莪术二酮对MDA-MB-231细胞周期和凋亡的影响

目的 探讨莪术二酮对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、凋亡和细胞周期的作用。方法 体外培养MDA-MB-231细胞,以卡培他滨作为阳性对照,采用细胞增殖与活性检测（CCK-8）法检测不同浓度的莪术二酮（125,250,500,1 000,2 000 μmol·L^-1）作用细胞24,48 h后对细胞活力的影响;选取3个有效抑制增殖的莪术二酮浓度（250,500,1 000 μmol·L^-1）进行后续实验。流式细胞术结合碘化丙啶（PI）染色法检测莪术二酮对细胞周期的影响;增设高浓度组（2 000 μmol·L^-1）,用JC-1法检测莪术二酮对细胞线粒体膜电位的影响,并采用流式细胞术结合Annexin V-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡的情况;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测莪术二酮作用后细胞中周期调控和凋亡相关蛋白表达的变化。结果 与空白组比较,250,500,1 000,2 000 μmol·L^-1莪术二酮对细胞增殖有显著抑制作用（P<0.01）,效果呈浓度和时间依赖性,24 h和48 h的半抑制浓度（IC₅₀）分别为1 607,1 401 μmol·L^-1;250,500,1 000 μmol·L^-1莪术二酮可将细胞阻滞在G₁期;250 μmol·L^-1莪术二酮对细胞线粒体膜电位无影响,500,1 000,2 000 μmol·L^-1莪术二酮可使细胞线粒体膜电位明显下降（P<0.05,P<0.01）;250,500,1 000 μmol·L^-1莪术二酮可使凋亡细胞比例明显增加（P<0.05,P<0.01）;各浓度莪术二酮可使B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白（Bax）/ B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）明显增加（P<0.05,P<0.01）,半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3（Caspase-3）蛋白表达量无明显变化,而Caspase-9,cleaved Caspase-9,cleaved Caspase-3,p53和p21蛋白表达量均有所增加（P<0.05）。结论 一定浓度的莪术二酮能抑制MDA-MB-231细胞的增殖,可能与其阻滞细胞周期、诱导细胞凋亡有关。     

辣椒碱通过TRPV1诱导结肠癌SW480细胞凋亡

目的 探讨辣椒碱通过瞬时受体电位香草酸亚型1（TRPV1）对人结肠癌SW480细胞的影响及可能的分子机制。方法 设立辣椒碱组及空白组,通过细胞增殖与活性检测-8（CCK-8）法检测辣椒碱（50,100,200,300,400,500,600,800,1 000 μmol·L^-1）处理SW480细胞12,24,48 h后的细胞活性,选取有效抑制增殖的辣椒碱浓度;采用流式细胞术检测辣椒碱干预（200,400,800 μmol·L^-1）后细胞凋亡及细胞周期的变化;采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测辣椒碱（200,400 μmol·L^-1）干预后TRPV1,肿瘤抑制蛋白p53,磷酸化p53（p-p53）,抑癌基因［B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）,Bcl-2相关X蛋白（Bax）］,活化的天冬氨酸蛋白水解酶-3（cleaved Caspase-3）,cleaved Caspase-8,活化的聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（cleaved PARP）的蛋白表达的影响;此外,利用微小RNA（mRNA）沉默技术作用TRPV1,观察200 μmol·L^-1辣椒碱处理沉默TRPV1的SW480细胞凋亡率的变化,以及上述蛋白表达的影响。结果 与空白组比较,辣椒碱50,100 μmol·L^-1作用对细胞活性未出现显著影响,浓度在200 μmol·L^-1以上时,随浓度增加细胞活性逐渐降低（P<0.01）,呈剂量依赖效应;与空白组比较,辣椒碱200,400,800 μmol·L^-1处理可明显诱导细胞凋亡（P<0.05,P<0.01）;200,400 μmol·L^-1 辣椒碱干预下,细胞生长表现为G₂/M期阻滞,800 μmol·L^-1表现为G₀/G₁期阻滞（P<0.05）;与空白组比较,辣椒碱200,400 μmol·L^-1处理细胞能够明显上调上述凋亡途径中相关蛋白（p53,p-p53,Bax,cleaved Caspase-3,cleaved Caspase-8,cleaved PARP）的表达（P<0.05,P<0.01）,Bcl-2蛋白表达显著下调（P<0.01）;沉默TRPV1能明显抑制辣椒碱诱导的细胞凋亡及凋亡通路蛋白表达（P<0.05,P<0.01）。结论 辣椒碱可能通过TRPV1受体抑制SW480细胞增殖,阻滞细胞周期并诱导细胞凋亡。     

