HPV16 E6与结核杆菌HSP70 N端真核表达载体的构建及表达

目的：将HPVl6 E6与结核杆菌HSP70N端进行重组，构建真核表达栽体，建立HPV16 E6阳性细胞株，最终制备抗宫颈癌的DNA疫苗。方法：用分子重组技术，设计相应的酶切位点，直接将HPV16 E6与结核杆菌HSP70N端进行尾首连接，使位于同一个阅读框架。以pCDNA3．1( )为载体，构建真核表达载体pCDNA3．1／E6-HSP70N。用电穿孔的方法转染HeLa细胞，细胞免疫化学及Western blot鉴定转化细胞中HPV16 E6的表达。结果：正确构建了真核表达载体pCDNA3．1／E6-HSP70N，在转化细胞中检测到了HPV16 E6的表达。结论：成功构建了真核表达载体pCDNA3．1／E6-HSP70N，建立了稳定表达HPV16 E6的HeLa细胞株。     

HPV-16 E6E7抗原表位嵌合体DNA疫苗黏膜免疫抑制宫颈癌的效果研究

目的 评价泛素及热休克蛋白70(HSP 70)C融合人乳头瘤病毒(HPV)16型E6E7表位嵌合体DNA疫苗鼻内黏膜免疫对宫颈癌移植瘤的预防和治疗效果。方法 建立TC-1小鼠肿瘤模型,以壳聚糖为发送载体,通过滴鼻免疫给药免疫C57BL/6小鼠。MTT法和淋巴毒性T细胞(CTL)反应检测小鼠脾脏T淋巴细胞增殖、流式细胞术检测细胞因子表达水平、肿瘤生长曲线和荷瘤小鼠存活时间评价壳聚糖包裹的HPV-16 E6E7嵌合体DNA疫苗鼻内黏膜免疫后对HPV-16型相关宫颈癌移植瘤的预防和治疗效果。结果 与对照组pcD-UH相比,实验组pcD-UE和pcD-UEH均具有显著的CTL反应,延缓HPV-16型相关宫颈癌移植瘤生长,但对已生成肿瘤无影响。鼻内黏膜途径发送壳聚糖包裹HPV-16 E6E7抗原表位嵌合体DNA疫苗仅能产生较弱的细胞免疫应答。结论 HPV-16 E6E7抗原表位嵌合体DNA疫苗通过鼻腔免疫,具有一定的肿瘤治疗和显著的肿瘤预防效果,为新型HPV疫苗的研制奠定了基础。     

pEGFP-HPV16 E6重组质粒的构建及其在Hela细胞中的表达定位

目的 构建以绿色荧光蛋白（Green fluorescen ceprotein，GFP）为报告基因的重组表达质粒pEGFP—HPV16 E6。方法 利用脂质体转染体外培养的Hela细胞，在活细胞状态下用荧光显微镜直接观察pEGFP—HPV16 E6融合蛋白在细胞中的分布和定位，用Western blot方法验证其蛋白的表达。结果 表明在空载体pEGFP—C2转染组中，Hela细胞内绿色荧光呈弥散分布；重组质粒pEGFP—HPV16 E6转染组中，绿色荧光集中在细胞核中。Western blot的结果确证了pEGFP—HPV16 E6融合蛋白的表达。结论 提示pEGFP—HPV16 E6融合基因真核表达载体在真核细胞Hela中获得了表达，细胞所表达的融合蛋白具有HPV16 E6和EGFP的双重活性，可用荧光显微镜直接观察其表达情况及业细胞定位，为HPV16 E6的功能研究提供了线索。     

深圳市妇女宫颈癌组织中人乳头瘤病毒16型E6、E7致癌基因的序列分析

目的 检测深圳市宫颈癌患者癌组织中HPV16型E6、E7致癌基因的序列.方法 采用PCR技术扩增1例在深圳生活17年宫颈癌HPV16型阳性患者组织中HPV16 E6、E7基因,对其进行克隆、构建重组质粒并进行核酸限制性内切酶鉴定及DNA测序分析.结果 成功地克隆了HPV16 E6、E7基因,测序分析表明克隆的HPV16 E6、E7基因与GenBank收录的德国标准株相比完全一致.结论 深圳市妇女宫颈癌组织中HPV16型E6、E7致癌基因的序列与德国标准株相同.     

