Sp1和Bcl-2在胃腺癌中的表达及临床意义

目的 研究转录因子Sp1与调亡抑制因子Bcl-2在胃腺癌及正常胃黏膜组织中的表达及其与床病理参数及患者预后之间的关系.方法 用免疫组织化学SP法检测63例胃腺癌组织(A组)、19例胃黏膜不典型增生组织(B组)及10例因胃良性病变行部分切除的正常胃黏膜组织(C绀)中 Sp1、Bcl-2的表达特征.结果 A组Sp1阳性表达率为58.7%,明显高于B组的21.1%及C组的10.0%(P＜0.05);Sp1蛋白的表达与肿瘤的浸润深度及TNM分期、淋巴结转移之间有明显的相关性.A组Bcl-2的阳性表达率为65.1%,明显高于B组的42.1%及C组的20.0%(P＜0.05).Bcl-2蛋白表达与肿瘤浸润深度、TNM分期、淋巴结转移,无明显相关性.结论 Sp1、Bcl-2对胃癌的发生发展起重要作用,检测其蛋白表达水平对于评价患者的预后有一定的价值.     

Bcl-2、Bax在百草枯诱导大鼠视网膜损伤中的表达

目的观察百草枯对SD大鼠视网膜损伤的作用及对Bcl-2、Bax表达的影响,并探讨Bcl-2、Bax在百草枯诱导的视网膜细胞凋亡中的作用及意义。方法将大鼠随机分成对照组和模型组,对照组玻璃体腔注射0.1 mol.L-1 PBS,模型组玻璃体腔注射一定浓度的百草枯,分别在12 h、1 d、2 d、5 d处死动物,HE染色观察视网膜的损伤程度,TUNEL法检测视网膜细胞的凋亡情况,同时采用Western blot检测Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果①HE染色观察随着时间的增加,外核层逐渐变得稀疏并观察到核固缩,内核层可观察到核固缩,神经节细胞出现空泡样,5 d时内丛状层消失,外核层内核层紊乱。②TUNEL法检测凋亡结果:对照组没有发现凋亡阳性细胞,PQ可以诱导视网膜细胞凋亡,2 d凋亡指数达到高峰③Western blot结果:百草枯诱导的大鼠视网膜损伤可上调Bcl-2的表达,在1 d时达到高峰,与对照组相比差异有显著性(P<0.01),2 d开始下降;同时上调Bax的表达,在2 d时达到高峰,5 d时下降,各组之间差异均具有显著性(P<0.01);下调Bcl-2/Bax的比值,在2 d时达到最低,与对照组相比差异有显著性(P<0.01),到5 d时升高,与对照组比仍较低(P<0.01)。结论百草枯诱导了视网膜细胞的凋亡,可能是通过调节Bcl-2和Bax的表达来诱导视网膜细胞的凋亡,Bcl-2/Bax也与凋亡的发生密切相关。     

Bag-1、Bcl-2在宫颈癌中的表达及临床意义

目的:探讨Bcl-2蛋白和Bag-1蛋白在正常宫颈组织和宫颈癌组织中的表达变化以及与宫颈癌临床病理特征之间的关系和临床意义。方法:采用免疫组织化学S-P法,分别检测子宫肌瘤经手术切除的15例正常宫颈组织、45例宫颈癌组织标本中Bcl-2和Bag-1蛋白的表达。结果:Bag-1蛋白在正常宫颈组织和宫颈癌组织阳性表达率分别为7%、78%(P<0.05),Bcl-2蛋白在正常宫颈组织和宫颈癌组织阳性表达率分别为14%、69%(P<0.05)。在宫颈癌组织中,Bag-1表达与淋巴结转移有关(P<0.05),Bcl-2的表达与临床病理特征无关(P>0.05)。宫颈癌中Bag-1蛋白表达与Bcl-2蛋白表达呈正相关。结论:Bag-1、Bcl-2蛋白过表达对宫颈癌的发生、发展均起重要作用,Bag-1表达水平与宫颈癌的转移有关,可作为预测宫颈癌转移潜能的新的生物学指标。Bcl-2与Bag-1之间的抗凋亡作用呈正相关,两者在肿瘤发生、发展中的抗凋亡作用相互增强。     

