一种从骨巨细胞瘤组织中纯化破骨细胞的简单方法

目的从人骨巨细胞瘤组织中分离纯化及鉴定破骨细胞。方法我们利用0．25％胰酶-EDTA和Ⅰ型胶原酶从人骨巨细胞瘤组织中纯化出大量破骨细胞，并进行表型特征的鉴定：包括抗酒石酸酸性磷酸酶染色(TRAP染色)，采用RT-PCR方法检测降钙素受体、组织蛋白酶K和破骨细胞分化因子受体(RANK)表达。结果该方法所得细胞纯度可达79．7％，具有破骨细胞表型特征。结论该方法所得破骨细胞可用于生化和分子生物学研究，是进行骨代谢研究较好的破骨细胞来源。     

一种从骨巨细胞瘤组织中纯化破骨细胞的简单方法(英文)

目的从人骨巨细胞瘤组织中分离纯化及鉴定破骨细胞。方法我们利用0.25%胰酶-EDTA 和Ⅰ型胶原酶从人骨巨细胞瘤组织中纯化出大量破骨细胞,并进行表型特征的鉴定:包括抗酒石酸酸性磷酸酶染色(TRAP 染色),采用 RT-PCR 方法检测降钙素受体、组织蛋白酶 K 和破骨细胞分化因子受体(RANK)表达。结果该方法所得细胞纯度可达79.7%,具有破骨细胞表型特征。结论该方法所得破骨细胞可用于生化和分子生物学研究,是进行骨代谢研究较好的破骨细胞来源。     

PCNA在骨巨细胞瘤的表达及与病理分级和复发的关系

应用免疫组织化学技术，对32便骨巨细胞瘤进行增殖细胞核抗元原（PCNA）的检测分析，探讨PCNA在骨巨细胞瘤的表达分布及与Jaffe病理分级和复发的关系。结果显示，PCNA的阳性反应只在骨巨细胞瘤波形蛋白阳性的单核基质细胞的胞核中出现，而多核巨细胞均无阳性表达；PCNA在骨巨细胞瘤中的增殖指数虽随Jaffe病理分级增高有呈递增趋势，但各级相互之间在交叉重叠现象；PCNA增殖指数低即低度增生的骨巨细胞瘤复发率低，PCNA增殖指数高即中度和重度增生者复发率明显增高。本文结果进一步支持单核基质细胞是骨巨细胞瘤的主要肿瘤细胞成份的观点，并提示PCNA的表达与Jaffe病理分级不完全一致，但PCNA是判断骨巨细胞瘤预后的一个重要参考指标。     

唑来膦酸诱导骨巨细胞瘤基质细胞向成骨细胞分化的实验研究

目的　探讨唑来膦酸诱导骨巨细胞瘤基质细胞向成骨细胞分化的可行性。方法　取我院收治的７例唑来膦酸治疗前后的患者肿瘤组织切片行ＨＥ染色、茜素红染色、碱性磷酸酶（ＡＬＰ）染色以及成骨前因子Ⅰ型胶原和骨唾液蛋白（ＢＳＰ）的免疫组化染色。取１０例未予唑来膦酸治疗的患者术中切除的骨巨细胞瘤新鲜组织进行原代培养,待骨巨细胞瘤基质细胞贴壁生长后分别给予１μｍｏｌ／Ｌ唑来膦酸诱导１２天后行ＡＬＰ染色、免疫组化法检测Ⅰ型胶原和ＲＴ-ＰＣＲ检测Ｃｂｆａ-１的表达。结果　（１）唑来膦酸治疗前,肿瘤组织切片中骨巨细胞瘤基质细胞ＢＳＰ染色阴性或低至中度阳性、Ⅰ型胶原染色阴性或轻度阳性,茜素红和ＡＬＰ染色均为阴性;治疗后,茜素红染色阳性,ＡＬＰ染色弱阳性,ＢＳＰ和Ⅰ型胶原染色均转为强阳性,３例患者组织切片中ＨＥ染色发现类骨质或骨矿化的增加。（２）原代培养的骨巨细胞瘤基质细胞中予１μｍｏｌ／Ｌ唑来膦酸诱导１２天,空白对照组ＡＬＰ和Ⅰ型胶原染色均为弱阳性表达,唑来膦酸诱导组呈阳性表达。ＲＴ-ＰＣＲ检测发现唑来膦酸诱导组骨巨细胞癌基质细胞中Ｃｂｆａ-１表达,而空白对照组未见Ｃｂｆａ-１表达。结论　体内外研究初步证实,骨巨细胞瘤基质细胞具有向成骨细胞分化的潜能并在唑来膦酸的诱导下向成骨细胞分化,这从细胞和分子生物学水平部分解释了临床上长期应用唑来膦酸治疗后肿瘤病灶和术后残留囊壁中的明显骨生成的现象。     