重组腺病毒Ad-sh-HPV16E7对宫颈癌细胞系Caski表面分子MHC-Ⅰ表达水平及对NK细胞杀伤性影响

目的探讨重组腺病毒Ad-sh-HPV16E7对宫颈癌细胞系Caski表面分子MHC-Ⅰ表达和对天然杀伤细胞(NK细胞)杀伤功能的影响。方法构建重组腺病毒Ad-sh-HPV16E7感染Caski细胞,western blot检测其HPV16E7蛋白的表达水平,流式细胞仪检测感染Caski细胞后MHC-Ⅰ的表达水平,用乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测NK细胞对腺病毒感染的Caski细胞杀伤作用。结果成功构建了可沉默Caski细胞表达HPV16E7的重组腺病毒Ad-sh-HPV16E7;与Ad-EGFP组MHC-Ⅰ分子的表达量15%比较,Ad-sh-HPV16E7较同型对照增加了65%(χ2=34.25,P0.05);感染重组腺病毒Ad-sh-HPV16E7可减弱NK细胞对Caski细胞的杀伤作用。结论重组腺病毒Ad-sh-HPV16E7能沉默HPV16E7蛋白的表达,增加表面分子MHC-Ⅰ的表达,降低NK细胞对细胞的杀伤性。     

HPV DNA和HPV E6/E7 mRNA检测在宫颈癌筛查中的应用价值探讨

目的探讨HPV DNA和HPV E6/E7 mRNA检测在宫颈癌筛查中的应用价值。方法选取宫颈病变筛查的受试者407例为研究对象,均行宫颈薄层液基细胞学(TCT)检查,并检测细胞学标本中HPV DNA和HPV E6/E7 mRNA的表达。215例行阴道镜宫颈活检,结合组织病理诊断结果进行统计分析。结果 407例细胞病理学诊断结果:正常范围(WNL)192例(47.17%)、意义不明的不典型鳞状上皮细胞(ASCUS)106例(26.04%)、低度鳞状上皮内病变(LSIL)70例(17.20%)和高度鳞状上皮内病变(HSIL)39例(9.58%)。诊断为LSIL和HSIL患者中,HPV DNA和HPV E6/E7 mRNA检出率差异无统计学意义(P0.05);诊断为ASCUS患者中,HPV DNA检出率显著高于HPV E6/E7 mRNA(P0.01)。215例组织病理学诊断结果:正常109例,阴性106例,包括CINⅠ级44例、CINⅡ级27例、CINⅢ级32例、宫颈鳞癌3例。对于诊断为CINⅡ级、CINⅢ级/宫颈癌患者,HPV DNA和HPV E6/E7 mRNA检测的灵敏度、特异度和阳性预测值差异无统计学意义(P0.05),但HPV E6/E7 mRNA检测的阴性预测值和准确度显著高于HPV DNA检测(P0.05或P0.01)。结论 HPV E6/E7 mRNA检查较HPV DNA检查能更好地评估HPV感染患者宫颈病变恶化风险,联合TCT检测对提高宫颈癌早期筛查和诊断的准确度具有积极意义。     

HPV16／18感染及其致癌基因与宫颈癌的关系

目的 研究端粒酶活性、人乳头瘤病毒16／18（HPV16／18）感染及致癌基因与宫颈癌的相关性。方法 对30例浸润型宫颈癌、58例宫颈内瘤形成（CINⅢ20例、CINⅡ20例、CINⅠ18例）及16例正常女性的宫颈新鲜组织，采用端粒酶重复序列扩增法（TRAP-PCR）检测端粒酶活性，用荧光定量多聚酶链式反应（FQ-PCR）检测HPV16／18DNA，用PCR方法对HPV16／18DNA阳性组织作HPV16型致癌基因E6、E7检测。结果 宫颈癌组中端粒酶阳性22例（73．33％）（HPV16／18＋15例，7例有E6、E7表达），端粒酶阴性8例（HPV16／18＋1例，无E6、E7表达）。CINⅢ级中端粒酶阳性13例（46．4％）（HPVl6／18＋6例，2例有E6、E7表达），端粒酶阴性15例（无HPV16／18＋）；CINⅡ级中端粒酶阳性6例（25％）（HPV16／18＋2例，1例有E6、E7表达），端粒酶阴性18例（无HPV16／18＋）；CINⅠ级中端粒酶阳性2例（10．00％）（HPV16／18＋2例，无E6、E7表达）。而16例正常宫颈组织仅1例（6．25％）端粒酶活性表达，此例HPV也呈阳性而无E6、E7表达。宫颈癌和癌前病变（CINⅢ）组织端粒酶活性表达频率（P〈0．01）和HPV16／18感染率（P〈0．01）及其致癌基因表达（P〈0．01）均显著高于良性损伤（CINⅠ和CINⅡ）和正常对照。结论 端粒酶活性在宫颈癌发生中可能起到重要作用，在子宫颈损伤中端粒酶激活与HPV感染及其致癌基因的表达密切相关；对于探讨宫颈病变的进展和宫颈癌的发生具有重要意义。     

