兰州地区IL-15、IL-17A和IL-18基因多态性与复发性流产的相关性研究北大核心CSCD

目的:探讨IL-15、IL-17A和IL-18基因多态性与复发性流产(RSA)的关系。方法:SNaPshot法分析150例RSA患者(RSA组)和150例健康志愿者(对照组)中IL-15基因rs3806798、IL-17A基因rs2275913、IL-18基因rs1946518和rs187238位点多态性分布情况。结果:RSA组和对照组中4个单核苷酸多态性(SNPs)基因型频率和等位基因频率分布在两组间差异无统计学意义(P>0.05);隐性和显性遗传模式下对IL-15基因rs3806798、IL-17A基因rs2275913、IL-18基因rs1946518进行非条件Logistic回归分析,发现两组间差异均无统计学意义(P>0.05)。但IL-18基因的rs187238 SNP位点GG型、CG型、CC型3种基因型构成比在两组间差异有统计学意义(χ2=9.256,P=0.010)。显性、隐性遗传模式Logistic回归分析结果显示G等位型(GC+GG基因型)与RSA患病风险降低相关(χ2=4.303,OR=0.53,95%CI=0.29~0.97,P=0.038),但G等位基因不是RSA的保护性等位基因(χ2=2.275,OR=0.66,95%CI=0.38~1.14,P=0.132)。经连锁不平衡和单体型分析,rs1946518和rs187238存在完全连锁不平衡。TGTG单体型是RSA的保护因素,其OR(95%CI)=0.361(0.158~0.827)。结论:IL-18基因rs187238基因多态性与RSA患病风险相关。     

重组IL-12对乙肝疫苗在小鼠诱导免疫应答的作用

目的:观察重组IL-12对乙肝疫苗在小鼠诱导应答的强度与性质的作用,探讨将重组IL-12用作乙肝治疗性疫苗分子佐剂的可能性.方法:将乙肝疫苗联合重组IL-12肌注免疫小鼠,检测小鼠产生的抗乙肝表面抗原特异性体液和细胞免疫应答.结果:乙肝疫苗联合重组IL-12能明显增强小鼠T淋巴细胞的增殖活性、促进分泌细胞因子IFN-γ和IL-2并提高IgG2a抗体水平.结论:重组IL-12可显著增强乙肝疫苗诱导的细胞免疫应答,并使免疫应答转向Th1型.     

人IL-6受体胞外区真核表达载体的构建及体外表达

目的 构建人IL-6受体(IL-6R)胞外区真核表达载体,检测其在体外培养细胞中的表达.方法 利用PCR扩增IL-6R胞外区,克隆到pcDNA3.1(+)中,用双酶切、测序鉴定.重组质粒通过脂质体转染HL-60细胞,用G418进行筛选,利用Western印迹检测IL-6R蛋白表达.结果 PCR扩增出1 218 bp的目的 片段,双酶切和测序结果显示重组质粒正确.Western印迹结果显示转染细胞能够表达目的 蛋白.结论 成功构建了人IL-6R胞外区真核表达载体,并且能够在真核细胞中表达.     

Wortmannin对糖尿病肾病大鼠肾组织IL-1与IL-6表达的影响

目的研究糖尿病肾病(DN)大鼠模型经静脉注射PI3K抑制剂Wortmannin后肾组织白介素-1(IL-1)与白介素-6(IL-6)表达的变化。方法成年健康清洁级SD雄性大鼠30只,随机分为假手术组(10)、模型组组(10)和Wortmannin处理组(10)。参照Anderson's方法制作糖尿病肾病大鼠模型。采用Western blot方法检测三组大鼠肾组织IL-1与IL-6蛋白的表达;RT-PCR方法检测三组大鼠肾组织IL-1m RNA与IL-6m RNA的表达。结果模型组与Wortmannin处理组肾组织IL-1与IL-6蛋白和m RNA的表达量均显著高于假手术组(0.05),而与模型组相比,Wortmannin处理组肾组织IL-1与IL-6蛋白和m RNA的表达量明显降低(0.05)。结论 PI3K抑制剂Wortmannin能够下调DN大鼠肾组织IL-1与IL-6的表达。     

