蛋白酶体抑制剂硼替佐米联合柔红霉素对HL-60细胞的凋亡作用和Survivin mRNA表达的影响

目的：研究蛋白酶体抑制剂硼替佐米（Bor）单用或联合柔红霉素（DNR）对HL-60细胞凋亡和Survivin mRNA表达的影响。方法：将不同浓度Bor,DNR及两药联合组和对照组作用于HL-60细胞,采用MTT法测定细胞增殖活性,RT—PCR检测Survivin mRNA表达。结果：5nmol／L Bor作用24h对HL-60细胞有增殖抑制作用,并诱导其凋亡。随着浓度增加及其作用时间的延长可使细胞凋亡率明显增加,10nmol／LBor与1．0μmol／L DNR联合作用72h细胞凋亡率最高,与同剂量两药单独作用相比差异有显著性（P〈0．01）。RT—PCR检测结果表明：随着药物浓度的增加,Survivin mRNA的表达逐渐下降,10mmol／L Bor与1．0μmol／L DNR联合作用72h Survivin mRNA表达最低。结论：Bor能显著抑制HL-60细胞的增殖并诱导其凋亡,Bor联合DNR对HL-60细胞有协同作用,并能显著下调Survivin基因的表达,这可能是促使HL-60细胞凋亡的机制之一。     

柔红霉素对HL-60细胞的促凋亡作用及其与ROS、CER、NF-κB关系的实验研究

目的：探讨柔红霉素（DNR）在体外作用于HL－60细胞时细胞发生凋亡的规律及一些相关机制。方法：应用光镜、流式细胞仪（FCM）及DNA电泳检测DNR诱导HL－60细胞的凋亡作用；用免疫细胞化学（IC）、FCM观察相关蛋白的变化。加入活性氧（ROS）抑制剂四氢吡咯烷二硫氨基甲酸酯（PDTC）或神经酰胺（CER）合成酶抑制剂马廉菌素B1（FB1）后，观察DNR诱导的HL－60细胞凋亡率的变化。结果：当DNR浓度为0．2－2．0μmol/L时，HL－60细胞发生的凋亡率随药物浓度的增加与作用时间的延长而升高，可见典型的凋亡细胞及明显的DNA梯度条带。当1．0μmol/L DNR作用于HL－60细胞后，细胞中Bcl-2与C－myc蛋白的荧光强度指数（FI)总的趋势降低，Bax、caspase-3的FI值在作用2h时上升，而5h时降低，核因子κB（NF-κB）的FI值持续升高。PDTC可抑制DNR对HL－60细胞的凋亡诱导作用，而FB1无影响。结论：一定浓度的DNR在体外诱导HL－60细胞凋亡，发生凋亡的机制可能是通过抑制Bcl-2和C－myc蛋白的表达、激活Bax、caspase-3蛋白诱导的；此凋亡过程与ROS、NF－κB有关，而与CER合成酶无关。     

细胞色素C对阿糖胞苷诱导白血病细胞凋亡的影响

【目的】探讨细胞色素C（CytC）对小剂量阿糖胞苷（LD-Ara—C）诱导白血病细胞凋亡的影响。【方法】用HL-60白血病细胞株进行传代培养,MTT试验检测Ara—c和Cyt C不同药物浓度对白血病细胞增殖的影响,流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡。【结果】12μg／ml浓度以下的CytC具有促进HL-60细胞增殖的作用,不同浓度的CytC干预后HL-60细胞凋亡率均低于干预前（P〈0．01）。联合应用CytC和LD-Ara—C,HL-60细胞凋亡率明显高于单用LD-Ara—C组（P〈0．01）。【结论】外源性CytC在12μg／ml浓度以下时仅能促进白血病细胞增殖,联合应用CytC和LD-Ara—C可增强LD-Ara—C诱导白血病细胞凋亡的作用。     