p16/Ki-67双染联合高危型人乳头瘤病毒E6/E7mRNA检测对子宫颈癌前病变诊断意义的初步评价

目的探讨p16/Ki-67双染联合高危型人乳头瘤病毒E6/E7mRNA检测对子宫颈癌前病变(CINⅡ+病变,包括CINⅡ、CINⅢ及宫颈原位癌)诊断的意义。方法应用宫颈炎标本176例、CINⅠ标本121例、CINⅡ标本95例、CINⅢ标本86例和宫颈原位癌标本75例为研究对象。回顾分析前期细胞学样本p16/Ki-67双染、HPV E6/E7mRNA检测结果,观察p16/Ki-67双染和HPV E6/E7mRNA检测在同级细胞学、组织学诊断中阳性率的差异。比较p16/Ki-67双染、HPV E6/E7mRNA、p16/Ki-67双染联合HPV E6/E7mRNA发现CINⅡ(+)病变的差异。结果在未见上皮内瘤变及恶性病变(NILM)组与意义不明的非典型鳞状细胞(ASCUS)组,p16/Ki-67双染和HPV E6/E7mRNA检测阳性率差异均显著(P<0. 05);而在低级别鳞状上皮内瘤变(LSIL)组与高级别鳞状上皮内瘤变以上组(HSIL+),差异不显著(P>0. 05)。②在宫颈炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、宫颈原位癌组,p16/Ki-67双染阳性率和HPV E6/E7mRNA检测阳性率差异均不显著(P>0. 05)。③三种检测方法诊断CINⅡ(+)病变的灵敏度、特异度、符合率、阳性预测值、阴性预测值总体差异均显著(P<0. 05)。p16/Ki-67双染联合HPV E6/E7mRNA检测法诊断CINⅡ(+)病变的灵敏度、阴性预测值最高,分别为95. 70%、84. 85%、89. 87%、84. 48%、95. 82%。结论 p16/Ki-67双染、HPV E6/E7mRNA检测均可应用于宫颈癌前病变的筛查。相比较于单独检测,两者联合应用明显提高了CINⅡ(+)病变灵敏度、阴性预测值,提高了筛查方法的效率,有在临床推广使用的潜能。     

布氏菌病双价DNA疫苗免疫保护效果的研究

【目的】构建布氏杆菌pcDNA3．1（＋）-L7／L12-BCSP31双价DNA疫苗，观察其免疫保护效果。【方法】分别克隆L7／L12、BCSP31基因，构建pcDNA3．1（＋）-L7／L12-BCSP31双价DNA疫苗。转染COS-7细胞，免疫细胞化学检测目的蛋白的表达。DNA疫苗免疫Balb／c小鼠，观察体液免疫和细胞免疫效果。布氏杆菌强毒株腹腔攻毒，观察双价DNA疫苗的免疫保护效果。【结果】构建的pcDNA3．1（＋）-L7／L12-BCSP31双价DNA疫苗在COS-7细胞有目的蛋白的表达。双价DNA疫苗免疫小鼠，ELISA检测双价DNA疫苗产生了高水平的特异性IgG抗体，且抗体亚型以IgG2a为主。FCM检测双价DNA疫苗的CD4^＋／CD8^＋比值明显下降。ELISPOT检测到疫苗免疫后小鼠分泌IFN-γ的T细胞增多。攻毒实验证明双价DNA疫苗能够产生有效的保护效果；部分数据及攻毒结果表明双价DNA疫苗的效果优于单价。【结论】研制的pcDNA3．1（＋）-L7／L12-BCSP31双价DNA疫苗免疫Balb／c小鼠能产生有效的免疫保护效果，且双价DNA疫苗效果优于单价。     