丝裂霉素C诱导喉癌细胞凋亡及其对Bcl-2基因表达的影响

目的 探讨药物体外诱导喉癌细胞凋亡及其相关基因的作用.方法 丝裂霉素(MMC)处理喉癌细胞系Hep-2细胞,观察喉癌细胞的形态学改变,琼脂糖电泳检测DNA片断;免疫组化法检测Bcl-2基因表达.结果 2&#215;10-2 g/L MMC作用24 h后,可见细胞浓缩,核固缩,染色质浓聚等;出现DNA ladder;12 h后,Bcl-2蛋白表达量明显增加.结论 MMC诱导喉癌细胞凋亡,MMC可能由于上调了Bcl-2蛋白的表达而减弱了自身对喉癌细胞的诱导凋亡.     

IGF-1和COX-2在子宫内膜癌中的表达及其临床意义

目的检测胰岛素样生长因子(IGF)-1和环氧合酶(COX)-2在子宫内膜组织中的表达,分析其与临床病理特征的关系。方法 150例子宫内膜样腺癌组织(EA组)、54例非典型增生(AHE组)及84例正常子宫内膜组织(NE组)。应用免疫组化SP法检测IGF-1及COX-2在各组中的表达情况。结果 (1)EA组IGF-1和COX-2阳性表达率(70.0%、78.7%)高于NE组(45.2%、44.0%),差异有统计学意义(P<0.01)。(2)EA组IGF-1阳性表达在不同子宫肌层浸润间差异有统计学意义(P<0.05);COX-2阳性表达在不同病理分级间差异有统计学意义(P<0.05)。(3)IGF-1和COX-2在子宫内膜样腺癌中表达呈正相关(rs=0.183,P<0.05)。结论 IGF-1和COX-2在子宫内膜样腺癌中可能存在协同作用,同时检测有利于早期诊断和预测其分化浸润情况。     

大蒜素对人视网膜母细胞瘤Rb细胞中Bcl-2表达影响的研究

目的探讨大蒜素对人视网膜母细胞瘤Rb细胞的抑制作用，及其对Bcl-2表达的影响。方法人视网膜母细胞瘤Rb细胞株，经复苏，孵育，传代分为10个实验组。分别用不同浓度大蒜素（5μg／ml、10μg／ml、15μg／ml、20μg／ml、25μg／ml、30μg／ml）、顺铂（3μg／ml）及大蒜素（15μg／ml）和顺铂（3μg／ml）联合处理人视网膜母细胞瘤Rb细胞，在不同时间（24h、48h、72h）观察Rb细胞的形态，并应用免疫细胞化学SP法检测不同处理条件下和各时间点Bcl-2的表达情况。结果人视网膜母细胞瘤Rb细胞在不同浓度大蒜素、顺铂以及大蒜素和顺铂联合作用下，细胞生长增殖受到抑制，与大蒜素空白液、培养液对照组的Rb细胞相比形态学变化明显。不同浓度的大蒜素均可以下调人视网膜母细胞瘤Rb细胞中Bcl-2的表达，大蒜素作用组与对照组两两比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。大蒜素下调Bcl-2的表达具有时间和剂量依赖性，随着大蒜素作用时间的延长，Bcl-2的表达依次下降。大蒜素（15μg／ml）和顺铂（3μg／ml）联合用药可增强对人视网膜母细胞瘤Rb细胞的生长抑制，与大蒜素（15μg／ml）、顺铂（3μg／ml）单独处理Rb细胞比较，下调Bcl-2的表达作用具有显著性差异（P〈0．05）。结论人视网膜母细胞瘤Rb细胞中存在与细胞凋亡有关的Bcl-2蛋白低表达。大蒜素可抑制人视网膜母细胞瘤Rb细胞的生长，且抑制作用随药物作用浓度的增高和作用时间的延长而增强，具有时间和浓度依赖性。采用免疫细胞化学的方法检测人视网膜母细胞瘤Rb细胞中Bcl-2的表达，发现大蒜素作用组Bcl-2的表达较空白和溶剂对照组低，提示大蒜素抑制人视网膜母细胞瘤Rb细胞的生长与Bcl-2介导的细胞凋亡有关，大赫素和顺铂联合用药作用强于单独用药，可进一步提高药物对肿瘤细胞的生长抑制。     