青蒿酯联合阿糖胞苷±柔红霉素对MLL基因重排白血病细胞株MV4-11凋亡的影响及其机制研究

目的:探讨青蒿酯(ARTS)联合柔红霉素(DNR)±阿糖胞苷(Ara-C)对MLL基因重排(MLL-r)急性髓系白血病(AML)细胞株MV4-11细胞增殖、凋亡的影响及作用机制。方法:采用CCK-8法检测ARTS、DNR、Ara-C单药及联用对MV4-11细胞增殖率及计算单药的IC₅₀;流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况及凋亡受体DR4、DR5的表达;Western blot检测各组细胞中Caspase-3、Caspase-9的表达。结果:ARTS、Ara-C、DNR均呈浓度依赖性抑制MV4-1l细胞增殖(r=0.99,r=0.90,r=0.97),48 h的IC₅₀分别为0.31μg/ml、1.43μmol/L、22.47 nmol/L。ARTS 0.3μg/ml、Ara-C 1.0μmol/L、DNR 15 nmol/L作用于MV4-11细胞48 h的增殖率比较：3药联合组<2药联合组<单药组(均P<0.05);2药联合组细胞增殖率比较：ARTS+Ara-C组相似文献   

基因fas的表达对细胞色素C诱导HL-60细胞凋亡的影响

本研究观察fas基因表达的变化对细胞色素C诱导急性早幼粒细胞白血病细胞株HL-60细胞凋亡的影响，并探讨细胞色素C诱导HL-60细胞凋亡的机制。将体外培养的HL-60细胞分成6组，细胞色素C终浓度分别为0（对照组）、9．375、18．75、37．5、75、150mg／L，用流式细胞仪检测细胞色素C对HL-60细胞的凋亡作用．用RT—PCR和Westernblot检测以凋亡为主的HL-60细胞中fas的表达水平。结果表明：细胞色素C终浓度分别为0、9．375、18．75及37。5mg／L时HL-60细胞是以凋亡效应为主，fas基因的mRNA和蛋白的表达随着细胞色素C浓度的增高而增高，当细胞色素C浓度为75mg／L、150mg／L时，HL-60细胞是以坏死效应为主。结论：细胞色素C能够上调fasmRNA及其蛋白的表达，从而可以诱导HL-60细胞的凋亡。     

细胞色素C对HL-60细胞凋亡作用及其与相关bcl-2、bax基因的关系

为了探讨细胞色素C在体外作用于HL-60细胞时细胞发生的变化及其相关凋亡基因的bcl-2、bax表达变化的机制，用不同浓度的细胞色素C作用于HL-60细胞24小时，然后分别用肌检测细胞色素C对HL-60细胞的抑制率；应用光学显微镜、荧光显微镜观察HL-60细胞形态的变化；用流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期的变化；用DNA凝胶电泳检测HL-60细胞的凋亡；用RT—PCR检测bcl-2、bax基因的表达的变化。结果表明：在细胞色素C浓度为0—150mg／L时，细胞抑制率随着浓度的增加而增加；当细胞色素C浓度在0—37．5mg／L时，细胞凋亡率逐渐增加，可见典型的凋亡细胞和明显DNA梯形条带，同时，在该浓度范围内bcl-2表达逐渐减少，而bax表达逐渐增加；当细胞色素C浓度大于37．5mg／L时，细胞凋亡率增加不明显，但细胞出现坏死。结论：细胞色素C能诱导HL-60细胞发生凋亡，细胞色素C对细胞周期的作用是将细胞阻滞于G1期，并且细胞凋亡率、bcl-2、bax基因的表达的变化与细胞色素C浓度呈一定的量效依赖关系，细胞色素C诱导HL-60凋亡可能与bax的激活和bcl-2的抑制有关。     