HPV E6/E7 mRNA检测在宫颈高级别病变筛查中的应用分析

目的探讨HPV E6/E7 mRNA检测在宫颈高级别病变筛查中的应用。方法回顾性分析2018年1月至2019年12月病理检查确诊为宫颈高级别病变[即宫颈上皮内瘤变≥Ⅱ级(CINⅡ+)]1596例患者的临床资料,比较确诊前1年内HPV DNA、HPV E6/E7 mRNA检测以及液基薄层细胞学检查(TCT)结果。结果TCT、HPV DNA及HPV E6/E7 mRNA检测的漏检率分别为17.31%、8.04%、3.39%,HPV E6/E7 mRNA检测漏裣率低于TCT检查和HPV DNA检测(P<0.05)。三者联合检测漏检率为0%。结论HPV E6/E7 mRNA检测比HPV DNA及TCT的漏检率低,选择HPV E6/E7 mRNA检测联合TCT检查能提高宫颈病变筛查的准确率。     

人乳头瘤病毒E6／E7mRNA在不同程度宫颈病变中的应用价值

目的：探讨人乳头瘤病毒（HPV）E6／E7 mRNA水平在不同程度宫颈病变中的应用价值。方法选取2011年4月至2013年4月广东省中医院妇科门诊收治的HPV感染患者430例,将HPV‐DNA阳性标本根据病理资料分为炎症组、CINⅠ组、CIN Ⅱ组、CIN Ⅲ组和宫颈癌组。用反转录聚合酶链反应（RT‐PCR）检测各组标本的HPV E6／E7 mRNA水平,比较不同宫颈病变组间HPV‐DNA病毒载量及 HPV E6／E7 mRNA阳性检出率的差异情况。结果随着宫颈病变程度增加,HPV‐DNA病毒载量未呈现逐级递增的趋势,各病变组间的病毒载量两两比较差异无统计学意义（P＞0．05）;而HPV E6／E7 mRNA阳性检出率则逐级递增,除炎症组与CINⅠ组的检出率比较差异无统计学意义（P＞0．05）之外,其余各组之间的检出率两两比较差异均有统计学意义（P＜0．05）。结论 HPV E6／E7 mRNA与宫颈病变程度有高度的相关性,可作为宫颈疾病筛查的重要检测指标。     

核酸分子杂交-流式细胞术检测HPV E6/E7 mRNA初步研究全文替换

目的 探讨核酸分子杂交-流式细胞术检测HPV E6/E7 mRNA的可靠性和应用价值。方法 收集2018年10月—2019年10月广东省妇幼保健院和中山大学附属第一医院妇科普通门诊常规宫颈癌筛查结果异常的361例已婚女性患者的子宫颈上皮脱落细胞样本,并进行新柏氏液基细胞学检测（TCT）、HPV DNA检测、HPV E6/E7 mRNA检测和组织病理学检查。结果 HPV E6/E7 mRNA检测阳性率随组织病理学检查结果严重级别的升高而增加。与HPV DNA比较,HPV E6/E7 mRNA有较高的特异性（72.73%）和阳性预测值（47.06%）。当TCT结果为ASCUS时,依据HPV E6/E7 mRNA结果进行阴道镜检分流的正确率为66%。结论 HPV E6/E7 mRNA检测与组织病理学检查有较高的一致性,且阴道镜镜检分流正确率和判断子宫颈组织高度病变的特异性、阳性预测值均较高。     

pcDNA3.1-HPV18E7重组基因的克隆

目的 从HPV18感染细胞中提取HPV18E7 DNA,构建pcDNA3．1-HPV18E7重组质粒。方法 应用PCR方法从HPV18感染细胞中扩增HPV18E7 DNA,并应用基因重组技术构建pcDNA3．1-HPV18E7重组质粒。结果 PCR扩增产物经电泳检测及测序鉴定证实为HPV18E7;基因重组产物经PCR鉴定及测序证实为pcDNA3．1-HPV18E7,成功构建了pcDNA3．1-HPV18E7重组质粒。结论 从受感染人体细胞中成功扩增出HPV18E7,并成功构建pcDNA3．1-HPV18E7重组质粒,为HPV基因疫苗的构建和治疗HPV感染相关肿瘤奠定了基础。     