小檗碱吴茱萸碱联用对AGS细胞TNF-α和IL-8含量的影响

目的: 观察小檗碱吴茱萸碱对胃癌细胞株(AGS)细胞增殖及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素(IL-8)含量的影响。方法: 采用MTT(四甲基偶氮唑盐)法测定小檗碱、吴茱萸碱及两药联用对AGS细胞生长的影响;流式细胞技术检测小檗碱、吴茱萸碱及两药联用对AGS细胞细胞周期的影响;ELISA法测定小檗碱、吴茱萸碱及两药联用 对AGS细胞TNF-α和IL-8含量的影响。结果: 小檗碱15 μmol·L^-1和吴茱萸碱45 μmol·L^-1联用时对AGS细胞增殖的抑制作 用弱于吴茱萸碱单用;小檗碱83 μmol·L^-1和吴茱萸碱1.4 μmol·L^-1 联用时对AGS细胞增殖的抑制作用稍优于两药单用,两药联用阻滞细胞周期于G₂/M期的作用较两药单用无显著差异。进一步研究发现,小檗碱83 μmol·L^-1和吴茱萸碱1.4 μmol·L^-1联用增加AGS细胞培养上清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量的作用优于两药单用。小檗碱具有降低AGS细胞培养上清IL-8含量的趋势,而吴茱萸碱能够显著增强AGS细胞培养上清IL-8的含量(P <0.01),两药联用能够显著降低AGS细胞培养上清中IL-8的含量(P <0.01)。结论: 不同剂量的小檗碱吴茱萸碱联用对AGS细胞增殖的影响不同。小檗碱能够抑制吴茱萸碱诱导的AGS细胞IL-8的表达上调。     

姜黄素对人前列腺增生间质细胞凋亡及Bcl-2,Bax表达的影响

目的：研究姜黄素对人前列腺增生间质细胞凋亡的诱导作用。方法：通过MTT法测定姜黄素抑制间质细胞的增殖效应；TUNEL法检测细胞凋亡；RT-PCR技术检测Bcl-2和Bax mRNA的表达;流式细胞术测定凋亡细胞周期的分布。结果：10，20，40 μmol·L^-1浓度的姜黄素对增生间质细胞的生长均有抑制作用，这种抑制作用具有时间/剂量依赖性(P<0.05)。TUNEL结果：与阴性组相比，10，20，40 μmol·L^-1浓度的姜黄素可以诱导间质细胞发生凋亡，凋亡率依次为(20.52±2.52)%，(48.33±0.75)%，(84.60±0.57)%(P<0.01)。RT-PCR结果：姜黄素作用于间质细胞24 h,Bcl-2/Bax mRNA的水平下降(P<0.05)。流式细胞检测发现姜黄素可以诱导人前列腺增生间质细胞周期阻滞于G₁期，10，20，40 μmol·L^-1浓度的姜黄素组细胞G₁期分别为(59.3±4.9)%，(65.2±5.1)%和(71.0±4.7)%。结论：姜黄素可以诱导人良性前列腺增生间质细胞发生凋亡，其机制可能与姜黄素改变凋亡相关基因Bcl-2和Bax mRNA的表达有关。     