初诊急性髓系白血病患者来源的骨髓间充质干细胞通过调节Caspase-3/survivin抑制DNR诱导的HL-60细胞凋亡

目的:探讨急性髓系白血病(AML)患者的骨髓微环境在化疗耐药中的作用,观察骨髓间充质干细胞(MSC)对柔红霉素(DNR)诱导的AML细胞HL-60凋亡的影响,并探索其初步作用机制。方法:分别将健康供者和初诊AML患者来源的骨髓MSC与HL-60细胞共培养,不同的实验组添加或者不添加DNR,采用流式细胞术检测AnnexinⅤ/PI标记的HL-60细胞凋亡;通过瑞氏-吉姆萨染色观察各组HL-60细胞形态,统计原始和分化细胞所占的比例;采用Western blot检测凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9和Survivin的表达情况。结果:流式细胞术显示,健康供者MSC以及初诊AML患者来源MSC分别与HL-60细胞共培养未见HL-60细胞的凋亡情况有显著变化。加入DNR后,HL-60细胞凋亡率为(49. 57±7. 44)%,健康供者MSC共培养加药组和初诊AML患者来源的MSC共培养加药组凋亡率显著降低,分别为(30. 72±4. 05)%(P 0. 01)和(22. 99±4. 08)%(P 0. 01),但健康供者MSC组与初诊AML患者来源MSC组对DNR诱导HL-60细胞凋亡的抑制作用无统计学差别(P 0. 05)。瑞氏-吉姆萨染色结果显示,初诊AML患者来源MSC共培养的HL-60细胞绝大多数处于原始状态,极少见到细胞分化。初诊AML患者来源MSC共培养组中,DNR引起的细胞凋亡和分化明显减少,HL-60细胞大多数处于原始状态。Western blot检测结果表明,初诊AML患者来源MSC和健康供者MSC共培养组的HL-60细胞内Caspase-3活性剪切均较HL-60细胞单独培养组下降,且初诊AML患者来源MSC组显著降低。此外,初诊AML患者来源MSC和健康供者MSC共培养的HL-60细胞Survivin的表达较单独药物作用组表达更高,且初诊AML患者来源MSC组表达显著增高。结论:初诊的AML患者骨髓中存在的MSC与健康人骨髓MSC可以抑制DNR诱导的HL-60细胞凋亡,其作用机制可能与抑制了HL-60细胞内Caspase-3活性,提高了Survivin的表达有关。     

联合应用尼洛替尼和汉防己甲素逆转K562/A02细胞耐药与诱导凋亡的研究

本研究旨在探讨联合应用尼洛替尼(nilotinib)和汉防己甲素(tetrandrine,Tet)逆转K562/A02细胞耐药与诱导凋亡的相关性及其机制。应用MTT法检测细胞敏感性,计算尼洛替尼和Tet干预后的柔红霉素(DNR)的半数抑制浓度(IC50),用流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率,RT-PCR检测bax、survivin mRNA的表达及Western blot分析BAX、SURVIVIN蛋白的表达情况。结果表明:5 nmol/L尼洛替尼或1.0μml/L Tet单独作用48小时后,DNR对K562/A02细胞的IC50分别为(5.71±0.72)mg/L和(6.52±0.43)mg/L,两药联合应用时DNR对K562/A02细胞的IC50降为(3.12±0.13)mg/L。单用尼洛替尼或Tet均能增加经DNR作用的K562/A02细胞的凋亡率,两药联合作用时凋亡率增高更明显。单用5 nmol/L尼洛替尼或1.0μml/L Tet 48小时后可上调bax mRNA及其蛋白的表达,且两药联合作用时上调幅度明显。单用5 nmol/L尼洛替尼或1.0μml/LTet48小时后可下调survivin mR...     

葡萄糖神经酰胺合成酶抑制剂PDMP对K562/A02细胞柔红霉素耐药逆转的研究

本研究旨在探讨葡萄糖神经酰胺合成酶(glucosylceramide synthase,GCS)抑制剂D,L-threo-1-phenyl-2-decanoylamino-3-morpholino-1-propanol(PDMP)hydrochloride对K562/A02细胞株柔红霉素(daunorubicin,DNR)耐药的逆转作用及其逆转机制。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度PDMP对K562细胞和K562/A02细胞的增殖抑制效应及其对K562/A02细胞DNR耐药逆转作用;用流式细胞术检测PDMP对K562/A02细胞内DNR浓度及细胞凋亡率的影响;半定量RT-PCR和Western blot方法检测K562及K562/A02细胞mdr1、GCS基因的表达以及PDMP对K562/A02细胞两种基因表达的影响。结果表明:DNR对K562和K562/A02细胞的IC50分别为0.23±0.02和7.15±0.24μg/ml,当PDMP≤20μmol/L时,对K562及K562/A02细胞株无明显生长抑制作用;20μmol/L和10μmol/L PDMP均能增加K562/A02细胞对DNR的敏感性,其耐药逆转倍数分别为2.59和1.69;两种浓度PDMP作用于耐药株48小时后能增加细胞内DNR浓度(p0.05)和细胞凋亡率(p0.01)。20μmol/L PDMP处理K562/A02细胞48小时后可在mRNA和蛋白水平下调GCS和mdr1基因的表达(p0.01)。结论:PDMP可以增强K562/A02细胞对DNR的敏感性,其机制可能与增加细胞内药物浓度及细胞凋亡率、下调GCS和mdr1基因表达有关。     

