酶法合成Kupffer细胞靶向的半乳糖配体

目的:采用酶催化法在非水相介质中合成半乳糖配体.方法:通过IR,质谱,核磁共振(1H-NMR,1C-NMR)对产物结构进行表征;以底物转化率为指标,采用单因素试验考察酶种类、反应介质、酶加入量、底物摩尔比、反应温度等对配体合成的影响.结果:通过表征分析显示经酶的催化反应,半乳糖C1’位的羟基发生了酯化反应,所得产物为目标产物.优选的反应条件为反应介质四氢呋喃(THF)-二甲基亚砜(DMSO) (3:1),Novozym 435固定化脂肪酶为催化剂,酶加入量600 U· mL-1,半乳糖-硬脂酸乙烯酯的摩尔比1:4,于55℃反应8h,半乳糖的转化率达＞0％.结论:酶促催化法可用于合成肝靶向脂质体配体.     

甘草酸介导脂质体的酶促构建初步探讨

目的甘草酸表面镶嵌脂质体可增强药物载体对肝脏的趋靶性,拟采用酶促催化偶联法构建甘草酸修饰的脂质体药物载体。方法甘草酸和硬脂酸乙烯酯作为反应底物,丙酮作为反应介质,Novozym 435固定化脂肪酶作为催化剂,以甘草酸的转化率作为评价指标,对酶的加入量、底物摩尔比、反应温度、反应时间等因素进行了考察。结果当酶加入量为40 mg.mL-1,甘草酸和硬脂酸乙烯酯的摩尔比为1∶5,60℃下反应48 h,甘草酸转化率最大可达到60%以上。结论通过实验酶促构建载体修饰物工艺简单可行,有着潜在的应用前景。     

去唾液酸糖蛋白受体配体胆固醇-半乳糖苷的酶促合成优化研究

目的在有机相中利用酶促反应合成能被去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)特异性识别的配体胆固醇-半乳糖苷分子,对其合成工艺进行优化。方法采用质谱和核磁碳谱鉴别产物结构;单因素和正交设计法优化酶促合成条件。结果酶促最佳条件为底物胆固醇癸二酸乙烯酯(CH-VS)与乳糖醇(LA)物质的量之比4∶1,脂肪酶Novozym 435 25 mg,反应32 h,产率高达92%。结论该方法高效、反应条件可行、产物专一。     

O-羧甲基N-半乳糖化壳聚糖衍生物的设计、合成和表征

目的：合成和表征O-羧甲基-N-半乳糖化壳聚糖衍生物作为潜在的肝靶向基因载体。方法：以天然聚合物壳聚糖为原料，首先制备得O-羧甲基壳聚糖，然后在其2-NH2上和乳糖酸反应，制得O-羧甲基-N-乳糖酰化壳聚糖；或与乳糖反应，用KB}14还原，制得O-羧甲基-N-乳糖胺化壳聚糖。结果与结论：分别用VF-IR、^1H NMR、^13C NMR和元素分析对其进行了表征。用粉末X-衍射、DSC、TG对其物理性质进行了分析。制得的O-羧甲基-N-乳糖酰化壳聚糖O-羧甲基-N-乳糖胺化壳聚糖有望作为潜在的肝靶向基因载体。     

N-亚甲基磷酸盐壳聚糖衍生物的设计、合成和表征

目的：合成和表征N-亚甲基磷酸盐壳聚糖衍生物作为潜在的肝靶向基因载体：方法：以天然聚合物壳聚糖为原料，与甲醛和磷酸反应，制得双取代的N-亚甲基磷酸壳聚糖，然后在其剩余的2-NH2和乳糖酸反应，制得N-亚甲基磷酸-N-乳糖酰化壳聚糖；与乳糖反应，用KBH4还原，制得N-亚甲基磷酸-N-乳糖胺化壳聚糖。结果与结论：分别用FTIR、1HNMR、13CNMR和元素分析对其进行了表征。用粉末X-衍射、DSC、TG对其物理性质进行了分析。制得的N-亚甲基磷酸壳聚糖、N-亚甲基磷酸-N-乳糖酰化壳聚糖和N-亚甲基磷酸-N-乳糖胺化壳聚糖的取代度分别为1．22，0．23和0．21，所制得的栽体有望作为潜在的肝靶向基因载体：     