毛蕊异黄酮介导GP130/JAK/STAT信号通路对脊髓星形胶质细胞氧化损伤的影响

目的 探究毛蕊异黄酮介导糖蛋白130（GP130）/Janus酪氨酸蛋白激酶（JAK）/信号转导及转录激活因子（STAT）信号通路对脊髓星形胶质细胞氧化损伤的影响。方法 原代分离大鼠脊髓星形胶质细胞，并利用免疫荧光检测胶质纤维酸性蛋白（GFAP）进行鉴定。分别加入5、10、20 μmol·L^-1毛蕊异黄酮预处理脊髓星形胶质细胞12 h，然后加入100 μmol·L^-1过氧化氢（H₂O₂）处理24 h造成氧化损伤模型，细胞增殖与活性检测（CCK-8）法检测各组细胞增殖情况选择合适的毛蕊异黄酮处理浓度。实验分为空白组、模型组（H₂O₂ 100 μmol·L^-1）、毛蕊异黄酮组（毛蕊异黄酮 20 μmol·L^-1）、毛蕊异黄酮+LY294002组（毛蕊异黄酮 20 μmol·L^-1+LY294002 10 μmol·L^-1）、毛蕊异黄酮+Stattic组（毛蕊异黄酮 20 μmol·L^-1+Stattic 3 μmol·L^-1）。CCK-8法、免疫荧光检测各组细胞增殖情况，流式细胞术检测各组细胞凋亡和周期情况；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组细胞中磷酸化（p）-JAK2、p-STAT3、p-蛋白激酶B（Akt）、GP130、白细胞介素-6（IL-6）的蛋白表达水平。结果 与空白组比较，模型组细胞的增殖活力明显降低，细胞凋亡率明显升高（P<0.05）；与模型组比较，毛蕊异黄酮（20 μmol·L^-1）组细胞的增殖活力明显增加，细胞凋亡率明显降低（P<0.05）；与毛蕊异黄酮（20 μmol·L^-1）组比较，PI3K抑制剂LY294002和STAT3抑制剂Stattic均能明显降低细胞的增殖活力，增加细胞凋亡率（P<0.05）。与空白组比较，模型组细胞中p-JAK2、p-STAT3、p-Akt、GP130、IL-6的蛋白表达水平明显增加（P<0.05）；与模型组比较，各用药组p-JAK2、p-STAT3、p-Akt、GP130、IL-6的蛋白表达水平均明显降低（P<0.05）。结论 毛蕊异黄酮能够促进氧化损伤的星形胶质细胞增殖并抑制其凋亡，并能通过抑制磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/Akt通路磷酸化、JAK2/STAT3通路磷酸化起作用。     

构树叶总黄酮对人肝癌HepG-2细胞增殖及其细胞周期的影响

目的： 研究构树叶总黄酮（total flavonoids of Broussonetia papyrifera,TFBP）对人肝癌细胞HepG-2的生长抑制和诱导凋亡的作用及其机制。 方法： 取对数生长期人肝癌HepG-2细胞,随机分为药物组和对照组,药物组用3,6,9,12 g·L^-1不同质量浓度TFBP作用人肝癌HepG-2细胞24,48,72 h后,采用MTT法检测细胞生长抑制率;Hoechst 33342荧光染色法荧光显微镜观察细胞的形态变化并用流式细胞仪检测细胞的周期及细胞凋亡率。 结果： MTT结果显示,各质量浓度3,6,9,12 g·L^-1的TFBP对HepG-2有增殖抑制作用,并存在浓度和时间依赖关系,3,6,9,12 g·L^-1不同质量浓度TFBP作用人肝癌HepG-2细48 h后,细胞增殖抑制率分别为20.2%,29.44%,39.21%,43.96%;9 g·L^-1的TFBP作用HepG-2细胞72 h后,细胞增殖抑制率可达52.46%,与对照组具有显著性差异（P<0.05）;Hoechst 33342荧光染色可观察到核浓缩及核碎裂等典型细胞凋亡特征及凋亡小体;流式细胞仪结果显示,随着TFBP作用浓度的增加,加药组细胞凋亡率加药组凋亡率与对照组相,有显著差异（P < 0.01）,G₀/G₁期细胞逐渐减少,G₂/M期细胞数逐渐增多,与对照组比较差异有显著性（P < 0.05）,细胞周期被阻滞在G₂/M期。 结论： TFBP在体外对肝癌细胞HepG-2有明显的增殖抑制和诱导细胞凋亡的作用,其抑制机制可能和诱导细胞凋亡与阻滞细胞周期有关。     