雷帕霉素对糖尿病大鼠肝组织IL-1与IL-6表达的影响

目的研究糖尿病(DN)大鼠模型经静脉注射PI3K抑制剂雷帕霉素后肝组织白介素-1(IL-1)与白介素-6(IL-6)表达的变化。方法成年健康清洁级SD雄性大鼠60只,随机分为对照组(20)、糖尿病组(20)和雷帕霉素组(20)。采用高脂饲料喂养和小剂量链脲佐菌素(STZ)腹腔内注射方法,建立2型糖尿病合并非酒精性脂肪肝动物模型。评价各组大鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(CHO)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的水平,采用免疫组织化学方法和Western blot方法检测三组大鼠肝组织IL-1与IL-6蛋白的表达。结果糖尿病组大鼠血清ALT、AST、TG、CHO、LDL-C水平比对照组显著升高,而雷帕霉素组比糖尿病组显著降低(P0.01)。糖尿病组大鼠肝组织IL-1与IL-6蛋白的阳性表达量比对照组显著升高,而雷帕霉素组比糖尿病组显著降低(P0.01)。结论雷帕霉素改善2型糖尿病大鼠肝功能可能与下调IL-1与IL-6的表达相关。     

蛋白表达的亚细胞定位影响基因免疫诱导的体液免疫应答水平的研究

目的研究表达产物的不同亚细胞定位对基因免疫诱导的体液免疫应答水平的影响,为基因疫苗的设计提供参考。方法利用分子克隆技术,分别构建能表达不同细胞定位的EGFP-HPVl6L1融合蛋白和截短型EGFP-HPV16L1△NLS融合蛋白的重组pcDNA-EGFP-HPV16L1和pcDNA-EGFPHPV16L1△NLS真核表达载体;通过转染CHO细胞,并在倒置荧光显微镜下观察表达产物的细胞定位;用重组pcDNA载体免疫BALB/c小鼠;EGFP作为抗原,ELISA法检测血清抗体吸光度。结果①重组pcDNA-EGFP-HPV16L1转染的CHO细胞核内可见到绿色荧光,pcDNA-EGFP-HPV16L1△NLS真核表达载体转染的CHO细胞质内可见到绿色荧光:②两种不同的重组pcDNA载体均可诱导BALB/c小鼠体液免疫反应,但重组pcDNA-EGFP-HPV16L1△NLS真核表达载体免疫组小鼠IgG抗体A_(450)值显著高于重组pcDNAEGFP-HPV16L1真核表达载体免疫组小鼠IgG抗体A_(450)值(P0.001)。结论表达产物的不同细胞定位可影响基因免疫诱发的体液免疫应答水平,定位于细胞质内的蛋白分子较定位于细胞核的蛋白分子能诱导机体更强的体液免疫反应,这为以增强体液免疫反应为目的的基因疫苗的设计提供了参考。     

高血压对急性心肌梗死患者血清IL-1β、IL-6及IL-8水平的影响

为探讨高血压对急性心肌梗死（AMI）患者血清白介素-1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）及白介素-8（IL-8）的影响。AMI患者67例,根据高血压病史分为非高血压组37例,高血压组30例,对照组28名,采用ELISA测定各组患者入院第24h、第14d及对照组的血清IL-1β、IL-6及IL-8水平。结果表明非高血压组患者的炎性因子水平于AMI发病第24h显著高于对照组（P〈0．001）,发病第14天炎症因子水平与对照组相比无显著性差异,高血压组患者AMI发病第24h、第14d血清炎症因子水平均显著高于非高血压组和对照组（P〈0．001）。结果显示,IL-1β、IL-6及IL-8参与了AMI的发病,但高血压对炎性因子的升高起到了关键作用。     

剪切力对血管内皮细胞表达IL-8的影响

本文利用改进的流室装置, 通过精密蠕动泵提供剪切力, 选择5dyne/cm2、10dyne/cm2、15dyne/cm2三种剪切力, 施加于体外培养的血管内皮细胞, 作用不同时间, 用RIA的方法检测流体动力学对血管内皮细胞表达IL-8的影响.结果表示, 不同剪切力作用内皮细胞后, IL-8的表达量与剪切力大小及作用时间有关, 为时间依赖性增长, 在5dyne/cm2组和10dyne/cm2组中, IL-8表达量明显高于空白对照组, 而15dyne/cm2组与对照组相比有下降趋势, 提示高剪切力有可能抑制IL-8的分泌.通过观察不同大小剪切力对血管内皮细胞表达IL-8的影响, 为探讨剪切力对动脉粥样硬化的影响提供一些数据.     

