金雀异黄素诱导K562和K562/ADM细胞的凋亡作用

目的探讨金雀异黄素(GS)对人红白血病细胞系K562与其多药耐药细胞系K562/ADM的生长抑制、诱导凋亡作用及其可能的作用机制。方法不同浓度的GS处理K562与K562/ADM细胞后,用MTT比色法检测生长增殖作用,流式细胞术检测凋亡,免疫细胞化学ABC法分析Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果 GS对K562及K562/ADM细胞均有很强的生长抑制作用。同一浓度下GS诱导K562/ADM细胞凋亡率明显低于K562细胞。不同浓度GS对K562细胞的Bax蛋白呈强阳性表达,Bcl-2蛋白实验组同对照组比较颜色无明显变化;而在K562/ADM细胞中,Bcl-2在实验组和对照组中均强表达,但Bax的表达均无明显变化。结论 K562细胞对GS的反应比K562/ADM细胞敏感;GS诱导K562细胞Bax蛋白高表达可能是GS诱导K562细胞凋亡的机制之一,而K562/ADM细胞的耐药性和凋亡抑制可能与Bcl-2蛋白高表达有关。     

运用siRNA抑制K562细胞中端粒酶逆转录酶基因表达的研究

目的建立利用小分子干扰RNA(siRNA)技术抑制白血病细胞系K562细胞中端粒酶活性的方法,为肿瘤的基因治疗提供理论依据。方法设计端粒酶逆转录酶(hTERT)基因特异性siRNA,用体外转录方法合成hTERT基因的siRNA并转染K562细胞,培养48小时后,收集细胞,应用实时荧光定量RT-PCR和western blot方法检测转染细胞中hTERT基因mRNA水平和蛋白表达量的变化,并运用TRAP ELISA方法检测细胞内端粒酶活性的变化。结果转染siRNA后,与对照组相比,实验组hTERT mRNA水平和蛋白表达量明显降低,抑制率分别为75％和60％,同时。TRAP ELISA方法检测发现实验组端粒酶活性仅为对照组活性的45％。结论hTERT siRNA能特异性的抑制hTERT基因的表达,降低端粒酶活性,因此运用siRNA来抑制hTERT的表达可达到降低端粒酶活性的效果。     

PCa组织Mfn2 mRNA表达及转染Mfn2过表达质粒的人PCa细胞株增殖、迁移、侵袭、凋亡观察

目的 观察前列腺癌（PCa）组织Mfn2 mRNA表达及转染Mfn2过表达质粒的人PCa细胞株增殖、迁移、侵袭、凋亡情况。方法 体外培养人PCa细胞株（PC3细胞和DU145细胞），分别转染Mfn2过表达质粒、空白载体质粒及不转染质粒，PC3细胞分别记为A、B、C组，DU145细胞分别记为D、E、F组。CCK-8实验检测各组细胞OD值，细胞集落形成实验测算各组细胞集落数目，以OD值和细胞集落数目表示细胞增殖能力。细胞划痕实验测算各组细胞迁移率，以细胞迁移率表示细胞迁移能力。Transwell实验测算各组细胞侵袭数目，以细胞侵袭数目数表示细胞侵袭能力。流式细胞术测算各组细胞凋亡率，Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Cleaved caspase-3、caspase-3及PI3K/AKT通路相关蛋白（p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT）。结果 PCa、癌旁组织Mfn2 mRNA相对表达量分别为0.36±0.32、0.72±0.35，两者比较，P<0.05。与同组24 h比较，A、B、C组48和72 h的OD值增加（P均<0.05）；与同组48 ...     