基于JAK2/STAT3信号通路探讨白头翁皂苷A对Burkitt淋巴瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨白头翁皂苷A对人伯基特淋巴瘤（BL）细胞Raji细胞增殖、凋亡及相关通路蛋白表达的影响。方法 以人BL细胞Raji细胞为研究对象，细胞增殖与活性检测（CCK-8）法检测细胞增殖情况，并计算出24、48、72 h的半数抑制浓度（IC₅₀）分别为19.77、18.31、16.70 μmol·L^-1。后续相关实验根据白头翁皂苷A作用Raji细胞72 h IC₅₀，选用白头翁皂苷A 8、16、32 μmol·L^-1开展实验。用0、8、16、32 μmol·L^-1白头翁皂苷A作用于Raji细胞24、48、72 h，CCK-8法检测细胞生长曲线吸光度A。检测经0、8、16、32 μmol·L^-1白头翁皂苷A处理Raji细胞24 h后Raji细胞中胱天蛋白酶（Caspase）-3、Caspase-8、Caspase-9的酶原活性。流式细胞仪检测不同浓度白头翁皂苷A作用Raji细胞24 h后细胞凋亡率及细胞周期。蛋白免疫印迹法（Western blot）检测0、8、16、32 μmol·L^-1白头翁皂苷A作用Raji细胞24 h，Raji细胞中B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白（Bax）、活化的聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（cleaved PARP）、活化的Caspase-3（cleaved Caspase-3）凋亡蛋白表达情况，检测非受体型酪氨酸蛋白激酶2（JAK2）、信号转导及转录激活因子3（STAT3）、磷酸化（p）-JAK2、p-STAT3通路蛋白表达情况。结果 与空白组比较，8、16、32 μmol·L^-1白头翁皂苷A组细胞增殖受到抑制，8、16、32 μmol·L^-1白头翁皂苷A组Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9酶原显著活化（P<0.01），细胞凋亡明显增加（P<0.05，P<0.01），细胞于有丝分裂准备期（G₂）期阻滞明显增加（P<0.05，P<0.01）。与空白组比较，8、16、32 μmol·L^-1白头翁皂苷A组Raji细胞中Bcl-2蛋白表达明显降低（P<0.05，P<0.01），Bax、cleaved PARP、cleaved Caspase-3蛋白表达显著增加（P<0.01），JAK2、STAT3蛋白表达未见明显改变，p-JAK2、p-STAT3蛋白表达明显降低（P<0.05，P<0.01）。结论 白头翁皂苷A可以抑制人BL细胞Raji细胞的增殖并促进其凋亡，其作用机制可能与白头翁皂苷A调控JAK2/STAT3信号通路有关。     

芹菜素抗肺癌SPC-A1细胞增殖和诱导凋亡作用

目的：探讨芹菜素对人非小细胞肺癌SPC-A1细胞增殖和凋亡的影响。方法：体外常规培养人肺癌细胞株SPC-A1细胞,用5~80 μmol·L^-1不同浓度芹菜素作用SPC-A1细胞,MTT法检测细胞增殖抑制率;Hoechst 33258染色法观察细胞凋亡的形态学变化;流式细胞术FITC-Annexin V/碘化丙啶（PI）双标记染色法检测细胞凋亡率。结果：芹菜素对SPC-A1细胞增殖的抑制作用呈时间和浓度依赖性,芹菜素干预24,48,72 h的IC₅₀值分别为319.02,37.23,18.59 μmol·L^-1;Hoechst 33258染色后倒置荧光显微镜下观察可见芹菜素给药后出现细胞数逐渐减少,凋亡细胞核固缩,染色质凝集,着色深而呈亮蓝色;流式细胞术检测结果显示芹菜素可诱导SPC-A1细胞出现不同程度的凋亡。结论：芹菜素能抑制人非小细胞肺癌SPC-A1细胞的增殖和诱导其凋亡。     

紫杉醇用于卵巢癌化疗的临床药效学研究

 目的:寻找紫杉醇药代动力学参数与疗效和毒性的关系?方法:10名卵巢癌化疗患者单独使用紫杉醇治疗,用药剂量为175mg·m^-2和235mg·m^-2?动态采集血样本,利用HPLC方法测定,计算药代动力学参数?记录用药过程中CA125改变和毒副作用?采用统计学方法和药代动力学模型进行分析?结果:c_max,AUC,AUMC和Cl与中性粒细胞减少症无关?而血浆浓度在0.1μmol·L^-1或0.05μmol·L^-1以上持续的时间与WBC减少百分数符合Sigmoid Emax模型?结论:在对此药的群体药代动力学特性深入研究后,监测给药后24h的血药浓度对临床合理用药具有积极意义?     