基于糖基化修饰的靶向药物传递系统研究概况

近年来,基于药物受体及转运体介导的靶向药物传递系统已被广泛研究,靶向药物传递系统增强药物在病变部位的浓度和疗效,最大限度地降低了药物毒副作用。人体不同细胞表面高表达的特异性凝集素受体及脑毛细血管内皮细胞、肿瘤细胞高表达的葡萄糖转运体亚型Ⅰ,可与其相应的糖基配体产生特异性识别。将糖基配体分子如甘露糖、半乳糖、葡萄糖等,键接在药物传递系统上,可赋予其靶向性。这些糖基配体具有无毒、无免疫原性、生物相容性和生物可降解性良好等诸多优点,可广泛用于对药物传递系统的糖基化修饰。本文综述了近5年来糖基化修饰药物传递系统的靶向机制、合成方法及靶向特性,并对其发展前景作了展望。     

甘草次酸衍生物18-GA-Gly介导肝主动靶向脂质体的制备及体内相关研究

基于国内外对甘草次酸配体介导主动肝靶向脂质体的研究情况,该文主要对以甘草次酸为母核的肝靶向配体18-GA-Gly修饰的脂质体的肝靶向效果进行研究。采用薄膜分散-高压乳匀法制备18-GA-Gly配体介导的丹参酚酸B-丹参酮ⅡA脂质体及未修饰配体的脂质体,考察2种脂质体的制剂学性质,考察粒径、电位、包封率和配体结合率;尾静脉给药后不同时间点获取血浆样本以及小鼠心、肝、脾、肺、肾组织样本,UPLC测定各样本中丹参酚酸B(Sal B)和丹参酮IIA(TSN)含量,评价18-GA-Gly配体的肝靶向效果。结果显示脂质体Gly-TS-Lip和TS-Lip的粒径、电位、包封率、配体结合率基本符合要求;体内靶向性考察结果显示Gly-TS-Lip组脂质体与TS-Lip组脂质体血浆数据无显著性差别;甘草次酸衍生物配体18-GA-Gly介导脂质体可以增加Sal B和TSN在肝组织的峰浓度,但并未显示明显的肝靶向效果。     

甘草次酸衍生物配体18-GA-Ala介导脂质体的制备及肝靶向性研究

目的：合成制备甘草次酸衍生物配体丙氨酸丁二酸甘草次酸十八烷酯（18-GA-Ala）,并修饰包埋药物丹酚酸B (Sal B)和丹参酮ⅡA(TSN)的脂质体,探讨该脂质体对小鼠的肝靶向作用。方法：采用薄膜分散-高压乳匀法制备18-GA-Ala配体修饰的TSN-Sal B脂质体及未修饰配体的脂质体,考察粒径、电位、包封率、多分散系数和配体结合率;尾静脉给药后不同时间点获取血浆样本及小鼠心、肝、脾、肺、肾组织样本,超高效液相色谱法测定各样本中Sal B和TSN的含量,评价18-GA-Ala配体的肝靶向效果。结果：配体18-GA-Ala修饰后的脂质体中,Sal B在肝脏的药时曲线下面积（AUC）分别是脾、肺和肾的1.19、1.39、63.67倍,TSN在肝脏的AUC分别为脾、肺、肾的4.64、0.36、14.12倍。结论：甘草次酸衍生物配体18-GA-Ala修饰后的脂质体可增加Sal B和TSN在肝脏中的峰浓度,表现出一定的肝靶向作用。     

基于酵母双杂交技术筛选肉苁蓉降血脂活性成分

目的 利用酵母双杂交系统对肉苁蓉中的单体成分进行降血脂活性的筛选.方法 将肉苁蓉中的5种化学成分加入到含有AH109菌株(携带大鼠apo-AI及其受体SR-BI全基因)的培养基中,通过报告基因β-半乳糖苷酶的活力,比较它们对大鼠apo-AI和SR-BI蛋白间相互作用的影响.结果 尿囊素可提高β-半乳糖苷酶的活力,8-表马钱子苷酸、松果菊苷、管花肉苁蓉苷B可降低β-半乳糖苷酶的活力,8-羟基-香叶醇-1-β-D-葡萄糖苷对β-半乳糖苷酶的活力无明显影响.结论 尿囊素可明显增强apo-AI和SR-BI蛋白的相互作用,具有一定的降血脂活性.     