影响骨巨细胞瘤预后的临床和病理因素研究

目的：研究影响骨巨细胞瘤预后的临床和病理因素，探讨可供临床预测患者预后和选择治疗方式的病理形态学指标。方法：从存档病例中选取有完整病历记录和追踪观察的骨巨细胞瘤病例41例，分复发和无复发两组，分析预后与组织学分级、组织形态学测量、免疫组化CD68和Ki67双重表达以及手术方式（病灶内刮除、肿瘤完整切除或广泛切除）的关系。结果：骨巨细胞瘤的预后与组织学分级、单核基质细胞的细胞面积、核面积、核分裂数和Ki67的阳性细胞数以及手术方式有关，而与多核巨细胞的数目和形态、单核基质细胞的核周长、核长／短径比值无关。结论：组织学分级对预测肿瘤的预后仍有一定意义，值得保留供临床参考；组织形态学测量将细胞形态指标量化，能客观地反映肿瘤细胞的异型性，对预测本瘤的预后意义更大，值得进一步探讨；单核基质细胞的异型性和Ki67阳性表达的细胞数与肿瘤复发有关，同时支持单核基质细胞是肿瘤细胞成分的学说；病灶内刮除的术后复发率较高，应尽量避免采用这种手术方式，尤其是对于Jaffe分级为Ⅱ或Ⅲ级的肿瘤、组织细胞形态学测量显示单核基质细胞的细胞面积、核面积及核分裂数高的病例、Ki67免疫组化显示阳性细胞多的病例，应更多选择肿瘤完整切除或广泛切除术。     

TNF—α、M—CSF及IL—1在骨巨细胞瘤中的表达及其意义

目的：探讨细胞因子与骨巨细胞瘤局部溶骨的关系。方法：采用ELISA法、Western blot分析和免疫组化双染检测了10例骨巨细胞瘤、5例骨肉瘤和5例正常人血清中TNF－α、含量和M－CSF、IL－1的表达,结果：骨巨细胞瘤组织TNF－α、含量和M－CSF表达率明显高于骨肉瘤和正常人。TNF－α、由骨巨细胞的部分单核基因细胞和多核巨细胞分泌;而－CSF及IL－1由部分单核基质细胞份泌,多核巨细胞则不表达。结论骨巨细胞瘤中各种细胞份泌不同的细胞因子可能与该肿瘤的局部溶骨过程。     

双膦酸盐对骨巨细胞瘤细胞超微结构的影响及细胞组织学变化

目的:探讨双膦酸盐对骨巨细胞瘤细胞超微结构的影响及细胞组织学变化。方法:取我院收治的7例双膦酸盐(唑来膦酸)治疗前后的患者肿瘤组织切片进行了透视电镜观察和TUNEL凋亡染色及图像分析。结果:双膦酸盐(唑来膦酸)治疗后的肿瘤组织切片中透视电镜下多核巨细胞和基质细胞出现了明显的凋亡表现,细胞质变化的特点是大量扩张紊乱的粗面内质网及分散于细胞质中包含于囊泡中央的高电子密度核。线粒体水肿或空泡化。巨细胞核变化的特点是形成致密的染色质材料分散于细胞核中,核膜增厚或分离,部分核碎裂和形成凋亡小体;双膦酸盐(唑来膦酸)治疗后的肿瘤组织切片中TUNEL染色强烈阳性,基质细胞凋亡率从治疗前的1.31%至治疗后的33.42%,差异有显著性意义(P=0.018),多核巨细胞凋亡率从治疗前的8.41%至治疗后的56.83%,差异有显著性意义(P=0.018)。结论:双膦酸盐可以诱导骨巨细胞瘤基质细胞和多核巨细胞的凋亡。从细胞和分子生物学水平证实双膦酸盐作为骨巨细胞瘤辅助治疗方法的可行性。     