Qualitative analysis of the humoral immune response to the "a" determinant of HBs antigen after inoculation with plasma-derived or recombinant vaccine

Competitive inhibition assays using monoclonal antibodies reacting with defined sequence of the "a" determinant of hepatitis B surface antigen (HBsAg) indicate that the humoral response to plasma-derived and recombinant HBsAg vaccine is similar in quantitative and qualitative terms. Both vaccines evoke an antibody response to the RFHBs 1 epitope, which is known in animal experiments to be protective.     

福建省疾病监测点儿童乙型肝炎疫苗免疫状况的调查

于１９９２年在福建省对疾病监测点自然人群中１～９岁儿童乙型肝炎疫苗免疫后的效果进行研究，按照全国肝炎流调抽样方案，应用放射免疫（ＲＩＡ）试剂盒检测，共调查儿童７５８人，结果显示未免疫组和免疫组儿童的ＨＢｓＡｇ阳性率分别为２３．１６％和４．７９％，抗－ＨＢｓ阳转率由免疫后第１年的８９．２９％降低至免疫后第６年的６６．６７％。表明乙肝疫苗具有良好的免疫保护效果     

HBV与HCV融合DNA疫苗的构建及其体液免疫应答

目的 构建含乙型肝炎病毒（HBV）表面抗原基因（S区基因）与丙型肝炎病毒（HCV）核心抗原基因（C区基因）的嵌合真核表达载体,观察preS1和preS2基因对HBV表面抗原及HCV核心抗原体液免疫的影响。方法 用PCR方法,分别扩增HBV S区基因和HCV C区基因。将S区基因克隆入真核表达载体pcDNA3.1,酶切鉴定后,大量提取质粒并免疫Balb/c小鼠,用ELISA法检测抗HBs和抗HCV抗体。结果 成功地扩增出目的基因片段,克隆后酶切鉴定结果正确,序列分析与文献报告相一致。免疫后检测到抗HBs和抗HCV抗体。preS1与preS2基因对构建的融合DNA疫苗的体液免疫应答有一定的抑制作用。抗HBs抗体的产生低于只含S基因的真核表达载体;preS1基因对抗HCV抗体的产生具有抑制作用,而preS2无影响。结论 不同长度的HBV S区基因可影响抗HBs和抗HCV抗体的产生。     

重组乙型肝炎病毒变异s基因疫苗诱导小鼠产生特异性体液免疫应答

目的：构建乙型肝炎病毒(HBV)变异s基因真核表达载体，检测其诱导小鼠产生特异性体液免疫应答。方法：利用限制性内切酶定位克隆构建s基因nt587 G→A的真核表达载体pcMV-S2．S 145R(PR).用其转染人肝癌细胞系Hep G2后，用EIA、EILISA及免疫细胞化学法，观察其抗原性。以重组变异型s基因真核表达载体(PR)和载体pcDNA3．0分别免疫C57BL／6小鼠各5只。每只小鼠各肌肉注射纯化质粒100μg.用ELISA法检测血清抗-HBs及抗-HBs2抗体的效价。结果：体外实验证实，变异型HBs矩可与抗-HBs结合；PR免疫小鼠可诱导其产生抗-HBs抗体及抗．HBs2抗体，但抗-HBs2抗体的出现早于抗-HBs抗体约1～2wk。结论：HBV变异s基因(nt587G→A)的真核表达载体的表达产物具有良好的抗原性，能够诱导C57BL／6小鼠产生体液免疫应答。     

鼠疫组分疫苗诱导小鼠体液免疫应答研究

目的通过检测鼠疫组分疫苗免疫小鼠诱导的体液免疫应答,对其免疫原性进行评价。方法将小鼠随机分成4个实验组,免疫后5周内眦采血,检测血清中抗F1抗原和rV抗原IgG及IgA抗体;充分暴露气管,沿气管上端剪一楔形口,用PBS冲洗肺泡制备肺冲洗液,检测肺冲洗液中抗F1抗原和rv抗原IgG及IgA抗体。结果血清中可产生较高效价的抗F1抗原和rV抗原IgG抗体以及较低效价的抗F1抗原IgA抗体。肺冲洗液中可检测到抗F1抗原和rV抗原的IgG抗体,但无特异性IgA产生。结论鼠疫组分疫苗能诱导小鼠产生较强的血清抗体应答,肺冲洗液可检测到一定的IgG抗体,该疫苗有希望成为我国新一代鼠疫疫苗。     

