恶性疟原虫EBA-175与血型糖蛋白A结合位点的鉴定

目的 探索EBA-175与GPA之间的结合信息,为疟疾短肽疫苗及拮抗药物的研制奠定基础.方法 以EBA-175重组蛋白为靶,采用亲和筛选法对噬菌体随机十二肽库进行3轮筛选,通过ELISA、竞争抑制试验、Dot-ELISA及Western blotting等方法鉴定获得的噬菌体短肽与EBA-175之间的结合特性.对阳性克隆进行DNA序列测定,推导其十二肽的氨基酸序列并与GPA氨基酸全序列进行了同源性比较.结果 经3轮亲和筛选后,结合噬菌体得到良好富集.从第3轮洗脱液铺制的琼脂板中随机挑取30个噬菌体单克隆,ELISA检测有27个为阳性,阳性率达90%.竞争性ELISA显示多数阳性噬菌体能竞争抑制EBA-175与其单抗结合.DNA及氨基酸序列分析表明24个噬菌体展示十二肽中共有序列IRR与GPA的114-116位氨基酸同源.结论 阳性噬菌体表达的短肽是EBA-175所识别的模拟表位,IRR几位氨基酸可能对EBA-175与GPA的结合起重要作用.     

重组恶性疟原虫红细胞结合抗原175功能区的制备及联合免疫

目的:全合成恶性疟原虫eba-175Ⅱf2基因并在毕氏酵母中进行高效分泌表达,用该重组蛋白与我室研制的疟疾疫苗候选抗原PfCP-2.9进行联合免疫以观察是否存在竞争性免疫抑制.方法:采用不对称PCR法拼接合成eba-175Ⅱf2基因(959 bp),用电转化方法将合成基因导入毕氏酵母中并进行诱导表达,采用离子交换层析和分子筛层析纯化EBA-175ⅡF2蛋白.结果:全合成eba-175Ⅱf2基因在毕氏酵母中高效分泌表达.重组EBA-175ⅡF2和PfCP-2.9联合免疫后,以ELISA 和IFA检测,针对2个蛋白联合免疫的抗体滴度明显高于2个蛋白单独免疫的滴度.结论:重组EBA-175ⅡF2和PfCP-2.9联合免疫时不存在竞争性免疫抑制,这2个重要的疟疾疫苗候选抗原具有潜在联合应用前景.     

恶性疟红细胞结合抗原功能区基因的克隆及其序列变异性的研究

红细胞结合抗原-肽4(EBA-肽4)是疟疾疫苗重要候选抗原。采用聚合酶链反应(PCR)方法克隆和鉴定了EBA-肽4的基因片段。用双脱氧末端终止法测定了我国海南省5株恶性疟原虫该基因的序列。结果表明,所测虫株的该基因序列完全一致,但与旧外报道的序列相比较,在3209位的碱基     

抗恶性疟原虫EBA-175单克隆抗体的制备与初步鉴定

目的 制备抗恶性疟原虫EBA-175的单克隆抗体(McAb),为恶性疟原虫的诊断及疫苗研究奠定基础。方法 以恶性疟原虫EBA-175(II区F2段)重组抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备McAb,间接ELISA筛选分泌高滴度McAb的杂交瘤细胞株,测定其免疫球蛋白亚类及其效价,ELISA、Westernblot试验分析其特异性。结果 筛选获得6株稳定分泌抗重组EBA-175McAb的杂交瘤细胞株1F3、2E8、2H5、4A1、4C3、4H9,6株McAb经鉴定其亚类5株为IgG1,1株为IgG2a,6株McAb的培养上清ELISA效价为1:256~1:512,腹水效价为1:12800~1:25600,间接ELISA显示其中4株McAb1F3、2H5、4A1、4H9能与恶性疟原虫抗原发生特异性结合,而只有1F3、4A1、4H9在Westernblot试验中识别恶性疟原虫M_r约35000的虫源蛋白。结论 获得了能稳定分泌高特异性抗EBA175McAb的杂交瘤细胞。     

恶性疟原虫海南株(FCC1/HN)EBA-175Ⅱ区F2结构域基因的克隆与表达

目的 构建EBA-175Ⅱ区F2结构域基因的原核表达载体。方法采用PCR的方法从恶性疟原虫基因组DNA中扩增出EBA-175Ⅱ区F2结构域856～1848bp基因,定向克隆入PMD18-T质粒,再经BamHI和XhoI酶切亚克隆人高效表达载体pET23a( )。重组质粒经PCR、酶切、测序鉴定后,在BL21(DE3)菌株中进行IPTG诱导表达。结果重组质粒经序列测定证实插入基因为目的基因,符合表达框架,经IPTG诱导,在BL21(DE3)菌株中以非融合蛋白形式表达,SDS-PAGE电泳显示在约36．4kDa处可见明显蛋白增粗条带,与预期结果一致。结论成功构建了重组EBA～175Ⅱ区F2结构域基因表达载体,并在BL21(DE3)中有效表达。     