nNOS参与OGD介导的促神经干细胞增殖效应

目的：体外研究脑缺血促神经发生的机制。 方法： 体外培养神经干细胞（neural stem cells,NSCs）与海马神经元,并采用氧糖剥夺模型（oxygen and glucose deprivation, OGD）模拟在体缺血,通过RT-PCR、Western blot、免疫细胞化学、酶活性测定、亚硝酸盐/硝酸盐（nitrite/nitrate,NOx） 含量测定等多种方法研究神经干细胞的生物学行为以及介导这种效应的分子机制。结果： （1）OGD通过直接和间接（神经元）作用增加神经干细胞中BrdU＋ 细胞比例。（2）OGD上调神经干细胞中神经元型一氧化氮合酶（neuronal nitric oxide synthase,nNOS）并下调神经元中nNOS,且都有利于神经干细胞增殖。（3）采用nNOS基因敲除小鼠来源的神经干细胞以及神经元（用于共培养）进行实验,发现OGD并不能升高神经干细胞中BrdU＋ 细胞比例。 结论：神经干细胞和神经元中nNOS水平变化共同参与了OGD诱导的促神经干细胞增殖效应。     

染砷大鼠生精细胞凋亡及其Bcl-2表达的变化

目的观察不同剂量三氧化二砷(As2O3)对大鼠生精细胞凋亡及其Bcl-2表达的变化。方法40只健康雄性SD大鼠随机分成四组,分别为0.375、0.75、1.5mg/kg3个染毒组和对照组,灌胃法连续给药16周后,采用末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)法检测大鼠生精细胞凋亡,免疫组化法检测大鼠生精细胞Bcl-2的表达。结果(1)与对照组相比,生精细胞凋亡指数(AI)显著升高(P<0.01),生精细胞Bcl-2阳性产物表达明显降低(P<0.01)。(2)每日精子生成量与生精细胞凋亡呈负相关(r=-0.563,P<0.01)。(3)生精细胞凋亡与Bcl-2阳性表达呈负相关(r=-0.737,P<0.01)。结论一定剂量的As2O3可通过抑制生精细胞Bcl-2的表达,促进生精细胞凋亡而导致精子生成量的减少,产生雄性生殖毒性。     

Survivin和Bcl-2调节槲皮素诱导的A549细胞凋亡

目的研究槲皮素诱导肺腺癌细胞A549凋亡,探讨survivin和Bcl-2在槲皮素诱导A549细胞凋亡中的调节作用。方法分别采用MTT法、荧光染色、流式细胞仪和免疫细胞化学观察了槲皮素对肺腺癌A549细胞增殖、凋亡、细胞周期和蛋白表达的影响。结果槲皮素抑制肺腺癌A549细胞增殖的作用明显,且呈浓度和时间依赖性。形态学检测显示出细胞凋亡的特征变化,槲皮素能使肺腺癌A549细胞周期阻滞于G0/G1期,且A549细胞survivin和Bcl-2蛋白表达同时下降,而caspase-3活性升高。结论槲皮素能诱导A549细胞凋亡,其机制可能是使肺腺癌A549细胞周期阻滞于G0/G1期,并同时下调survivin和Bcl-2蛋白的表达,直接激活caspase-3而诱导A549细胞凋亡。     