过氧化氢诱导PC12细胞凋亡及芍药苷的保护作用

 目的探讨过氧化氢诱导PC12细胞凋亡及芍药苷保护作用的可能机制。方法MTT测定细胞存活率,流式细胞仪测定细胞凋亡率,DCFH-DA为细胞内荧光探针,测定细胞内ROS浓度,流式细胞仪检测线粒体跨膜电位。结果200μmol·L^-1H₂O₂可诱导PC12细胞凋亡,细胞内ROS浓度增加,细胞线粒体跨膜电位明显下降。预先经过0.1,1和10μmol·L^-1浓度的芍药苷处理后,H₂O₂诱导的PC12细胞凋亡明显减少,同时明显减弱H₂O₂对细胞内ROS浓度和线粒体跨膜电位的影响。结论芍药苷可抑制过氧化氢诱导PC12细胞凋亡,其作用机制可能与其抑制细胞内ROS累积,稳定细胞线粒体跨膜电位有关。     

青蒿琥酯对人结肠癌细胞HCT-8细胞凋亡和细胞周期的影响

目的:研究青蒿琥酯对人结肠癌HCT-8细胞凋亡和细胞周期的影响.方法:实验分为10,20,30 μmol·L-1青蒿琥酯处理组,阴性对照组和空白对照组.采用透射电镜和流式细胞仪检测青蒿琥酯对HCT-8细胞的凋亡诱导效果;采用流式细胞仪分析青蒿琥酯对HCT-8细胞周期的影响;采用Western blot印迹法检测青蒿琥酯对细胞凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2表达的影响.结果:经青蒿琥酯处理后,电镜下可见HCT-8细胞膜皱缩、染色质凝聚、核碎裂、凋亡小体形成.10,20,30 μmol·L-1青蒿琥酯处理组凋亡率分别为17.1％±3.8％,29.5％±5.1％,41.4％±5.8％,显著高于空白对照组5.1％±1.4％.P＜0.05.在20 μmol· L-1青蒿琥酯处理组,HCT-8细胞G0/G1期所占比例随着药物作用时间延长而增加,S期与G2/M期细胞所占比例则下降.10,20,30 μmol·L -1青蒿琥酯处理组Bax蛋白表达水平分别为0.20±0.03,0.40±0.05和0.50±0.08显著高于空白对照组(0.06 ±0.02),P＜0.05;Bcl-2蛋白表达水平未见明显变化,Bcl-2/Bax呈下降趋势.结论:青蒿琥酯可以抑制人结肠癌细胞HCT-8增殖,诱导细胞凋亡,其诱导凋亡作用机制可能与其阻滞结肠癌细胞周期和上调促癌基因Bax表达有关.     

去氢木香内酯诱导乳腺癌SK-BR-3 细胞凋亡的机制研究

目的观察去氢木香内酯(Dehydrocostuslactone,Dehy)对乳腺癌SK-BR-3细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其分子机制。方法体外培养乳腺癌SK-BR-3细胞,分别加入不同浓度Dehy(5、10、20、30、40、50、60、80、100μmol·L-1)作用24、48、72 h,采用CCK-8法检测细胞增殖抑制率。将SK-BR-3细胞分为空白对照组(0μmol·L-1)和Dehy 10、20、30μmol·L-1浓度组,干预48 h后,利用倒置显微镜观察乳腺癌SK-BR-3细胞的形态;采用流式细胞术检测细胞周期;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;Hoechst 33258荧光染色法检测细胞凋亡的形态学变化;Western Blot法检测Bcl-2、Bax、Caspase-3和Cleaved Caspase-3蛋白的表达。结果Dehy干预SK-BR-3细胞24、48、72 h后的IC50值分别为24.84、19.39、11.45μmol·L-1,且呈现浓度和时间依赖性。与空白对照组比较,Dehy 10、20、30μmol·L-1浓度组的SK-BR-3细胞数量明显减少,细胞结构松散、轮廓消失、变圆,贴壁不良;Dehy 10、20、30μmol·L-1浓度组的G2/M期细胞比例及细胞凋亡率均显著升高(P<0.05,P<0.01),呈明显的浓度依赖性;Dehy 10、20、30μmol·L-1浓度组的SK-BR-3细胞出现不同程度的细胞核浓染、固缩及碎裂等凋亡现象,且细胞核致密浓染的比例显著升高(P<0.05,P<0.01);Dehy 10、20、30μmol·L-1浓度组的Bax、Caspase-3和Cleaved Caspase-3蛋白表达显著上调(P<0.05,P<0.01),Bcl-2蛋白表达明显下调(P<0.05,P<0.01),Bax/Bcl-2比值明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论Dehy能够抑制乳腺癌SK-BR-3细胞的增殖及诱导其凋亡,可能与其调控Bax/Bcl-2/Caspase-3凋亡信号通路来抑制乳腺癌细胞的抗凋亡能力有关。     