双膦酸盐对骨巨细胞瘤细胞超微结构的影响及细胞组织学变化

目的：探讨双膦酸盐对骨巨细胞瘤细胞超微结构的影响及细胞组织学变化。方法：取我院收治的7例双膦酸盐（唑来膦酸）治疗前后的患者肿瘤组织切片进行了透视电镜观察和TUNEL凋亡染色及图像分析。结果：双膦酸盐（唑来膦酸）治疗后的肿瘤组织切片中透视电镜下多核巨细胞和基质细胞出现了明显的凋亡表现,细胞质变化的特点是大量扩张紊乱的粗面内质网及分散于细胞质中包含于囊泡中央的高电子密度核。线粒体水肿或空泡化。巨细胞核变化的特点是形成致密的染色质材料分散于细胞核中,核膜增厚或分离,部分核碎裂和形成凋亡小体;双膦酸盐（唑来膦酸）治疗后的肿瘤组织切片中TUNEL染色强烈阳性,基质细胞凋亡率从治疗前的1.31%至治疗后的33.42%,差异有显著性意义（P=0.018）,多核巨细胞凋亡率从治疗前的8.41%至治疗后的56.83%,差异有显著性意义（P=0.018）。结论：双膦酸盐可以诱导骨巨细胞瘤基质细胞和多核巨细胞的凋亡。从细胞和分子生物学水平证实双膦酸盐作为骨巨细胞瘤辅助治疗方法的可行性。     

双膦酸盐诱导骨巨细胞瘤细胞凋亡的实验研究

目的　探讨双膦酸盐（唑来膦酸）对骨巨细胞瘤多核巨细胞和基质细胞的诱导凋亡作用。方法　对我院收治的７例唑来膦酸治疗前后患者的肿瘤组织切片进行透射电镜观察和ＴＵＮＥＬ凋亡染色及图像分析。另１０例未予唑来膦酸治疗的患者,取术中切除的骨巨细胞瘤新鲜组织进行细胞原代培养,分别给予５、３０、１５０μｍｏｌ／Ｌ唑来膦酸诱导肿瘤细胞凋亡４８ｈ,倒置相差显微镜观察细胞形态,Ａｎｎｅｘｉｎ-ＶＦＩＴＣ凋亡染色及流式细胞仪定量分析。结果　唑来膦酸治疗后的肿瘤组织切片透射电镜观察到多核巨细胞和基质细胞呈明显的凋亡表现;ＴＵＮＥＬ染色呈强阳性;基质细胞凋亡率治疗前为１.３１％,治疗后３３.４２％（Ｐ＝０.０１８）;多核巨细胞凋亡率治疗前为８.４１％,治疗后５６.８３％（Ｐ＝０.０１８）。在原代培养的骨巨细胞瘤基质细胞中予不同浓度的唑来膦酸诱导凋亡４８ｈ后,细胞数量减少,部分细胞形态有显著变化;Ａｎｎｅｘｉｎ-ＶＦＩＴＣ凋亡染色及流式细胞仪定量分析结果显示,对照组以及５、３０、１５０μｍｏｌ／Ｌ唑来膦酸诱导组的凋亡率分别为（１０.６７±２.１５）％、（２０.４７±３.７７）％、（４４.２１±８.３４）％和（５６.９６±９.６８）％,各诱导组显著高于对照组（Ｐ＜０.０５）,且凋亡率呈剂量依赖性（ｒ＝０.７７５,Ｐ＝０.０００）。结论　双膦酸盐能够诱导骨巨细胞瘤基质细胞和多核巨细胞的凋亡,且骨巨细胞瘤基质细胞的凋亡率呈剂量依赖性,因此,双膦酸盐可以作为骨巨细胞瘤辅助治疗的方法之一。     