柔红霉素对K562细胞凋亡的影响

目的 研究柔红霉素(DNR)对白血病K562细胞细胞凋亡的影响.方法 对数生长期K562细胞随机分A、B两组,A组(对照组):加RPMI-1640培养液;B组 (DNR组):分别加DNR0.2、2、20 μmol/L分别作用1 、2 、6 、24 h后,用流式细胞检测术检测K562细胞的凋亡率.结果 在没有药物的作用下,K562细胞存在自然凋亡.DNR组: 0.2 μmol/L分别作用1、2、6、24 h,细胞凋亡率与对照组相比差异均无统计学意义(P>0.05);2 μmol/L作用于K562细胞1 h,与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05);作用2、6、24 h,与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.01);20 μmol/L作用1、2、6、24 h,与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.01).结论 DNR能促进K562细胞凋亡,并存在剂量、时间依赖性.     

姜黄素、红霉素逆转K562/A02细胞多药耐药机制的研究

目的研究姜黄素（curcumin，Cur）及红霉素（erythromycin，EM）对多药耐药（MDR）细胞株K562／A02的影响及作用机制。方法MTF法测定Cur、EM作用后K562／A02细胞对阿霉素（ADM）敏感性的变化。流式细胞仪测定细胞内柔红霉素的平均荧光强度（DNR MFI）。免疫组化法检测细胞膜上P—gP的表达。RT—PCR法检测细胞mdr1 mRNA水平：结果Cur、EM均可减低ADM对K562／A02细胞的IC50值，两药合用时逆转倍数可达11．3倍。K562／A02细胞内DNR MFI明显低于K562细胞（P〈0．01），Cur、EM均可明显增加K562／A02细胞内DNR MFI（P〈0．05），以两药合用时作用最为明显，Cur2．5μg／ml处理组细胞内DNR MFI略高于EM120μg／ml处理组，但差异无统计学意义（P〉0．05）。免疫组化检测结果显示K562／A02细胞P—gP表达明显高于K562细胞（P〈0．01），各组药物分别处理后，K562／A02细胞膜P—gP表达减低（P〈0．01），但仍高于K562细胞（P〈0．01）；各药物组处理5d细胞膜P—gP表达均低于3d组（P〈0．01），Cur与EM合用时细胞膜P—gP表达降低最为明湿，低于其它处理组（P〈0．01）。RT—PCR结果显示K562／A02细胞mdr1 mRNA水平明显高于K562细胞（P〈0．01），各组药物处理后，K562／A02细胞mdr1 mRNA水平均减低（P〈0．01），5d组低于3d组，但仍高于K562细胞（P〈0．01）；Cur与EM合用时K562／A02细胞mdr1 mRNA水平降低最为显著，Cur 2．5μg／ml处理5dK562／A02细胞mdr1 mRNA水平低于EM120μg／ml处理5d组（P〈0．01）。结论Cur、EM均可部分逆转K562／A02细胞的MDR，降低其P—gP的表达和功能，逆转作用有时间依赖性；两药联合应用时逆转作用明湿增强，Cur2．5μg／ml逆转作用略强于EM120μg／ml。     

尖吻蝮蛇蛇毒抑瘤组分1诱导白血病K562细胞凋亡的线粒体机制

本研究探讨尖吻蝮蛇毒抑瘤组分1(component1from Agkistrodon acutus venom,AVVC-1)诱导人慢性髓系白血病(CML)K562细胞线粒体凋亡途径。选择K562细胞株为实验对象,采用Jc-1检测细胞线粒体的膜电位,Western blot检测线粒体内细胞色素C蛋白的表达,免疫荧光检测细胞色素C蛋白的分布。结果表明,不同浓度梯度AVVC-1(12.5,25,50,100μg/ml)处理6 h后,K562细胞线粒体膜电位明显下降(P<0.01)。AVVC-1 30μg/ml处理48 h后,K562细胞线粒体内细胞色素C蛋白表达量明显下降(P<0.05),伴随胞浆内细胞色素C的荧光强度增强。结论:尖吻蝮蛇毒抑瘤组分1可以促使细胞色素C的释放并激活线粒体死亡途径,从而诱导K562细胞发生凋亡,并由此发挥其抗肿瘤活性。     

