞周期和细胞凋亡调控通路相关蛋白表达的影响。结果FM—Nov17在体外可明显抑制K562和K562／G01细胞增殖,半数抑制率（IC50）分别为（58．28±0．31）和（62．36±0．14）μmol／L,并减少K562及K562／G01细胞的增殖分裂代数;FM—Nov17能诱导细胞DNA损伤和阻滞细胞于G。／M期,并增加细胞凋亡率,呈剂量依赖关系;FM—Nov17能增加y-H2AX、ATM、P53的磷酸化水平以及Parp和Caspase3的切割,减少CDC25A和CDC25C的表达。结论FM—Nov17通过诱导DNA的损伤,阻滞细胞于G2／M期,激活线粒体凋亡通路,诱导细胞的凋亡,抑制K562和K562／G01细胞的增殖。     

蟾蜍灵对K562细胞凋亡诱导作用及bcl-2基因表达的影响

目的探讨中药蟾酥有效成分蟾蜍灵（bufalin）对人白血病细胞系K562细胞增殖和凋亡及bcl-2基因表达的影响。方法MTT实验测定K562细胞对蟾蜍灵的敏感性;原位缺口末端标记法（TUNEL）观察细胞凋亡率;琼脂糖凝胶电泳分析细胞凋亡的DNA断裂情况;半定量RT—PCR技术检测bcl-2mRNA表达。结果蟾蜍灵对K562细胞生长具有明显的抑制作用,MTT实验显示,蟾蜍灵对K562细胞的IC50值为0．013μmol·L^-1,统计学分析表明差异具有显著性（P〈0．01）;蟾蜍灵可明显诱导K562细胞调亡（P〈0．01）,药物作用6h、12h和24hK562细胞的凋亡率分别为20．36％、34．35％和48．16％;经琼脂糖电泳,蟾蜍灵作用细胞可见到DNA梯形条带;bcl-2mRNA表达3h开始下降,6～12h持续下调,与对照组相比具有显著差异（P〈0．01）。结论蟾蜍灵对K562的增殖抑制作用可能是因为它的凋亡诱导作用,而K562细胞凋亡可能是由于bcl-2基因表达改变。     

As203联用华蟾素对K562细胞Bcr—Abl磷酸化的影响

目的研究As2O3,联用华蟾素对K562细胞Bcr—Abl蛋白酪氨酸磷酸化的影响,探讨其抗白血病的分子机制,为As2O3和华蟾素联合应用治疗CML提供理论依据。方法采用细胞增殖实验检测细胞生长;采用Annexin—V／PI双染实验、DNAPI染色及DNA电泳等方法测定细胞凋亡;运用Westernblot检测K562细胞Bcr—Abl蛋白酪氨酸磷酸化水平。结果在As2O3,和华蟾素作用下K562细胞生长受抑伴随活力下降,1．0pmol／LAs：O,、0．125肛g／mL华蟾素、0．25斗g／mL华蟾素、1．0卜mol／LAs20,＋0．125肛g／mL华蟾素、1．0斗mol／LAs20,＋0．25斗g／mL华蟾素作用K562细胞24h和48h后,增殖抑制率分另0为（24-4-1．3）％、（21±1．5）％、（38-4-3．1）％、（57±2．7）％、（66±3-3）％及（49±2．9）％、（48±2．7）％、（61±2．1）％、（77±3．8）％、（82±4．2）％,细胞凋亡率分别为（4_8±0．5）％、（5．6±0．7）％、（9．8±0．6）％、（11．9-4-1．2）％和（15．2±1．5）％及（11．0±0．9）％、（12．9±1．1）％、（18．4±1．5）％、（21．0±2．0）％、（28．0±1．9）％,凋亡细胞百分率呈时间剂量依赖关系;DNA电泳出现“梯”状条带;Bcr—Abl蛋白酪氨酸磷酸化水平出现时间剂量依赖性下调。结论As,O,和华蟾素能诱导K562细胞凋亡和抑制其增殖,两药联用具有协同作用,机制与下调K562细胞Ber—Abl蛋白酪氨酸磷酸化有关。     