尿激酶型纤溶酶原激活剂在 骨巨细胞瘤组织中的表达

已有研究表明,尿激酶型纤溶酶原激活剂（ urokinase-type plasminogen activator, UPA）、 UPA受体（ UPAR）和 I型纤溶酶原激活物的抑制物（ PAI-I）,这三种物质连同胶原酶构成胶原溶解系统,直接影响肿瘤细胞的浸润、转移和骨质吸收的能力。本研究拟定量检测 UPA在骨巨细胞瘤组织中的表达情况,并分析其与肿瘤分级及预后之间的关系。 1 材料与方法 1． 1 材料 所有标本为中山医科大学第一附属医院及孙逸仙纪念医院 1994至 1998年的临床骨科手术标本（术前均未经化疗）。经病理诊断为骨巨细胞瘤,参考 Jaffe的分类标准分为 3级,Ⅰ级：单核基质细胞数量较少而排列疏松,形状大小较一致,异型性不明显,偶见核分裂,多核巨细胞体积大、核多,散布于单核基质细胞之间,数量较多;Ⅱ级：单核基质细胞数量增多而致密,出现异型性,核分裂增多,多核巨细胞体积缩小,核也减少;Ⅲ级：单核基质细胞分化不良,异型性明显,核分裂多见,梭形细胞常呈纤维肉瘤样,多核巨细胞体积缩小,核也减少。其中Ⅰ级 2例,Ⅱ级 9例,Ⅲ级 2例,并有 1例非骨化性纤维瘤作对照。     

葡萄糖转运蛋白-1在不同骨肿瘤中的表达

目的研究葡萄糖转运蛋白-1（GLUT-1）在正常骨组织及不同骨肿瘤标本中的表达情况。方法收集我院临床骨肉瘤标本30例，骨巨细胞瘤标本15例，骨样骨瘤标本10例及正常骨组织标本10例，采用免疫组化染色检测GLUT-1的分布。体外培养骨肉瘤细胞系MG63、临床骨肉瘤细胞、临床骨巨细胞瘤细胞及成骨细胞，RT-PCR检测GLUT-1基因的表达。结果免疫组化显示，骨肉瘤标本GLUT-1染色强阳性占总例数的53％；骨巨细胞瘤切片GLUT-1染色，阳性占总例数的60％；骨样骨瘤标本多为阴性，阴性占总例数的80％；正常骨组织中未见GLUT-1阳性表达。骨肉瘤明显高于与其余3组标本（χ^2=1．622，P=0．009；χ^2=34．667，P〈0．001，χ^2=40．000，P〈0．001）。RT-PCR显示，GLUT-1基因表达存在于MG63细胞、临床骨肉瘤细胞及骨巨细胞瘤中，而正常成骨细胞内并无GLUT-1表达。结论骨肿瘤中存在GLUT-1表达，且GLUT—1与骨肿瘤的恶性程度有较密切的关系。GLUT-1有可能作为判断骨肿瘤恶性程度参考指标及骨肿瘤治疗的新靶点。     

股骨近端骨巨细胞瘤的刮除治疗

目的了解股骨近端骨巨细胞瘤行刮除术后的预后情况及相关因素。方法1993年～2004年共收治股骨近端骨巨细胞瘤35例，其中施行刮除术且获随访12例。男7例，女5例，平均年龄21岁（19～40岁）。Campannacci分级：Ⅰ级3例、Ⅱ级4例（骨折2例）、Ⅲ级5例。11例术前行穿刺活检，8例阳性，3例阴性。前入路7例，外侧入路5例。刮除＋骨水泥填充3例，刮除＋植骨9例。术后病理Jaffe分级：I级7例、Ⅱ级5例。结果随访24～80个月（平均47个月）。有4例复发，复发率为33．3％，复发时间为术后3～38个月（平均19．3个月）。结论股骨近端骨巨细胞瘤行刮除术后复发率较高。术前确诊、X线分级Ⅰ级者复发率低，病理骨折复发率高。股骨颈解剖结构复杂，不易在直视下刮除和难以切除菲薄的包壳是复发的主要原因。     

Giant cell tumor of bone

Giant cell tumor of bone is an enigmatic osseous neoplasm that is histologically benign but clinically shows local aggression and metastatic potential. The absence of clinical, radiographic, or pathologic features that are predictive of tumor behavior and patient outcome has resulted in recent attention to the pathobiology of giant cell tumor of bone. In this report, the clinicopathologic features of and current treatment approaches to giant cell tumor of bone are reviewed. Recent investigations of the specific role of the cell populations present in giant cell tumor of bone that influence tumor proliferation, bone resorption, and its clinical behavior are described.     