微流控肠-肝-乳腺癌芯片的构建及其体外药物PK-PD分析

目的:基于微流控技术构建肠-肝-乳腺癌多器官芯片并将其用于药物的体外药物代谢动力学-药物效应动力学(PK-PD)研究。方法:利用微流控技术构建包含4层聚二甲基硅氧烷(PDMS)基板和2层聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)盖板的多器官芯片;分别使用Cell Tracker Red/Green和Hoechst对生长21 d的人结肠癌细胞株Caco-2细胞层和生长3 d的人脐静脉内皮细胞株HUVEC细胞层进行染色,考察细胞间的连接情况,通过测定2 g·L^-1荧光素钠和33.28 mg·L^-1普萘洛尔跨细胞层的透过率来验证所建肠模块的功能;通过比较125μmol·L^-1环磷酰胺经过常规孔板中人肝癌细胞株Hep G2细胞和芯片肝模块处理48 h后对人乳腺癌细胞株MCF-7细胞的抑制率来考察肝模块的代谢水平;通过检测芯片中Hep G2细胞分泌白蛋白情况验证肝模块的合成功能;将Caco-2细胞层,HUVEC细胞层,Hep G2细胞层,MCF-7细胞层及透析膜组装在芯片上,在芯片上层通道中通入含55 mg·L^-1普萘洛尔的培养液4 h后换成正常培养液,检测72 h内各个时间点下层循环培养液中普萘洛尔的质量浓度,绘制药-时曲线;在芯片上层循环液中分别通入含125μmol·L^-1环磷酰胺,5μmol·L^-1紫杉醇,50μmol·L^-1卡培他滨的培养液,研究3种抗肿瘤药物在芯片上对MCF-7细胞层的72 h抑制率,并将该结果与96孔板结果进行比较。结果:构建的芯片运行良好,Caco-2和HUVEC细胞层均连接紧密,荧光素钠和普萘洛尔在细胞层间的透过率证明构建的肠模块具有良好的吸收转运功能;125μmol·L^-1环磷酰胺经孔板上的HepG2细胞代谢后对MCF-7的抑制率22.12%,未被代谢的环磷酰胺对MCF-7的抑制率1.84%;而125μmol·L^-1环磷酰胺从芯片肝模块上层注入后对MCF-7的抑制率提升至32.13%,而从芯片肝模块下层注入后对MCF-7的抑制率7.23%;测得普萘洛尔质量浓度在芯片上随时间变化的趋势与体内基本一致;125μmol·L^-1环磷酰胺在孔板上对MCF-7的抑制率比芯片上要低,而5μmol·L^-1紫杉醇和50μmol·L^-1卡培他滨在孔板上对MCF-7的抑制率则高于芯片结果。结论:构建的肠-肝-乳腺癌多器官芯片具有肠的吸收转运功能、肝的代谢功能;该芯片能够反映普萘洛尔在体内的药代动力学特性,同时可用于紫杉醇和卡培他滨的药效学研究。     

黄芩素对4种肝损伤物质造成肝细胞毒性的拮抗作用

目的:观察黄芩素对4种肝毒性物质诱导的人正常肝细胞株L-02细胞损伤的拮抗作用.方法:培养的L-02细胞分别给予10 mmol· L-1对乙酰氨基酚(AP),50 μmol·L -1山岗橐吾碱( clivorine,CLI),2μmol·L-1川楝素( toosendanin,TSN)和100 mmol· L-1乙醇( EtOH)诱导肝细胞毒性.黄芩素1,10,25,50,100 μmol· L-1分别与细胞预孵15 min后,加入肝毒性物质,48 h后MTT法检测细胞存活率.结果:与对照组相比,4种肝毒性物质均能显著降低肝细胞存活率(P ＜0.001).经不同浓度黄芩素处理后,各浓度黄芩素均能显著提高AP,TSN,EtOH肝细胞损伤模型组的细胞存活率(P ＜0.01,P＜0.001);10,25,50,100μmol·L-1黄芩素能显著提高CLI肝细胞损伤模型组的细胞存活率(P ＜0.05,P＜0.001).结论:黄芩素具有拮抗对乙酰氨基酚、山岗橐吾碱、川楝素和乙醇这些肝毒性物质诱导的肝细胞毒性的作用,且具有一定的浓度依赖性.     