柚皮素对人髓系白血病K562细胞增殖的作用

目的:探讨柚皮素(naringenin)对人慢性髓系白血病K562细胞株生长的影响及其作用机制。方法:MTT法检测柚皮素在不同浓度、不同时间对K562细胞的影响;倒置显微镜下,Wight-Giemsa染色(W-G染色),免疫荧光染色和透射电镜下观察细胞形态变化、凋亡发生情况以及超微结构的变化;并用流式细胞仪分析细胞周期分布,用免疫组织化学的方法检测细胞增殖核抗原(PCNA)的表达。结果:柚皮素对K562细胞增殖有明显抑制作用,作用24,48和72 h后的半数抑制浓度(IC50)分别为455,225和175μmol/L;柚皮素处理组细胞在普通光镜和电镜下均见观察到显著的增殖抑制和典型的细胞凋亡形态学改变;流式细胞仪分析证实柚皮素能使K562细胞聚积在G0/G1期,S期细胞减少;在处理组PCNA的表达显著低于对照组。结论:柚皮素对K562细胞具有明显的增殖抑制作用,这一作用可能是通过细胞周期阻滞和诱导凋亡两种机制实现的。     

STAT5-ROS信号通路介导K562细胞伊马替尼耐药的机制研究

目的 探讨信号转导与转录因子5-氧化物(STAT5-ROS)细胞信号转导通路在慢性髓细胞白血病细胞(K562)伊马替尼(IM)耐药中的作用机制.方法 以浓度递增的方法诱导K562对IM产生耐药, CCK-8法检测其耐药性.RT-PCR方法定量测定K562/G细胞中STAT5A和STAT5B mRNA表达.流式细胞术测定ROS和细胞凋亡水平.Western blot法检测细胞中总STAT5和p-STAT5蛋白表达.结果 实验成功诱导K562/G耐药细胞,CCK-8法测定耐药倍数为80倍.细胞生长曲线显示20 μmol/L IM作用于K562/G细胞48 h,活细胞数量减半.0.1 μmol/L IM作用于K562细胞24 h,活细胞数量几乎为零.流式细胞检测K562/G细胞内ROS水平明显高于K562细胞(P=0.000 1),相同浓度IM作用于两株细胞相同时间,K562/G细胞凋亡比例低于K562(P<0.05).RT-PCR结果显示K562/G细胞中STAT5A和STAT5B水平均高于K562(P=0.000 1、0.017 0).Western blot结果表明K562/G细胞中STAT5蛋白水平显著升高(P=0.009 0).结论 STAT5在慢性髓细胞白血病中高表达,STAT5-ROS通路的活化与K562细胞IM耐药密切相关.     

小分子酪氨酸激酶抑制剂AG-490对人慢性髓系白血病急变细胞株K562细胞增殖凋亡的影响

目的探讨酪氨酸激酶抑制剂AG-490对人慢性髓系白血病急变细胞株K562细胞的增殖及凋亡的影响。方法采用MTT法观察AG-490在体外对人慢性髓系白血病急变细胞株K562细胞增殖的影响,光学显微镜下观察AG-490对K562细胞形态的变化,流式细胞术检测AG-490对K562细胞凋亡及细胞周期的影响,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）及实时荧光定量PCR技术检测AG-490作用后K562细胞bcr/abl融合基因及凋亡相关基因c-myc mRNA的表达水平。结果 AG-490可明显抑制K562细胞的增殖,并随药物作用时间的延长和浓度的增加,抑制作用越明显（P〈0.05）;AG-490可使细胞周期阻滞于G1期,促使其凋亡（P〈0.05）。AG-490作用于K562细胞48 h后bcr/abl融合基因的表达无明显改变（P〉0.05）,而c-myc的表达水平明显降低（P〈0.05）。结论 AG-490可能通过阻断JAK2信号通路而下调c-myc的表达,使K562细胞阻滞于G1期,从而抑制K562细胞增殖,促使其凋亡。     