Osteoclast-like cell formation by circulating myeloma B lymphocytes: role of RANK-L

Excessive bone resorption in multiple myeloma (MM), a malignancy of B lymphoid origin, is mediated through osteoclasts, which respond to local osteoclast-activating factors produced by tumor cells within the bone marrow microenvironment. Direct bone resorption by myeloma cells is investigated in the present study, since a connection between B lymphocytes and osteoclast differentiation pathways has been recently postulated in mice. Peripheral CD19+ B lymphocytes isolated from 10 myeloma patients with multiple osteolytic lesions and 10 healthy donors were cultured in the presence of M-CSF and RANK-L, two major osteoclast-activating factors. The TRAP expression and resorption of bone substrates were employed to evaluate osteoclast differentiation. MM patients were characterized by the presence of circulating B lymphocytes endowed with both phenotypical and functional properties of osteoclast-like cells in vitro when stimulated with RANK-L. The absence of these characteristics in B lymphocytes from healthy donors indicates that the transformation can be ascribed to the presence of clonogenic B cells in patients with MM. Clonotypic B lymphocytes may contribute to the pathogenesis of bone disease in MM by acting as RANK-L-dependent osteoclast progenitors.     

ANGPTL4在调控骨巨细胞瘤细胞增殖、血管生成和破骨分化作用的实验研究

目的探讨人血管生成素样蛋白4(ANGPTL4)基因沉默对骨巨细胞瘤单核基质细胞(GCTSC)增殖、血管生成以及破骨分化的作用。方法体外培养GCTSC细胞系,采用ANGPTL4 shRNA、Scrambled shRNA转染作为ANGPTL4 shRNA组和阴性对照组,另设置无处理的空白对照组。采用实时荧光定量PCR(QPCR)和Western blotting法检测ANGPTL4 mRNA和蛋白表达。MTT法和流式细胞术检测细胞增殖和凋亡。将GCTSC细胞分别与人脐静脉内皮细胞(HUVECs)、小鼠骨髓单核细胞(BMM)共培养,观察HUVECs成管能力和BMM破骨分化能力。结果与空白对照组和阴性对照组比较,ANGPTL4 shRNA组ANGPTL4 mRNA(0.174±0.045)和蛋白表达量(0.098±0.020)均明显降低;而ANGPTL4 shRNA组GCTSC细胞增殖活性降低,凋亡率升高(P<0.05)。与HUVECs共培养后,ANGPTL4 shRNA组闭合管数量[(57.35±17.24)%]减少(P<0.05);与BMM共培养后,ANGPTL4 shRNA组TRAP染色阳性的破骨细胞样多核巨细胞数量[(48.36±21.79)%]减少(P<0.05)。结论沉默骨巨细胞瘤GCTSC细胞ANGPTL4基因表达后,细胞增殖活性降低,凋亡率增加,并且对肿瘤血管生成和多核巨细胞破骨分化有一定的抑制作用。     

Giant cell tumor of bone: a model for the in vitro human osteoclast characterization

The in vitro growth pattern of cells obtained from bioptic material of ten patients with giant cell tumor of bone (GCT) was investigated. Cytochemical reactions and monoclonal antibodies raised against macrophage markers were tested on the two histologically identifiable GCT cell populations. Only monoclonal antibody EBM/11 stained both mononuclear and giant cells. EBM/11 positivity and resistance of acid phosphatase to high doses of tartrate strongly suggest that both mononuclear and giant cells belong to the same lineage.     

Expression of c-Src and comparison of cytologic features in cherubism, central giant cell granuloma and giant cell tumors

Cherubism (CBM) and central giant cell granuloma (CGCG) of the jaw and giant cell tumor (GCT) of the long bone are clinically different diseases. Histologically, they are all multinucleated giant cell (MGC)-containing lesions. This study aims to evaluate the expression of c-Src and cytologic features in CBM, CGCG and GCT and to clarify whether there is a common mechanism underlying the formation of multi-nucleated giant cells (MGCs) in these lesions. Specimens and paraffin blocks were collected from patients with CBM (12 cases), CGCG (24 cases) and GCT (37 cases). Histomorpho-metric differences in MGCs were compared among the three types of lesions. The expression of c-Src by immunohistochemistry and in situ hybridization and the expression of TRAP by enzyme histochemical staining were examined. Expression of c-Src mRNA and protein, as well as TRAP staining, was detected in both MGCs and a fraction of mononuclear cells in all investigated lesions. There are no quantitative differences for cytologic features and c-Src expression among the lesions. The results suggested that CBM, CGCG and GCT have overlapping cytological features at the histological level, and c-Src may be involved in the formation of MGCs in the three different diseases.