高三尖杉酯碱联合survivin抑制剂YM155对人白血病K562细胞系增殖和凋亡的影响

目的:探讨高三尖杉酯碱(HHT)联合survivin抑制剂YM155对人白血病K562细胞系增殖抑制和诱导凋亡的作用及机制。方法:CCK法检测细胞增殖抑制率,依据中效原理及CalcuSyn软件评价HHT和YM155的联合治疗效果。设空白对照组、HHT组、YM155组和联合用药组,采用Annexin V/PI双染法以流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot法检测survivin蛋白变化,以特异性荧光底物检测caspase-3、-8活性变化。结果:HHT和YM155单药均以浓度依赖方式抑制K562细胞生长,二者联合应用具有化疗协同作用(CI1)。联合用药组K562细胞凋亡率明显高于单独用药组,且survivin蛋白表达显著下调(均P0.05)。HHT单药及联合用药组诱导caspase-3、-8活化,而YM155单药未引起caspase-3、-8活性变化。结论:HHT和YM155联合应用于K562细胞具有化疗协同作用,通过下调survivin诱导K562细胞凋亡。     

白血病抑制因子对K562细胞增殖、凋亡及p53蛋白表达的影响

目的探讨白血病抑制因子（LIF）体外对K562细胞增殖、凋亡的影响及机制。方法取对数生长期K562细胞接种于96孔板中,随机分为对照组和观察1—3组,分别加入质量浓度为0、5、10、40μg/L的重组人LIF,继续培养6、12、24、48h;应用MTT法、Hoeehst染色法观察各组K562细胞增殖活性、凋亡率,采用免疫组化法检测观察3组和对照组p53蛋白表达情况。结果观察1～3组不同时间细胞增殖活性均显著低于对照组,且观察1组〉观察2组〉观察3组、6h〉12h〉24h〉48h（P均〈0．05）;观察1—3组不同时间细胞凋亡率均显著高于对照组,且观察1组〈观察2组〈观察3组、6h〈12h〈24h〈48h（P均〈0．05）;观察3组各时间点p53蛋白阳性表达率均明显高于对照组,且6h〈12h〈24h〈48h（P均〈0．05）。结论LIF能以浓度-时间依赖性抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡,机制可能为上调p53蛋白表达。     

Smac基因过表达对白血病耐药细胞株K562/AO2化疗敏感性的影响

目的 探讨Smac基因过表达对K562/A02细胞株化疗敏感性的影响.方法 构建重组腺病毒载体pAdeno-Smac,转染K562/A02细胞.实验分组:A组:pAdeno-Smac转染组;B组:空载体转染对照组;C组:正常对照组.Western blot检测转染前后细胞内Smac蛋白的表达水平.将终浓度分别为0、0.5、1.0、1.5 mg/L的柔红霉素处理各组后,Annexin V/PI双染法经流式细胞仪检测各组细胞早期凋亡率.结果 成功构建腺病毒载体pAdeno-Smac质粒.Western blot结果证实,经Smac基因全长cDNA转染后,K562/A02细胞中的Smac蛋白表达显著升高.经不同浓度柔红霉素处理后,A组的细胞早期凋亡率明显高于B组和C组,组间比较差异有统计学意义(P＜0.05),且随着柔红霉素浓度的升高,细胞凋亡率随之升高,B组和C组之间差异无统计学意义.结论 重组腺病毒载体pAdeno-Smac可通过使K562/A02细胞中的Smac蛋白表达增高,增强细胞对化疗药物的敏感性.     

硼替佐米对高三尖杉酯碱耐药细胞株K562的作用及其机制

目的:探究硼替佐米对高三尖杉酯碱耐药细胞株K562(K562/HHT)的作用及其机制。方法:采用浓度梯度增加法建立K562/HHT细胞;CCK-8法检测不同浓度硼替佐米分别作用K562和K562/HHT细胞24 h、48 h后对细胞增殖抑制的作用;流式细胞术分别检测硼替佐米单独或联合高三尖杉酯碱作用于K562/HHT细胞48 h后的细胞凋亡;Western blotting技术检测硼替佐米单独或联合高三尖杉酯碱作用K562/HHT细胞48 h后BCL-2、P170蛋白表达的变化。结果:成功建立K562/HHT细胞,24 h耐药倍数为678.31倍,48 h耐药倍数为787.31倍。硼替佐米对K562/HHT细胞的增殖抑制呈浓度、时间依赖性(P0.05);低浓度硼替佐米能够逆转K562/HHT的耐药性,24 h逆转倍数为2.89倍,48 h逆转倍数为3.85倍。低浓度硼替佐米联合高三尖杉酯碱能够增加K562/HHT的凋亡;低浓度硼替佐米能够抑制K562/HHT细胞P170蛋白的表达,但不影响BCL-2的表达。结论:低浓度硼替佐米可以逆转K562/HHT细胞对高三尖杉酯碱的耐药,增加K562/HHT的化疗敏感性,其机制可能与下调耐药蛋白P170相关。     