三种IL-15基因转染NCI-H446细胞模型的建立与鉴定

目的构建并鉴定三种IL-15基因转染的人小细胞肺癌(NCI-H446)细胞模型。方法PCR法扩增得原型IL-15基因片段(FhIL-15)I、L-15成熟肽基因片段(FhIL-15mp)和IL-2信号肽基因片段(FhIL-2sp);利用重叠延伸基因拼接法将FhIL-15mp和FhIL-2sp拼接成改型IL-15基因片段(FhIL-2sp-hIL-15mp)。将三种IL-15基因片段(FhIL-15、FhIL-15mp和FhIL-2sp-hIL-15mp)分别插入真核表达载体pEGFP-N1构建成相应的重组质粒(PhIL-15、PhIL-15mp和PhIL-2sp-hIL-15mp),用脂质体法分别转染NCI-H446、G418筛选得三种IL-15基因转染的NCI-H446细胞(C-hIL-15、C-hIL-15mp、C-hIL-2sp-hIL-15mp)。对所得的各基因片段和重组质粒,用琼脂糖凝胶电泳和测序鉴定;对所得的各转染细胞,用RT-PCR法检测hIL-15mRNA的表达,ELISA法检测hIL-15蛋白的分泌。结果琼脂糖凝胶电泳和测序证明,FhIL-15、FhIL-15mp、FhIL-2sp-hIL-15mp电泳条带位置和基因序列正确。三种转染细胞均有IL-15mRNA表达,但仅C-hIL-2sp-hIL-15mp可测到22pg/mL的IL-15蛋白分泌。初步应用表明,三种转染细胞确有不同的免疫生物学特性。结论正确构建了三种IL-15基因转染的NCI-H446细胞模型,可在进一步研究IL-15基因与肿瘤细胞免疫生物学特性的关系及至机制中应用。     

乙肝疫苗免疫耐受性相关基因研究进展

乙肝疫苗接种可刺激机体免疫系统产生保护性抗体,但部分人群接种后并没有有效的抗体产生.发生乙肝疫苗低或无应答的免疫耐受因素众多,机体的遗传因素是一个重要原因.该文就接种乙肝疫苗后所产生的免疫耐受现象与机体遗传相关基因的研究进展进行综述.     

乙型肝炎核酸疫苗NV—HB／s肌注小鼠后HBsAg的表达和抗 …

目的 研究乙型肝炎核酸疫苗肌注小鼠后在体内的表达及小鼠体液免疫应答的规律,同时观察接种局部组织的病理变化。方法 以乙型肝炎核酸疫苗ＮＶ－ＨＢ／ｓ肌注小鼠,然后定期分批处死,采集肌注局部组织检测ＨＢｓＡｇ（ＡＢＣ免疫组化法）,采集外周血标本检测ＨＢｓＡｇ和抗－ＨＢｓ（ＥＬＩＳＡ法０,并常规病理检查。     

B7-2表达质粒对HBV DNA疫苗诱导的特异性免疫应答的影响

目的：探讨B7－2分子是否能够增强乙型肝炎病毒（HBV）DNA疫苗诱导的特异性免疫应答。方法：将B7－2表达质粒与HBV DNA疫苗共接种于小鼠腓肠肌内，检测细胞毒性T淋巴细胞（CTL）活性，迟发性超敏反应（DTH）及抗－HBs滴度。结果：B7－2表达质粒与HBV DNA疫苗共接种组的DTH反应和CTL活性，明显强于单独接种HBV DNA疫苗组（P＜0．01）。两组的抗－HBs滴度差异无显著性（P＞0．05）。结论：B7－2表达质粒与HBV DNA疫苗共接种可显著增强抗－HBV特异性细胞免疫应答（CMI）。     

乙型肝炎卡介苗联合疫苗与单价乙型肝炎疫苗免疫效果的比较

目的：比较乙型肝炎卡介苗联合疫苗与单价乙型肝炎疫苗的免疫效果。方法：实验动物采用豚鼠，按0、1、2月三针免疫程序接种，并于每针免疫后1个月采血，ELISA方法检测血清抗体滴度。实验分三部分进行。实验一：三种不同规格的联合疫苗与单价乙型肝炎疫苗的比较；实验二：同一规格连续三批联合疫苗与单价乙型肝炎疫苗的比较；实验三：联合疫苗与两种单价疫苗同时免疫的比较。结果：在三个实验中，联合疫苗组第一针血清抗体滴度均低于对照组，但无统计学差异：联合疫苗组第二、三针血清抗体滴度均高于对照组，也无统计学差异，实验组各组之间无明显差异。结论：联合疫苗组三针免疫程序的HBsAg的效力与单价乙型肝炎疫苗组相似。