Survivin和Bcl-2在结肠癌组织中的表达及相互关系

目的探讨Survivin、Bcl-2在结肠癌组织中的表达及其与结肠癌临床病理学特征关系。方法利用免疫组织化学染色方法检测55例结肠癌组织及15例正常结肠癌组织中Survivin、Bcl-2蛋白的表达情况,结合临床病理特征对其进行分析。结果 Survivin、Bcl-2在结肠癌组织中的表达率显著高于癌旁组织和正常结肠组织中的表达率（P〈0.05）;有淋巴转移的癌组织中Survivin、Bcl-2表达率显著高于无淋巴转移的癌组织中的表达率（P〈0.05）;Survivin、Bcl-2的表达呈高度一致性（P〈0.05）。结论 Sur-vivin、Bcl-2与结肠癌的生物学行为密切相关。     

Bcl-2在非小细胞肺癌中的表达与临床病理特征的关系

目的研究Bc l-2在人类非小细胞肺癌中的表达与临床病理特征的关系。方法应用免疫组织化学(S-P法)检测80例非小细胞肺癌组织标本和40例肺良性病变组织中Bc l-2的表达水平。结果非小细胞肺癌组织中Bc l-2表达水平(51.2%)显著高于肺良性病变组织(12.5%)(P<0.01);非小细胞肺癌组织中Bc l-2表达水平升高与肺癌组织学类型存在相关性(P<0.05)。结论Bc l-2表达升高与肺癌的发生、发展关系密切。     

苦参碱诱导RPMI8226细胞凋亡及其对Bcl-2、增殖细胞核抗原蛋白表达的影响

目的：研究苦参碱是否具有诱导RPMI8226细胞凋亡的生物学活性,探讨苦参碱对RPMI8226细胞Bcl-2及增殖细胞核抗原（PCNA）表达水平的影响及其作用的分子机制。方法：CCK-8法检测一定浓度的苦参碱对RPMI8226细胞的体外增殖抑制作用;AnnexinV/PI双染色法检测细胞凋亡;PI单染色法检测细胞周期改变;同时应用流式细胞术检测Bcl-2及PCNA蛋白表达的变化。结果：苦参碱对RPMI8226细胞生长具有明显的抑制作用,呈量效和时效关系;苦参碱能诱导RPMI8226细胞凋亡,呈量效关系;细胞周期分析,G0/G1期细胞相对增多、S期相对减少、G2/M期无明显变化。苦参碱处理组RPMI8226细胞中Bcl-2及PCNA蛋白的表达跟未加药组相比阳性表达率均降低。结论：苦参碱对RPMI8226细胞生长具有明显抑制作用,其作用主要通过诱导RPMI8226细胞产生细胞周期阻滞和凋亡,降低PCNA的表达。苦参碱诱导RPMI8226细胞凋亡过程中,Bcl-2蛋白表达下调对调控细胞凋亡有重要作用。     

镍染毒大鼠睾丸生精细胞凋亡及其对Bcl-2和Bax表达的影响

目的探讨硫酸镍诱导大鼠睾丸生精细胞凋亡的类型及其对生精细胞Bcl-2、Bax蛋白表达和雌二醇水平的影响。方法健康性成熟Wistar雄性大鼠32只,随机分为4组,正常对照组,硫酸镍1.25、2.5、5.0 mg/kg 3个剂量组。腹腔注射染毒,1次/d,连续30 d。采用原位缺口末端标记法(TUNEL)检测睾丸生精细胞凋亡;免疫组化SABC法检测生精细胞Bcl-2和Bax蛋白表达;放射免疫法检测血清雌二醇(E2)水平。结果与对照组比较,各剂量组大鼠睾丸生精细胞凋亡增多(P<0.05),且凋亡细胞主要是生精早期和晚期阶段的精原细胞和精母细胞。各剂量组大鼠生精细胞Bcl-2阳性表达减少而Bax阳性表达增多,且血清E2水平降低(P<0.05)。结论硫酸镍可诱导大鼠睾丸精原细胞和精母细胞凋亡,其机制可能与生精细胞内Bcl-2蛋白表达下调,Bax蛋白表达上调以及雌二醇水平降低有关。     