白藜芦醇对白血病K562细胞增殖、凋亡的影响及机制探讨

目的 探讨白藜芦醇对白血病K562细胞生长的影响及相关作用机制.方法 用不同浓度白藜芦醇作用于K562细胞,CCK-8法观察白藜芦醇对K562细胞生长增殖的影响,AnnexinV-FITC/PI双染法观察白藜芦醇对K562细胞凋亡的影响,PI染色法观察白藜芦醇对K562细胞周期的影响,Western blot法检测K562细胞中的Bcl-2、Bcl-xl、Bax、Cyclin D1蛋白.结果 白藜芦醇作用后的K562细胞的增殖被抑制并且凋亡增加,呈时间-剂量依赖性;同时,凋亡相关分子Bcl-2、Bcl-xl表达下调,Bax表达上调;白藜芦醇作用K562细胞后,G1期细胞增多,S期细胞减少,细胞周期调节蛋白Cyclin D1表达下降.结论 白藜芦醇可抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与下调细胞内Bcl-2、Bcl-xl、Cyclin D1表达并上调Bax的表达有关.     

Cx43基因修饰对大肠癌细胞的放射增敏作用

目的通过重组质粒pBudCE4.1-Cx43转染人大肠癌SW480细胞,探讨Cx43基因修饰对大肠癌SW480放射增敏性的影响。方法用Lipofectamine TM2000转染的方法将重组表达质粒pBudCE4.1-Cx43转染入大肠癌SW480细胞,通过RT-PCR、Western印迹检测Cx43在转染后的mRNA和蛋白的表达情况,转染48 h后,分别测定各个处理组细胞Cx43 mRNA水平及其蛋白表达水平,划痕染料示踪法检测细胞间通讯功能。各组细胞分别接受不同剂量6 MV X射线照射,通过集落形成实验检测细胞放射敏感性,流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率。每组实验重复3次。通过构建人大肠癌裸鼠移植瘤模型,观察10 Gy照射后肿瘤生长状况,并检测其Bcl-2基因活性。结果 Cx43 mRNA和蛋白表达,转染组与阴性对照组和空白组相比显著升高,差异有统计学意义(P0.05)。细胞传递的荧光强度,转染组与阴性对照组和空白组相比亦显著升高,差异有统计学意义(P0.01),与阴性组和空白对照相比,经过射线放射处理后,转染组细胞的增殖能力显著降低(P0.05);经过0～8 Gy射线处理后细胞克隆形成的能力明显下降(P0.05);10 Gy照后,转染组凋亡率为(19.86±1.53)%,明显高于阴性对照组[(6.75±1.20)%]和空白组[(6.90±1.17)%,P0.05];同时射线处理后移植瘤生长受到显著抑制作用;移植瘤细胞的Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P0.05)。结论转染Cx43基因能够提高人大肠癌SW480细胞对X射线的敏感性,概系因降低了细胞Bcl-2的基因表达使然。     

海生素对体外白血病K562细胞的抑制作用及其机制

目的探讨海生素对体外白血病K562细胞的抑制作用及机制。方法将0.1、1、10、100、1000μg/ml的海生素分别作用于K562细胞24、48 h,免疫细胞化学法检测凋亡相关蛋白bcl-2、bax的表达。结果海生素作用后K562细胞抑制率明显高于对照组,且呈现浓度及时间依赖性。K562细胞bcl-2蛋白表达下调,bax蛋白表达上调。结论海生素可抑制K562细胞的生长,其机制可能为通过下调bcl-2蛋白表达,增加bax蛋白的表达,诱导细胞凋亡。     