抗恶性疟原虫EBA-175单克隆抗体的制备与初步鉴定

目的制备抗恶性疟原虫EBA—175的单克隆抗体（McAb），为恶性疟原虫的诊断及疫苗研究奠定基础。方法以恶性疟原虫EBA-175（Ⅱ区F2段）重组抗原免疫BALB／c小鼠，采用杂交瘤技术制备McAb，间接ELISA筛选分泌高滴度McAb的杂交瘤细胞株．测定其免疫球蛋白亚类及其效价，ELISA、Western blot试验分析其特异性。结果筛选获得6株稳定分泌抗重组EBA-175McAb的杂交瘤细胞株1F3、2E8、2H5、4Al、4C3、4H9，6株McAb经鉴定其亚类5株为IgG1，1株为IgG2a，6株McAb的培养上清ELISA效价为1：256～1：512，腹水效价为1：12800-1：25600，间接ELISA显示其中4株McAb 1F3、2H5、4A1、4H9能与恶性疟原虫抗原发生特异性结合，而只有1F3、4A1、4H9在Western blot试验中识别恶性疟原虫Mr约35000的虫源蛋白。结论获得了能稳定分泌高特异性抗EBA175McAb的杂交瘤细胞。     

红细胞压积、C反应蛋白水平与2型糖尿病中医辨证分型的关系

目的:分析红细胞压积、C反应蛋白水平与2型糖尿病中医辨证分型的关系。方法:175例2型糖尿病患者为研究对象,按照中医辨证分型分为痰湿内阻证、气阴两虚证、阴虚热盛证及血瘀脉络证。分别检测所有患者红细胞压积、C反应蛋白水平、体质量指数、糖化血红蛋白、血压并进行统计分析。结果:175例2型糖尿病患者中痰湿内阻证45例(25. 71%),气阴两虚证52例(29. 71%),阴虚热盛证43例(24. 57%),血瘀脉络证35例(20. 00%)。痰湿内阻证患者体质量指数显著高于其他证型患者,差异具有统计学意义(P 0. 05);阴虚热盛证患者红细胞压积显著高于其他证型患者,差异具有统计学意义(P 0. 05);痰湿内阻证C反应蛋白水平显著高于其他证型患者,差异具有统计学意义(P 0. 05)。红细胞压积与年龄、病程、体质量指数、收缩压、舒张压、C反应蛋白存在正相关(r=0. 008、0. 002、0. 047、0. 028、0. 007、0. 009,P 0. 05); C反应蛋白与年龄、病程、体质量指数、红细胞压积存在正相关(r=0. 007、0. 001、0. 015、0. 008,P 0. 05)。结论:气阴两虚证是2型糖尿病最常见的证型,痰湿内阻可能是肥胖重要病理实质之一,红细胞压积、C反应蛋白水平可作为型糖尿病中医辨证分型的参考指标。     

应用E-玫瑰花环试验检测动物T细胞

[目的 ]对人和几种动物的淋巴细胞数目进行测定 .[方法 ]应用T淋巴细胞玫瑰花环实验 .[结果 ]马的淋巴细胞与豚鼠的红细胞结合好 ,但不能与绵羊的红细胞结合 .牛的淋巴细胞与绵羊红细胞及豚鼠红细胞结合好 .豚鼠淋巴细胞与兔红细胞结合率高 .[结论 ]在测定动物的T细胞数时 ,必须同时测试几种动物的红细胞 ,否则T细胞数目将不准确     

红细胞免疫功能在中医药研究中应用

红细胞免疫功能在中医药研究中应用吴达武李平张梅（安徽中医学院学报编辑部合肥２３００３８）关键词：红细胞免疫功能;中医药科研１９８１年Ｓｉｅｇｅｌ首先提出“红细胞免疫系统”的概念〔１〕,认为红细胞不仅可载输气体以维持呼吸,而且有免疫功能,如识别和储...     

溶血性贫血护理

溶血性贫血(hemolytic anemia)是指红细胞遭破坏致使其寿命缩短,且溶血程度超过骨髓造血代偿能力时所引起的贫血.临床表现特点是贫血、黄疸、脾肿大、网织红细胞增高,骨髓幼红细胞增生.当骨髓造血功能足以代偿红细胞的破坏时,可不发生贫血称为溶血性疾病.