氨肽酶抑制剂对全反式维甲酸诱导人急性早幼粒白血病细胞株NB4细胞分化作用的影响及其机制的初步探讨

为了研究氨肽酶抑制剂乌苯美司（bestatin）对全反式维甲酸（ATRA）诱导人APL细胞株NB4细胞分化作用的影响及其可能机制,NB4细胞经bestatin和ATRA单用或联合应用处理一定时间后,用光学显微镜观察细胞形态,流式细胞仪检测CD11b表达,四氮唑蓝（NBT）还原实验检测分化细胞功能,RT-PCR法检测c-myc和c-EBPεmRNA表达,Western blot检测c-Myc蛋白表达.结果显示：NB4细胞经100μg/ml bestatin和10 nmol/L ATRA联合处理72小时后,其分化的形态更明显;100μg/ml bestatin与不同浓度ATRA联合处理72小时,能增强NB4细胞的NBT还原能力,与单用相应浓度ATRA组相比,差异显著（P＜0.01）;从48-96小时,100μg/ml bestatin能增强10 nmol/L ATRA诱导NB4细胞的NBT还原能力,且呈时间依赖性,与相应时间点ATRA组相比,差异明显（P＜0.01）;与单用10 nmol/L ATRA组相比,ATRA（10 mmol/L）和bestatin（100μg/ml）联用处理72小时,NB4细胞CD11b阳性表达率明显增加（P＜0.01）;与单用10 nmol/L ATRA组相比,联用100μg/ml bestatin处理4小时后,NB4细胞c-myc mRNA表达的降低更明显（P＜0.05）;50、75、100μg/ml bestatin与10 nmol/L ATRA联合处理8小时后,NB4细胞c-Myc蛋白表达水平明显降低,与单用ATRA组相比差异显著（P＜0.05）;药物联用各组NB4细胞c-Myc蛋白表达水平与NBT还原能力之间呈负相关（r=-0.940,p=0.017）;与100μg/ml bestatin联用不能增强10 nmol/L ATRA上调c-EBPεmRNA的表达;50、75、100μg/ml bestatin单独处理对NB4细胞的分化无影响.结论：氨肽酶抑制剂bestatin能够增强ATRA对NB4细胞的诱导分化作用,这可能与bestatin协同ATRA下调c-myc的表达有关.     

hMRE11在依托泊甙所致U937细胞DNA双链断裂后的修复中发挥重要作用

MRE11在DNA损伤反应的信号转导通路中起着重要的作用.本研究查明hMRE11与依托泊甙所致人单核细胞白血病细胞株U937 DNA双链断裂的关系.在依托泊甙(VP-16)处理U937细胞后,运用脉冲凝胶电泳(PFGE)检测DNA双链断裂,采用RT-PCR技术检测MRE11的转录水平,借助免疫荧光技术检测hMRE11蛋白的分布改变,并通过流式细胞术检测其细胞周期.结果表明VP-16诱导U937细胞DNA双链断裂的发生率与其剂量高度相关,从2μg/ml时的(13.0±2.3)%增至20μg/ml时的(32.0±4.3)%(P＜0.01).但VP-16诱导U937细胞前后不同时间内hMRE11 mRNA水平未见变化(P＞0.05).hMRE11蛋白丰富而均匀分布于核仁外的细胞核中,但经VP-16处理后则形成独立的核灶(nuclear focus),并且存在这种核灶的细胞数和细胞中的核灶数量随VP-16的剂量增加而增多.经100μg/ml VP-16处理(2小时)后8小时形成hMRE11蛋白灶的U937细胞数达到(61.54±3.6)%[对照组为(0.47±1.17)%,P＜0.01],而且47.55±2.35%的U937细胞[对照组(21.95±2.91)%,P＜0.05]停滞于S期,然后逐渐下降.结论hMRE11蛋白核灶形成可能参与VP-16所致人单核白血病细胞株U937的DNA损伤修复过程.     

重组人血小板生成素对急性髓系白血病细胞株增殖及凋亡的影响

目的:探索重组人血小板生成素(rhTPO)对急性髓系白血病(AML)细胞株增殖和凋亡的影响.方法:采用CCK-8法检测AML细胞株(Kasumi-1、Skno-1、HEL、HL-60、THP-1)经不同浓度rhTPO(0、50、100 ng/ml)作用不同时间(24、48、72 h)后的细胞增殖率;Annexin V/...     