四嗪二甲酰胺对K562和K562／Adr的作用及其与NF—κB信号分子的关系

目的探讨四嗪二甲酰胺（ZGDHu-1）对慢性粒细胞白血病细胞株K562（K562-S）和耐药细胞株K562／Adr（K562-R）的抑制作用及其对p210BCR／Abl融合蛋白和转录核因子KB（NF—κB）表达的影响。方法MTT比色法观察其对K562-S细胞增殖的抑制作用,采用Hoechst33258荧光染色检测细胞凋亡,流式细胞仪及细胞克隆形成初步分析其对白血病干细胞的影响,通过Western印迹分析PARP-1、p210BCR／Abl、e—Abl、NF—KB的表达。结果不同浓度的ZGDHu-1对K562-s细胞均有增殖抑制作用,呈现剂量一时间依赖关系,ZGDHu-1作用48h时的IC50值为0．25μg／ml。在ZGDHu-1作用7天后,K562-S及K562-R细胞克隆形成被完全抑制。ZGDHu-1作用48h后,出现PARP-1裂解,诱发细胞凋亡,下调K562-R细胞p210BCR／Abl及C—Abl的表达,抑制K562-S及K562-R细胞质内NF—κB／p65的表达。结论ZGDHu-1能够抑制K562-s及耐药细胞株K562／Adr（K562-R）细胞的增殖,促进细胞凋亡。通过抑制p210BCR／Abl的表达,降低NF—κB的活性,阻断NF—κB信号传导通路,尤其对于耐药型白血病细胞具有广泛的应用价值。     

Study on Taxol in Inhibiting Human Leukemia Cell Proliferation andInducing Apoptosis

Objective: To explore the effects of Taxol in inhibiting human leukemia k562 cell proliferation and inducing apoptosis in vitro. Methods: Human leukemia K562 cells were treated with Taxol of different concentrations for 12-72 hrs. Cell proliferation was evaluated by MTT assay and morphological changes of apoptosis were examined by microscopy. Cell apoptosis was determined by flow cytometry (FCM) and DNA gel electrophoresis. Results: Growth of K562 cells was inhibited by Taxol with an IC50 value of 0. 84μg/ml. Typical nuclear condensation and apoptosis bodies were observed as early as 24 hrs after a 0.5μg/ml Taxol treatment; Apoptotic rate of the Taxol-treated K562 cells increased from 3.7% to 24.0% in 24 hrs. No DNA ladder was observed by DNA gel electrophoresis. Conclusion: Taxol could inhibit K562 cell growth and induce apoptosis in vitro.     

KA2012MBL复合提取液体外抗肿瘤活性评价及相关机制研究

目的：系统评价KA2012 MBL复合提取液的抗肿瘤活性及对P-gp介导的肿瘤多药耐药的克服能力,并初步探讨KA2012 MBL复合提取液的抗肿瘤机制。方法应用SRB法测定KA2012 MBL复合提取液对K562/A、K562/S和HGC-27的细胞毒活性,应用流式细胞术检测KA2012 MBL复合提取液对K562/S细胞的细胞周期阻滞作用、凋亡诱导作用和对其线粒体膜电位的影响作用。结果 KA2012 MBL复合提取液对肿瘤细胞株K562/A、K562/S和HGC-27均具有细胞毒活性,IC50值分别为（1．12±0．15）％（v/v％）、（1．18±0．04）％（v/v％）、（1．21±0．17）％（v/v％）,并可有效克服P-gp介导的肿瘤多药耐药。流式细胞术检测结果显示KA2012MBL复合提取液可有效降低K562/S细胞的线粒体膜电位,并可使 K562/S 细胞阻滞在 G0/G1期,从而诱导其凋亡。结论KA2012 MBL复合提取液通过诱导肿瘤细胞凋亡而杀死肿瘤细胞,同时能克服P-gp介导的肿瘤多药耐药。