17-羟-岩大戟内酯B对U251细胞增殖及凋亡作用的影响

目的:探讨17-羟-岩大戟内酯B(HJB)对人脑胶质瘤细胞U251增殖及凋亡的影响.方法:将U251细胞分为空白对照组,5-氟尿嘧啶组( 80μmol·L-1),HJB组(6.25,12.5,25,50,100,200,400,800μmol· L-).用不同浓度的药物作用24h及药物半数抑制浓度(IC50)浓度作用不同时间(12,24,48,72 h),四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活性,流式细胞仪Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡率,分光光度法检测半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和半胱氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)的相对活性.结果:与空白对照组相比,HJB对U251细胞的增殖有显著抑制作用,并呈浓度依赖及时间依赖性(P＜0.05),作用24 h后IC50为62.236 11μmol·L-1.HJB可诱导U251细胞凋亡,浓度30,60,120μmol· L-1分别处理细胞24 h后,早期凋亡率明显升高(P＜0.05),且呈浓度依赖关系;Caspase-3及Caspase-9的相对活性均升高(P＜0.05),并呈浓度依赖关系.结论:HJB明显抑制体外U251细胞生长并诱导其凋亡,线粒体途径可能是诱导其凋亡的机制之一.     

丹酚酸B对谷氨酸诱导的 PC12 细胞兴奋毒保护作用的研究

目的:研究丹酚酸B对谷氨酸诱导PC12细胞兴奋毒的保护及作用机制。方法:以谷氨酸损伤PC12细胞24 h为模型,采用四甲基偶氮唑蓝法检测细胞存活率;LDH法检测乳酸脱氢酶的漏出率;AO/EB双染法荧光显微镜和PI单染流式细胞术检测细胞凋亡;流式细胞术检测细胞内活性氧的含量;Western blotting法检测细胞内Caspase-3蛋白的表达。结果:丹酚酸B可明显抑制谷氨酸诱导的PC12细胞的损伤,阻止细胞LDH的释放,在50～200μmol.L-1剂量呈一定的量效关系;同时,丹酚酸B明显降低谷氨酸诱导的活性Caspase-3蛋白的表达,抑制谷氨酸引起的ROS的累积,降低PC12细胞的凋亡率,在50～200μmol.L-1剂量呈量效相关性。结论:在一定剂量范围内,丹酚酸B对谷氨酸损伤的PC12细胞有保护作用,其保护的机制可能与丹酚酸B减少ROS的生成,阻止氧化损伤的发生,抑制Caspase-3途径依赖的凋亡相关。     

三氧化二砷抑制小鼠乳腺癌细胞MA-891生长作用及其对端粒酶活性的影响

目的:探讨As2O3在诱导小鼠乳腺癌细胞MA-891凋亡过程中的作用,以及对端粒酶及其亚单位mTERT mRNA活性表达的影响,为进一步进行小鼠体内实验提供理论和实验依据。方法:以小鼠乳腺癌细胞株MA-891为研究对象,将不同浓度的As2O3与MA-891细胞共培养不同时间后,MTT法检测As2O3对MA-891细胞的生长抑制作用;流式细胞术检测As2O3对MA-891细胞凋亡的影响;TRAP-PAGE-银染法检测As2O3作用后MA-891细胞中端粒酶活性的改变;RT-PCR检测As2O3对MA-891细胞鼠端粒酶逆转录酶(mTERT)的影响。结果:As2O3能显著抑制MA-891细胞生长,24,48 h的半数生长抑制浓度(IC50)分别为9.68,5.50μmol.L-1。5,10,20μmol.L-1的As2O3诱导MA-891细胞24 h后,细胞凋亡率依次为30.21%,48.26%,57.43%。5,10,20μmol.L-1的As2O3作用MA-891细胞24,48 h后,端粒酶活性显著下降,抑制程度呈明显的时间和浓度依赖性;银染条带也显示出相同结果。RT-PCR产物显示mTERT mRNA表达显著下降并呈时间和浓度依赖关系。结论:As2O3能显著抑制MA-891细胞生长、诱导细胞凋亡,可能是通过抑制细胞端粒酶及其亚单位端粒酶逆转录酶的活性而发挥作用。     