血小板衍生膜微粒对人脐静脉内皮细胞增殖和凋亡的影响

本研究探讨血小板衍生膜微粒（platelet-derived membrane microparticles,PMP）对人脐静脉内皮细胞（hu-man umbilical vein endothelial cells,HUVEC）增殖和凋亡的影响。用不同浓度的凝血酶激活血小板释放出PMP,采用流式细胞术检测PMP的释放量,确定制备PMP时凝血酶的最佳应用浓度。以体外培养HUVEC为载体,通过噻唑蓝（MTT）实验和流式细胞术研究不同浓度的PMP对HUVEC增殖和凋亡的影响。结果表明,2、1.5、1.0和0.5U/ml凝血酶激活血小板后PMP的释放率分别为28.7、47.7、50.1和43.9%;HUVEC的增殖与PMP呈剂量依赖关系。在培养液中添加40μg/mlPMP时,HUVEC增殖是空白对照组的1.8±0.3倍;10μl/ml血管内皮细胞生长因子（VEGF）组的HUVEC增殖是空白对照组的1.9±0.5倍,两组之间无统计学差异,（p〉0.05）;PMP能抑制HUVEC的凋亡,40μg/mlPMP组的细胞凋亡率为（3.9±0.4）%,明显低于空白对照组的细胞凋亡率（9.4±0.5）%（p〈0.05）。VEGF（10μl/ml）对HUVEC细胞的凋亡无明显抑制作用,其凋亡率为（8.0±0.8）%。结论：用1U/ml的凝血酶刺激血小板释放的PMP较为均一,且释放量最大,可促进HUVEC细胞的增殖并抑制其凋亡。     

细胞色素酶CYP2C19代谢对沙利度胺体外抗骨髓瘤作用的影响

目的 研究人肝微粒体代谢对沙利度胺体外抗骨髓瘤作用的影响,并探讨细胞色素酶CYP2C19在其中的作用.方法 以沙利度胺或与人肝微粒体在体外孵育后分别处理多发性骨髓瘤(MM)细胞株U266、NCI-H929、RPMI 8226、LP-1和CZ-1细胞,采用MTT法检测细胞活力,流式细胞术测定细胞周期和细胞凋亡.结果 沙利度胺对MM细胞活力无明显抑制作用,10、50和100μg/ml沙利度胺处理5株MM细胞后的细胞活力分别为96.2%～103.7%、96.3%～103.7%和97.9%～106.5%,与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).但与人肝微粒体孵育后,沙利度胺明显抑制MM细胞活力,且该作用呈剂量依赖性.10、50和100μg/ml沙利度胺与人肝微粒体共孵育后对5株MM细胞活力抑制率分别为12.2%～22.9%、25.9%～36.4%和34.9%～46.3%,与对照组比较差异均具有统计学意义(P<0.05).100μg/ml沙利度胺与人肝微粒体孵育后,5株MM细胞凋亡的比例增加达18.5%～32.5%.在孵育体系中加入CYP2C19特异性抑制剂奥美拉唑后,沙利度胺与人肝微粒体孵育后对MM细胞活力的抑制作用减弱,5 μmol/L和10μmol/L奥美拉唑对100μg/ml沙利度胺经肝微粒体孵育后抑制细胞活力的逆转率分别为7.5%～21.9%和19.1%～38.3%,差异有统计学意义(P<0.05).结论 沙利度胺的体外抗骨髓瘤作用需要人肝脏代谢,细胞色素酶系中的CYP2C19参与了这一过程.     

小檗胺对K562细胞体外及体内作用的实验研究

为了探讨小檗胺(berbamine,BER)在体外及体内抗人白血病细胞株K562细胞的作用及其可能的机制,用MTr法测定K562细胞的增殖抑制,用流式细胞术检测凋亡细胞,用RT-PCR方法检测bcr/abl基因表达,用Westem blot方法检测BCR/ABL蛋白质水平表达,利用K562细胞荷瘤裸鼠模型观察小檗胺治疗后瘤体大小、组织病理及bcr/abl基因表达的改变.结果表明小檗胺对K562细胞有明显的增殖抑制作用,呈时间-浓度依赖关系.经8.0μg/ml BER作用24、48、72小时,对K562细胞的抑制率分别为(26.63±3.57)%,(61.84±4.74)%,(75.32±1.95)%,与对照组相比,P＜0.01.IC50值(72小时)为(5.227±1.307)μg/ml.与空白对照组相比,经8.0μg/ml小檗胺处理72小时后,K562细胞凋亡率明显增加[(61.77±4.35)%vs(0.50±0.14)%,P＜0.01].小檗胺能下调K562细胞bcr/abl mRNA表达和P210水平,且呈浓度-时间依赖效应,并与细胞凋亡率有一定的相关性.经8.0μg/ml BER处理后,与同浓度点对照组相比,72小时组的表达明显地减弱(0.97±0.01vs1.38±0.02,P＜0.01).4.0-16.0μg/ml BER处理24小时后,P210的相对表达量由未加药对照组的1.04±0.02降至16.0μg/ml组的0.63±0.01(P＜0.01),与所设的对照组药物酪氨酸蛋白激酶抑制剂STI571的作用结果相似.在K562荷瘤裸鼠模型,小檗胺治疗组瘤重较未治疗对照组的明显减少[(1.46±0.43)g vs(2.90±0.94)g,P＜0.01],抑瘤率为49.66%.瘤体细胞的bcr/abl mRNA的表达水平明显下调.结论小檗胺在体外对K562细胞具有明显的增殖抑制作用及明确的诱导凋亡作用,并呈时间-浓度依赖关系;小檗胺诱导细胞凋亡可能与其下调bcr/abl基因和(或)P210的表达水平有关;在荷瘤裸鼠体内,小檗胺同样具有显著的抑制K562细胞生长的作用,尤其能下调瘤体组织细胞bcr/abl mRNA的表达水平.     