茉莉酸甲酯结合高温胁迫对白桦悬浮细胞三萜合成的影响

目的研究茉莉酸甲酯(Me JA)和高温胁迫对白桦悬浮细胞三萜合成的影响。方法利用不同浓度(25、50、100、150μmol/L)Me JA和高温(50℃处理2 h)处理白桦细胞,进行生长量、细胞活力、抗逆酶活性、丙二醛和总三萜量及其合成关键酶基因相对表达量分析。结果高温和Me JA的复合处理对白桦细胞三萜合成的诱导作用比单独的Me JA和高温处理更强。高温胁迫1 d后加入150μmol/L的Me JA处理,细胞总三萜量最高,为76.6 mg/g,分别比空白对照、单独的Me JA和高温处理增加81.3%、159.9%和13.1%;三萜合成关键酶鲨烯合酶(SS)、鲨烯环氧酶(SE)、羽扇醇合酶(BPW)和β-香树酯醇合酶(BPY)基因的相对表达量也分别比空白对照增加297.1%、83.7%、1 032.6%和282.4%。高温胁迫1 d后加入Me JA处理,超氧化物歧化酶(SOD)和苯丙氨酸裂解酶(PAL)活性高于空白对照;生长量和细胞活力被抑制。结论在高温胁迫后加入Me JA的复合处理可能通过影响白桦细胞生长量、细胞活力、丙二醛量和防御酶活性变化,调节三萜合成关键酶基因的表达,最终促进三萜物质的高效合成与积累。     

双响应面曲线法优化水相反应体系中共轭亚油酸和薄荷醇的酶催化酯化反应

 目的 优化水相反应体系中的共轭亚油酸与薄荷醇的酶催化合成反应条件。方法 根据中心组合试验设计原理,采用五因素五水平的响应曲面分析法, 以反应转化率(％为响应值作响应面和等高线图,考察了温度、反应时间、酶量、底物物质的量比、水量的影响。结果 优化后的酶催化反应条件为： 温度35 ℃、反应时间36 h、酶量40％、底物物质的量比为1,水量30％。结论 本文所建立的数学模型显著(P<0.05,可用来对水相体系中的共轭亚油酸-薄荷醇酯的酶催化合成反应进行分析和预测。     

柱前衍生HPLC分析酸枣仁汤中多糖的单糖组成

目的:建立1-苯基-3-甲基-5-吡唑琳酮(PMP)柱前衍生高效液相色谱法分离检测4种单糖和2种糖醛酸的方法.方法:采用水提醇沉法提取酸枣仁汤中多糖,中空纤维超滤膜法纯化,然后用硫酸水解,1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生后,利用反相高效液相色谱法,分析单糖的PMP衍生物.以单糖PMP衍生物的峰面积大小为指标,分别对衍生化反应中反应时间、PMP与NaOH的用量、中和温度和盐酸用量进行考察,从而得到较佳的样品衍生化制备条件.并将该方法应用于酸枣仁汤中总多糖(SDP)、相对分子量＜10 kDa多糖(SDP-1)、相对分子量为10 ～ 50 kDa多糖(SDP-2)、相对分子量＞ 50 kDa多糖(SDP-3)的单糖组成分析和含量测定.结果:SDP和SDP-1均由Man-GlcUA-GalUA-Glc-Gal-Ara组成,摩尔比分别为1∶0.8∶0.7∶3.4∶3.3∶2.1和1∶0.5∶0.3∶0.6∶0.6∶0.4.SDP-2由Man-Glc-Gal-Ara组成,摩尔比为1∶2.0∶0.2∶0.3;SDP-3由Man-Glc组成,摩尔比为1∶5.4.结论:方法准确、灵敏度高,适用于酸枣仁汤中多糖的单糖组成测定.     