子宫内膜腺癌中PTEN和Bcl-2的表达及其意义

目的　探讨PTEN和Bcl 2在子宫内膜腺癌发生、发展中的作用。方法　应用免疫组化S P法检测PTEN和Bcl 2在 10例正常增生期子宫内膜 ,10例子宫内膜不典型增生 ,5 8例子宫内膜腺癌中的表达 ,并分析它们与子宫内膜癌临床病理的关系。结果　 (1)PTEN和Bcl 2在正常增生期子宫内膜、子宫内膜不典型增生和子宫内膜腺癌中的阳性表达逐渐降低 ,均有显著性差异 (P <0 0 5 ,P <0 0 0 5 )。 (2 )在子宫内膜癌中PTEN的表达与临床分期、组织分化、肌层浸润、淋巴结转移无关 (P >0 0 5 ) ;而Bcl 2均有显著性差异 (P <0 0 5 ,P <0 0 5 ,P <0 0 1,P <0 0 5 )。 (3)单因素分析PTEN和Bcl 2与子宫内膜腺癌患者预后没有明显的关系 ,多因素分析筛选出患者的年龄、手术分期是独立的预后影响因素。结论　PTEN和Bcl 2的检测对子宫内膜腺癌的早期诊断、恶性程度的判定和治疗提供了依据 ,与预后的关系尚有待进一步研究。     

IGF-1对6-OHDA诱导神经元氧化损伤的保护作用

目的 探讨胰岛素样生长因子-1（IGF-1）对6-羟基多巴胺（6-OHDA）诱导的PC12细胞氧化损伤的保护作用。方法 以25、50、100、150、200 μmol/L 的6-OHDA 处理PC12细胞,在12、24、48 h用MTT 法检测6-OHDA 对PC12细胞活性的影响,筛选最佳的实验浓度和观察时间。实验分为3组：对照组、6-OHDA组（150 μmol/L处理24 h）和IGF-1+6-OHDA组（IGF-1 100 nmol/L预处理2 h,后加入150 μmol/L 6-OHDA处理24 h）,MTT法检测各组细胞活性;免疫荧光染色法检测细胞活性氧（ROS）水平;Hoechst33342/PI双染法检测细胞凋亡。结果 随6-OHDA浓度的增加和作用时间的延长,PC12细胞的活性呈梯度降低,150 μmol/L 6-OHDA浓度和处理后24 h作为本研究的最佳的实验浓度和观察时间。与6-OHDA组比较,IGF-1+6-OHDA组PC12细胞活力增强、ROS水平下降、细胞凋亡减少。结论 IGF-1预处理能减少6-OHDA引起的PC12细胞氧化损伤及凋亡,增加细胞活性,为防治帕金森病提供了潜在的治疗策略。     

黄芩苷对SH-SY5Y细胞损伤的Bcl-2和Bcl-xL mRNA基因表达的影响

目的 探讨黄芩苷对过氧化氢(H₂O₂)诱导的SH-SY5Y细胞损伤的Bcl-2和Bcl-xL mRNA表达的影响. 方法 建立人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的体外H₂O₂损伤模型,采用噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度黄芩苷对SH-SY5Y细胞存活率的影响,采用Real-time PCR法检测各组细胞的Bcl-2和Bcl-xL表达水平的变化. 结果 50,100,200 μmol.L^-1黄芩苷组细胞存活率分别为130.4%,89.9%和60.9%,H₂O₂损伤组细胞存活率为33.9%,50,100 μmol.L^-1黄芩苷组与H₂O₂损伤组比较,差异有统计学意义(P<0.01). 50,100,200 μmol.L^-1黄芩苷组Bcl-2 mRNA表达量分别为(11.48±0.48),(7.37±1.57),(7.39±2.01),H₂O₂损伤组为(5.84±0.58);50,100,200 μmol.L-1黄芩苷组Bcl-xL mRNA表达量分别为(19.96±2.22),(11.36±3.94),(13.07±2.37),H₂O₂损伤组为(7.95±0.58),50 μmol.L^-1组Bcl-2 和Bcl-xL mRNA与H^₂O^₂损伤组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05). 结论 黄芩苷对H₂O₂诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用,可能与黄芩苷上调Bcl-2和Bcl-xL的表达而起到抗凋亡的作用有关.     