120例高危 HPV E6／E7 mRNA 检测结果分析

目的：分析高危人乳头瘤病毒（HPV）E6/E7mRNA 检测结果在宫颈病变的不同情况时的意义。方法应用支链DNA 技术检测宫颈脱落细胞和宫颈组织中的 HPV E6/E7 mRNA。结果细胞学异常组阳性率显著高于细胞学正常组（P ＜0．05）;宫颈癌前病变和宫颈癌之间阳性率比较,差异无统计学意义（P ＞0．05）。结论宫颈上皮的异常与高危 HPV E6/E7 mRNA的转录有关,在宫颈癌筛查中检测高危 HPV E6/E7 mRNA 的转录具有临床应用价值。     

人乳头瘤病毒58型L1/E7“假病毒”疫苗的制备及免疫效果评价

目的构建人乳头瘤病毒58型L1/E7"假病毒"疫苗,并研究其免疫学特性。方法采用sf9昆虫-杆状病毒表达系统表达HPV58L1蛋白,体外解离重组病毒颗粒,向已经解离的衣壳中加入mE7-pcDNA3.1+质粒,CaCl2室温透析促使病毒样颗粒(VLP)重新聚合,用"假病毒"颗粒滴鼻免疫小鼠,检测小鼠血清IgG,IgA中和抗体以及脾淋巴细胞IFN-γ的分泌水平和细胞毒性T淋巴细胞(CTL)反应。结果 SDS-PAGE,Western blot和红细胞凝集实验证实sf9昆虫-杆状病毒表达系统有效表达有功能活性的HPV58L1蛋白,HPV58L1蛋白能够有效的折叠、解聚以及再折叠为VLP。小鼠免疫保护实验发现,用包含有mE7-pcDNA3.1~+质粒的HPV58L1"假病毒"免疫小鼠,抗HPV58L1特异性IgG,IgA明显升高(P0.001),"假病毒"免疫组产生的IFN-γ明显高于VLP免疫组(P0.001);"假病毒"免疫过的小鼠脾淋巴细胞可以特异性杀伤Tc-1细胞,引起CTL反应。结论成功制备了人乳头瘤病毒58型L1/E7"假病毒"疫苗,能诱发免疫动物较强的体液免疫反应,激发保护性抗体的产生。     

人乳头瘤病毒E6／E7mRNA检测在宫颈病变筛查中的应用价值

目的：探讨人乳头瘤病毒（HPV）E6/E7 mRNA 检测在宫颈病变筛查中的应用价值。方法2012年6月至2013年4月在余姚市人民医院因宫颈炎症、阴道异常出血或排液的720例门诊患者行宫颈 TCT 和 HPV DNA 检测,对 TCT 结果≥ASC-US 或（和）高危 HPV DNA 阳性者行宫颈 HPV E6/E7mRNA 检测和组织病理学检查。以病理学结果为标准,与 HPV DNA 检测相比较,评价 HPV E6/E7 mRNA 检测对 CIN2＋诊断价值,并用受试者工作特征（ROC）曲线评价其准确性。结果在 CIN 和宫颈浸润癌中,HPV E6/E7 mRNA 总体阳性率为78．7％,低于 HPV DNA 总体阳性率（92．6％）,差异有统计学意义（P ＜0．001）。HPV E6/E7 mRNA 检测诊断 CIN2＋的灵敏度为83．0％,低于 HPV DNA（94．5％）,差异有统计学意义（P ＜0．01）;特异度为51．1％,高于 HPV DNA（22．8％）,差异有统计学意义（P ＜0．001）。 HPV E6/E7 mRNA、HPV DNA 对诊断 CIN2＋的 ROC 曲线下面积分别为0．670、0.587, HPV E6/E7 mRNA 检测对 CIN2＋的诊断的准确性高于 HPV DNA,差异有统计学意义（P ＜0．01）。结论 HPV E6/E7 mRNA 检测诊断 CIN2＋特异度和准确性高于 HPV DNA,对宫颈病变的筛查有一定应用价值。     

120例高危HPVE6/E7mRNA检测结果分析

目的 分析高危人乳头瘤病毒(HPV)E6/E7mRNA检测结果在宫颈病变的不同情况时的意义。方法 应用支链DNA技术检测宫颈脱落细胞和宫颈组织中的HPV E6/E7mRNA。结果 细胞学异常组阳性率显著高于细胞学正常组(P<0.05);宫颈癌前病变和宫颈癌之间阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 宫颈上皮的异常与高危HPV E6/E7mRNA的转录有关,在宫颈癌筛查中检测高危HPV E6/E7mRNA的转录具有临床应用价值。     