正交试验优化硝基卡因的直接酯化工艺研究

目的采用正交试验法优化硝基卡因的直接酯化工艺。方法以对硝基苯甲酸和N,N-二乙氨基乙醇为原料,通过直接酯化法合成硝基卡因,选择反应的催化剂、溶剂、投料比、时间为考察因素,采用L9（34）正交试验确定硝基卡因的直接酯化法最佳工艺。结果最佳工艺条件是催化剂为甲酸,溶剂为二甲苯,投料比为1∶1.10,反应时间为6 h。最佳工艺条件下的合成收率为98.17%,硝基卡因的质量分数为99.40%。结论该合成硝基卡因的方法具有收率高、工艺简单、稳定可行的特点。     

星点设计-效应面法优化天山雪莲提取物磷脂复合物制备工艺

目的采用星点设计-效应面法优化天山雪莲Saussureae Involucratae Herba提取物(SIHE)-磷脂复合物(PC)制备工艺,旨在提高SIHE的生物利用度。方法考察反应溶剂、反应时间、SIHE反应物质量浓度、反应温度和投料比5个因素对复合率的影响,应用星点设计-效应面法设计实验,对指标与因素进行数学模型拟合,以效应面法预测优化并验证。利用红外光谱(IR)、X射线衍射(XRD)对SIHE-PC结构进行分析。结果建立的多元二项式方程拟合度高,预测性好。最佳制备工艺条件为SIHE与大豆卵磷脂(SL)的投料比1∶2.5、反应物质量浓度10 mg/mL及反应时间2 h,在此条件下绿原酸复合率可达到96%,芦丁复合率可达到93%。IR、XRD验证了SIHE-PC的形成。结论采用星点设计-效应面法建立数学模型,预测性好,稳定可行。优化SIHE-PC制备工艺为中药制剂的进一步研究提供帮助。     

聚乙二醇共价修饰β-乳球蛋白的合成和分离纯化方法研究

 目的以β-乳球蛋白(β-lactoglobulin B,LG)为模型蛋白,探讨PEG化蛋白质的最佳合成条件和分离纯化方法。方法用不同摩尔比的NHS-PEG-MAL修饰LG,不同反应时间下,进行SDS-PAGE测定。采用ImageMaster图象分析系统定量凝胶中游离蛋白质,评价蛋白质的PEG化程度:采用灌注色谱技术,通过阳离子交换柱分离纯化反应混合物。结果SDS-PAGE法可使游离LG与PEG-LG达到完全分离。LG的PEG化程度随PEG量和反应时间的增加而提高。在最佳合成条件下,PEG化LG的程度接近95%。被纯化的PEG-LG的产率为84%,LG和PEG的摩尔比为1:7.3。结论对PEG化LG的合成、分析和分离纯化进行了较完整的研究,结果较满意。检定方法可用于其他蛋白质的PEG化研究。     

Characterization of a fucoarabinogalactan,the main polysaccharide from the gum exudate of Croton urucurana

A fucoarabinogalactan (CU-1), the main component of the gum exudate of the medicinal plant Croton urucurana, has been isolated by precipitation and subsequent dialysis and finally purified by ion-exchange chromatography. The estimated average molecular weight of CU-1 by gel permeation chromatography was approximately 2.48 x 10(6) Da. CU-1 was found to contain 1.0% proteins and 93.7% total sugars, mainly fucose, arabinose, and galactose (molar ratio: 7.8, 8.1, 19.0), and minor quantities of mannose, xylose, glucose, and uronic acids (molar ratio: 2.2, 1.0, 0.3, 3.0). Among the uronic acids, glucuronic acid was identified and the presence of mannuronic acid could be also presumed. Methylation analysis of this polysaccharide revealed high proportions of 1,3-linked, 1,2,3-linked, and 1,2,3,6-linked galactose, 1-linked fucose, and 1-linked arabinose. This suggests that CU-1 is constituted by a principal skeleton of (1-->3)-linked galactopyranose units, with some of these galactose units branched at the 2-position or at both the 2- and 6-positions, and with mainly terminal fucopyranosyl and arabinofuranosyl residues in the side chains. This is the first report on the polysaccharide constitution of a gum exudate from a Croton species.     