人端粒重复序列结合因子(hTRF1)蛋白质在急性白血病中的表达水平与端粒酶活性关系的研究

为了研究人端粒重复序列结合因子（TRF1）蛋白质在急性白血病（AL）及正常骨髓组织中的表达水平，AL和正常骨髓组织中端粒酶活性及TRF1蛋白质表达水平与端粒酶活性的关系，定量分析了AL患者及正常人骨髓组织中TRF1蛋白质的表达水平，并应用经倍比稀释的TRF1^33-277纯化蛋白质作为定量标准，建立以抗TRF1^33-277单克隆抗体的定量Western blot的方法，而且以该方法检测TRF1蛋白质在组织中的表达水平；另外，应用TRAP-PCR-ELISA法检测AL患者及正常人骨髓组织端粒酶活性，以研究TRF1蛋白质表达水平与端粒酶活性的关系。结果表明：20例AL患者骨髓组织中TRF1表达水平较正常人骨髓组织显著降低，差异具有显著性（P〈0．01）；急性淋巴细胞性白血病患者的TRF1表达水平较急性非淋巴细胞性白血病患者略减低，但差异无统计学意义（P〉0．05）；化疗缓解的患者TRF1表达水平较前增高，但仍低于正常（P〈0．01）；化疗后完全缓解患者的TRF1表达水平较未缓解的患者显著增高，差异具有显著性（P〈0．01）；AL患者初发未治时骨髓细胞端粒酶的活性明显高于正常人（P〈0．05）和首次缓解者（P〈0．01）；初发未治时，ALL患者骨髓细胞端粒酶活性略高于ANLL患者，但差异无统计学意义（P〉0．05）。TRF1蛋白质表达水平与端粒酶活性呈明显负相关（P〈0．001）。结论：TRF1蛋白质在AL患者骨髓细胞中的表达明显减低．且与疗效及端粒酶活性相关。     

柔红霉素、阿糖胞苷作用于NB4细胞的体外实验研究

目的探讨柔红霉素（DNR）联合阿糖胞苷（Ara-C）和单用DNR对急性早幼粒细胞白血病（APL）细胞株NB4与另一急性髓系白血病（M2）细胞株HL-60生长抑制率、凋亡率的比较。方法用MTT法和流式细胞术分别检测NB4与HL-60细胞的生长抑制率和细胞凋亡率；采用瑞特染色法观察细胞形态。结果两组药物（DNR单药组和双药组）对NB4细胞的生长抑制率[单药组为（35．73±6.82）％，双药组为（36.75±3．82）％]、凋亡率[单药组为（22.55±3．62）％，双药组为（21.24±5．82）％]差异均无统计学意义（P〉0．05）；而对HL-60细胞的抑制率[单药组为（62．31±1.80）％，双药组为（67．17±2.07）％]、凋亡率[单药组为（41.51±0.89）％，双药组为（48.05±0．92）％]的差异均有统计学意义（P值分别〈0.01和〈0．05）；形态学检测显示，各组细胞形态学上均出现凋亡特征性改变。结论从细胞水平说明，DNR联合Ara—C与单用DNR对APL的疗效差异无统计学意义，且后者的临床不良反应明显轻于前者，因此支持单用DNR的治疗方案。