高危型HPV DNA和HPV E6/E7 mRNA检测对宫颈高级别鳞状上皮内病变的筛查价值

目的 探讨高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV) DNA和HPV E6/E7 mRNA检测两种方法对宫颈高级别鳞状上皮内病变(HSIL,包含宫颈上皮内瘤变Ⅱ级及以上病变)的筛查价值。方法 回顾性选择2020年6月至2021年7月在扬州市妇幼保健院因宫颈炎症、接触性出血等原因就诊的疑似宫颈病变而转阴道镜活检的639例患者为研究对象,患者均行HR-HPV DNA和HPV E6/E7 mRNA检测、液基薄层细胞学检查及宫颈活体组织检查。比较不同细胞病理学和组织病理学分级患者HR-HPV DNA、HPV E6/E7 mRNA阳性率。以组织病理学检查结果为金标准,分析HR-HPV DNA、HPV E6/E7mRNA检测对HSIL的筛查价值。结果 HR-HPV DNA总阳性率为81.06%,明显高于HPV E6/E7 mRNA的52.58%(P<0.05)。不同细胞病理学分级患者比较,未见上皮内瘤变或恶性病变(NILM)、不能明确意义的非典型鳞状上皮细胞(ASCUS)、低级别鳞状上皮内病变(LSIL)和HSIL患者间HR-HPV DNA、HPV E6/E7 mRNA阳性率差异均有统计学意义(P&...     

HPV E6/E7mRNA检测在葫芦岛地区宫颈癌筛查中的应用

目的 探讨人乳头瘤病毒(HPV)E6/E7mRNA检测在宫颈癌筛查中的应用。方法 选取于该院妇科治疗的160例患者的超薄液基细胞学检查(thin prep cytology test,TCT)标本,根据患者的检查结果将其分为4个组:正常组(32例)、宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅰ组(44例)、CINⅡ组(67例)、CINⅢ组(17例)。除了CIN分级外,又根据不同的病理学类型对患者进行分组。在不同的组别中,比较HPV E6/E7mRNA检测和HPV DNA检测阳性率的差异;并比较不同病理学分组间HPV E6/E7mRNA和HPV DNA水平的差异。结果 在不同CIN分级的患者及对照组人群中,HPV E6/E7mRNA和HPV-DNA的阳性率比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。对不同病理学分组间HPV E6/E7mRNA和HPV DNA水平进行比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 在宫颈癌的筛查中HPV E6/E7mRNA检测可以作为筛选手段之一,该项检测和细胞学检测联合运用有助于诊断准确性的提高。     

NK 细胞上清液提高CTL 细胞对肝癌细胞杀伤力的研究

目的：研究用白细胞介素2（IL‐2）联合IL‐12、IL‐18以及三者共同活化NK细胞所提取的上清液与肝癌细胞共培养是否能提高AFP特异性的细胞毒性T细胞（CTL）对小鼠肝癌细胞的杀伤性。方法提取NK 细胞,分别用IL‐26000 IU／mL、IL‐26000 IU／mL＋ IL‐1210 ng／mL、IL‐26000 IU／mL＋IL‐l8100 ng／mL、IL‐26000 IU／mL＋IL‐1210 ng／mL＋IL‐18100 ng／mL活化NK细胞,3 d后提取上清液,ELISA检测上清液IFNγ表达量,然后将上清液与Hepa1‐6细胞培养过夜,流式细胞仪检测肿瘤细胞表面I类组织相容性抗原（M HC I）表达,以其为靶细胞检测AFP特异性的CTL细胞对 Hepa1‐6细胞杀伤率。结果NK＋IL‐2＋IL‐12、NK＋IL‐2＋IL‐18、NK＋IL‐2＋IL‐12＋IL‐18上清液的IFNγ含量高于NK＋IL‐2上清液的IFNγ含量（P＜0．05）,并且上述三组能有效提高小鼠 Hepa1‐6细胞表面M HC I的表达（P＜0．05）,从而显著提高了AFP特异性的CTL细胞对靶细胞的杀伤活性,然而阻断IFNγ分泌,AFP特异性的CTL细胞对靶细胞的杀伤活性降低。结论 NK 细胞上清液能够增强AFP特异性的CTL对肝癌细胞的杀伤作用。