醋酸钙梯度法制备阿魏酸脂质体的研究及体外评价

 目的采用醋酸钙梯度法制备阿魏酸脂质体,考察其制备工艺及理化性质,进行体外释放度及稳定性评价。方法以包封率为指标,考察阿魏酸脂质体胆固醇含量、脂药比、孵育时间、孵育温度、钙离子浓度等因素对包封率的影响。评价其粒径、Zeta电位、体外释放、稳定性。采用冷冻蚀刻电镜观察其显微结构。结果磷脂-胆固醇比例为0.5,脂药比为26,钙离子浓度120 mol·L^-1,孵育条件为37℃,30 min制备的脂质体包封率达80.2%,粒径152 nm。荷电脂质体粒径增加,Zeta电位升高。载药脂质体Zeta电位降低,粒径无变化。体外5 h释放80%。30 d内包封率及粒径均无显著变化。结论通过工艺和处方考察优选出最佳制备条件,制得的阿魏酸脂质体为单室结构,包封率高,稳定性好。     

咖啡因代谢物AFMU,1X的测定及其在N-乙酰化分型中的应用

 目的：建立一套测定咖啡因的2种主要代谢物AFMU和1X的高效液相色谱（HPLC）方法。方法：选用岛津Shim-Pack CLC-ODS柱，流动相为甲醇-乙腈-水-醋酸（12∶1．5∶86．45∶0．05）。对120名健康志愿者服用咖啡5g后4h～5h尿样进行测定，以AFMU与1X摩尔比作为代谢指标，并作频谱显示。结果：受试者可明显划分为快乙酰化者和慢乙酰化者，快、慢乙酰化表型之比101∶19。结论：咖啡因HPLC方法的建立及在N-乙酰化分型中的成功应用，为国内进行N-乙酰化分型提供了一种值得推广的新方法。     

蛹虫草多糖的分离纯化及促胆固醇逆向转运研究

对蛹虫草子实体多糖进行分离纯化、相对分子质量测定、单糖组成分析和体内胆固醇逆向转运活性研究。采用阴离子交换色谱、分子排阻色谱分离纯化多糖,高效凝胶渗透色谱法测定相对分子质量,高效液相色谱结合柱前衍生法测定单糖组成,同位素示踪技术评价胆固醇转运活性。最终获得3种纯多糖组分CMBW1,CMBW2和CMYW1,糖含量依次为87%,89%,95%,蛋白含量依次为6.5%,1.3%,2.8%,相对分子质量依次为772.1,20.9,13.2 kDa;CMBW1由Man,GlcN,Rha,GlcUA,Glc,Gal和Ara构成,摩尔比例为7.25:0.17:1.29:0.23:6.30:11.08:0.79;CMBW2由Man,GlcN,Gal和Ara组成,摩尔比例为2.40:0.16:2.92:0.24;CMYW1由Man,GlcN,GlcUA和Glc组成,摩尔比例为0.59:0.57:0.45:25.61;蛹虫草多糖50 mg·kg^-1即可显著促进³H-胆固醇向小鼠血液转运和经由粪便排出。所得3种蛹虫草多糖组分均为杂多糖,所得蛹虫草多糖具有促胆固醇逆向转运功能。     

黄芩素-羟丙基-γ-环糊精包合物制备工艺研究

目的优化羟丙基-γ-环糊精（HP-γ-CD）包合黄芩素的工艺条件。方法采用冷冻干燥法,以包合物的得率、包封率和载药率为考察指标,通过L9（3）^4正交设计优选黄芩素（Ba）与HP-γ-CD摩尔比、包合温度、包合时间、包合溶剂比（水：无水乙醇）,综合评价确定最佳制备工艺;采用X射线衍射分析和差示扫描量热分析验证包合物。结果最优包合条件：Ba与HP-γ-CD摩尔比为1：3,温度45℃,包合时间4h,包合溶剂比（水：无水乙醇）2：3;采用最优包合条件制备的Ba-HP-γ-CD包合物得率为93．97％,包封率为95．96％,载药率为5．20％,其粉末经鉴定已形成包合物;Ba—HP-γ-CD包合物能够显著提高Ba的溶解度。结论优选的包合工艺合理可行,为黄芩素制备成各种剂型奠定了良好基础。