白血病抑制因子对K62细胞增殖、凋亡及p53蛋白表达的影响

目的 探讨白血病抑制因子(LIF)体外对K562细胞增殖、凋亡的影响及机制.方法 取对数生长期K562细胞接种于96孔板中,随机分为对照组和观察1～3组,分别加入质量浓度为0、5、10、40μg/L的重组人LIF,继续培养6、12、24、48 h;应用MTT法、Hoechst染色法观察各组K562细胞增殖活性、凋亡率,采用免疫组化法检测观察3组和对照组p53蛋白表达情况.结果 观察1～3组不同时间细胞增殖活性均显著低于对照组,且观察1组＞观察2组＞观察3组、6 h＞12 h＞24 h＞48 h(P均＜0.05);观察1～3组不同时间细胞凋亡率均显著高于对照组,且观察1组＜观察2组＜观察3组、6 h＜12 h ＜24 h＜48 h(P均＜0.05);观察3组各时间点p53蛋白阳性表达率均明显高于对照组,且6 h＜12 h＜24 h＜48 h(P均＜0.05).结论 LIF能以浓度—时间依赖性抑制K562细胞 增殖并诱导其凋亡,机制可能为上调p53蛋白表达.     

基因重组质粒pBudCE4.1_Cx43转染骨髓间充质干细胞及其表达和功能的测定

目的用重组质粒pBudCE4.1_Cx43转染大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),观察缝隙连接蛋白43(connexin43,Cx43)的mRNA和蛋白的表达及细胞间隙连接通讯功能的变化。方法用脂质体转染的方法将重组表达质粒pBudCE4.1_Cx43转染细胞;用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测Cx43mRNA表达,免疫细胞化学法检测Cx43蛋白的表达,划痕染料示踪法检测细胞间通讯功能。结果转染Cx43基因后的细胞在形态学、生长能力等方面的特征与未转染的细胞比较没有明显变化;Cx43mRNA与蛋白的相对表达量和对照组相比差异显著(P<0.01);转染组细胞传递的荧光强度与对照组相比亦差异显著(P<0.01)。结论转染Cx43基因的BMSCs能表达有生物学活性的基因产物,改善细胞间通讯功能,能为细胞性心肌成形术提供较理想的基因工程细胞。     

K562/A02细胞核糖体蛋白L6的表达与多药耐药性的实验研究

目的观察核糖体蛋白L6(RPL6)基因表达的改变对白血病多药耐药性的作用。方法通过RT-PCR方法获得RPL6cDNA序列,用真核表达载体pcDNA3.1( )分别构建正向插入和反向插入的RPL6cDNA重组质粒,以脂质体将正义RPL6cDNA真核表达质粒转染K562细胞,将反义RPL6cDNA真核表达质粒转染K562/A02细胞,以MTT法检测细胞对阿霉素(ADM)、长春新碱(VCR)、米托蒽醌(MIT)和依托泊苷(VP16)耐药性的作用。结果RPL6在K562/A02细胞中的表达较K562增高(P<0.001),转染正义RPL6cDNA真核表达质粒后,K562细胞对ADM、VCR、MIT、VP16的耐药性比未转染的K562细胞分别增强3.25、1.95、2.00和3.48倍(P<0.05或0.01),转染反义RPL6cDNA真核表达质粒后,K562/A02细胞对ADM、VCR、MIT、VP16的耐药性比未转染的K562/A02细胞分别降低62%、50%、56%和47%(P<0.05或0.01)。结论RPL6基因过表达在K562/A02细胞耐药性的形成中起重要作用。     

藤黄酸调控白血病K562细胞GFI-1表达及对细胞增殖和凋亡的影响

目的: 探讨藤黄酸对白血病K562细胞增殖和凋亡的影响及可能的机制。方法：体外培养K562细胞,采用CCK-8法检测不同浓度藤黄酸(0、0.2、0.4、0.8、1.2、2.0μmol/L)处理24、48、72h后K562细胞增殖率;用流式细胞术检测K562细胞的凋亡和周期;采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR)）和Western blot法检测独立生长因子1(GFI-1) 的mRNA及蛋白表达水平。结果： 藤黄酸可以抑制K562细胞的增殖,并呈剂量、时间依赖性;0.4μmol/L藤黄酸处理24h后的K562细胞凋亡率增加;藤黄酸对GFI-1的mRNA表达无显著影响,藤黄酸可以下调GFI-1蛋白的表达;藤黄酸及蛋白酶体抑制剂（MG132）共处理后的K562细胞GFI-1蛋白水平较藤黄酸组升高;藤黄酸及氯喹（CQ）共处理后的K562细胞GFI-1蛋白水平与藤黄酸组无统计学差异（P>0.05）。结论： 藤黄酸可以有效抑制K562细胞的增殖并诱导细胞凋亡;藤黄酸可以诱导K562细胞G0/G1期及S期阻滞;藤黄酸通过蛋白酶体途径促进GFI-1蛋白降解。     