木犀草素诱导非小细胞肺癌细胞株A549 凋亡和G2 周期阻滞

目的:研究木犀草素诱导非小细胞肺癌细胞株A549细胞凋亡和抑制其细胞周期(G2期)的分子机制。方法:MTT法分析木犀草素对A549细胞的生长抑制作用和半数抑制率IC50。Hoechst 33258核染色,Annexin V-FITC/PI双染,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,Western blot分析木犀草素引起的周期相关蛋白和凋亡相关蛋白的变化。Western blot和免疫细胞化学推测可能存在的分子机制。结果:木犀草素对A549细胞有显著的生长抑制作用,48 h的IC50为45.2μmol.L-1,流式细胞术检测细胞周期发现A549细胞经木犀草素处理后主要阻滞在G2期,周期蛋白cyclin A,p-CDC2和p-Rb都呈低表达。Hoechst 33258核染色,Annexin V-FITC/PI双染发现木犀草素处理组细胞凋亡率明显高于未处理组。Western blot发现木犀草素可上调JNK的磷酸化,下调NF-κB(p65)的磷酸化水平。免疫细胞化学显示木犀草素可抑制TNF-α刺激的p65入核,抑制其入核发挥转录因子的作用,促进细胞凋亡。结论:木犀草素能显著诱导人非小细胞肺癌细胞A549细胞凋亡和细胞周期阻滞,其可能的分子机制是通过上调JNK磷酸化继而激活线粒体凋亡途径,同时抑制NF-κB入核使其不能发挥转录活性。     

槲皮素对SMMC-7721肝癌细胞PI3K/AKT信号通路影响的探讨

目的:观察槲皮素( quercetin)对人肝癌细胞SMMC-7721增殖与细胞凋亡的影响,探讨其对SMMC-7721细胞PI3K/AKT信号通路的影响.方法:采用MTT法检测槲皮素对SMMC-7721细胞生长的抑制,流式细胞术检测细胞周期变化,Western blot检测槲皮素对SMMC-7721细胞PI3K/AKT信号通路凋亡相关蛋白表达的影响.结果:槲皮素抑制SMMC-7721肝癌细胞增殖作用明显,且呈浓度和时间依赖性.顺铂和槲皮素40,80,160,320 μmol·L-148 h抑制率分别为62.19％,25.47％,27.18％,36.96％,51.28％.流式细胞术结果提示,槲皮素80,160,320μmol ·L -可使SMMC-7721肝癌细胞周期阻滞于G0/G1期.Western blot凋亡相关蛋白表达检测表明,药物组AKT的表达受抑制,PTEN,Caspase-9蛋白的表达率随着药物浓度的增加而增加.结论:槲皮素能诱导SMMC-7721肝癌细胞凋亡,其机制可能是使肝癌细胞SMMC-7721周期阻滞于G0/G1期,PTEN的过表达抑制AKT活化,激活Caspase-9从而促进细胞凋亡.     

丹皮酚对Aβ1-42致神经元细胞毒的保护作用及机制

目的:考察丹皮酚对β-淀粉样蛋白(Aβ)损伤神经元的保护作用及机制.方法:取生长良好的新生大鼠海马神经元和经诱导分化后的SH-SY5Y细胞株,在培养液中加入不同浓度(1,5,10 μmol·L-1)的丹皮酚孵育6h后,再加入Aβ1-42寡聚体(30 μmol·L-1)分别孵育24,48 h.采用Heochst33258荧光染色法观察神经元的凋亡形态,Annexin V/PI双染流式细胞术测定SH-SY5Y细胞凋亡率,RT-PCR法检测神经元BDNF和Bcl-2 mRNA的表达.结果:与模型组比较,各剂量丹皮酚(1,5,10 μmol·L-1)显著减少海马神经元核固缩,降低SH-SY5Y细胞的凋亡率至22.4％,18.1％,16.4％,显著增加海马神经元BDNF和Bcl-2 mRNA的表达.结论:丹皮酚可通过增加神经元BDNF和Bcl-2的表达,拮抗Aβ1-42寡聚体诱导的神经细胞损伤.