芍药苷对醋酸铅诱导海马神经元凋亡及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响

目的 探讨芍药苷(paeoniflorin,PF)对醋酸铅诱导海马神经元凋亡及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响。方法 分离培养胎鼠海马神经元细胞,细胞免疫荧光染色鉴定纯度。MTT测定海马神经元细胞活力以确定醋酸铅最适造模浓度及时间,同时筛选合适剂量PF干预海马神经元凋亡。依据MTT测定结果,分为空白组、模型组和20,40,80 μmol·L^-1 PF组干预海马神经元细胞,作用24 h后,加醋酸铅染毒,检测细胞色素C (cytochrome C,Cyt-C)含量、线粒体膜电位及细胞内Ca²⁺浓度。流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Western blotting测定海马神经元细胞中caspase-3、cleaved-caspase-3、caspase-8、cleaved-caspase-8、caspase-9、cleaved-caspase-9、Bax、Bcl-2蛋白表达水平。结果 细胞免疫荧光染色鉴定结果显示分离培养的细胞为海马神经元细胞,且纯度较高。MTT测定结果显示醋酸铅最适造模浓度及时间为25 μmol·L^-1染毒24 h;PF剂量为20,40,80 μmol·L-1可显著改善海马神经元细胞活性,呈剂量依赖性。与空白组相比,模型组Cyt-C含量、凋亡率、细胞内Ca²⁺浓度显著升高(P<0.01),线粒体膜电位显著降低(P<0.01)。与模型组相比,40 μmol·L^-1 PF组和80 μmol·L^-1 PF组可降低Cyt-C含量、凋亡率、细胞内Ca²⁺浓度(P<0.05或P<0.01),升高线粒体膜电位(P<0.01),20 μmol·L^-1PF组可显著升高线粒体膜电位(P<0.05)。此外,一定剂量的PF可下调cleaved-caspase-3、cleaved-caspase-8、cleaved-caspase-9、Bax蛋白表达,上调Bcl-2蛋白表达。结论 PF可抑制醋酸铅诱导的海马神经元凋亡,可通过调控Bcl-2/Bax蛋白表达发挥神经保护作用。     

大鼠脑缺血再灌注后Bcl-2和Bax的表达

目的探讨大鼠脑缺血再灌注（CIR）后早期凋亡相关基因Bcl-2和Bax在脑皮质神经元中的表达变化。方法将56只大鼠随机分为假手术组（对照组）及缺血再灌注组（观察组）,采用免疫组织化学法测定Bcl-2和Bax的表达。结果随着CIR时间的延长,凋亡细胞增多,缺血组Bcl-2、Bax表达增多,与对照组相比,差异有统计学意义（P〈0．01）,Bcl-2的表达在12h达到最高,Bax的增加一直持续到48h。结论CIR后Bcl-2表达的增加早于Bax,CIR后神经细胞凋亡可能与Bcl-2／Bax失调有关。     

糖尿病大鼠视网膜中IGF-1的动态表达及巴曲酶对其的影响

目的探讨胰岛素样生长因子（IGF-1）在糖尿病大鼠视网膜中的动态变化规律，初步证实巴曲酶对IGF-1的影响并探讨其机制，为临床上治疗糖尿病视网膜病变（DR）提供理论依据。方法将大鼠腹腔注射链脲佐菌素制作实验性糖尿病模型，再分别于成模后2个月和3个月时腹腔注射巴曲酶进行干预。通遏免疫组织化学和原位杂交双重检测IGF-1在视网膜中的表达。结果DM造模后2个月时视网膜中IGF-1的含量明显增加，且随时间变化有统计学差异，而巴曲酶治疗后IGF-1的表达明显增加。结论DR大鼠视网膜中IGF-1表达增加可能参与DR的发病机制。巴曲酶对DR有保护作用，其机制可能包括对IGF-1的调节。