白藜芦醇的小分子类似物RSVA314对白血病K562细胞迁移和增殖的影响

目的:探讨白藜芦醇的小分子类似物(RSVA314)对白血病K562细胞迁移和增殖的影响。方法:体外培养K562细胞,并分为4组:生理盐水对照组、RSVA314低剂量组(1μM)、RSVA314中剂量组(5μM)、RSVA314高剂量组(25μM)。采用CCK-8方法分别检测4组中K562细胞的增殖活性;采用TransweⅡ迁移实验分别检测4组K562细胞的迁移能力;采用Western blot分别检测4组K562细胞蛋白激酶B(AKT)的表达。结果:与对照组比较,RSVA314中、高剂量组OD值明显增加(P0.05或P0.01),提示其可抑制K562细胞的增殖活性。RSVA314低、中、高剂量组穿膜细胞数量明显减少,与对照组比较有明显差异(P0.05或P0.01)。Western blot检测显示RSVA314中、高浓度组可抑制AKT磷酸化的表达,与对照组比较有显著差异(P0.05或P0.01)。结论:RSVA314能抑制白血病K562细胞迁移和增殖,其机制可能与抑制K562细胞AKT磷酸化表达有关。     

RSVA314对白血病细胞K562 细胞迁移和增殖的影响

目的 探讨RSVA314对白血病细胞K562 细胞迁移和增殖的影响,为RSVA314可能治疗白血病提供实验依据。方法 通过体外培养K562 细胞,实验分为四组：生理盐水对照组、RSVA314低剂量组（1 μM）、RSVA314中剂量组（5 μM）、RSVA314高剂量组（25 μM）。采用CCK-8方法检测K562细胞的增殖活性;采用Transwell 迁移实验检测K562细胞的迁移能力;采用Western blot检测K562细胞蛋白激酶B（AKT）的表达。结果 与对照组相比,RSVA314中、高剂量组OD值明显增加（P<0.05,P<0.01）,提示其可抑制K562细胞的增殖活性。RSVA314低、中、高剂量组穿膜细胞数量明显减少,与对照组相比有明显的差异（P<0.05,P<0.01,P<0.01）。Western blot 检测显示RSVA314中、高浓度组可抑制AKT磷酸化的表达,与对照组相比有显著差异（P<0.05,P<0.01）。     

川楝素诱导K562细胞自噬性死亡的实验研究

目的研究川楝素诱导人慢性髓系白血病K562细胞自噬性死亡的作用及其机制。方法不同浓度川楝素处理K562细胞后,采用MTT法检测K562细胞的增殖情况,瑞氏染色观察细胞形态学,透射电镜观察K562细胞超微结构,免疫细胞化学法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)-Ⅱ、Beclin1的表达。结果川楝素对K562细胞有明显增殖抑制作用,呈时间和浓度依赖性,P均<0.01。光镜下可见K562细胞数量减少,胞质出现大量空泡。30、50 nmol/L川楝素处理K562细胞后,透射电镜下可见典型的自噬体。免疫细胞化学法结果显示,K562细胞Beclin1、LC3-Ⅱ蛋白表达较阴性对照组增强,P均<0.01。结论川楝素对K562细胞有显著的增殖抑制作用,川楝素可以诱导K562细胞发生自噬性细胞死亡,其作用机制可能与上调Beclin1、LC3-Ⅱ蛋白有关。     

半夏水提取液诱导人白血病K562细胞凋亡的初步研究

目的:观察半夏水提取液对K562细胞增殖及凋亡的影响,初步探讨半夏对白血病的抗肿瘤作用机制。方法:采用CCK-8法,检测半夏水提取液不同浓度梯度范围内(35、350、700、1 000μg/ml)及不同作用时间(24、48、72h)对K562细胞的增殖抑制率;流式细胞仪检测K562细胞48h凋亡及周期变化。结果:半夏水提取液对人白血病K562细胞的增殖有明显的抑制作用,且呈剂量依赖性和时间依赖性;流式细胞仪分析结果显示半夏水提取液作用K562细胞48h后细胞凋亡百分率随半夏水提取液浓度增加而增加,且半夏水提取液可以诱导K562细胞周期阻滞在G0/G1期。结论:半夏水提取液在一定浓度范围内对人白血病细胞K562的增殖有抑制作用,且呈一定的量效时效关系;其对K562细胞的抑制作用可能与其诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞有关。     

上调FBP1表达对胃癌细胞生长的抑制作用

目的探讨上调果糖-1,6-二磷酸酶1(fructose-1,6-bisphosphatase 1,FBP1)表达对胃癌细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法以实时定量PCR和Western blotting检测胃癌BGC-823、SGC-7901细胞中FBP1 mRNA和蛋白的表达;将培养的BGC-823细胞随机分为对照组(未转染)、阴性组(转染pc DNA3.1质粒)和实验组(转染pc DNA3.1-Flag-FBP1质粒),以实时定量PCR检测FBP1 mRNA表达,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blotting检测FBP1、Cyclin D1、c-Myc和Cleaved caspase-3蛋白表达。结果与正常胃黏膜上皮GES-1细胞相比,胃癌BGC-823、SGC-7901细胞中FBP1蛋白及mRNA的相对表达水平均显著降低,且BGC-823细胞较SGC-7901细胞下降更为明显;转染后,与对照组相比,实验组细胞中FBP1蛋白及mRNA、细胞的增殖能力和Cyclin D1、c-Myc蛋白表达水平均显著降低,细胞凋亡能力和Cleaved caspase-3蛋白表达水平均显著升高,差异有统计学意义(P0.05);阴性组与对照组比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论 FBP1在胃癌细胞中低表达,上调其表达能够抑制细胞增殖并诱导细胞凋亡,其作用机制可能与上调Cleaved caspase-3蛋白和下调Cyclin D1、c-Myc蛋白表达有关。     

siRNA抑制PTTG表达对人结肠癌LoVo细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响

目的 探讨siRNA抑制人垂体瘤转化基因PTTG表达对人结肠癌LoVo细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响.方法 LoVo细胞分为3组:正常细胞对照组、Lipo2000+ pGenesil-2.1 HK组(HK阴性对照组)、Lipo2000+ pGenesil-2.1-PTTG siRNA组.应用Western印迹法检测转染48 h后各组细胞PTTG蛋白表达,MTT法检测转染24、48和72 h后各组细胞增殖情况,流式细胞术检测转染48 h后各组LoVo细胞凋亡和细胞周期情况.结果 pGenesil-2.1-PTTG siRNA质粒转染LoVo细胞后PTTG蛋白表达明显低于正常和HK阴性对照组.MTT比色分析法显示,pGenesil-2.1-PTTGsiRNA质粒转染LoVo细胞后,在24、48和72 h细胞增殖能力均显著低于正常对照组和阴性对照HK组(均P＜0.05).流式细胞术检测结果显示,与对照组相比,转染pGenesil-2.1 PTTG siRNA质粒后LoVo细胞Go/G1期细胞百分率均高于正常和阴性HK对照组(均P＜0.01),而S期细胞百分率均低于正常和阴性HK对照组(均P＜0.01);Annexin V-PI双染结果显示,转染pGenesil-2.1 PTTG siRNA质粒后LoVo细胞凋亡百分率高于正常和阴性HK对照组(均P＜0.01).结论 pGenesil-2.1-PTTG siRNA质粒可明显抑制LoVo细胞PTTG蛋白表达,并进而抑制LoVo细胞增殖,促进其凋亡,使细胞阻滞于G0/G1期.